家兔绿脓杆菌败血症时血浆TNF的改变

给正常家兔静脉注射不同剂量绿脓杆菌活菌(7×10~9、2×10~(10)/kg)造成败血症后,外周血中TNF水平明显升高,其变化特征与内毒素休克并不相同,2×10~(10)/kg组血浆TNF水平显著高于7×10~9/kg组(P<0.01)。输注绿脓杆菌活菌后,与对照组相比,血浆胰高血糖素呈持续升高(P<0.05～0.01),胰岛素和血糖有短暂升高(P<0.05～0.01),血浆乳酸和β-G水平呈持续增高(P<0.05～0.01),上述改变在2×10~(10)/kg组要甚于7×10~9/kg组(P<0.05～0.01),此外2×10~(10)/kg组动物死亡率和MABP的下降较之7×10~9/kg组也更为严重。这些结果表明输注绿脓杆菌活菌后血浆TNF水平的升高与败血症的发生发展以及病变严重程度有密切关系。     

心肌肌球蛋白轻链的双相非竞争性ELISA吸附分析及其临床初步应用

应用特异抗体建立了人心肌肌球蛋白轻链的双相非竞争性酶联免疫吸附分析。该法灵敏度为0.lng/孔,批内及批间变异系数分别为2.7％～9.2％和3.7％～19.1％,回收率近100％(高剂量组10ng/孔),工作范围0.1～10ng/孔。用该法检测了11例急性心肌梗塞病人入院后2周的血清样品,并调查了20例正常健康人血清样品,结果所有急性心梗病人血清样品在一定时间内心肌肌球蛋白轻链水平增高。大多数病人(9例)初次升高后1～2d达正常水平,以后又升高5～9d。轻链高峰在入院后第2.2±1,2d(第一峰)和7.1±1.9d(第二峰)出现,峰值分别是45.7±33.5ng/ml和62.2±32.9ng/ml,高水平肌球蛋白轻链在病人血中保持11±3.4d。然而,在健康人血清中未见有可测量的轻链存在。     

外源性白细胞介素-10对重症急性胰腺炎的肠屏障功能保护作用

目的:探讨外源性白细胞介素-10(IL-10)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肠屏障功能的影响。方法:90只SD大鼠随机分为假手术组、SAP组I、L-10治疗组,制模12 h后,检测各组血生化指标、血浆内毒素水平、脏器细菌易位率、小肠黏膜细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及观察各组胰腺、小肠病理形态学改变。结果:制模12 h后,SAP组血浆内毒素为(144.682±9.584)EU/L、脏器组织细菌易位率为64.6%、小肠黏膜ICAM-1 5.842±0.706、胰腺病理评分10.62±0.60、小肠病损严重。IL-10治疗组上述指标测定值分别为:(103.112±8.124)EU/L(P<0.05),30.6%(P<0.01),4.102±0.668(P<0.05),4.46±0.52(P<0.01)、小肠病损明显减轻。结论:小肠黏膜黏附分子异常表达及炎性介质平衡紊乱,参与SAP鼠肠屏障功能受损。早期应用外源性IL-10能降低小肠黏膜黏附分子表达,抑制炎性介质过度释放,减少肠源性细菌易位,对SAP鼠肠屏障功能有保护作用。     

