围产期BPA暴露对子代海马组织APP、Tau表达影响

[摘要] 目的：观察围产期不同时期双酚A（Bisphenol A,BPA）暴露对子代小鼠海马中APP、p-Tau、Tau蛋白的影响,探讨雌雄小鼠胎儿发育阶段BPA暴露的敏感期。方法：利用C57BL6J胎鼠原代培养的海马神经元共孵BPA;F0代小鼠围产期皮下注射建立BPA暴露小鼠模型,根据不同暴露期分为四组,即对照组、胎儿期（P6-PND0）、哺乳期（PND0-PND21）、胎儿期和哺乳期联合暴露（P6-PND21）,取其成年子代海马组织（8月龄）通过Western Blot方法检测淀粉样蛋白前体（amyloid precursor protein,APP）、微管相关蛋白（microtubule-associated protein,Tau）及磷酸化的微管相关蛋白（phosphorylated microtubule-associated protein,p-Tau）的表达量。结果：海马神经元细胞与不同浓度BPA共孵后,APP、 p-Tau和 Tau蛋白的表达均上调,呈剂量依赖性。BPA连续暴露后的子代小鼠中,雌性小鼠PND0-PND21组、P6-PND21组APP、 p-Tau和 Tau蛋白表达增加,而雄性小鼠仅P6-PND21组三种蛋白的表达上调。结论：围产期BPA连续暴露可引起子代小鼠海马APP、 p-Tau和 Tau蛋白表达改变而可能引起神经损伤,而雌性小鼠相较于雄性小鼠可能对BPA引起的神经损伤更敏感。     

母鼠孕期暴露双酚A对子代雌性大鼠性发育的影响

目的：研究母鼠孕期暴露双酚A（BPA）对子代雌性大鼠的性发育影响。方法：选择SPF级12周龄的健康成年SD大鼠,按雌∶雄为2∶1比例合笼。将妊娠大鼠20只,随机分成4组,于妊娠第5天至第20天,分别按0,10,50,250mg/（kg·d）进行灌胃染毒。母鼠正常分娩,雌性仔鼠出生28天开始观察阴道开口,第一次发情周期,此后连续观察动情周期变化,在第10周确定发情间期后处死动物。称量肝脏、肾脏、子宫、卵巢的重量,计算脏器系数;用ELISA法测血清中卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、孕酮（P4）、雌二醇（E2）及睾酮（T）水平。结果：各剂量组肝脏和肾脏重量与对照组相比有增加趋势,50 mg/kg组的肾脏重量和250 mg/kg组的肾脏系数有统计学意义（P〈0.05）;与对照组比较,10 mg/kg组阴道开口延迟,而250 mg/kg组阴道开口日龄提前,各剂量组阴道开口时体重增加（P〈0.05）;与对照组相比,BPA各剂量组子代雌性大鼠性周期均无明显影响;各剂量组与对照组相比,T水平明显下降（P〈0.05）;50mg/kg组与对照组相比,LH、FSH、E2水平明显减少（P〈0.05）,且P4水平有升高趋势;而250 mg/kg组上述指标与对照组比较差异无显著性（P〉0.05）。结论：母鼠孕期暴露BPA可能导致子代雌性大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的调节功能障碍,对其性发育功能造成一定影响。     

围生期双酚A暴露对雄性子代大鼠学习记忆能力的影响

目的 研究围生期双酚A暴露对雄性子代大鼠探索行为及学习记忆能力的影响.方法 自妊娠11 d开始直至产后7 d,一组母鼠每I:1皮下注射10μg/kg双酚A(BPA),另一组母鼠注射等量的BPA的溶剂.在大鼠出生后21 d进行开场实验、水迷宫实验,同时制作海马脑片,用电生理学方法 检测BPA暴露对海马CA1区LTP诱导的影响.结果 BPA模型组大鼠穿越格子数[(70.35±13.56)次]明显高于对照组[(29.32±14.12)次,P＜0.05];BPA模型组大鼠站立次数、理毛次数[分别为(38.52±6.52)次,(6.26±2.78)次]均较对照组大鼠显著增加[分别为(10.35±8.38)次,(2.67±1.46)次,P＜0.05].Morris水迷宫实验中,BPA模型组大鼠寻找平台的潜伏期[(55.22±5.78)s]较对照组显著延长[(21.22±2.65)s,P＜0.05];高频刺激后对照组海马CAI区可诱导稳定的LTP[(162.13±10.12)%],BPA模型组大鼠海马CA1区LTP诱导障碍[(101.05±7.58)%,P＜0.05].结论 围生期BPA暴露损伤了雄性子代大鼠的学习记忆能力,其机制可能和突触前功能受损有关.     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ及Aβ寡聚体表达的影响

