基质金属蛋白酶与组织金属蛋白酶抑制剂在甲状腺癌中的研究进展

甲状腺癌是最常见的一类内分泌恶性肿瘤，根据组织来源分为滤泡细胞癌和滤泡旁细胞癌，不同组织类型的甲状腺癌其恶性程度亦不相同，但都具有癌细胞生长失去可调控性，具备浸润潜能，这些细胞脱离原发灶浸入周围组织，并向远处转移，癌转移是造成临床治疗失败和病人死亡的主要原因，大量研究表明：基质金属蛋白酶（MMP）对肿瘤的侵袭和转移起重要作用。但在甲状腺癌中，国内外对基质金属蛋白酶（MMP）及基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）的研究报道很少，其结果也不完全一致。现就针对MMP和TIMP在甲状腺癌中的表达及其与甲状腺癌侵袭、生长、转移及血管形成关系作一综述。     

基质金属蛋白酶的表达与肝癌侵袭转移的关系

目的　揭示基质金属蛋白酶 -2 (MMP -2 )、基质金属蛋白酶 -9(MMP -9)在肝细胞癌的表达及其与侵袭转移过程中的表达关系 ,进一步了解肝细胞癌侵袭转移的发生机制。方法　通过免疫组化SABC法 ,检测 3 2只大鼠的肝细胞癌模型标本肝癌及癌旁肝组织MMP -2及MMP -9的表达 ,应用图像分析法进行定量分析MMP -2及MM -9的变化。门静脉癌栓形成作为肝细胞癌侵袭转移标志。结果　免疫组化显示 ,癌及其癌旁肝组织均有MMP -2及MMP -9表达 ,MMP -2及MMP -9在肝癌组织的表达显著高于癌旁肝组织 (P <0 0 1) ;MMP -2及MMP -9在有侵袭转移肝癌组织的表达显著高于无侵袭转移肝癌组织 (P <0 0 1)。MMP -2及MMP -9在无侵袭转移肝癌、癌旁肝组织及有侵袭转移癌旁肝组织的表达差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;肝癌组织中MMP -2及MMP -9含量高于相对应癌旁肝组织时 ,发生癌栓的机会至少为 42 9% ,当癌组织中MMP -2及MMP -9含量低于癌旁肝组织时癌栓发生率为 0。结论　肝细胞癌在有侵袭转移情况下MMP -2及MMP -9在癌组织表达明显增高。预示可通过检测癌组织MMP -2及MMP -9表达水平帮助判断肝癌复发、转移风险。因此 ,提示其极有可能成为防治肝细胞癌的生物学标志物     

辛伐他汀含药血清对U937单核巨噬细胞MMP-9及TIMP-1表达与分泌的影响

【目的】探讨辛伐他汀含药血清对U937单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达与分泌的影响。【方法】15只新西兰大白兔随机分为正常对照组（NL,n=5）、粥样硬化模型组（AS,n=5）和辛伐他汀含药血清组（SIM,n=5）。通过喂养高脂饲料,建立兔动脉粥样硬化模型后,予辛伐他汀药液灌胃,获得含药血清。分别予不同浓度含药血清（5%、10%、20%）培养U937单核细胞源巨噬细胞24 h,应用逆转录聚合酶链反应检测MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA的表达,以及应用酶联免疫吸附试验检测MMP-9及TIMP-1蛋白的分泌。【结果】与相同浓度AS组比较,5%、10%、20%SIM组U937单核细胞源巨噬细胞MMP-9 mRNA表达均显著性降低（P值为0.005、0.041和0.013）;5%、10%、20%SIM组TIMP-1 mRNA表达无显著性差异（P值均〉0.05）。而与相同浓度AS组比较,不仅10%、20%SIM组MMP-9分泌显著性减少（P值分别为0.009和0.001）,而且10%、20%SIM组TIMP-1分泌均显著性增加（P值分别为0.017和0.001）。【结论】辛伐他汀可抑制单核巨噬细胞MMP-9的表达和分泌,以及促进TIMP-1的分泌。     

