选择性环氧合酶抑制剂ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ对血管平滑肌细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用和分子机制

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞莱昔布(celecoxib)对血管平滑肌细胞的增殖抑制作用及分子机制.方法:给予原代培养的大鼠平滑肌细胞不同浓度的celecoxib处理,WST-1细胞增殖实验观察细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测凋亡;Western blot方法检测血管平滑肌细胞COX-2的表达、caspase-3蛋白的裂解激活、磷酸化Akt的表达.结果:WST-1实验结果显示.经0、6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/Lcelecoxib作用24 h后,细胞的增殖率分别为100%、81.15%、66.72%、54.93%和11.41%:50 μmol/L celecoxib作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率为30.72%;Western blot实验显示,血管平滑肌细胞中COX-2有表达,celecoxib作用于细胞后caspase-3蛋白裂解片段激活,磷酸化Akt的表达减弱或消失.结论:celecoxib对血管平滑肌细胞有增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能部分涉及到Akt/caspase途径.     

丹皮酚对人肝癌Bel-7404的抑瘤效应及其机制

目的：探讨丹皮酚（Paeonol，Pae）抑制人肝癌细胞株Bel-7404增殖作用及其分子机制。方法：应用光学显微镜、MTT法检测经不同浓度、不同时间Poe处理Bel-7404细胞后的增殖抑制作用；DNA凝胶电泳法、TUNEL法检测细胞凋亡；用RT—PCR法、免疫细胞化学ABC法检测抑癌基因PTEN和致癌基因Akt表达水平。结果：与空白对照组比，Pae能抑制人肝癌细胞Bel-7404的增殖，诱导其凋亡，光镜下可见明显的凋亡细胞；DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征；RT—PCR和免疫细胞化学检测显示，Poe处理Bel-7404后可使PTEN表达升高，Akt表达下降。结论：Pae具有抗Bel-7404细胞增殖的作用，其机制可能是通过抑制P13K通路，增强诱导其凋亡有关。     

粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防己碱（Tetrandrine）对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响，初步探讨粉防己碱对肝癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、集落形成实验观察粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、细胞凋亡荧光染色法及流式细胞术检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用，以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响。结果：MTT比色法、集落形成实验显示，粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖有抑制作用，其抑制效应具有剂量依赖的特点，细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明，粉防己碱可诱导7402细胞凋亡，免疫细胞化学法显示，粉防己碱上调Bax蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达。结论：粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

当归多糖对人粒单系祖细胞和粒系白血病细胞株增殖分化的实验研究

目的：研究当归多糖(APS)对人粒单系造血祖细胞(CFU—GM)和急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)增殖分化的影响。方法：采用造血细胞体外培养，形态学观察，流式细胞术和免疫细胞化学等实验血液学技术。结果：APS对正常CFU-GM的体外增殖有显著刺激作用；而对HL-60细胞的增殖却有明显的抑制作用；APS可能通过阻止HL-60细胞从静止期进入增殖周期，抑制DNA的合成等途径来抑制细胞增殖；APS可能诱导HL-60细胞发生凋亡。结论：APS有可能成为既能促进正常造血，又能抑制白血病等肿瘤细胞增殖，并诱导其凋亡或分化的天然诱导剂。     

吡格列酮对肝门部胆管癌QBC939细胞增殖、凋亡和侵袭力的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）配体吡格列酮（pioglitazone,PGZ）对胆管癌细胞增殖、凋亡和体外侵袭力的影响．方法：体外培养人肝门胆管癌QBC939细胞;采用流式细胞技术与TUNEL酶标记法检测PGZ对QBC939细胞增殖和凋亡的影响．通过Matrigel侵袭实验和过河实验检测PGZ对QBC939细胞体外侵袭力和运动能力的影响．结果：流式细胞仪分析显示,PGZ能明显抑制QBC939细胞增殖,使其停滞于G2／M期,促使诱导细胞凋亡;TUNEL酶标记显示凋亡的QBC939细胞出现凋亡小体;Matrigel侵袭实验和过河实验显示,随着PGZ浓度的增加,透过Matrigel膜的细胞数减少,过河时间延长（P〈0．01）,呈剂量一效应关系．结论：PGZ能明显抑制QBC939细胞增殖,诱导细胞凋亡,对QBC939细胞的体外侵袭力有明显的抑制作用．PPAR-γ配体PGZ有望成为治疗胆管癌新的切入点．     