目的运用免疫组织化学方法和蛋白质印迹(Western-blot)方法观察淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠治疗前后β淀粉样蛋白42(Aβ42)、β淀粉样蛋白40(Aβ40)和可溶性Aβ寡聚体(ADDLs)的变化,判断姜黄素(curcumin)对Aβ级联反应的影响。方法将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮组)及姜黄素大、中、小剂量组。灌胃3个月后,以免疫组织化学方法和Western blot方法检测Aβ42、Aβ40和ADDLs蛋白表达量的变化。结果免疫组织化学检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞均较正常组增加,Aβ40和Aβ42相比,阳性细胞计数增加以Aβ42更加明显,各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞明显降低。Western blot检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达比正常对照组明显增加(P<0.01);与模型组小鼠相比,虽然各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达均减少,罗格列酮组和姜黄素中剂量组小鼠海马Aβ40和Aβ42的蛋白表达显著减低(P<0.01);罗格列酮组小鼠海马ADDLs的蛋白表达减低显著(P<0.01),姜黄素大、中剂量组小鼠海马ADDLs的蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论姜黄素给药3个月能显著减少APP/PS1双转基因小鼠脑内海马CA1区Aβ40、Aβ42和ADDLs的表达,对Aβ42减低更为明显。其潜在的神经保护机制是否通过下调Aβ42和ADDLs的产生,增强Aβ42和ADDLs的降解影响Aβ级联反应,有待进一步研究。     

围生期双酚A暴露对雄性子代大鼠中脑多巴胺神经细胞凋亡的影响

目的探讨围生期双酚A暴露对大鼠雄性子代腹侧中脑区多巴胺神经元凋亡及对酪氨酸羟化酶(tyros ine hydroxy lase,TH)蛋白表达的影响。方法孕鼠自妊娠第10 d起至哺乳期结束分别每日给予50(高)、5(中)、0.5(低)、0(对照)m g/kg.bw双酚A灌胃染毒,于子代出生后(postnata l day,PND)第21、30 d取雄性仔鼠脑,采用免疫组化方法检测腹侧中脑区C aspase-3、B cl-2和TH的表达,原位凋亡检测PND 21时腹侧中脑区神经细胞的凋亡。结果仔鼠出生后的两个检测时间点,高、中剂量染毒组的腹侧中脑区与对照组相比C aspase-3表达明显增加,B cl-2表达明显降低,PND 21时腹侧中脑区可见较多的凋亡细胞。PND 21及PND 30时腹侧中脑区TH表达降低。结论围生期双酚A高、中剂量暴露能导致断乳期雄性子代鼠脑多巴胺神经元的凋亡增加,使腹侧中脑多巴胺神经元富集区酪氨酸羟化酶减少,从而影响多巴胺神经系统的功能。     

Wnt/β-catenin信号通路在双酚A暴露对子鼠雄性生殖细胞表达

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路蛋白在出生前后双酚A（BPA）暴露对子鼠雄性生殖表达。方法 ICR孕鼠饮水染毒,自受孕0天随机分为：溶剂对照组、100 nmol/LBPA组、300 nmol/LBPA组;雄性仔鼠出生后6周处死,取睾丸组织,免疫组化检测β-catenin、DKK1蛋白的表达。结果免疫组化结果显示,与溶剂对照组比较,BPA暴露组β-catenin、DKK1蛋白表达明显增加,多分布在精原细胞和睾丸间质细胞中,且间质细胞强阳性。结论 Wnt/β-catenin信号通路蛋白可能参与了BPA暴露对子鼠雄性生殖细胞表达影响。     

