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相似文献
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1.
糖尿病肾病目前尚缺乏早期诊断的有效方法,且治疗效果不佳。结缔组织生长因子作为一种致纤维化因子,在糖尿病肾病时的肾脏系膜细胞、足细胞、肾间质细胞中表达增加,并反作用于上述细胞。其机制可能是结缔组织生长因子与细胞表面硫酸类肝素蛋白多糖、酪氨酸激酶受体等结合,诱导细胞炎性反应及基质胶原蛋白合成与纤维粘连蛋白合成,肾脏发生纤维化。结缔组织生长因子是肾脏纤维化与蛋白尿形成的一种因素,特异性阻断结缔组织生长因子可能会成为治疗糖尿病肾病的新方向。  相似文献   

2.
目的肝脏前体细胞(WB-F344)在不同的刺激下可以分化成肝细胞或胆管细胞。本研究旨在比较外源性和内源性结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对WB-F344细胞分化的影响。方法重组人CTGF直接刺激WB-F344细胞,MTT法观察CTGF对WB-F344细胞活性的影响;用Western blotting方法检测CTGF对WB-F344细胞分化的影响:包括肝系标志物甲胎蛋白(α-feto protein,AFP)、白蛋白和胆系标志物细胞角蛋白-19(CK-19)蛋白水平的变化。构建含CTGF全长编码基因的质粒(dl6-96-CTGF)转染WB-F344细胞,用G418筛选稳定表达CTGF的WB-F344细胞株,Western blotting方法同样检测上述标志物蛋白水平的变化。结果重组人CTGF作用于WB-F344细胞24h后,可以轻度抑制细胞活性,但剂量关系不明显。高剂量CTGF作用于WB-F344细胞24h后,可以明显改变WB-F344细胞表面标志物的表达:幼稚肝细胞标志物AFP的表达减少,而成熟肝细胞标志物白蛋白和胆管细胞标志物CK-19的表达均增加。成功构建CTGF全长编码基因的质粒,并用G418获得稳定转染CTGF全长质粒的WB-F344细胞株。稳定转染dl6-95-CTGF的WB-F344细胞,与转染dl6-95相比,AFP和CK-19表达均减少,白蛋白表达增加,但诱导程度没有外源性明显。结论与内源性结缔组织生长因子相比,外源性结缔组织生长因子可以明显改变肝脏前体细胞表面标志物的表达,具有诱导肝脏前体细胞向成熟肝脏细胞分化的潜能。  相似文献   

3.
郝建军  多永胜  杨钰 《现代医学》2010,38(2):125-128
目的:探讨人硫酸酯酶1对生长因子诱导下胰腺癌细胞生长作用的影响及其机制.方法:应用lipofectamine方法转染人硫酸酯酶1基因到低表达该基因的胰腺癌细胞Panc-1,通过Northern bloting筛选阳性转染的细胞克隆,并检测转染后胰腺癌细胞硫酸酯酶1的水平;应用噻唑氮蓝比色分析(MTT)法检测转染后胰腺癌细胞对生长因子作用的影响;应用Western bloting检测人硫酸酯酶1转染对生长因子受体与MAPK磷酸化水平的影响.结果:硫酸酯酶1稳定转染入Panc-1细胞后,Panc-1细胞稳定表达硫酸酯酶1 mRNA,并且硫酸酯酶1表达水平升高.FGF-2、HB-EGF、EGF均促进胰腺癌细胞Panc-1的生长,硫酸酯酶1基因转染后减弱FGF-2对细胞的生长促进作用,降低FGF-2所诱导的MAPK磷酸化水平,但对HB-EGF、EGF的作用无明显影响.结论:人硫酸酯酶1 转染减弱生长因子FGF-2所诱导的胰腺癌细胞的生长促进作用;人硫酸酯酶1可能参与胰腺癌的病理发生发展过程.  相似文献   

4.
目的 探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质(ECM)不同成分的抑制作用及对结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法 以体外培养大鼠肾小球系膜细胞及血清药理学方法 为基础,采用酶联免疫吸附试验检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅡ)的含量;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测结缔组织生长因子mRNA的表达.结果 细胞外基质纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原的含量与结缔组织生长因子mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对其均有抑制作用.结论 肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制结缔组织生长因子的分泌与表达,此作用是其防治肾小球硬化的可能机制之一.  相似文献   