探讨EGCG对人肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨茶多酚主要成分没石子儿茶素没石子酸酯（EGCG）诱导人肝癌细胞株SMMC27721体外增殖和凋亡过程中的影响,预测其对人肝癌的抗癌作用及机制。方法体外培养人肝癌SMMC27721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用MTT法观测其对肝癌细胞增殖能力的影响;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响;用免疫细胞化学法检测肝癌细胞中p-Akt（sel473）蛋白的的表达变化;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,SMMC27721细胞增殖能力明显受到抑制（P〈0.05）,p-Akt（sel473）细胞凋亡明显增加（P〈0.05）。结论 EGCG可通过抑制Akt信号通路而诱导肝癌细胞凋亡。     

桦褐孔菌醇对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的：研究桦褐孔菌醇（Inotodi01）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：以不同浓度的Inotodiol处理HeLa细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞增殖情况,透射电镜观察细胞超微结构变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测caspase-3蛋白的表达。结果：Inotodiol能抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖关系（P〈0．05,P〈0．01）;超微结构观察可见细胞体积缩小、核固缩、核内异染色质增多并边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变;TUNEL法显示,经50μg/ml的lnotodiol处理48h,HeLa细胞发生凋亡;免疫细胞化学结果表明,与对照组相比,Inotodiol组HeLa细胞中caspase-3蛋白表达上调（P〈0．01）。结论：在一定浓度范围内,Inotodiol可在体外抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调easpase-3蛋白的表达有关。     

青果多酚对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究青果多酚对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响。方法：利用超声波提取青果多酚,分光光度法检测其含量,采用MTT法、免疫细胞化学法、流式细胞术检测Hela细胞增殖抑制率与凋亡情况。结果：青果多酚对Hela细胞的增殖有明显抑制作用,并存在时间和剂量依赖性;青果多酚可通过激活caspase-3促进细胞的凋亡。结论：青果多酚对Hela细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721的体外抗肿瘤作用

目的研究奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其机制。方法以不同浓度的奥沙利铂作用于SMMC7721细胞,应用MTT法检测奥沙利铂对SMMC7721细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;采用分光光度法检测caspase-3、cas-pase-8、caspase-9的活性。结果奥沙利铂可抑制SMMC7721细胞的生长并具有时间和剂量依赖性,Hoechst33258荧光染色可见典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测到细胞阻滞于S期和SubG1峰。经过奥沙利铂诱导,caspase-3、caspase-9活性被上调,较对照组明显升高（P〈0.05）,caspase-8活性未见明显改变（P〉0.05）。结论奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株SMMC7721增殖及诱导凋亡作用,此作用可能通过激活内源性凋亡途径实现。     

c-myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的影响

目的 观察c—myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的抑制作用。方法 用四甲基偶氮唑盐法评价脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对细胞增殖的影响，免疫细胞化学ABC方法检测转染后c—myc蛋白表达；荧光显微镜观察细胞凋亡；流式细胞仪分析细胞凋亡。结果 c-myc基因反义寡核苷酸转染MKN-45细胞后，可以显著抑制细胞增殖，其抑制作用具有剂量依赖性；流式细胞仪分析结果显示，转染后能诱导胃癌细胞凋亡，Go／G1期细胞增多；免疫细胞化学显示c—myc蛋白水平明显降低，阳性表达率为64．9％±5.68％。结论 c-myc基因反义寡核苷酸能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。     