青春期前双酚A暴露对雌性大鼠卵巢组织中mRNA分子表达谱的影响

研究双酚A（BPA）对青春期前雌性大鼠卵巢组织中mRNA分子表达谱的影响,探讨BPA对卵巢结构和功能的潜在影响。     

电子垃圾污染区双酚A暴露水平评估以及双酚A暴露对亲吻素基因KiSS-1表达水平的影响

目的:探讨双酚A(BPA)暴露水平以及BPA产生生殖毒性的潜在机制。方法:采用气相色谱质谱联用法检测新生儿(贵屿区153例为暴露组,濠江区47例为对照组)脐带血BPA浓度;实时定量RT-PCR法检测新生儿胎盘组织KiSS-1基因表达量。结果:暴露组脐带血BPA浓度(中位数6.4μg/L)显著高于对照组(2.8μg/L),暴露组胎盘组织KiSS-1基因相对表达量(中位数0.5)同样显著高于对照组(0.2),BPA浓度与KiSS-1表达量正相关(P<0.05);男性组该相关性更为显著(P<0.01)。结论:贵屿区人群已处于较高的BPA暴露水平,BPA有可能通过影响亲吻素的正常表达而干扰生殖内分泌系统。     

手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白和β淀粉样蛋白表达的影响

目的 探讨手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白(App)、β淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响.方法 49只SD大鼠随机分成对照组(A组,n=7)、假手术组(B组,n=21)、肝部分切除术组(C组,n=21),B、C组大鼠分别在术后24 h、3 d、7 d三个时间点取左侧海马(n=7),放射免疫法测Aβ,取右侧海马热启动荧光定量PCR测AppmRNA.结果 (1)肝部分切除术后24h大鼠海马中App770(Ct)/GAPDH(Ct)为(1.39±0.05),低于对照组和假手术组(P＜0.05),说明此时App770mRNA的表达增加.但是手术对于App695mRNA、App751mRNA以及App770mRNA在其他时间的表达没有影响.假手术组App695mRNA、App751mRNA、App770mRNA的表达与对照组差异无显著性(P＞0.05).(2)肝部分切除术组大鼠海马中Aβ的表达在术后24h、3d、7d分别为(58.3±2.6)pg/ml、(48.0±3.7)pg/ml、(27.2±3.6)pg/ml,明显高于对照组和假手术组,(P＜0.05).在相应的时间点中,假手术组与对照组没有差异(P＞0.05).结论 肝部分切除术后大鼠海马中App770mRNA的表达增加,Aβ表达水平上调.     

母鼠摄入BPA对子代AHR mRNA表达和Th17细胞的影响

目的：研究母鼠围生期经饮水摄入低剂量双酚 A (BPA)对子代芳香烃受体(AHR)和辅助性T(Th)17细胞的影响。方法将确认妊娠的ICR母鼠随机分成空白对照组和溶剂对照组、10、100和1000 nmol/L BPA组;母鼠自妊娠第0天(GD 0)至仔鼠出生后第21天(PND 21)经饮水摄入BPA。 PND 21时处死仔鼠,取血用ELISA法测血清白细胞介素( IL)-17和 IL-23含量,取脾脏,流式细胞术检测 Th17细胞比例,实时荧光定量聚合酶链反应( RT-qPCR)检测维甲酸相关孤核受体γt( RORγt)和AHR mRNA表达水平。结果与空白对照组比较,各BPA剂量组母鼠孕期体重、仔鼠出生和PND 21时体重、窝仔数差异均无统计学意义;100和1000 nmol/L BPA组仔鼠PND 21时脾脏Th17细胞比例均显著升高( P<0．05),脾脏RORγt mRNA和AHR mRNA表达水平明显上调(P<0．01),血清IL-17和IL-23含量也明显上升(P<0．01);脾脏Th17细胞比例和RORγt mRNA表达水平与AHR mRNA表达水平均呈正相关性( P<0．01)。结论围生期母鼠暴露于低剂量BPA可导致子代断乳时AHR表达上调,并经RORγt途径促进Th17细胞发育。     