MMP-14和TIMP-2在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：检测基质金属蛋白酶14(MMP-14)和基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)在结直肠癌组织中的表达情况,探讨MMP-14和TIMP-2在结直肠癌组织中的表达与临床病理指标及二者之间的关系。方法：收集结直肠癌术后石蜡包埋标本60例,正常结直肠组织20例作为对照,采用免疫组织化学SP法检测MMP-14和TIMP-2的表达水平,分析MMP-14和TIMP-2在结直肠癌中的表达与正常结直肠组织的差异及其与临床病理指标和二者之间的关系。结果：MMP-14和TIMP-2在结直肠癌组织中高表达,阳性率分别为86.7%和80.0%,高于正常结直肠组织(P<0.01)。MMP-14的表达与结直肠癌肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期密切关联,在浸润浆膜组、有淋巴结转移组和Dukes C＋D期的阳性表达率分别为89.5%、94.1%和94.3%,显著高于未及浆膜组、无淋巴结转移组和Dukes A＋B期的68.2%、73.1%和76.0%（P<0.05）。TIMP-2的表达与结直肠癌肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期密切关联,在浸润浆膜组、有淋巴结转移组和Dukes C＋D期的阳性表达率分别为55.3%、64.7%和62.9%,显著低于未及浆膜组、无淋巴结转移组和Dukes A＋B期的81.8%、88.5%和92.0%（P<0.05）。MMP-14和TIMP-2在结直肠癌组织中的表达呈显著负相关（rs＝－1.0,P<0.05)。结论：结直肠癌组织中MMP-14的高表达可能促进了肿瘤的浸润和转移,TIMP-2在结直肠癌的发生发展中可能起抑制作用,二者之间的平衡失调可能是肿瘤侵袭和转移的重要机制之一。
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结肠癌MMP-9和nm23表达的相关性研究

目的：研究MMP-9和nm23在结肠癌中的表达及其与侵袭转移之间的关系,探讨MMP-9与nm23之间的相关性。方法：采用免疫组化SP法对41例结肠癌和5例正常结肠组织做MMP-9和nm23的抗原标记。结果：MMP-9和nm23的表达与淋巴结转移、分化程度、Duke’s分期有明显相关性（P〈0.01）;MMP-9和nm23的表达与结肠癌患者年龄、性别有明显相关（P〈0.01）;MMP-9与nm23在结肠癌的表达无相关性。结论：MMP-9和nm23的表达与结肠癌侵袭转移密切相关,可作为判断结肠癌预后的指标。。     

脑脊液和血清MIF、MMP-9及IL-1β对蛛网膜下腔出血发病机制和预后判断的研究

目的:研究蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)患者脑脊液和血清巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平的变化,及其三者之间的相关性,探讨其对SAH发病机制及预后判断的意义。方法:选择本院2012年1月到2015年1月收治的92例SAH患者,并以30例体检健康者作为对照,检测其脑脊液和血清MIF、MMP-9及IL-1β水平的表达,并进行统计学分析。结果:本研究SAH组患者脑脊液和血清MIF、MMP-9及IL-1β水平的表达均较对照组明显升高,具有统计学意义(P<0.05);且在SAH组、对照组脑脊液和血清MIF、MMP-9及IL-1β相互之间具有明显的正相关性。结论:SAH患者脑脊液和血清MIF、MMP-9及IL-1β水平明显升高及其正相关性提示SAH患者脑脊液和血清MIF、MMP-9及IL-1β水平变化对其发病机制及预后判断具有重要的临床意义,可作为对SAH早期脑损伤和预后评估的一项参考指标。     

基质金属蛋白酶-9及其组织金属蛋白酶抑制剂-1表达与大肠癌侵袭转移的研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP鄄9)及其相应组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP鄄1)在大肠癌组织中的表达与大肠癌侵袭转移的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测了48例大肠癌组织标本及23例正常大肠标本MMP鄄9、TIMP鄄1的表达。结果:48例大肠癌组织MMP鄄9阳性率为87.5%,显著高于正常大肠标本(P<0.05),伴有淋巴结转移或肝转移者MMP鄄9的阳性率明显高于无淋巴结转移或肝转移者(P<0.05)。大肠癌组织TIMP鄄1的阳性率为54.2%,明显高于正常大肠标本(P<0.05);MMP鄄9表达超过TIMP鄄1者,发生淋巴结转移和肝转移的比例明显高于TIMP鄄1表达超过MMP鄄9者。结论:MMP鄄9和TIMP鄄1表达失衡和大肠癌的浸润、淋巴结转移、肝转移密切相关,MMP鄄9有促进肿瘤侵袭转移的作用,TIMP鄄1和大肠癌的侵袭转移呈负相关;MMP鄄9表达超过TIMP鄄1者预后不良。     

