黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体损伤的保护研究

[摘要] 目的 研究黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体损伤的保护作用。方法 采用两肾一夹制备肾血管性高血压大鼠,术后两周将大鼠随机分为手术组和黄芪甲苷治疗组[5.0mg/(kg?d)],以假手术组为正常对照,治疗两周后,观察大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体超微结构的变化,应用免疫组化染色法观察大鼠胸主动脉内皮细胞锰超氧化物歧化酶（SOD2）的表达。结果 术后两周大鼠收缩压明显高于正常对照大鼠。手术组大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体内嵴断裂、消失,基质电子密度降低,肿胀、空泡化明显;黄芪甲苷治疗后大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体损伤程度明显减轻。手术组大鼠胸主动脉内皮细胞SOD2表达水平较正常对照大鼠明显降低,黄芪甲苷治疗后恢复至正常大鼠水平。结论 黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体的损伤有保护作用,上调主动脉内皮细胞SOD2表达可能是其途径之一。     

黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的腹膜间皮细胞线粒体损伤的干预机制研究

目的?研究黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞（HPMCs）线粒体损伤的影响,并探讨其干预机制。方法?①人腹膜间皮细胞株（HMrSV5）在RPMI 1640（含1%FCS）培养液中培养24?h后分为6组:空白组:正常培养液2?mL;高糖腹透液组:含4.25% PDS 1?mL+正常培养液1?mL;低剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度10?μmol/mL;中剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度20?μmol/mL;高剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度40?μmol/mL;阳性药对照组:吡菲尼酮50?μmol/mL。②分别采用CCK-8法测定HMrSV5的增殖活性;流式细胞仪检测细胞活性氧族（ROS）水平变化;罗丹明123荧光染色检测HMrSV5膜电位水平变化;JC-1法测定HMrSV5线粒体膜电位的去极化;Western blot检测HPMCs线粒体形态和功能相关蛋白的表达情况。结果?①CCK-8检测结果显示,与模型组相比,黄芪甲苷处理组OD值明显升高,细胞存活率也相应增加,呈浓度依赖性,黄芪甲苷对HPMCs有保护作用;②流式检测提示高糖腹透液刺激后线粒体ROS产生增加,而黄芪甲苷可有效降低ROS水平;③JC-1和罗丹明123染色后流式检测发现随着黄芪甲苷浓度的增加,线粒体膜电位的去极化程度随之减少,同时有效增加线粒体膜电位,线粒体膜通透性降低,黄芪甲苷能部分修复高糖腹透液对线粒体的损伤;④Western blot检测结果显示,黄芪甲苷处理的细胞线粒体分裂蛋白DRP1、FIS1的表达水平明显降低,线粒体外膜结合蛋白OPA1、TOM70的表达水平明显升高。结论?①高糖腹透液能诱导HPMCs线粒体损伤模型;②黄芪甲苷能够通过促进HPMCs线粒体外膜OPA1、TOM70蛋白的表达,降低DRP1、FIS1蛋白表达水平,减少线粒体膜电位去极化,同时有效增加膜电位及降低线粒体膜通透性,进而改善高糖腹透液诱导的HPMCs线粒体氧化应激损伤,保护其结构功能的稳定。      

大鼠胸主动脉球囊损伤后早期平滑肌细胞凋亡观察

目的探讨大鼠胸主动脉球囊损伤后早期细胞凋亡和凋亡相关基因表达的变化及其规律。方法将36只雄性SD大鼠随机分为两组,手术组（n=30）行球囊扩张损伤大鼠胸主动脉术;对照组（n=6）不行球囊损伤。取正常及损伤术后即刻、30min、1h、2h、4h胸主动脉,应用苏木精-伊红染色、TUNEL法、免疫组化和计算机图像分析等方法进行形态学观察,进行细胞凋亡、凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2表达水平检测。结果正常大鼠胸主动脉管腔面有单层完整内皮细胞,内外弹力层呈波浪形,完整连续;手术组球囊损伤后可见内弹力层模糊,多处断裂,管腔面毛糙无内皮细胞;损伤后4h中膜平滑肌细胞密度较对照组减少。对照组、手术组损伤后即刻胸主动脉偶见凋亡细胞;手术组球囊损伤后30min,管壁中膜可见大量凋亡平滑肌细胞,损伤后1、2h中膜凋亡细胞明显减少,损伤后4h中膜仅偶见凋亡细胞。对照组、手术组动脉损伤后即刻胸主动脉偶见Fas阳性平滑肌细胞,球囊损伤后30min中膜可见大量Fas阳性细胞,损伤后1、2h中膜Fas阳性细胞明显减少,动脉损伤后4h仅偶见Fas阳性平滑肌细胞。对照组动脉壁显著表达Bcl-2,手术组胸主动脉中膜Bcl-2表达迅速下降,损伤后1h达最低水平,后回升。Bcl-2与Fas表达呈负相关（r=-0.816,P〈0.01）。结论平滑肌细胞凋亡可能在动脉损伤后平滑肌细胞过度增殖和迁移过程中具有重要作用。     