双酚 A 对小鼠腹腔巨噬细胞极化影响的体外研究

目的：探讨体外实验条件下,双酚 A（BPA）对小鼠腹腔巨噬细胞极化的影响。方法提取 C57BL/6J 雄性小鼠腹腔巨噬细胞,用（10 ng/ ml）干扰素-γ（IFN-γ）和（500 ng/ ml）细菌脂多糖（LPS）诱导其向 M1型极化;用（10 ng/ ml）白介素-4（IL-4）诱导其向 M2型极化;同时加入0.1、1、10μmol/ L BPA 处理细胞,并设立空白对照组和溶剂对照组。流式细胞术检测 M1型和 M2型巨噬细胞比例,ELISA 法检测 M1型和M2型巨噬细胞各自分泌的诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）和精氨酸酶（Arg-1）活性。结果不同浓度 BPA 促进 IFN-γ和LPS 诱导的小鼠腹腔巨噬细胞向 M1型极化,1、10μmol/ L BPA 组 M1型巨噬细胞比例较空白对照组分别升高11.3%和17.4%,M1型巨噬细胞分泌的 iNOS 活性分别升高1.95和2.29倍,差异均有统计学意义。不同浓度 BPA 抑制 IL-4诱导的小鼠腹腔巨噬细胞向 M2型极化,1、10μmol/ L BPA组 M2型巨噬细胞比例分别较空白对照组降低9.0%和14.3%,M2型巨噬细胞分泌的 Arg-1活性分别下降0.37和0.49倍,差异均有统计学意义。结论体外条件下,低剂量BPA 促进小鼠腹腔巨噬细胞向 M1型极化,抑制其向 M2型极化。     

神经细胞牵张损伤后CsA对CaN活性和APP表达的影响

目的 研究神经细胞牵张损伤后环孢霉素A (cyclosporin A, CsA)对钙调神经磷酸酶(calcineurin, CaN)活性和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)表达的影响.方法 在Bioflex培养皿原代培养大鼠大脑皮层神经元.细胞分为正常对照组、损伤组和CsA组.多功能小型生物撞击机25 kPa的压力牵张细胞.损伤后损伤组不予以处理,而CsA组则给以10 nM CsA. 各组伤后1、6、24h,3d标本的CaN活性和APP蛋白表达,分别采用酶底物显色和Western blot方法进行检测.结果 牵张损伤后1h神经元的CaN活性已较正常对照组显著增加(P＜0.05),伤后6h更为明显(P＜0.01),并持续到伤后3d(P＜0.01);而伤后10nM CsA干预能在各时相点非常显著地降低CaN的活性(P＜0.01).APP伤后1h有增加趋势,但在伤后6h差异才具有统计学意义(P＜0.05),伤后24h、3d这种增加则更加明显(P＜0.01).伤后10nM CsA干预能在6、24h,3d显著地降低APP的表达增加(P＜0.05),其APP的表达仍显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 CsA能降低神经细胞牵张损伤后CaN活性的增加并减少APP表达的增加,可能起到神经保护作用.     

双酚A对雄性仔鼠生殖功能的影响

目的：探讨双酚A对雄性仔鼠生殖功能的影响。方法：妊娠小鼠随机分成4组，从受孕第1天起实验组分别以30、120和360 mg•kg^-1•d^-1剂量溶于玉米油中的双酚A染毒至仔鼠出生，对照组用相同体积玉米油灌胃。仔鼠出生30 d后检测各组雄性仔鼠精子畸形率、睾丸乳酸脱氢酶(LDH)和6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD)、脏体比及病理组织学改变。结果：实验组小鼠睾丸曲细精管上皮细胞排列紊乱、成熟精子数量减少，部分上皮与基底部分离，且随剂量增加而加重；与对照组比较，低、高剂量组脏器系数降低，中、高剂量组LDH活性、G-6-PD活性降低，低剂量组LDH活性升高；随剂量增加精子畸形率增高，差异均具有显著性(P<0.01)。结论：胚胎期接触双酚A对F1代雄性仔鼠的生殖功能产生影响。     

淀粉样前体类蛋白2-C端不同片段对S100A9蛋白表达的影响

[目的]探讨淀粉样类前体蛋白2-C端不同片段（APLP2-CTFs）对S100A9蛋白表达的影响．[方法]将pEGFP—APLP2-C57,C50,C31转染BV2细胞,采用蛋白印迹方法和RT-PCR方法检测S100A9蛋白表达和mRNA水平．[结果]转染pEGFP—APLP2-C57,C50,C31的细胞中,S100A9蛋白表达和mRNA水平均增高,与空载体转染组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）．[结论]转染APLP2-CTFs使S100A9蛋白表达和mRNA水平均增高．     