胰岛素抵抗大鼠的肝脏中丝氨酸/酪氨酸磷酸化异常与血清TNF-α相关

目的 探讨胰岛素抵抗大鼠胰岛素受体底物-1丝氨酸,酪氨酸磷酸化与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的关系.方法 雄性Wistar大鼠30只(体质量80～120 g),随机分为普通饮食组(NC)及高脂饮食组(FH)2组,每组15只.喂养10周,以高胰岛素-正常血糖钳夹技术评估胰岛素抵抗大鼠模型.应用ELISA法检测大鼠血清TNF-α含量,Western Blot法检测肝脏组织中胰岛素受体底物-1丝氨酸磷酸化(IRS-ISer636)及酪氨酸磷酸化(IRS-ITyr456)表达.结果 FH组葡萄糖输注率(GIR)60-120水平明显低于NC组[(1.56±0.43 vs.5.15±0.66)mg/(kg·min),P<0.01];FH组大鼠TNF-α、IRS-ISer636均高于NC组[(15.43±2.16 vs.5.4±2.16)pg/mL,P<0.01;(109.45±13.75 vs.94.23±15.05),P<0.05],IRS-ITyr456水平低于NC组[(111.08±14.28 vs.125.77±14.51),P<0.05].TNF-α水平与IRS-ISer636呈正相关(r=0.503,P=0.024),与IBS-ITyr456呈负相关(r=-0.521,P=0.019).结论 胰岛素抵抗大鼠TNF-α水平与IRS-ITyr456负相关,与IBS-ISer636正相关,提示TNF-α引起胰岛素抵抗机制可能与IBS-1磷酸化异常有关.     

消耗白细胞在兔油酸性肺损伤模型形成中的意义

用盐酸氮芥消耗兔白细胞90％左右,观察白细胞在兔油酸性肺水肿发病中的作用。实验分为正常组(5只),油酸组(5只),消耗白细胞组(5只)。与正常组比较,油酸组肺血流量在10min后各时间点均明显下降(P<0.05);而消耗白细胞组除30min点有一过性降低外(P<0.05),其它各时间点的变化均无统计学意义。肺湿干重比及肺水含量,正常组分别为4.91±0.20和79.56±0.79％;油酸组分别为5.95±0.4g(P<0.01)和83.12±1.46％(P<0.01);消耗白细胞组分别为6.77±1.32(P<0.05)和84.77±3.04％(P<0.01)。结果提示,白细胞是使兔油酸性肺水肿时肺血流量下降的原因之一,而对肺水肿程度影响不大。     

妊娠期糖尿病孕妇血清TNF-α水平与胰岛素抵抗的关系

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)孕妇血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平与胰岛素抵抗的关系。方法选择GDM孕妇39例(GDM组)、同期正常妊娠孕妇38例(正常妊娠组),采用酶联免疫吸附试验测定空腹血清TNF-α水平;同时测定2组孕妇空腹血糖、胰岛素、糖化血红蛋白(HbA1c)水平,并且根据公式计算2组孕妇的胰岛素敏感指数(ISI)。结果(1)GDM组空腹血清TNF-α、血糖、胰岛素、ISI、HbA1c水平分别为(5.3±0.9)ng/L、(6.1±0.7)mmol/L、(13.1±3.2)mU/L、-4.3±0.4、(5.7±0.4)%,正常妊娠组孕分别为(4.4±0.7)ng/L、(4.8±0.6)mmol/L、(9.1±2.6)mU/L、-3.8±0.4、(5.4±0.5)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);(2)GDM组孕妇空腹血清TNF-α水平与ISI呈负相关(r=-0.388,P<0.01),与空腹血糖、HbA1c呈正相关(r=0.524,P<0.01;r=0.426,P<0.01),与胰岛素无相关性。正常妊娠组孕妇TNF-α水平与ISI呈负相关(r=-0.336,P<0.05),但相关性显著小于GDM组,与胰岛素、血糖及HbA1c无相关性。结论GDM组孕妇空腹血清TNF-α水平明显升高,且与ISI呈显著负相关,提示TNF-α参与了GDM孕妇的胰岛素抵抗。     

甲基强的松龙对成骨细胞钙通道电流的影响

目的:观察甲基强的松龙(mPSL)对MC3T3-E1成骨细胞L-钙通道电流(L-type voltage-sensi-tive calciumchannels current,L-VSCCsC)的影响。方法:设A组(正常对照组)、B组(10-6mol/L)、C组(10-5mol/L)和D组(10-4mol/L),各浓度的mPSL作用24h后,膜片钳技术记录每组细胞的L-VSCCsC(nA)。结果:正常对照组峰值电流为(-0.2284±0.0209,nA);10-6mol/L组为(-0.1991±0.0158,nA)下降12.8%;10-5mol/L和10-4mol/L组分别为(-0.1839±0.0179,nA)、(-0.1610±0.0033,nA)分别下降19.5%和29.5%,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:mPSL剂量依赖性抑制成骨细胞L-VSCCsC。     