PYK2与大鼠肾血管性高血压左心室肥厚关系的研究

目的 探讨富脯氨酸蛋白酪氨酸激酶(PYK2)与肾血管性高血压大鼠左心室肥厚的关系及其发病机制.方法 20只雄性SD大鼠,随机分成手术组及假手术组,每组各10只.手术组行二肾一夹手术建立肾血管性高血压左室肥厚模型,假手术组行假手术.分别于术前及术后4周、8周、12周检测鼠尾动脉血压1次;术后12周处死动物,取心脏检测相应指标.结果 (1)术后4周时,手术组大鼠收缩血压大于150 mmHg,与假手术组大鼠相比,手术组大鼠术后4周、8周、12周时血压均明显升高(P＜0.05).(2)手术组大鼠左心室质量指数(LVMI)、左心室壁厚度(LVWT)、室间隔厚度(IVST)均明显大于假手术组(P＜0.05),而左心室腔内直径(LVD)小于假手术组(P＜0.05).(3)手术组大鼠心肌组织PYK2蛋白表达明显高于假手术组(P＜0.05).结论 PYK2蛋白表达增加与大鼠肾血管性高血压左心室肥厚密切相关.     

葡萄籽原花青素对肾血管性高血压大鼠血管重塑保护作用机制的研究

目的 探讨葡萄籽原花青素(GSP)对肾血管性高血压大鼠血管重塑保护作用机制.方法 采用两肾一夹(2K1C)法,复制肾血管性高血压(RH)大鼠模型,并设立假手术组(control,n=7).术后2周,选取鼠尾动脉收缩压(SBP)升至130mmHg以上的大鼠28只为RH大鼠,并随机分为4组(n=7):高血压模型组(RHmodel)、GSP低剂量治疗组[low GSP,50mg/(kg·d)]、GSP高剂量治疗组[high GSP,200mg/(kg·d)]和卡托普利阳性对照治疗组[(captopril,30mg/(kg·d)].治疗6周后,分别测定各组大鼠尾动脉SBP、胸主动脉中膜厚度(MT)及管腔内径(LD);ELISA法测定腹主动脉中超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量;Western blotting法检测腹主动脉中白介素-10(IL-10)的蛋白表达.结果 治疗6周后,与control组比较,RH model组大鼠尾动脉SBP、MT及MDA含量明显升高,而腹主动脉中SOD活性、T-AOC、NO含量、LD和IL-10的蛋白表达明显降低.与RH model组比较,GSP能显著降低大鼠尾动脉SBP、MT及MDA含量,升高腹主动脉中SOD活性、T-AOC、LD和IL-10的蛋白表达.NO含量虽然增多,但无统计学意义.结论 GSP能显著降低RH大鼠的尾动脉SBP,同时可以通过增强大鼠抗氧化能力,增加腹主动脉中NO含量及抑炎因子IL-10的蛋白表达来发挥保护血管重塑的作用.     

L-精氨酸对高血压大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨一氧化氮前体L-精氨酸对肾血管性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响.方法 采用两肾一夹(2K1C)型肾血管性高血压大鼠模型.所有大鼠被随机分为4组(每组10只):假手术对照组;高血压对照组(2K1C组);L-精氨酸治疗组,于术后第5周开始给予L-精氨酸200 mg·kg-1·d-1;L-NAME处理组,于术后第5周开始同时给予L-NAME 10 mg·kg-1·d-1及L-精氨酸200 mg·kg-1·d-1.采用标准尾套法间接检测清醒大鼠血压.给药8周后,处死大鼠,用比色法测定血浆一氧化氮(NO)含量;分离胸主动脉检测胸主动脉平滑肌细胞凋亡(原位耒端标记法).结果 与假手术组大鼠相比,2K1C组大鼠血压明显升高,胸主动脉平滑肌细胞凋亡指数升高,而血浆NO含量明显降低.应用L-精氨酸治疗则明显降低了肾动脉狭窄术后高血压大鼠的血压,升高了血浆NO含量,同时也使胸主动脉平滑肌细胞凋亡指数进一步增大.NOS抑制剂L-NAME明显抑制了L-精氨酸的上述作用.结论 长疗程L-精氨酸治疗可刺激高血压血管平滑肌细胞凋亡增加.     