5.
目的 构建含人结缔组织生长因子(CTGF)的腺相关病毒(AAV)表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达。方法 以含有人CTGF基因序列的质粒pCMV-SPORT6为模板,应用PCR克隆出CTGF基因,采用分子克隆的方法把CTGF克隆到AAV表达载体pSNAV2.0上构建重组质粒pSNAV2-CTGF。把重组质粒转染HEK293细胞,用免疫荧光法对重组质粒目的蛋白的表达进行研究,MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性。结果 成功构建完全正确的CTGF基因序列的AAV表达载体pSNAV2-CTGF,将其转染HEK293细胞后,免疫荧光检测到目的蛋白的表达,转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性。结论 成功构建了真核表达载体pSNAV2-CTGF,转染HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的CTGF蛋白。  相似文献   

6.
骨修复是一个复杂过程,需要细胞与各种生长因子的协同作用。生长因子是一类通过与特异的、高亲和的细胞膜受体结合,调节细胞生长与其他细胞功能等多效应的小分子多肽类物质。重组生长因子是利用基因工程技术生产的生长因子产品。由于生长因子在骨修复过程中的重要作用以及传统骨移植方法暴露出的一些不良反应和并发症问题,用重组生长因子治疗骨缺损、骨不连以及重组生长因子在各种骨科手术中的应用越来越受到研究人员的重视。本文对重组人血小板衍生生长因子(rhPDGF)、重组人骨形成蛋白(rhBMPs)促骨修复的实验和临床研究以及其它重组生长因子的研究进展作综述。  相似文献   

7.
目的:探讨人牙龈成纤维细胞合成结缔组织生长因子对促进其分泌Ⅰ型胶原的作用。方法将人牙龈成纤维细胞与壳聚糖/明胶/卡拉胶支架材料复合培养,以培养基中是否加入抗结缔组织生长因子抗体分为实验组和对照组,采用ELISA法检测并比较两者培养孔中上清液Ⅰ型胶原和结缔组织生长因子的浓度。结果加入抗结缔组织生长因子抗体的实验组上清液中的Ⅰ型胶原含量和结缔组织生长因子含量均小于未加抗结缔组织生长因子抗体的对照组,差异有统计学意义( P<0.05)。结论人牙龈成纤维细胞与壳聚糖/明胶/卡拉胶支架复合培养时,可以通过分泌结缔组织生长因子来促进Ⅰ型胶原的产生。  相似文献   

8.
目的 构建人结缔组织生长因子(CTGF)基因真核表达载体,并在哺乳类细胞人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中获得表达。从而为进一步研究CTGF基因在血管新生的作用打下基础。方法 根据人CTGF基因的cDNA序列,设计合成一对5′端分别含有Xba Ⅰ和HindⅢ酶切位点的特异性引物,运用RT-PCR方法扩增JIVECs中CTGF,回收PCR产物,并将其连接至克隆载体PIM-18中,重组的PUMT-18在大肠杆茵DH5α内扩增后,经质粒提取、XbaⅠ和HinsⅢ酶切,筛选出阳性重组子,并进行基因测序鉴定;琼脂糖凝胶电泳回收含有CTGFcDNA全长的酶切片段,然后在DNA连接酶作用下将其与真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,重组质粒经XbaⅠ和HindⅢ酶切予以鉴定。并将其转染到HUVECs中,Western blotting法证实其表达。结果 RT-PCR产物含有CTGFcDNA,基因测序显示重组的PUMT-18中含有正确的人CTGFcDNA全长编码序列,重组的pcDNA3.1(-)含有人CTGFcDNA全长编码序列,Western blotting证实重组的真核表达载体在人脐静脉内皮细胞成功转染并表达。结论 成功构建人结缔组织生长因子CTGF基因的真核表达载体。  相似文献   

9.
姜黄素对糖尿病大鼠早期肾纤维化的影响   总被引:3,自引:1,他引:2  
宁勇  刘晓城 《现代医学》2004,32(2):77-80
目的 研究姜黄素对糖尿病大鼠结缔组织生长因子表达的影响。方法  2 4只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和姜黄素治疗组 ,每组 8只 ,前两组用生理盐水灌胃 ,治疗组用姜黄素 (2 0 0mg·kg-1·d-1)灌胃 ,6周后用半定量逆转录 多聚酶链式反应 (RT PCR)来检测各实验组肾组织中结缔组织生长因子基因的表达水平。结果 糖尿病组大鼠结缔组织生长因子表达水平与正常对照组比较显著增高 (P <0 .0 1) ;姜黄素治疗组大鼠结缔组织生长因子表达水平与正常对照组和糖尿病组比较均有显著性差异 (均为P <0 .0 5 )。结论 姜黄素具有抗肾纤维化的作用 ,可能与其抑制结缔组织生长因子在肾组织中的表达有关  相似文献   