腹膜透析液中添加黄芪对腹腔巨噬细胞功能的影响

目的:通过在腹膜透析液(PDF)中添加黄芪注射液后观察患者腹腔巨噬细胞功能的变化。　方法:采用自 身对照的方法,在28例连续性不卧床腹膜透析(CAPD)治疗患者的PDF中添加黄芪注射液(20ml/2L)后,比较患 者透出液巨噬细胞活性、吞噬功能及肿瘤坏死因子α(TNF α)和一氧化氮(NO)分泌的变化情况,以及在不同剂量 黄芪注射液的作用下,巨噬细胞活性和细胞因子分泌改变的影响。　结果:用药前后患者透出液中TNF α含量未 出现显著变化,分别为(100±63)ng/Lvs(116±60)ng/L(P=0.192);腹腔巨噬细胞噬菌率分别为(34.8±12.7)% vs(43.4±9.3)%(P<0.01),杀菌率分别为(23.6±7.7)%vs(32.1±10.2)%(P<0.01);巨噬细胞经脂多糖 (LPS)刺激其噻唑蓝(MTT)还原能力检测值(A值)分别为0.156±0.051vs0.230±0.097(P<0.01)。上清液中 NO含量分别为(7.72±2.36)μmol/Lvs(12.22±2.81)μmol/L(P<0.01)。上清液中TNF α含量分别为(1406± 358)ng/Lvs(1925±389)ng/L(P<0.01)。分离的巨噬细胞在不同条件下共同孵育后,PDF组和RPMI1640组巨 噬细胞上清液中TNF α、NO含量和沉渣MTT还原能力较含黄芪注射液各组明显降低(P<0.01);黄芪组上清液中 TNF α、NO含量和沉渣MTT还原能力以1%和2%黄芪组改善较为明显,两组间比较     

人参皂甙Rb1、黄芪抗大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡研究

目的研究人参皂甙Rb1、黄芪对体外培养的新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的保护机理。方法应用Neurobasal加B27 Supplement体外培养大鼠大脑皮层神经细胞;流式细胞仪检测神经细胞凋亡率;Hoechst33342荧光染色法检测神经细胞凋亡率。结果(1)流式细胞仪测定结果:正常对照组神经细胞凋亡率为0.78%,凋亡阳性组细胞凋亡率为31.61%,人参皂甙Rb1 1、2、3组细胞凋亡率分别为8.52%、4.86%、1.43%,黄芪注射液1、2、3组细胞凋亡率分别为16.06%、7.03%、1.22%;(2)神经细胞凋亡阳性组可见有明显的凋亡梯状条带,而正常对照组、人参皂甙Rb1 2组、黄芪注射液2组未见有明显的凋亡梯状条带;(3)Hoechst 33342荧光染色结果:正常对照组神经细胞凋亡率为(8.24±0.31)%,凋亡阳性组细胞凋亡率为(41.30±2.56)%;与凋亡阳性组比较,缺氧前加BDNF组细胞凋亡率为(21.06±0.72)%(P<0.05),缺氧后加BDNF组细胞凋亡率为(27.82±3.65)%(P<0.01);缺氧前加人参皂甙Rb1 3组细胞凋亡率为(12.57±1.61)%(P<0.05),缺氧后加人参皂甙Rb1 4组细胞凋亡率为(23.71±2.24)%(P<0.01);缺氧前加黄芪注射液1、2、3组细胞凋亡率分别为(20.28±1.00)%、(18.67±0.57)%、(13.84±0.79)%(P<0.05),缺氧后加黄芪注射液4组细胞凋亡率为(26.46±2.18)%(P<0.01)。结论人参皂甙Rb1在100μg/mL,黄芪在10~100 mg/mL的浓度范围內,具有抗缺氧的神经细胞凋亡的作用。     