双酚A对前列腺癌PC-3细胞增殖和miR-19表达的影响

目的 :探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对人前列腺癌PC-3细胞增殖和mi R-19表达的影响。方法 :不同浓度BPA处理人前列腺癌PC-3细胞,以雌二醇(E2)作为阳性对照,6 d后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和Hoechst 33258荧光染色法测定BPA对PC-3细胞增殖的影响,real-time PCR检测mi R-19a和mi R-9b表达水平的变化,Western blot检测细胞中mi R-19的靶基因PTEN及细胞增殖相关基因p-AKT、AKT、PCNA和Cyclin D1的蛋白表达变化。结果:5×10-6~5×10-5 mol/L BPA显著促进PC-3细胞增殖,增加PC-3细胞中mi R 19a和mi R 19b的表达水平,降低PTEN表达并上调p-AKT、PCNA和Cyclin D1表达水平。结论:BPA可促进前列腺癌PC-3细胞增殖,其机制可能与BPA引起mi R-19表达上调有关。     

双酚A对成年雄性小鼠的生殖毒性及其作用机制

目的: 探讨双酚A(BPA)对成年小鼠睾丸组织的损伤作用,阐明BPA对动物机体的生殖毒性及其作用机制。方法: 8周龄昆明小鼠40只随机分为对照组(玉米油)和低(100 mg·kg^-1 BPA)、中(200 mg·kg^-1BPA)、高(400 mg·kg^-1BPA)剂量BPA组。灌胃染毒4周后,取小鼠睾丸组织,采用流式细胞术检测小鼠睾丸组织中细胞凋亡率;免疫组织化学法检测Fas和FADD蛋白表达情况。结果: 与对照组比较,低剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、Fas和FADD阳性细胞表达率无明显变化(P>0.05);中和高剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、Fas和FADD阳性细胞表达率明显升高(P<0.05)。与低剂量BPA组比较,中和高剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、FAS和FADD阳性细胞表达率明显升高(P<0.05);与中剂量BPA组比较,高剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、FAS和FADD阳性细胞表达率明显升高(P<0.05)。中剂量BPA组细胞凋亡率与FAS、FADD阳性细胞表达率呈正相关关系(r=0.430,P<0.05;r=0.238,P<0.01),高剂量组细胞凋亡率与Fas、FADD阳性细胞表达率呈正相关关系(r=0.637,P<0.01;r=0.359,P<0.01)。结论: 一定剂量BPA会导致小鼠睾丸组织中细胞凋亡率升高,凋亡调控基因Fas和FADD表达上调;BPA对小鼠睾丸组织有损伤作用,其生殖毒性与激活Fas死亡受体信号通路从而导致细胞过度凋亡有关。     

Pubertal exposure to bisphenol A affects the reproduction of male mice and sex ratio of offspring

Objective To study the effects of pubertal exposure to bisphenol A(BPA)on the reproduction of male mice in adulthood and subsequent generation mice.Methods Male mice aged 21 d were exposed to BPA at a dose of 50 mg/kg per day for 7 d by intraperitoneal injection.Sperm count,sperm deformity rate and testis histology were evaluated 35 d after exposure.Male fertility index and newborns were further observed by mating with the normal female mice.Results The epididymal sperm number was decreased by 20.6%in BPA exposure group compared with the control(P<0.01).Sperm deformity rate in BPA group was increased by 9.65%compared with the control(P<0.05).Testis seminiferous tubules were abnormal with sloughing of germ cells;BPA exposure had no significant effects on the fertility of male mice in adulthood;sex ratio of male to female offspring was increased.Conclusion Pubertal exposure to BPA disrupted spermatogenesis in adult mice,and the proportion of male offspring was increased compared with the control.     

出生前后双酚A暴露对小鼠不同时期血清白介素-17白介素-23的影响

目的研究出生前后高剂量双酚A（BPA）暴露对小鼠不同时期血清白介素-17（IL-17）和白介素-23（IL-23）水平的影响,初步探讨BPA发育免疫毒性机制。方法将确认妊娠的ICR母鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、BPA剂量组（高、中、低组分别为2.0、0.5和0.125 g/L BPA）;母鼠自妊娠第0 d（GD0）至仔鼠断乳（出生后第21 d,PND21）经饮水暴露于BPA。分别于PND7、PND21和PND42取仔鼠外周血用ELISA检测IL-17和IL-23含量。结果在PND7和PND21时,随母鼠BPA暴露剂量的增加,仔鼠血清IL-17和IL-23含量逐渐上升,2.0 g/L BPA组与空白对照组和溶剂对照组相比,差异均有统计学意义（P值均〈0.05）。在PND42时,各BPA暴露组仔鼠血清IL-17和IL-23含量与空白对照组和溶剂对照组差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。结论出生前后BPA暴露可能引起子代断乳前体内Th17细胞分泌的细胞因子含量升高。