mRNA差异显示筛选卵巢癌相关基因

目的：利用ｍＲＮＡ差异显示技术研究正常卵巢上皮和卵巢上皮癌之间的基因表达差异状况,筛选和克隆卵巢上皮癌相关基因。方法：通过ＤＤ－ＰＣＲ分析正常卵巢上皮和卵巢上皮癌总ＲＮＡ将差异片段分离并显示出来,将其回收,利用基因克隆技术将其筛选和克隆出来作为探针进行斑点杂交鉴定、ＤＮＡ序列测定、通过国际互联网络检索ＧｅｎＢａｎｋ进行同源性分析。结果：共筛选克隆鉴定６个差异显示片段。其中４个为未知基因片段,已收录     

应用mRNA差异显示技术进行肝癌相关基因的筛选

目的采用mRNA差异显示技术寻找肝癌及非肝癌组织的差异表达基因，筛选肝癌相关基因，为进一步研究创造条件。方法提取手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA，逆转录获得eDNA片段，以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因。对所获得的差异表达基因进行序列分析，并通过CenBank／BLAST数据库进行序列的同源性比较，并以Northern杂交方法对有意义片段予以来源确认。结果自720余条扩增条带中选出28条差异条带，其中“上调”者16条，“下调”者12条。对其中5条差异最为明显的片段进一步分析，其中2条为可能的新基因片段，其中一条经Northern印迹杂交证实确来自源标本组织，且在肝癌组织中有明显高表达趋势。结论mRNA差异显示技术是一种快速、灵敏、高效的差异表达基因的克隆技术，已采用这种技术获得了1条可能的肝癌相关新基因片段，有必要进一步研究。     

mRNA差异显示法筛选大肠癌相关基因

目的：分离并克隆大肠癌相关基因。方法：分别提取大肠癌与正常大肠粘膜的组织总RNA,用mRNA差异显示法（Differential display polymerase chain reaction,DD-PCR)筛选大肠癌特异性表达产物的cDNA片段,对其进行克隆、测序、序列分析以及斑点杂交初步鉴定。结果：获得了2个在大肠癌高表达而在正常大肠粘膜组织低表达的新基因片段。结论：这2条差异显示新基因片段很可能是与大肠癌相关的致癌基因。     

差异表达基因的几种筛选方法

多种因素导致的基因差异性表达与疾病的发生发展密切有关,分离差异表达基因,对于研究细胞生命过程的调节机制及致病机制具有重要意义. 20世纪90年代以来,先后出现了mRNA差异显示PCR(mRNA DDRT-PCR)、代表性差异分析(RDA)、抑制性消减杂交(SSH)、基因表达连续性分析(SAGE)和DNA微阵列(DNA microarray)等多种分析差别表达基因的方法. 我们对以上方法的原理、基本步骤及其应用进行简要综述.     

mRNA差异显示技术筛选何首乌中二苯乙烯苷合成相关基因

【目的】筛选和克隆何首乌中二苯乙烯苷代谢相关酶基因。【方法】采用mRNA差异显示技术,对何首乌中二苯乙烯苷含量差异悬殊的不同组织(根、茎、叶)进行差异表达基因的筛选,将得到的差异基因连接pMD19-T载体进行测序后,通过数据库比对预测其基因功能。【结果】发现差异片段51条,选取其中9条进行半定量PCR验证,获得3条阳性差异片段。其中1条阳性片段为何首乌茎和叶特异表达,与甘氨酸脱氢酶高度同源,另外2条阳性片段为何首乌块根特异表达,分别与烯酰辅酶A水合酶、氨基肽酶N高度同源。【结论】通过mRNA差异显示技术得到的3个同源序列可为进一步研究何首乌中二苯乙烯苷生物合成途径提供帮助。     

用mRNA差异显示技术初步筛选食管癌相关基因

用ｍＲＮＡ差异显示技术初步筛选食管癌相关基因王尧河１）张云汉１）高冬玲１）付淑莉１）王宏２）夏贞彪２）李春海２）罗庆良２）１）河南医科大学第一附属医院病理科，河南省肿瘤病理学重点实验室郑州４５００５２２）军事医学科学院北京１００８５０关键词食管肿瘤...     