10.
[目的]探索人胃成纤维细胞体外培养的技术方法及其结缔组织生长因子表达情况。[方法]采用组织块贴壁培养法进行人胃成纤维细胞体外培养并传代,倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态,并用免疫细胞化学法检测培养细胞的波形蛋白与角蛋白表达。用RT-PCR法检测人胃成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达,免疫细胞荧光染色法检测人胃成纤维细胞CTGF蛋白表达情况。[结果]人胃成纤维细胞培养成功传代,表现为长梭形或星形细胞,免疫细胞化学鉴定细胞波形蛋白阳性,角蛋白阴性。RT-PCR法与免疫细胞荧光染色法证实体外培养的人胃纤维细胞表达CTGF。[结论]组织块法培养的人胃成纤维细胞可在体外稳定培养、传代,人胃成纤维细胞能合成CTGF。  相似文献   

11.
目的:构建CTGF特异性siRNA慢病毒表达载体并观察其介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对人肝癌细胞CTGF(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响?方法:针对已经筛选确定的人CTGF基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与Plk0.1-GFP-SP6载体连接产生shRNA 慢病毒载体,经PCR筛选阳性克隆进行DNA测序鉴定?用脂质体转染法将质粒共转染293T 细胞,将包装产生的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,Real-time PCR?Western-blot检测CTGF mRNA和蛋白的表达?结果:PCR与DNA测序证实合成的含CTGF shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确?经RNA干扰后的靶细胞CTGF mRNA以及蛋白表达水平明显降低?结论:成功构建人CTGF基因RNA干扰慢病毒载体,体外感染HepG2细胞可有效降低CTGF mRNA和蛋白的表达,为以CTGF基因为靶点的肝癌基因治疗研究奠定了基础?  相似文献   

12.
人白细胞介素17cDNA的克隆及表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 获取重组的人白细胞介素17以进行科学研究和应用。方法 应用RT-PCR的方法,从经PHA活化的人外周血单个核细胞中扩增hIL-17cDNA的编码序列,将其克隆至测序载体pBS SKⅡ( )中进行测序,再将其亚克隆至表达载体pBV220中,在大肠杆菌XL1-Blue中进行表达。结果 克隆获得了hIL-17cDNA,经热诱导后使hIL-17蛋白在大肠杆菌中的表达量达到了39.7%。结论 通过克隆hIL-17cDNA的编码序列及热诱导使hIL-17蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。  相似文献   

13.
设计合成含适当酶切位点的PCR引物 ,以人的全长THcDNA为模板 ,进行PCR扩增反应 ,得到人酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase,TH)全长及催化核心序列 ,将其分别插入谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 4T 1 ,转化入大肠杆菌BL2 1 ,以IPTG诱导表达 ,SDS PAGE、westernblotting分析表达产物。结果获得了编码N 端缺失 1 4 5个氨基酸的酪氨酸羟化酶催化结构域的cDNA片段及带一定内切酶识别位点的全长片段 ,表达载体构建正确。插入片段序列与人THmRNA相应序列完全一致。转入重组质粒的菌经诱导后 ,有相对分子质量约为 8.3万及 6.6万的外源融合蛋白表达 ,并得到较纯的酶蛋白  相似文献   

14.
目的 了解恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)谷氨酸脱氢酶(GDH)基因全编码区核苷酸序列变异情况。方法 PCR扩增恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)GDH基因全编码区,产物经EcoRI SalI酶切后,定向克隆至pGEX-4T-1质粒,采用Sanger双脱氧链末端终止法测序,与其它生物GDH进行同源性分析。结果 成功扩增了恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)GDH编码基因,大小为1410bp,无内含子,与Thailand株GDH基因相比,两有2个碱基不同,推导的氨基酸序列完全相同;与蓝氏贾第鞭毛虫,克鲁氏锥虫和梭状芽孢杆菌GDH的同源性分别为57.90%(260/449),56.51%(243/430),42.05%(164/390);与人的GDH-1,GDH-2的同源性分别为29.02%(101/348),28.73%(100/348)。结论 FCC1/HN株与Thailand株GDH高度同源,疟原虫GDH明显不同于其它生物GDH。  相似文献   