塞来昔布通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡的影响

目的:观察COX-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨该作用与ERK1/2信号通路之间的关系。方法:用不同浓度的塞来昔布溶液(0、25、50、75和100μmol/L)处理对数生长期的肝癌SMMC-7721细胞,MTT比色法检测不同时间点各药物浓度组细胞增殖情况;流式细胞术分析不同浓度的塞来昔布溶液对SMMC-7721细胞凋亡的影响;RT-PCR检测COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA表达的变化;Western blot检测COX-2、VEGF和ERK1/2蛋白表达的变化。结果:塞来昔布对SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,该作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强;流式细胞术检测结果显示出明显的细胞凋亡,且凋亡率随着塞来昔布浓度的增高而升高;随着塞来昔布剂量的增加,COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA及蛋白的表达水平逐渐降低。结论:塞来昔布可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促使瘤细胞凋亡,且作用呈时间和剂量依赖性,其机制可能与下调ERK1/2信号通路及抑制新生血管生成有关。     

吲哚-3-甲醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的 探讨吲哚-3-甲醇(13C)对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度的I3C(100、150、200、250、300、350 μmol/L)处理细胞48 h后,显微镜下观察细胞生长状况;采用WST-1法检测细胞增殖情况,Hoehest33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白.结果 I3C能够抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在250 μmol/L以下时,细胞生长变慢;处理浓度达到300μmol/L时,大量细胞凋亡.I3C浓度高于200 μmol/L时CytC、Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3蛋白表达明显增加,且随着I3C浓度的增加三种蛋白的表达也明显增加.结论 I3C在体外实验条件下可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖并诱导其发生凋亡.     

MicroRNA-340在肝细胞肝癌中抑制细胞增殖并促进凋亡

目的 探讨微RNA-340(miR-340)在肝细胞肝癌中的表达特点及其对细胞生物学行为的影响.方法 收集重庆医科大学附属第一医院肝胆外科2015年3月至2016年9月收治的40例肝细胞肝癌患者手术后切除的癌组织和癌旁组织标本.通过qPCR检测组织标本中miR-340的表达,并分析miR-340表达与临床病理学指标的关系.分别培养肝癌细胞株Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721以及正常肝细胞株HL-7702,48 h后使用qPCR检测5种细胞中miR-340的表达水平.通过转染增加或抑制SMMC-7721细胞中miR-340的表达,然后分别于细胞培养24、48、72 h后采用CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.通过生物信息学软件预测miR-340的靶基因,并使用qPCR和蛋白质印迹法进一步验证miR-340对靶基因的作用.结果 癌组织中miR-340的表达低于癌旁组织(P＜0.01),并且miR-340的表达与乙肝表面抗原、HBV DNA载量、肿瘤大小以及临床TNM分期有关(P＜0.01).正常肝细胞HL-7702内miR-340的表达高于4种肝癌细胞Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721(P＜0.05,P＜0.01).增加miR-340表达可抑制SMMC-7721细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01),而抑制miR-340的表达则促进SMMC-7721细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01);增加miR-340的表达可促进SMMC-7721细胞的凋亡(P＜0.01),而抑制miR-340则减少凋亡(P＜0.01).生物信息学分析显示S期激酶相关蛋白2(SKP2)基因是miR-340下游的一个靶基因.qPCR和蛋白质印迹分析结果显示增加SMMC-7721细胞中miR-340的表达可抑制SKP2的mRNA和蛋白表达,抑制miR-340表达则增加SKP2的mRNA和蛋白表达.结论 miR-340的异常表达可能与乙肝病毒的感染有关,其异常表达有助于评价病情以及预后.在肝癌细胞系SMMC-7721细胞中,miR-340能够抑制细胞增殖并促进凋亡,这一作用结果可能是通过miR-340对SKP2的抑制而实现的.     