新的癫痫相关基因的筛选及部分cDNA序列的分离鉴定

用ｍＲＮＡ差异显示技术从大鼠癫痫状态的海马分离到２０个ｃＤＮＡ差异片段，对４个ｃＤＮＡ片段进行序列分析并在基因库中进行相同性比较，发现ＥＲＧ８，ＥＲＧ１１，ＥＲＧ１２无相同性序列，ＥＲＧ１４与鼠的微管相关蛋白基因有６４％￣６９％的相同性。由于这些基因的差异表达是致痫剂马桑内酯和抗痫剂ＭＫ－８０１所致，所以，ＥＲＧ８可能是新的候选癫痫基因，ＥＲＧ１１和ＥＲＧ１２可能是新的候选抗痫基因；由于微管相关蛋     

应用mRNA差异显示技术筛选卵巢癌耐药相关基因

目的 筛选卵巢癌泰素耐药相关基因。方法 采用间歇诱导法建立了卵巢癌泰素耐药细胞株Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｌ－２５;采用ｍＲＮＡ ＤＤ比较Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５对泰素耐药增加４４倍,同时对顺铂也产生了耐药。比较Ｓｋｏｖ３和Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５的ｍＲＮＡ,获得２２个差异条带。对其中５个差异条带进行了ＤＮＡ序列测定,有３个与已知的基因高度同源,分别为ｔＰＡ、Ｋｉａａ０３７２和ＬＤＬＣ。２个为未知     

人食管癌相关基因cDNA片段的克隆、筛选与初步鉴定

目的：筛选和鉴定人原发性食管癌组织的相关基因,揭示食管癌的癌变机理。方法：用高效、灵敏的荧光mRNA差异显示技术,以食管癌及相应的正常食管粘膜组织为对照,通过对其基因表达的比较,找出差异条带,利用Reverse Northern Dot Blot、DNA序列分析和Northern Blot,并结合mRNA 原位杂交技术对被筛片段进行鉴定。结果：①在实验中分离、鉴定了74条差异片段,其中包括正常组织表达而癌组织中不表达的差异片段54个,癌组织中表达而正常组织不表达的差异片段20个。②其中1个片段C57（337bp）在GenBank数据库中没有发现同源的已知基因或片段,推测其可能为食管癌相关基因。③经Northern Blot检测C57在癌组织中有表达信号。④原位杂交技术检测C57在癌组织中具有较高的阳性表达率（74％）。结论：食管癌组织中C57可能是新的食管部相关的候选癌基因,它与食管癌的发生发展可能有关。     

新的癫痫相关基因的筛选及部分cDNA序列的分离鉴定

用mRNA差异显示技术从大鼠癫痫状态的海马分离了20个cDNA差异片段，对4个cD-NA片段进行序列分析并在基因库中进行相同性比较，发现ERG8、ERG11、ERG12无相同性序列，ERG14与鼠的微管相关蛋白基因有64％～69％的相同性。由于这些基因的差异表达是致痫剂马桑内酯和抗痫剂MK－801所致，所以，ERG8可能是新的候选癫痫基因，ERG11和ERG12可能是新的候选抗痫基因；由于微管相关蛋白高表达与惊厥条件下海马苔藓纤维侧枝出芽关系密切，因此，ERG14在癫痫早期高表达可能预示着新的轴突生长和突触形成。     

mRNA差异显示法在分离肿瘤转移相关基因中的初步应用

用mRNA差异显示技术（mRNAdifferentialdisplay）对分别用200U／ml重组人IFN－a和IFN－Υ处理的MA891肿瘤细胞系总mRNA进行分析，分离出10个差异表达的片段，并进行了克隆。因IFN－a抑制MA891细胞系的肺转移能力，而IFN－Υ则增强其肺转移能力，故认为该10个片段所代表的基因中可能有某个或几个基因与肿瘤转移有关。     

人肺癌转移相关基因片段的克隆

目的：克隆人肺癌转移相关基因片段。方法：采用mRNA差异显示技术对两株来源相同，转移能力不同的肺癌细胞株进行筛选和克隆与转移有关的基因片段，并采用通过GenBank对所获得基因片段，进行检索和序列分析及同源比较。结果：两株细胞的基因表达存在明显差异，共获得三个基因片段，其中片断l(P1)的序列与AND-34基因高度同源，片断2(P2)的序列与ARHA基因高度同源，片断3与目前已知基因均没有同源性，可能来自—个新基因的片段。结论：上述三个基因可能与人肺癌的转移有一定的关系。     

缺氧预适应小鼠海马组织差异表达基因的研究

为了研究缺氧预适应的分子机制 ,分离并分析预缺氧预适应小鼠海马组织的差异表达基因 ,运用mRNA差异显示技术 ,共获得 5 6条差异基因片段 ,对其中 1 4条进行纯化、克隆、测序以及BLAST分析 ,其中 9条为已知基因 ,5条可能为未知基因。对这些差异基因的研究将为研究缺氧预适应的分子机制提供新思路     