侵袭性牙周炎患者牙龈组织中MMP-8及TIMP-1的表达

目的:探讨基质金属蛋白酶-8(MMP-8)及其抑制因子-1(TIMP-1)在侵袭性牙周炎(AgP)牙龈组织中的表达情况。方法:采用免疫组织化学方法检测15例AgP患者和20例对照的牙龈组织中MMP-8和TIMP-1蛋白的表达情况。结果:MMP-8和TIMP-1在2组牙龈组织的上皮内及上皮下结缔组织中均有表达。AgP组MMP-8表达水平和MMP-8/TIMP-1均高于对照组(Z=2.990和4.911,P<0.05),2组TIMP-1的表达差异无统计学意义(Z=1.822,P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,AUC(MMP-8)=0.752(95%CI=0.618～0.885,P=0.003),AUC(MMP-8/TIMP-1)=0.913(95%CI=0.831～0.996,P<0.001),AUC(TIMP-1)=0.347(95%CI=0.194～0.499,P=0.068)。结论:牙龈组织中MMP-8表达水平和MMP-8/TIMP-1可以作为诊断AgP的潜在指标。     

肺泡灌洗液TNF-α、IL-8和MMP-9在大鼠自身免疫性肺气肿发病中的作用

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在大鼠自身免疫性肺气肿中的作用,为研究其发病机制及寻求新的治疗方法提供理论依据。方法 20只SD大鼠随机分为两组:佐剂对照组(n=10)和模型组(n=10)。将原代培养的人脐静脉内皮细胞及佐剂注入模型组大鼠腹腔内建立自身免疫性肺气肿模型,佐剂对照组只给予佐剂大鼠腹腔内注射。两组大鼠均取肺组织切片行苏木素-伊红(HE)染色观察病理学改变,并定量测定肺平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN),以ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的TNF-α、IL-8和MMP-9含量。结果 (1)模型组MLI比佐剂对照组增高,而其MAN比佐剂对照组降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(2)模型组BALF中MMP-9含量较佐剂对照组升高(P<0.05),而两组TNF-α、IL-8含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MMP-9可能参与大鼠自身免疫性肺气肿的形成,而TNF-α、IL-8与该病的形成无关。     

巨噬细胞移动抑制因子在肾癌中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响.方法 以内蒙古自治区人民医院和包头市肿瘤医院2013年3月至2015年3月病理室确诊的49例肾癌患者为研究对象,采用蛋白质印迹法(West-ern blot)及反转录(RT)-PCR法检测肾癌组织及癌旁正常组织、肾癌细胞株及正常肾小管上皮细胞HK 2中MIF蛋白及mRNA表达;利用脂质体将siRNA MIF及siRNA NC转染到肾癌细胞中,Western blot及RT-PCR检测转染效果,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达.结果 肾癌组织中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(0.89±0.09 vs.0.18±0.02,1.19±0.04 vs.0.19±0.01,P＜0.05),肾癌细胞株ACHN、769-p、786-O、Caki-1中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于肾小管上皮细胞HK-2(P＜0.05).与siRNA NC组比较,siRNA MIF组中MIF蛋白及mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),细胞活力及侵袭能力降低(P＜0.05),HIF-1α及MMP9表达水平下调(P＜0.05).结论 MIF在肾癌中高表达,下调MIF表达能明显抑制肾癌细胞的侵袭能力,可能与抑制HIF-1α/MMP9信号通路有关.     

Vascular Endothelial Growth Factor165-regulated Nasopharyngeal Carcinoma Cell Lines Invasion and Migration Involve Expression and Activation of Matrix Metalloproteinase-2

The effect of vascular endothelial growth factor （VEGF） overexpression on matrix metalloproteinase-2 （MMP-2） in nasopharyngeal carcinoma （NPC） cells in vitro and the possible mechanism involved were investigated, and the correlation between the expression of VEGF and MMP-2 in NPC evaluated. The NPC cells were transfected with PAd-trackVEGF165 plasmid. The expression levels of VEGF and MMP-2 mRNA and protein in NPC cells were detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blot respectively. It was found that the expression of VEGF and MMP-2 mRNA and protein was significantly increased in NPC cells after transfection of VEGF 165. It was concluded that the expression of VEGF was correlated to the in vitro invasion of NPC cells, and the induction of MMP-2 by VEGF was a key process of NPC cell invasion.     

