江苏省113株大肠杆菌O157:H7的扩增片段长度多态性分析

目的:分析江苏省不同地区和年代分离的Escherichia coli O157:H7(E. coli O157:H7)之间的同源性?方法:用扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析法对113株 E. coli O157:H7菌株进行分子分型,采用软件BioNumerics Version 4.0对分型数据进行处理和分析?结果:113株E. coli O157:H7共分37个型别,不同来源的菌株存在相同的基因型别,不同的地区和物种之间存在着相互传播?结论:AFLP可以用于对不同来源的E. coli O157:H7进行分子分型?     

江苏省徐州市分离的大肠杆菌O157:H7菌株携带志贺毒素2型别的变化

目的 研究我国分离的大肠杆菌O157：H7菌株的志贺毒素型别的变化。方法使用针对志贺毒素2及其变种的引物对进行PCR检测、细菌染色体DNA的PstⅠ酶切后的Southern印迹实验和PCR产物的HaeⅢ、RasⅠ酶切分析,以及：PCR产物克隆后的序列分析方法以及致病性大质粒的PstⅠ酶切分析。结果1999年分离自徐州市的人的5株菌均携带slt1、slt2,而2000年从江苏省徐州市患者分离的10株和蜣螂标本分离的4株共计14株大肠杆菌O157：H7菌株仅携带slt2vha毒素基因,其致病性质粒的限制性酶切图谱与1999年的菌株相比也发生了改变。结论鉴于江苏省徐州市1999年的分离的5菌株全部携带slt1和slt2基因,结果提示该地的优势菌型发生了改变,可能当地大肠杆菌O157：H7感染的流行病学特点有关。针对slt2变异基因而设计的引物及其以此为基础进行的限制性片段长度多态性分析的方法对于研究O157：H7菌株的志贺毒素型别的变化能够满足特异性及灵敏性的要求。     

志贺氏菌痢暴发菌株的分子流行病学分析

目的：探讨四种基因分型方法在一起F2a志贺氏菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法：对43株分离自患者粪便和食物的菌株分别进行质粒图谱分析、质粒DNA酶切图谱分析、随机PCR分析、set1／set2毒力基因PCR分析。结果：随机PCR将43株Fla志贺氏菌分为两个不同的谱型，质粒图谱、set1／set2毒力基因PCR分为三个不同的谱型，而质粒DNA酶切图谱分为四个不同谱型。其中基因型完全相同的菌株35株，为引起本次菌痢暴发的流行株。7株基因型不同菌株是本次暴发期间同时存在的散发病例。从食物中分离的菌株基因型与流行株相同，证明此次暴发是通过污染的食物而引起传播的。食堂炊事员粪便中虽然分离出了F2a志贺氏菌，但基因型与流行株不同，不是本次暴发的传染源。结论：DNA水平上的分型方法能更为准确、深入地揭示菌痢暴发过程中各分离株之问的流行病学联系。     

应用多重引物PCR方法检测O157：H7毒力基因的初步研究

目的 研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157：H7毒力的复合RSR方法。方法 选用针对大肠杆菌O157：H7志贺样毒素I、Ⅱ的两对引物，在同一扩增体系中进行PCR，检测不同来源的大肠杆菌O157：H7及E．coli ATEEE5922株。结果 EHEC O157：H7 933W株扩增出两条志贺样毒素基因产物，而E．coli ATOC25922株和EHEC O157：H7 97-l-68的扩增结果均为阴性。结论 应用多重引物RCR方法检测大肠杆菌O157：H7毒力基因，简便、快速、特异、敏感，对流行病学调查分析、制定预防和控制对策有重要的参考价值。     

长沙市岳麓地区大肠埃希菌O157∶H7宿主动物带菌情况调查

目的:调查湖南省长沙市岳麓地区不同乡镇大肠埃希菌O157:H7宿主动物带菌情况.方法:2011年5月采集长沙市岳麓地区境内鸡、鸭、猪、牛等家畜家禽的粪便标本307份,按国标常规培养法检测大肠埃希菌O157:H7.并采用PCR对分离菌株O157的抗原特异性基因rfb EO157进行检测.结果:307份标本中共检出阳性标本6份,总阳性率为1.95％(6/307),其中散放的鸡、鸭、猪带菌阳性率分别为1.67％(3/180)、14.29％(1/7)、2％(2/100).且分离的6株大肠埃希菌O157:H7特异性基因rfb EO157均为阳性.结论:长沙市岳麓地区家畜家禽已存在大肠埃希菌O157:H7感染,应引起足够的重视.提示加强宿主动物大肠埃希菌O157:H7监测,对疫情的分析和疫情预测具有重要意义.     