辐射抗性小鼠与其亲代差异基因的表达序列标签

目的寻找IRM-2小鼠体内存在的与辐射抗性相关的基因。方法提取IRM-2小鼠和其亲代小鼠脾细胞总RNA,利用mRNA差异显示技术挑选差异表达片段,对每一条差异带进行特异PCR扩增、克隆和测序。结果获得IRM-2小鼠独有而亲代小鼠均无的cDNA差异带75条,经测序获得52条差异cDNA序列。与GenBank基因库同源性比较,得到21条与小鼠已知基因不同源的表达序列标签（EST）。结论21条EST提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因,为进一步分离和鉴定辐射抗性相关基因奠定了基础。     

Screening of novel epilepsy-related genes and isolation and identification of cDNAs

Epilepsy is a brain dysfunction syndrome characterized by excessive. disorderly discharge ofcerebral neurons. The cause and mechanism ofepilepsy has not been established. Since epilepsy iscaused by multiple factors working together andpossesses heterogeneity, it is necessary to searchfor epilepsy--related genes (ERG). We isolated andcloned several novel epilepsy--related gene fragments by using mRNA differential display technique (mDD), which established a new way to Investigate the molecu…     

子宫肌瘤致病相关基因的筛选与克隆

【目的】研究子宫肌瘤与正常子宫肌组织中的基因表达差异，筛选及克隆子宫肌瘤的致病相关基因。【方法】应用荧光标记的mRNA差异显示技术，比较11例子宫肌瘤及其正常子宫肌组织基因表达的差异．对获得差异片段进行克隆、测序及同源性分析，并对其中5条差异片段在子宫肌瘤及正常子宫肌组织中的表达情况进行RT—PCR分析。【结果】差异片段NO．3，5，11，12在子宫肌瘤正常及异常组织中的表达均存在差异。其中NO.3差异片段在8例子宫肌瘤组织中有表达，而相应的正常组织中仅2例有表达。NO．5，11，12差异片段在子宫肌瘤中的表达水平高于正常子宫肌组织中的表达水平。【结论】在子宫肌瘤的发生和发展过程中存在多个基因的表达异常，其中ulap8基因有可能在子宫肌瘤组织中呈特异性的表达，ulapl4，ulap25，ulap26基因在子宫肌瘤组织中存在表达差异，推测这些基因有可能与子宫肌瘤的发病有关。     

胃癌及其癌前病变相关基因差异表达的研究

目的 探讨与人胃癌发生密切相关的基因片段。方法 本研究应用荧光mRNA差异显示技术分析胃癌（3例）、胃癌前病变（3例）和正常胃黏膜（3例），鉴别并分离差异表达的基因片段，进行PCR再扩增。将扩增的cDNA片段克隆后进行测序，测序结果提交GenBank，经BLAST软件检索进行同源性分析。应用生物信息学技术确定基因在染色体中的定位。结果 发现1个差异表达的cDNA片段，在胃癌组织和癌前病变中高表达，初一步定位于17号染色体，在GenBank数据库中与RP11-25705克隆高度同源，但其具体功能目前尚不清楚。结论 本研究发现的1个基因片段在胃癌组织和癌前病变中高表达，可能参与了胃癌的发病过程。     

子宫肌瘤致病相关基因的筛选与克隆

【目的】 研究子宫肌瘤与正常子宫肌组织中的基因表达差异,筛选及克隆子宫肌瘤的致病相关基因。【方法】 应用荧光标记的mRNA差异显示技术,比较11例子宫肌瘤及其正常子宫肌组织基因表达的差异,对获得差异片段进行克隆、测序及同源性分析,并对其中5条差异片段在子宫肌瘤及正常子宫肌组织中的表达情况进行RT-PCR分析。【结果】 差异片段NO.3,5,11,12在子宫肌瘤正常及异常组织中的表达均存在差异。其中NO.3差异片段在8例子宫肌瘤组织中有表达,而相应的正常组织中仅2例有表达。NO.5,11,12差异片段在子宫肌瘤中的表达水平高于正常子宫肌组织中的表达水平。【结论】 在子宫肌瘤的发生和发展过程中存在多个基因的表达异常,其中ulap8基因有可能在子宫肌瘤组织中呈特异性的表达,ulap14,ulap25,ulap26基因在子宫肌瘤组织中存在表达差异,推测这些基因有可能与子宫肌瘤的发病有关。     

薄层扫描法测定肾舒冲剂中人参皂甙R_(g1)的含量

目的　测定肾舒冲剂中人参皂甙Rg1的含量。方法　薄层扫描法。色谱条件为硅胶G板 ,展开剂为氯仿 -醋酸乙酯 -甲醇 -水 ( 65∶10∶35∶10 )下层溶液 ,测定波长λs=52 5nm ,参比波长为λR=70 0nm。结果　r =0 9996,线性范围 1～ 5μg精密度 1 95%,含量在 0 5mg以上。 结论　方法灵敏、快速准确 ,可供本品质量控制