15.
16.
目的 克隆人PRL-3基因并构建其原核表达载体.方法 设计PRL-3特异性引物,提取人大肠癌细胞系SW480总RNA,用RT-PCR方法获取人PRL-3 cDNA.经T-A克隆,通过双酶切鉴定及测序确认后,构建人PRL-3基因的原核表达载体pGEX-4T-1-PRL-3.结果 成功扩增出人PRL-3全长cDNA,并构建pGEX-4T-1-PRL-3原核表达载体,测序结果表明PRL-3全长cDNA与GenBank中PRL-3序列完全一致,SDS-PAGE胶分析表明,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了重组蛋白.结论 获得人PRL-3基因全长cDNA并构建其原核表达载体,使其在大肠杆菌中获得了高效表达,为深入研究PRL-3基因在大肠癌发生发展中的作用奠定了基础.  相似文献   

17.
目的:从人基因组中克隆SOD2基因的启动子并插入到荧光素酶报告基因载体中并进行基因测序鉴定。方法:以人基因组DNA为模板,用PCR的方法扩增出人SOD2基因启动子片段后,将其插入到pGL3-basic载体的荧光素酶报告基因上游,将构建的重组质粒通过双酶切片段的凝胶电泳分析和DNA测序以确定插入位置和序列的正确性。结果:双酶切反应和测序结果显示SOD2基因启动子插入的位置和序列是正确的。结论:成功克隆了SOD2基因启动子,为后续SOD2转录调控机制的研究提供重要的实验基础。  相似文献   

18.
罗庆  康权  金先庆 《重庆医学》2005,34(2):163-165
目的结缔组织生长因子(CTGF)在肿瘤发生,胚胎发育、骨折愈合、细胞增殖和分化、血管形成等众多领域都有着重要的作用,对结缔组织生长因子进行克隆及构建其真核表达载体,对其在功能上的进一步研究及应用有积极意义.方法以含有鼠CTGF基因序列的EST克隆为模板,通过PCR的方法克隆出目的基因CTGF,再以分子克隆学的方法将CTGF克隆入真核表达载体pAdTrack-CMV,进一步以PCR、酶切、DNA测序的方法筛选出正确的真核表达质粒.并通过Western-Blotting的方法对质粒的表达功能进行研究.结果 PCR、酶切、DNA测序的方法均证实已经成功克隆获得序列正确的目的基因CTGF,并将CTGF克隆入真核表达载体pAdTrack-CMV.Western-Blotting的结果表明构建的表达CTGF的真核表达载体高表达CTGF蛋白质.结论成功克隆目的基因CTGF并构建其真核表达质粒,证实在蛋白质水平获得了表达.  相似文献   

19.
重症肌无力抗乙酰胆碱受体单链抗体基因的构建   总被引:2,自引:2,他引:0  
[目的 ]构建重症肌无力抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因 .[方法 ]应用PCR技术及基因克隆技术分两步完成重链和轻链可变区基因的克隆 ,再对构建的单链抗体A 7基因进行序列测定检测其核苷酸序列 .[结果 ]构建的重组质粒经序列分析 ,重链可变区基因长度为 36 9bp ,轻链可变区基因长度为 32 1bp ,单链抗体基因长度为 735bp ;单链抗体A 7基因正确地插入在载体质粒pHEN 2开放读码框架内 .[结论 ]成功地构建重症肌无力抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因 ,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础 .  相似文献   

20.
人抵抗素基因cDNA的克隆   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的克隆人抵抗素基因(hRETN)cDNA,为进一步研究RETN的结构和功能提供实验基础.方法应用RT-PCR方法从中国人网膜脂肪垫总RNA中扩增出RETN 基因cDNA,克隆入载体pMD18-T中,形成重组载体pMD18-T/hRETN.通过蓝白斑筛选出阳性克隆,限制性内切酶酶切鉴定后对其进行测序.结果从脂肪组织总RNA中扩增得到363 bp片段hRETN基因,其cDNA序列与Genbank hRETN基因序列基本相同.结论成功地克隆中国人hRETN cDNA.  相似文献   

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