河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC O157:H7)感染之流行与基因特征研究

目的 :了解河南省肠出血性大肠杆菌 (enterohemorrhagicescherichiacoli,EHEC)的流行状况与流行菌株的志贺毒素基因型。方法 :采集河南省 14个监测点上腹泻病人、家畜家禽粪便和肉食品等标本分离E HEC菌株。应用分子生物学技术检测EHEC菌株的rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、stx2 和stx1等毒力基因和志贺毒素基因亚型 ,应用细胞培养技术检测菌株Vero细胞毒性。结果 :从腹泻病人、家畜家禽、肉食品、苍蝇、蜣螂中均分离出EHECO15 7:H7菌株 ,波尔山羊的带菌率最高达到 2 9.8%。 13 8株携带志贺毒素基因的菌株中 ,EHECO15 7:H7计 95株 ,占产毒菌株的 68.8% ;EHEC非O15 7菌株 43株 ,占 3 1.2 %。菌株可分为 5种毒素基因型 ,EHECO15 7:H 7仅含stx2 基因 ,以stx2 vha亚型为主 ,不含有stx1基因。EHEC非O15 7血清型毒素基因型较复杂。携带stx1和 /或stx2 的菌株均具有Vero细胞毒性。结论 :河南省腹泻病人和家畜家禽中存在EHEC感染。EHECO15 7:H7血清型是优势菌型 ,羊是主要宿主动物。目前河南省EHECO15 7:H7菌株毒素基因型为stx2 并以stx2 vha亚型为主。     

改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7

目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7的快速方法。方法根据GenBank公布O157：H7的rfbE保守序列，设计一对引物和改良分子信标探针，用FAM荧光剂标记探针的5’端，建立改良分子信标实时PCR检测O157：H7的反应体系，应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果共检测11种细菌。只有大肠杆菌O157：H7有荧光信号，其余10种全无荧光信号，且与其他细菌无交叉反应，DNA灵敏度为64fg，菌液灵敏度为59cfu／ml或2cfu／PCR反应体系。应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157：H7均出现特异的荧光信号，无干扰。对89份食品样品进行检测，5份O157：H7实时PCR阳性，其余样品为阴性，检测仅需2h。5份阳性样本，经传统方法培养，有3份检出大肠杆菌O157：H7。结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于大肠杆菌O157：H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

肠出血性大肠埃希菌O157：H7的分布及特征

目的了解H市外环境（食品、生活污水及菜地土壤）中肠出血性大肠埃希菌O157∶H7的分布与特性。方法用免疫磁珠富集法进行O157：H7分离;按《全国食品污染物监测相关实验室手册》（细菌学部分）及相关国家标准鉴定分离菌株;标准血清分型;PCR法测定菌株SLT1,SLT2,ereA,hly毒素基因;纸片琼脂扩散（K-B）法测定菌株耐药性。结果自H市外环境标本（食品、生活污水、菜地土壤）检出O157：H7共15株,检出率1.42%～4.34%,鸡肉与生活污水检出率高;农贸市场食物中O157：H7的检出率（2.25%）高于超市（0.56%）;它们中有93.33%（14/15）是携带SLT1、SLT2、eae、hly毒力基因的高致病菌株;食源性O157：H7耐药性严重,耐药菌株多,仅对哌拉西林、亚胺培南敏感。结论H市外环境有O157：H7分布,且检出的多是高致病性强毒菌株,应警惕其流行造成感染的潜在危险。     

用RAPD技术分析出血性大肠杆菌O157：H7

目的 应用RAPD技术分析肠出血性大肠杆菌O157：H7 DNA多态性并对其分型。方法 用两条10bp的随机引物对3株肠出血性大肠杆菌O157：H7和3株其它病原性大肠艾希氏菌进行扩增，扩增产物经凝胶电泳后得到指纹图。结果 共得到12个不同的DNA指纹图谱，经统计软件SPSS系统聚类分析得到两个不同的分类树状图。结论 RAPD技术方法简便、快速、分辨力高，在肠出血性大肠杆菌O157：H7分子流行病学研究中有较大的应用前景。     