人鼻咽癌细胞系中基质金属蛋白酶9的表达及意义

目的 检测MMP9在鼻咽癌细胞株及细胞株裸鼠成瘤瘤块组织中的表达,探讨MMP9的表达与鼻咽癌发生、发展的关系.方法 采用细胞免疫组织化学技术、RT-PCR、Western blot检测鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HNE1、HNE2和SUNE15株细胞株中MMP9表达;免疫组织化学(SABC 法)检测HNE1和CNE2细胞裸鼠成瘤后瘤块MMP9的表达.结果 5株鼻咽癌细胞株中,免疫组化显示HNE1和SUNE1细胞中MMP9蛋白表达阳性.RT-PCR及Western Blot检测结果显示.HNE1和SUNE1细胞中MMP9 mKNA及蛋白高表达.HNE1和CNE2细胞裸鼠种植成瘤后,5例瘤块中MMP9蛋白均强阳性表达.结论 MMP9在鼻咽癌细胞系中表达阳性,成瘤后表达增强,提示MMP9的表达可能与鼻咽癌侵袭转移有关.     

干扰内皮素-1 可抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨干扰内皮素-1（ET-1）基因对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响以及相应的分子机制。方法构建ET-1 shRNA慢病毒干扰载体,成功包装慢病毒后感染鼻咽癌5-8F细胞。Western blotting检测ET-1干扰效率。利用MTT、细胞周期 检测、平板克隆形成实验、Transwell 小室、Boyden 小室以及裸鼠皮下成瘤实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭能力的改变。 Western blotting 检测上皮间质转化（EMT）相应基因表达改变。结果与对照组细胞相比,鼻咽癌细胞5-8F 感染慢病毒 shRNA-ET-1后ET-1的表达水平显著降低。MTT实验结果显示,在抑制ET-1表达后细胞增殖能力显著下降。流式细胞仪检测 细胞周期显示干扰ET-1表达,G1细胞数明显增多。平板克隆形成实验结果显示干扰ET-1表达,癌细胞克隆形成能力显著下 降。皮下裸鼠成瘤实验结果同样显示,ET-1表达抑制后癌细胞成瘤能力显著下降。Transwell和Boyden小室结果表明,ET-1表 达沉默后可显著降低细胞的迁移和侵袭能力。通过检测ET-1 沉默后EMT 相关分子的表达改变,结果显示上皮标志物 E-cadherin和CK18表达增高,而间质标志物Vimentin和N-cadherin表达降低。结论ET-1在鼻咽癌中可通过调控上皮间质转 化相关基因促进细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

乳腺癌组织中巨噬细胞移动抑制因子的表达研究

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子( MIF)在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况. 方法 运用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹分析( Western Blot)方法检测85例乳腺癌组织和相应的癌旁组织中MIF的表达情况. 结果 乳腺癌组织中MIF mRNA表达量为(3.18 ±1.19) ×10 -2 ,高于癌旁组织的(1.38 ±0.05) ×10 -2 ( P<0.05);Western Blot结果显示乳腺癌组织中MIF蛋白表达水平为(0.879 ±0.232),高于癌旁组织的(0.325 ±0.178)(P<0.05). 结论 MIF在乳腺癌组织中表达高于癌旁组织,其可能在乳腺癌发生发展过程中起重作用.     