白杨素通过调控MAPKs信号通路促进SMMC-7721细胞凋亡

目的探究白杨素诱导肝癌细胞系SMMC-7721细胞凋亡的效应及分子机制。方法将SMMC-7721细胞分为空白对照 组,DMSO溶剂对照组和白杨素处理组（5,10,20,40,60,80,100,150,200 μg/mL）,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制作用;将 SMMC-7721细胞分为空白对照组,DMSO溶剂对照组和白杨素处理组（5,10,20 μg/mL）,在倒置显微镜下观察细胞形态学变 化;DAPI染色后,在荧光倒置显微镜下观察细胞核形态变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;将SMMC-7721细胞 分别用白杨素,P38特异性抑制剂SB203580（0,5,10 μmol/L）、ERK特异性抑制剂U0126（0,5,10 μmol/L）和JNK特异性抑制剂 SP600125（0,5,10 μmol/L）处理后,Western blotting技术检测凋亡相关蛋白PARP、caspase-3和凋亡相关信号通路和MAPKs的 磷酸化变化情况。结果白杨素显著抑制SMMC-7721细胞增殖,和对照组相比,DMSO组,5,10,20 μg/mL白杨素处理组细胞 抑制率分别为96%,76%,71.75%和64.29%,具有剂量依赖性。超过60 μg/mL细胞抑制率达到饱和。另外,白杨素促进细胞凋 亡,20 μg/mL 白杨素处理组细胞凋亡率为68.7%,比空白对照组增加了59.4%,PARP 和caspase-3 显著切割。白杨素激活 MAPKs信号通路,具有剂量和时间依赖性。分别用SB203580、U0126、SP600125预处理细胞,白杨素诱导的P38、ERK和JNK 的磷酸化和PARP切割被抑制。结论白杨素通过调控MAPKs信号分子的活化,抑制SMMC-7721细胞的增殖并且促进细胞凋 亡的发生。     

重组人内皮抑素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响

目的 初步研究Wnt通路在重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,ES)诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡过程中的作用及可能机制.方法 分别以50、100、200、400 μg/ml ES体外处理人肝癌细胞株SMMC-7721,利用MTT比色法检测不同浓度、时间ES作用下的细胞增殖状态;利用流式细胞仪检...     

抗坏血酸促进三氧化二砷诱导的肝癌细胞毒性及其相关机制研究

目的：探讨抗干血酸(AA)对三氧化二砷(AT)诱导人肝癌细胞凋亡的协同效应，为改善三氧化二砷临床治疗人肝癌细胞提供理论基础。方法：体外培养人肝癌细胞株BEL-7402，用MTT和免疫印迹的方法分别评价AT和(或)AA对其生长抑制和胞内两个信号分子的影响。结果：微摩尔剂量的AT能抑制人肝癌细胞BEL-7402的异常生长，通过caspase-3的激活诱导其凋亡，并激活了ERKs信号蛋白，其作用有明显的剂量依赖性。AA对BEL-7402无明显的作用，但能有效的通过caspase-3而不是ERKs的激活促进AT对肝癌细胞的凋亡效应。结论：ERKs和caspase-3信号蛋白可能分别参与了砷剂诱导的人肝癌细胞促分化和凋亡效应，AT和AA对肝癌细胞的作用有协同性，他们通过caaspase-3而不是ERKs的激活进一步抑制了肝癌的生长。诱导其凋亡。     

苦参碱对SMMC-7721细胞周期及凋亡的影响

目的:研究苦参碱对肝癌细胞周期和凋亡的影响。方法:体外培养SMMC-7221细胞,采用MTT法观察不同浓度苦参碱对SMMC-7721细胞抑制情况,应用免疫组化法观察激活型Caspase-3蛋白表达,采用流式细胞术PI单染观察细胞周期。结果:苦参碱抑制SMMC-7221细胞增殖,抑制率呈浓度依赖关系,IC50为1.1 g/L,0.8 g/L和1.2 g/L苦参碱作用48 h,SMMC-7221细胞激活型Caspase-3表达增强,引起G1期阻滞。结论:苦参碱能够抑制肝癌增殖,诱导其凋亡。     