心肌缺血再灌注损伤时心肌肌球蛋白ATP酶活性的改变

目的　探讨心肌缺血再灌注损伤时心肌肌球蛋白 ATP酶活性的改变。方法　从正常兔及心肌缺血再灌注损伤模型兔心肌中提取肌球蛋白 ,根据酶反应 ATP分解释放的无机磷含量分别检测 Ca2 + 激活的肌球蛋白ATP酶的米氏常数 (Km)值及最大反应速度 (Vmax) ,并对两组蛋白酶活性进行比较。结果　对照组兔心肌肌球蛋白ATP酶的 Vmax为 (1.15± 0 .17)μm ol/ (mg· m in)、Km 为 (5 .4 3± 2 .18) mm ol;实验组心肌肌球蛋白 ATP酶的 Vmax为 (1.17± 0 .2 1)μmol/ (mg· min)、Km 为 (6 .0 2± 2 .0 1) m mol,两组心肌酶活性无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论　心肌缺血再灌注损伤时 ,肌球蛋白 ATP酶活性没有明显改变     

猪心肌球蛋白及其轻,重链亚基的纯化和鉴定

采用一种改进的方法，从１００ｇ猪心室肌中提取心肌肌球蛋白３７０ｍｇ，并进一步分离和纯化其亚基成分，分别得到肌球蛋白轻链２４ｍｇ和重链２１０ｍｇ，核酸含量＜１％，不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它杂蛋白；ＳＤＳＰＡＧＥ显示，猪心肌球蛋白重链为２００～２２０ＫＤ一条带，肌球蛋白轻链则为２７ｋｄ、２１．４ｋｄ、１９ｋｄ三条带；纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋激活ＡＴＰ酶活性为０．２４μｍｏｌＰｉ／（ｍｇ·ｍｉｎ），但其分离后的亚基则无此活性。     

人心肌肌凝蛋白轻链的提纯及其抗体的制备

从人心肌中提纯的肌凝蛋白轻链(myosin-light chain,M-LC),SDS聚丙烯酰胺凝胶电脉呈三条蛋白带。经DEAE-纤维素柱层析出现三个峰。免疫白兔产生的抗血清,琼脂双扩散鉴定有一条沉淀线;亲和层析,用盐酸胍解离下一个抗体蛋白峰。     

胶原刺激后血小板细胞骨架成分分布的变化

将正常血小板与用胶原刺激的血小板的胞浆部分与膜部分进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳(PAGE),并测定各部分的肌动蛋白激活的肌球蛋白Mg～(2+)-ATPase活力(AM-Mg～(2+)-ATPase)后发现:正常血小板膜部分所连接的肌球蛋白与肌动蛋白分别占血小板中此两种蛋白总量的26.40％)和31.55％。血小板受胶原刺激后则分别变为87.83％和42.17％。胞浆中的AM-Mg～(2+)-ATPase活力从正常的1.43±1.37nmolPi/min(每毫克肌球蛋白)升高到刺激后的4.66±1.51nmol Pi/min(每毫克肌球蛋白)。这些结果表明;血小板的胶原受体被结合后,有大量肌球蛋白和较少量肌动蛋白连接到胞膜上。另一方面,胞浆中的AM-Mg～(2+)-ATPase活力也明显增加。这些变化可能与血小板的形态变化和功能变化有密切关系。     

大鼠脑损伤后星形胶质细胞结蛋白和肌球蛋白表达的研究

对大鼠脑基底节穿刺损伤后星形胶质细胞结蛋白和肌球蛋白的表达进行了动态观察。结果显示结蛋白的表达显著增强，７ｄ时达高峰并维持这一高水平至损伤后３０ｄ，损伤后早期（２～４ｄ）其反应限于伤口周围，随后波及整个同侧半球，但强度随与伤口距离增加而逐渐减弱。肌球蛋白的阳性细胞主要见于伤口周围，部分出现在皮质分子层。结果表明结蛋白表达增强与反应性胶质化密切相关，而肌球蛋白的表达可能与增生星形胶质细胞的迁移、收缩有关。文中还对脑损伤后星形胶质细胞骨架蛋白表达改变的意义进行了讨论。     