黄芪甲苷经 TGF －β／Smad 信号通路对糖尿病肾病大鼠肾脏的影响

目的：观察黄芪甲苷干预链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病肾病大鼠模型氧化损伤的影响及相关的分子机制研究。方法健康成年雄性SD大鼠80只,体重（2.54±0.45）kg,其中10只作为空白对照组,10只作为空白加高剂量黄芪甲苷组,其余60只则用于STZ模型。糖尿病肾病大鼠模型以60 mg／kg一次性腹腔注射诱导,造模后1周开始测血糖,剔除血糖低于13.9 mmol／L的大鼠。造模成功的大鼠随机选取10只作为模型对照组和模型加黄芪甲苷高中低（120 mg／kg、60 mg／kg、30 mg／kg）治疗组。每2周收集代谢数据,给药6周后处死。测定体重肾脏指数,血糖情况以及大鼠血清ROS及SOD情况,观察患侧肾脏组织病理,采用蛋白质免疫印迹法（ Western blot）检测TGF－β／Smad信号通路相关信号分子的表达。结果模型组大鼠肾重及肾脏指数最大,而治疗组大鼠肾重及肾脏指数明显减小（P＜0.05）,但仍高于对照组大鼠（P＜0.05）。实验各组大鼠血糖在0周时无明显差别。黄芪甲苷治疗组血糖值低于模型组,但差异无统计学意义（P＞0.05）。黄芪甲苷可降低模型大鼠患侧肾脏组织纤维化病变,呈剂量依赖性下调TGF－β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad4、Smad2／3、P－Smad2／3、α－SMA、Collagen Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ的蛋白表达水平,呈剂量依赖性上调Smad7的蛋白表达。结论（1） SD大鼠单次腹腔大剂量注射STZ建立致糖尿病肾病模型;（2）黄芪甲苷可通过降低ROS水平,升高SOD活性对糖尿病肾病大鼠的氧化损伤起到一定的缓解;（3）黄芪甲苷可通过下调大鼠肾脏TGF－β／Smad信号通路的表达而改善大鼠的胞外基质堆积而保护肾脏。     

黄芪甲苷对糖尿病肾脏病变大鼠氧自由基代谢和转化生长因子β1 mRNA表达的影响

目的: 研究黄芪甲苷对链脲佐菌素(STZ)所致糖尿病肾病(DN)大鼠的氧自由基代谢及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达水平的影响,并探讨其相关作用机制。 方法: 60只Wistar大鼠分为对照组、模型组、厄贝沙坦(14.37 mg·kg^-1)组和低剂量(0.75 mg·kg^-1)、中剂量(1.50 mg·kg^-1)及高剂量(3.00 mg·kg^-1)黄芪甲苷组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠腹腔注射 60 mg·kg^-1STZ,每日灌胃相应药物并用高脂饲料喂养。8周后,检测各组大鼠血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、空腹血糖(FBG)水平和24h尿蛋白量;检测各组大鼠肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平;RT-PCR法检测肾组织中过氧化氢酶(CAT)和TGF-β1 mRNA 表达水平。 结果: 与模型组比较,中、高剂量黄芪甲苷组DN大鼠肾功能明显改善,各剂量黄芪甲苷组大鼠血清Scr水平降低(P<0.05或 P<0.01),中、高剂量黄芪甲苷组大鼠血清中BUN、FBG水平和24h尿蛋白量降低 (P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,中、高剂量黄芪甲苷组大鼠肾组织中MDA水平降低、SOD活性升高(P<0.05或P<0.01),TGF-β1mRNA表达水平降低(P<0.05);各剂量黄芪甲苷组大鼠肾组织中GSH-Px活性均升高(P<0.05或P<0.01), CATmRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。 结论: 黄芪甲苷可以改善DN大鼠的肾功能,其作用机制可能与改善肾内氧自由基的氧化损伤及降低肾组织TGF-β1mRNA表达有关。     

大鼠肾血管性高血压左心室肥厚与蛋白激酶B关系的研究

目的探讨肾血管性高血压大鼠左心室肥厚和蛋白激酶B(PKB)之间的关系。方法将20只雄性SD大鼠随机分为手术组和假手术组,每组10只。手术组行二肾一夹手术,致大鼠肾血管性高血压,假手术组行假手术。术前及术后每4周测鼠尾动脉血压1次。术后12周处死动物,采用Western blot方法检测心肌组织中蛋白激酶B(PKB)表达。结果与假手术组相比,手术组术后4周、8周、12周血压明显升高(P0.05);手术组左心室质量指数(LVMI)、左心室壁厚度(LVWT)、室间隔厚度(IVST)均明显高于假手术组(P均0.05);手术组的PKB蛋白表达明显高于假手术组(P0.05)。结论 PKB途径可能是肾血管性高血压致左心室肥厚相关信号转导途径之一。     

Study on the Relationship between Left Ventricular Hypertrophy in Rats with Renovascular Hypertension and Protein Kinase B

目的 探讨肾血管性高血压大鼠左心室肥厚和蛋白激酶B(PKB)之间的关系.方法 将20只雄性SD大鼠随机分为手术组和假手术组,每组10只.手术组行二肾一夹手术,致大鼠肾血管性高血压,假手术组行假手术.术前及术后每4周测鼠尾动脉血压1次.术后12周处死动物,采用Western blot方法检测心肌组织中蛋白激酶B(PKB)表达.结果 与假手术组相比,手术组术后4周、8周、12周血压明显升高(P＜0.05);手术组左心室质量指数(LVMI)、左心室壁厚度(LVWT)、室间隔厚度(IVST)均明显高于假手术组(P均＜0.05);手术组的PKB蛋白表达明显高于假手术组(P＜0.05).结论 PKB途径可能是肾血管性高血压致左心室肥厚相关信号转导途径之一.