秦艽总苷对人肝癌细胞等几种肿瘤细胞的体外作用

目的研究秦艽总苷对肝癌细胞SMMC-7721、淋巴癌细胞U937、卵巢癌细胞A2780等3种癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法MTT法检测秦艽总苷对人肝癌SMMC-7721细胞、淋巴癌细胞U937、卵巢癌细胞A2780增殖的影响,流式细胞仪检测细胞调亡率。结果①秦艽总苷在一定浓度时,SMMC-7721细胞和U937细胞的生长受到不同程度的抑制,且有浓度依赖性;而对A2780细胞无抑制增殖作用。②一定浓度的秦艽总苷可诱导SMMC-7721细胞和U937细胞凋亡;对A2780无诱导凋亡作用。结论①秦艽总苷对人肝癌细胞SMMC-7721和淋巴癌细胞U937有抑制增殖和诱导凋亡的作用;②秦艽总苷对卵巢癌细胞A2780无抑制增殖作用;③秦艽总苷对卵巢癌细胞A2780无诱导细胞凋亡作用。     

蔓荆子总黄酮抑制肝细胞癌球形成与激活AMPK抑制AKT相关

目的：研究蔓荆子总黄酮（FVTF）抑制人肝细胞癌自我更新作用及其机制是否涉及AMPK/Akt信号传导。方法：肿瘤球形成法测定FVTF对肝细胞癌SMMC-7721和MHCC97H细胞系球形成率的影响。Western blot分析FVTF处理SMMC-7721细胞AMPK和Akt磷酸化水平。结果：FVTF显著降低SMMC-7721和MHCC97H细胞系球形成率,呈浓度依赖性。不同浓度FVTF（1.0、2.0、4.0μg/mL）处理SMMC-7721细胞24 h,AMPK磷酸化水平增高;Akt磷酸化水平下降。结论：FVTF抑制肝细胞癌自我更新作用与其激活AMPK抑制Akt活性相关。     

去甲斑蝥素诱导肝癌细胞凋亡的实验观察

目的 观察去甲斑蝥素(NCTD)诱导肝癌细胞凋亡的分子学机制,为合理应用NCTD治疗肝细胞肝癌提供理论基础.方法 对肝癌细胞株SMMC-7721,BEL-7402进行体外培养,应用不同浓度的NCTD(3、10、30μg/ml)处理肝癌细胞,采用MTT方法检测细胞生存率,锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western印迹检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(caspase)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白,以及Bcl-2家族蛋白的表达.结果 MTT检测显示NCTD处理24、48和72 h后SMMC-7721细胞IC50分别为12、6和1.6μg/ml,BEL-7402细胞IC50分别为10、4和2 μg/ml;锥虫蓝拒染法结果显示,浓度为3、10、30 μg/ml的NCTD处理24 h后,SMMC-7721细胞的死细胞率分别为16.89%、46.16%、72.13%,均显著高于未处理对照组的死细胞率3.34%(P＜0.01);BEL-7402细胞的死细胞率分别为19.59%、50.10%、90.31%,均显著高于未处理对照组的死细胞率2.88%(P＜0.01).流式细胞仪检测显示,NCTD 10 μg/ml处理12 h,SMMC-7721细胞凋亡率达到27%,较未处理对照组(7%)升高20%,BEL-7402细胞凋亡率达到30%,较未处理对照组(8%)升高22%;Western印迹结果显示,NCTD 10μg/ml处理8、14和24 h后,在两株肝癌细胞均检测到caspase-9,-3活化,PARP蛋白裂解,以及Bcl-2、Bcl-XL和Mcl-1蛋白的表达下调.结论 结果提示NCTD具有较强的抑制肝癌细胞生存和诱导肝癌细胞凋亡作用.NCTD的抗肝癌作用机理可能是通过诱导多个Bcl-2抑凋亡家族蛋白表达下调,激活内源性线粒体凋亡通路,诱导肝癌细胞发生凋亡.