商丘市、济源市腹泻患者、家禽、家畜粪便中E.coli O157:H7的鉴定

目的：对商丘市、济源市腹泻患者、家禽、家畜粪便中首次分离的E.coliO157:H7进行生物学特性等方面的研究。方法：采集疫区患者，外环境，家畜和家禽粪便标本1895份，采用mEC肉汤增菌，胶体金免疫卡快速测定法，免疫磁珠集菌法，CHROMAGAR-O157：H7菌株，在CHROMAGAR-O157：H7显色培养基生长形态，颜色，生化反应出现多样化，rfbO157,stx2,hlyA,eaeA基因检测均阳性的有58株，stx2阳性1株，eaeA阳性4株，72株无毒力基因。结论：为本省实验室诊断E.coliO157:H7提供了理论依据；不同种类的家禽，家畜分离的产毒菌株比例差别显著，以波尔山羊最为突出；为今后在制定对该菌的诊断标准，传染源的追踪和控制及细菌毒力学等方面的研究提供了重要线索。     

寡核苷酸阵列芯片快速鉴定大肠杆菌O157:H7初步研究

目的设计、制作一种微型化寡核苷酸阵列芯片，评价快速鉴定肠出血性大肠杆菌O157：H7的效果。方法多重PCR扩增大肠杆菌O157：H7七个特异性基因位点（rfbE、flicH7、intimin、Shiga-like toxins Ⅰ and Ⅱ、hemolysin A和uidA）．通过PCR反应掺入SpectrumOrang^TM-dUTP获取荧光标记的靶序列，与制备的芯片寡核苷酸探针杂交。结果寡核苷酸阵列芯片检测结果与试验预期相符，获取的杂交图分辨效果明显优于多重PCR琼脂糖凝胶电泳。结论基于玻片的寡核苷酸阵列芯片制作简便，鉴定病原菌检测细菌毒力因子快速、灵敏、特异，有良好的应用前景。     

汕头市食源性致病菌及食源性疾病监测分析

目的 了解汕头市主要食品食源性致病菌污染状况及食源性疾病的发生情况，食品污染来源及其与食源性疾疾病发生的关系，以便能采取相应的预防与控制措施。方法 于2004～2006年每年夏秋季在集贸市场、超市采集样品进行致病菌监测，按国标方法对食品中的沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌0157：H7以及海产品中的副溶血性弧菌进行分离和鉴定。结果 采集5类样品共251份检出致病菌56份，总检出率为22．31％（56／251），其中，沙门菌检出率为1．99％（5／251），单核细胞增生李斯特菌检出率19．92％（50／251）、大肠杆菌O157：H7检出率为0．40％（1／251），海产品的副溶血性弧菌检出率高达41．93％（13／31）。结论 汕头市5类主要食品均受到食源性致病菌不同程度的污染。因此，应加强对各类食品食源性致病菌监测，并采取相应的预防和控制措施，以便防止食源性疾病的暴发。     

硫辛酸对细胞DNA损伤保护作用的初步研究

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究不同浓度过氧化氢(H2O2)分别作用于HepG2细胞2 h后DNA损伤的剂量效应关系,同时观察硫辛酸对H2O2损伤细胞DNA的保护作用. 方法: 将细胞分为对照组、损伤组和保护组,依次加入不同浓度的H2O2及硫辛酸,应用SCGE检测H2O2引起细胞DNA损伤. 结果: 随着H2O2浓度的增加,细胞DNA的损伤程度加重,能使尾长、尾部DNA百分含量和尾距显著增加(P《0.05). 硫辛酸能使H2O2损伤细胞的尾长、尾部DNA百分含量和尾距均较对照组减少(P《0.05). 结论: H2O2对细胞DNA损伤具有剂量效应关系,硫辛酸可以有效地减少H2O2引起的细胞DNA的断裂损伤.     