人心肌肌凝蛋白轻链的分离提纯与鉴定研究

参考采用Schoβler方法并加以改进,分别应用等电点沉淀法、快速蛋白质液相层析(FPLC)及SDS聚丙烯酰胺凝胶制备电泳三种方法分离提纯肌凝蛋白轻链(CMLC),其各具有不同的优缺点,并对CMLC做了鉴定。同时证明在-20℃条件下,冻存时间较长或蛋白浓度较低的CMLC容易降解。     

18例子宫内膜间质肉瘤的组织学和兔疫组织化学研究

子官内膜间质肉瘤(endometrial stromal sarcoma ESS)是发生于女性生殖系统的一种罕见的恶性肿瘤。本文用免疫组织化学方法在石蜡切片上检测了18例ESS瘤细胞vim-entin(波形蛋白)、myosin(肌球蛋白)和EMA(上皮膜抗原)。发现瘤细胞内vimentin阳性,myosin和EMA阴性。这一结果支持了ESS起源于宫内膜间质细胞的观点。对ESS的诊断和鉴别诊断亦进行了讨论     

大鼠左室肌球蛋白重链同功酶谱的分析

在Ｍｅｒｃａｄｉｅｒ法基础上，采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术分离肌球蛋白重链同功酶。此法不仅能灵敏和准确地反映大鼠心室肌肌球蛋白重链同功酶的变化，而且保证了实验条件的可比性。本文对肌球蛋白重链同功酶分离方法中的关键技术进行了讨论。     

心肌急性损伤肌球蛋白轻链激酶酶促反应动力学研究

以内毒素休克狗作为急性心肌损害的动物模型，从心肌中提纯肌球蛋白轻链（ＭＬＣ）和肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ），根据酶动力学分析法研究急性损害对ＭＬＣＫ活性的影响。结果发现在此种状态下狗心肌ＭＬＣＫ活性显著降低，推测ＭＬＣＫ活性降低导致可磷酸化轻链（ＰＬＣ）磷酸化的磷酸酶相对占优势，磷酸化型Ｐ－ＬＣ向去磷酸化型转变。     

家兔半膜肌各亚部肌球蛋白重链表达差异的实验研究

目的利用家兔半膜肌各亚部肌纤维类型的分布特征,观察骨骼肌两型肌纤维肌球蛋白重链（MHC）的构成特点,为进一步探讨两型肌纤维的区别以及两型肌纤维转化机制奠定基础。方法取成年家兔半膜肌,通过改良肌球蛋白ATP酶染色法观察半膜肌四个亚部肌纤维类型的构成,应用RT-PCR方法检测各亚部4种MHC亚型mRNA的表达情况。结果固有半膜肌只含有慢肌（Ⅰ型）肌纤维,表达MHCⅠ型和少量MHCⅡa型基因。副半膜肌腹侧亚部除含有少量Ⅰ型肌纤维外,主要含有快肌（Ⅱ型）肌纤维,表达少量MHCⅠ型基因以及MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因等四种类型;而副半膜肌背侧和外侧亚部只含有Ⅱ型肌纤维,仅表达MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因。结论家兔半膜肌各亚部肌纤维类型几乎均呈单一类型分布。固有半膜肌亚部主要表达MHCⅠ型基因;副半膜肌各亚部主要表达MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因,以MHCⅡx型基因为主,各亚部之间存在细微差别。     

抗人心肌肌凝蛋白轻链Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

以人心肌肌凝蛋白轻链I免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与NS-1细胞融合,经过筛选、克隆化和再克隆已获得3-D_3、2-D_9、1-E_(10)和2-E_(10)等4个分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经免疫酶标和放免方法测定抗体工作滴度为1:1万。流动式荧光密度计检测NS-1、小鼠脾和杂交瘤细胞DNA的含量,结果表明杂交瘤细胞的DNA含量相当于NS-1和小鼠脾细胞DNA含量之和。杂文瘤细胞传代半年以上稳定地分泌特异性的单克隆抗体。用两个单抗进行了抗原双决定簇的放免測定,并制备了高效价的小鼠腹水。