中国人丙型肝炎病毒2a型基因组C区基因cDNA的克隆及序列分析

测定陕西地区丙型肝炎病毒的Ｃ区基因序列，为进一步研究ＨＣＶ的流行病学和开展ＨＣＶ的诊治打下基础。方法；自行设计合成了两条正向引物和两条反向引物，用反转录ＰＣＲ法从陕西地区１例ＮＡＮＢ型肝炎患者血清中扩增出４３６ｂｐ的片段，将此片段克隆于ＰＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）中用全自动序列分析仪测序。     

HCV广东株5‘NCRcDNA的克隆及序列测定

从广东省１例慢性丙型肝炎病人血清中提取ＨＣＶＲＮＡ，随机引物逆转录为ｃＤＮＡ后用ＨＣＶ５’端非编码区（５’ＮＣＲ）特异引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增产物３０２ｂｐ，经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒，获得的重组质粒ｐＵＮ采用双脱氧链终止法测定核苷酸序列，与国内外多相株比较，核苷酸同源性介乎９２．６９％～１００％，其中与ＨＣＶⅡ（１ｂ）型的同源性最大，本文的测序结果可为引物设计提供依据，获得的Ｈ     

日本血吸虫中国大陆株32ku抗原cDNA的克隆及其核苷酸序列分析

目的　研究日本血吸虫重组疫苗，表达和制备血吸32ku抗原重组疫苗。方法　根据Merekelbach等报道的日本血吸虫中成虫32ku抗原完整编码序列设计引物，以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板，采用逆转录—聚合酶链反应技术，扩增其32ku抗原完整编码区cDNA。将cDNA重组于pGEM-T easy载体上，转化大肠杆菌。结果　重组质粒经测序进行鉴定，结果与Merckelbach等报道的32ku抗原编码区cDNA进行比较，二序列一致。结论　32ku抗原在不同的地区异株间的32ku蛋白进化上存在高度保守性，因此32ku抗原可以作为重组疫苗的候选抗原。     

HCVNS3区C33c抗原基因cDNA的克隆及序列分析

自上海市及江苏省慢性丙型肝炎患者血清中分离丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，采用自行设计的引物，经逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），获得长为６９４ｂｐ的Ｃ３３ｃ抗原基因ｃＤＮＡ，将其克隆于表达载体并作序列分析。结果表明，上海株ＨＣＶ－Ｓ１及江苏株ＨＣＶ－Ｓ２该区域核苷酸水平有很高的同源性（＞９９％），上海及江苏株ＨＣＶ与美国原型ＨＣＶ－１、日本株ＨＣＶ－Ｊ及河北株ＨＣＶ－ＨＢ在该区域核苷酸水平的差异分别为１８．６４％、５．５５％及８．０１％～８．１７％，氨基酸水平的差异在２．３１％～６．０２％之间。上海株同一份血清三个独立克隆间核苷酸水平有０．６％～０．９％的差异。本实验为进一步表达Ｃ３３ｃ蛋白作好了准备。     

饰胶蛋白（Decorin）基因的cDNA克隆与表达

目的 通过基因克隆技术获得饰胶蛋白基因ｃＤＮＡ克隆并表达。为研究饰胶蛋白的生物学功能及应用打基础。方法 应用ＰＣＲ技术从Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库获得饰胶蛋白全长基因ｃＤＮＡ片段。并克隆到ｐＵＣ１９载体中,采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定全部ｃＤＮＡ序列,将测序正确的饰胶蛋白ｃＤＮＡ序列插入ｐＧＥＸ－４Ｔ－１表达载体中,经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后１．２％凝胶电泳鉴定,ＩＰＴＧ诱导表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果 克隆的饰胶蛋白ｃＤＮＡ序列与ＧｅｎＢａｎｋ中ＡＦ１３８３００记载的序列完全一致,所表达的融合蛋白质分子量与理论计算值（６５．６ＫＤ）也一致并为可溶性蛋白。结论 本研究成功地克隆了饰胶蛋白基因和表达了ＧＳＴ－Ｄｅｃｏｒｉｎ融合蛋白。     

甲型肝炎减毒活疫苗（H2减毒株）口服免疫反应的研究

选自５个幼儿园和１个小学１０个班级ＳＧＰＴ值正常，抗甲肝病毒（ＨＡＶ）抗体阴性３－９岁儿童１９３名，进行８个不同批号的甲肝减毒活疫苗（Ｈ２减毒株），疫苗剂量为１０６．５ＴＣＩＤ５０，口服途径和皮下注射途径免疫的比较，８周血清检测结果表明：口服途径免疫组１０１名儿童全部未检测到甲肝抗体。皮下注射免疫组的９２名儿童中８８名（９５．５％）有甲肝抗体反应。１９３名儿童８周ＳＧ－ＰＴ值全部正常。口服途径不感     

一株TT病毒中国分离株结构区全基因的克隆及序列测定

目的 克隆和序列测定ＴＴ病毒（ＴＴＶ）中国分离株全国基因。方法 采用长片段ＰＣＲ技术从一例临床非甲－非庚型肝炎病人血清中扩增ＴＴＶ全基因,获得３个互相重叠的片段,分别为１９９、３２６９和４３４ｂｐ。用标准分离子生物学方法测定这３个片段的序列,从而得到全长ＴＴＶ基因序列。结果 ＴＴＶ中国分离株全基因长３７３９个核苷酸,含两个开放读码框架。第一个ＯＲＦ位于５８９至２９０１位核苷酸,编码７７０个氨基酸;     

人Hrs cDNA的克隆与序列分析

以小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ为探针从人胎盘ｃＤＮＡ文库中克隆出人ＨｒｓｃＤＮＡ，其全长为２９１０ｂｐ，所编码的蛋白质含７７７个氨基酸。人ＨｒｓｃＤＮＡ与小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ间高度保守。推定的氨基酸序列含有锌指样结构域、脯氨酸丰富区及脯氨酸、谷氨酰胺丰富区。