巨噬细胞移动抑制因子在急性坏死性胰腺炎肺损伤中的表达及白介素-10的干预作用

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在实验性急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤发病机制中的作用以及ANP早期应用抗炎细胞因子白介素-10(IL-10)对肺组织的保护作用.方法 92只大鼠随机分为对照组、ANP组和lL-10干预组,腹腔注射左旋-精氨酸制作ANP模型,干预组于末次精氨酸注射后第2、5及8h腹腔内注射IL-10 10 ku.各组再分4、12、24和3 h点.观察并比较ANP组与IL-10干预组胰腺、腹腔及肺的大体及组织学改变,检测各组血清MIF水平以及肺组织的MIF表达.结果 ANP时MIF明显升高,应用IL-10干预后各时点血清MIF明显下降(P<0.05).正常对照大鼠肺组织的支气管上皮细胞及肺泡细胞MIF仅为弱表达,ANP时肺组织MIF阳性细胞数增加、染色明显增强,IL-10干预组的肺组织病变程度较ANP组明显减轻.结论 ANP时MIF明显升高,肺组织MIF表达明显增强,提示MIF参与了大鼠ANP相关肺损伤的发病;IL-10对血清及肺组织的MIF水平有抑制作用,可减轻实验性ANP相关肺损伤的损害程度,早期给药对肺组织有保护作用.     

TRIM59靶向调控PPM1B对鼻咽癌侵袭和迁移的作用

目的 探讨TRIM59能否通过靶向PPM1B影响鼻咽癌侵袭和迁移。方法 TCGA数据库分析TRIM59在鼻咽癌中的表达;Western blot实验检测TRIM59和PPM1B在鼻咽癌和癌旁组织中的表达情况;RT-PCR和Western blot实验分别检测鼻咽癌细胞系中TRIM59和PPM1B mRNA和蛋白的相对表达量;建立HNE1细胞TRIM59过表达及抑制表达的稳定细胞系,实验设未转染组（Control）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、TRIM59 模拟物组（mimic-TRIM59）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及TRIM59抑制剂组（si-TRIM59）。Western blot和荧光素酶报告基因实验检测TRIM59和PPM1B靶向关系;Transwell小室检测HNE1细胞侵袭和迁移能力的变化。结果 TCGA数据库结果表明,TRIM59在鼻咽癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P= 0.006）;TRIM59在鼻咽癌组织中表达增加（P=0.01）且PPM1B 表达下降（P=0.03）;与HNEpC细胞相比,TRIM59在HNE1细胞中相对表达量显著增加（P=0.04）,PPM1B在HNE1细胞中相对表达量显著下降（P=0.02）;PPM1B为TRIM59下游靶基因且与TRIM59表达呈负相关（P=0.01）;Transwell结果显示,上调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力增强（P=0.01,P=0.02）,下调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制（P=0.01）;同时下调TRIM59且上调PPM1B表达后,HNE1细胞侵袭和迁移能力均较单独下调TRIM59表达显著被抑制（P=0.02,P=0.01）。结论 TRIM59通过靶向调控PPM1B影响鼻咽癌细胞侵袭和转移。     

MIF在食管鳞癌组织和癌旁组织中的表达

目的 研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在食管鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的表达及与临床病理的关系.方法 用免疫组化方法检测80例食管鳞癌标本和80例食管癌旁组织中MIF的表达水平.结果 MIF在食管鳞癌组织中的表达呈明显增加,并与癌细胞的分化程度、肿瘤的TNM分期密切相关,MIF在癌旁组织的黏膜生发层细胞中表达也有少量的增加.结论 MIF参与调节细胞的生长周期,在人食管鳞状细胞癌的发病机制中起着重要的作用,与食管鳞癌TNM分期有关.     

巨噬细胞移动抑制因子真核表达载体的构建

目的构建巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)基因真核表达载体。方法通过PCR方法从pAdTrack-CMV质粒中扩增出348 bp的靶片段,将其粘端克隆至pcDNA3.1-(+)真核表达质粒,然后应用限制性酶切、PCR扩增及序列测定等技术进行鉴定。结果成功构建了MIF真核表达载体,酶切及测序证实读码框正确。结论成功克隆MIF真核表达载体,为体内基因治疗勃起功能障碍奠定基础。     

病毒性心肌炎患儿血清MIF IL-6水平的变化

目的探讨VM患儿血清MIF、IL-6水平的变化及临床意义。方法采用ELISA法测定32例急性期和20例恢复期VM患儿血清MIF、IL-6水平,同时检测CK-MB,并与35例健康儿童作对照。结果VM急性期血清MIF、IL-6水平明显高于恢复期及对照组(P<0.01),并与CK-MB呈正相关(P<0.05);VM恢复期MIF、IL-6水平与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论MIF、IL-6可能参与VM的发生、发展,并可作为病情判断及预后的观察指标。