维生素K_1的含量测定方法研究

维生素 K_1中间体有紫外吸收,在使用紫外分光光度法测定 K_1时带来干扰。本文报告经含水率7%氧化铝层析后,可分离除去这些中间体。本文测定了 K_1中间体的紫外吸收曲线,探讨不同含水率的氧化铝对 K_1和 K_1中间体吸附的影响,比较含水率7%氧化铝对各个中间体的吸附。     

异丙酚对H2O2增强肿瘤坏死因子-α诱导血管内皮细胞凋亡效应的抑制作用

目的:探索H2O2对TNF-α诱导血管内皮细胞凋亡的作用及异丙酚(propofol)对细胞凋亡的保护作用和可能的机制。方法:将体外培养的ECV304细胞分为5组:①对照组(Control);②10μmol/L H2O2组(H);③40 nmol/L TNF-α组(T);④TNF-α+H2O2组(T+H);⑤TNF-α+H2O2+propofol组(T+H+P)。观察:①流式细胞仪检测细胞凋亡率;②丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果:10μmol/L的H2O2仅造成少量细胞凋亡,MDA含量变化不显著(P>0.05);与TNF-α共同作用后细胞凋亡率显著增加,且高于二者分别作用之和,细胞内MDA含量也明显增加,SOD和GSH-Px含量明显减少,与TNF-α组相比差异具有显著性(P<0.05);加入异丙酚预处理可使TNF-α和H2O2组凋亡率明显降低,同时伴随细胞内MDA含量降低,SOD和GSH-Px含量增加。结论:H2O2能显著增强TNF-α诱导细胞凋亡的效应,异丙酚通过降低细胞氧化损伤的机制,有效逆转H2O2增强TNF-α诱导细胞凋亡的效应。     

高热预处理对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理（HPC）对过氧化氢（H2O2）所致大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）细胞氧化应激损伤的影响。方法 体外培养PC12细胞，将细胞分为正常对照组、HPC组、H2O2组、HPC＋H2O2组，采用MTT法测定细胞活力，乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤，流式细胞术分析细胞凋亡。结果 与正常对照组相比，H2O2组引起PC12细胞MTT活力明显下降（P〈0．01），LDH释放量增多（P〈0．01），凋亡明显；而与H2O2处理组相比，HPC＋H2O2组则表现为MTT活力升高（P〈0．05），LDH释放量减少（P〈0．05），且没有出现明显凋亡。结论 高热预处理对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤产生保护作用。     

异常黑胆质成熟剂与清除剂对H2O2诱导的淋巴细胞凋亡的影响

目的观察异常黑胆质成熟剂及清除剂对低浓度H2O2诱导的淋巴细胞凋亡的作用.方法不同浓度H2O2诱导体外培养的淋巴细胞,运用Hoechst33258染色法观察凋亡发生的凋亡指数,以确定H2O2诱导凋亡的剂量及作用时间;随后运用不同浓度异常黑胆质成熟剂及清除剂进行干预,观察其对淋巴细胞凋亡指数的影响.结果高浓度的异常黑胆质成熟剂及清除剂均能降低H2O2所致的淋巴细胞凋亡的凋亡指数. 结论异常黑胆质成熟剂及清除剂能够抑制H2O2诱导的淋巴细胞的凋亡.     

过氧化氢酶与甲基强的松龙对实验性脱髓鞘性视神经炎的抑制作用

目的:研究活性氧簇清除剂过氧化氢酶(Catalase,CAT)及甲基强的松龙(Methylprednisolone sodium succinate,MP)琥珀酸钠对实验性脱髓鞘性视神经炎的作用及其机制.方法:将致敏大鼠分别以Catalase、生理盐水(Physiolosic saline,PS)及MP琥珀酸钠腹腔注射后分别于抗原致敏后第7 d及14 d,通过H_2O_2测定、病理图像分析、细胞组织超微结构分析等方法研究CAT及MP对实验性变应性视神经脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠视神经炎症损伤的作用.结果:EAE大鼠视神经H_2O_2含量较正常大鼠高,CAT和MP能减少EAE大鼠视神经H_2O_2含量,减轻炎症反应,抑制视神经的脱髓鞘,但MP对H_2O_2清除作用及髓鞘损害的保护作用较CAT弱.结论:H_2O_2可能和脱髓鞘性视神经炎的发病有一定关系.