Balb/c小鼠静脉注射刀豆蛋白A致大脑皮层内MAPEG基因表达变化及环孢素影响

目的：探索刀豆蛋白A（Con A）致小鼠免疫性炎症时,脑内花生四烯酸和谷胱甘肽代谢膜关联蛋白（MAPEG）家族蛋白的mRNA表达谱,及免疫抑制剂环孢素A（Cs A）对其表达的调控。方法：雄性Balb/c小鼠尾静脉注射Con A,20 mg/kg,制备免疫性炎症模型。另设尾静脉注射Cs A150 mg/kg预给药。采用RT-PCR检测小鼠大脑皮层内MAPEG家族蛋白在mRNA水平的基因表达情况。结果：采用RT-PCR测得未经Con A处理小鼠大脑皮层内,mGST1、mGST3、LTC4S、FLAP和mPGES-1 mRNA均有不同程度表达,但未见mGST2 mRNA表达。给Con A后8 h,无论是否以Cs A预处理,脑内mGST1 mRNA表达显著增加,达到未处理组的1.2-1.5倍;而LTC4S、FLAP和mPGES-1 mRNA表达均未明显受Con A影响。结论：小鼠尾静脉注射Con A可诱导大脑皮层mGST1 mRNA表达上调,但未明显影响MAPEG其它5个成员;同时Cs A未能抑制该变化,提示Con A诱导的免疫性炎症对脑内花生四烯酸类炎症介质代谢影响不明显,但可能涉及氧化应激病理过程。     

刀豆蛋白A致小鼠肝损伤的LTC4合成酶系基因表达及环孢素A调控作用

目的:探索白三烯C4(LTC4)合成酶系在小鼠刀豆蛋白A(Con A)肝损伤时的基因表达谱,及环孢素A(Cs A)对其表达水平的调控。方法:雄性Balb/c小鼠尾静脉注射Con A致肝损伤,另设尾静脉注射Cs A预给药。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)评价肝功能,光镜检查肝组织学损伤,RT-PCR检测肝LTC4合酶(LTC4S)、微粒体谷胱甘肽S-转移酶2(mGST2)和mGST3基因的表达。结果:血清转氨酶和病理组织学结果表明:Con A注射2h后肝脏即有明显损伤,8h达到高峰;mGST2基因表达在2h明显上调(170%),8h达高峰(190%),而LTC4S和mGST3基因表达无明显改变。Cs A预给药可阻断Con A引起的肝脏损伤,并部分抑制mGST2基因表达上调,但对LTC4S和mGST3基因表达无影响。结论:Con A致小鼠肝损伤时,mGST2基因表达显著上调,而LTC4S和mGST3基因表达差异不明显。Cs A预处理能有效阻断ConA引起的肝损伤,但不能完全抑制mGST2基因表达上调。     

橙皮苷对刀豆蛋白A致小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的 研究橙皮苷(HDN)对小鼠免疫性肝损伤的保护作用.方法 采用尾静脉一次性注射给予一定剂量的ConA(20 mg/kg),造成急性肝损伤模型,造模8 h后采血,并处死动物,剖腹取肝,制备肝匀浆.测定不同剂量的橙皮苷对肝损伤谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性、白细胞介素-1(IL-1)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量、肝匀浆中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响;同时对肝组织进行病理学检查.结果 HDN能降低小鼠免疫性肝损伤血清ALT、AST、TNF-α、IFN-γ和IL-1的水平,降低肝匀浆中MDA、NO的含量,升高GSH的含量增强SOD的活性,减轻ConA对肝组织的病理损伤.结论 HDN对ConA致小鼠免疫性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能与他清除自由基,增强机体抗脂质过氧化能力及降低IL-1、TNF-α和IFN-γ等炎性细胞因子的表达有关.     

连花清瘟颗粒抗呼吸道合胞病毒感染BALB/c小鼠的药效作用研究

【目的】观察连花清瘟颗粒体内抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的药效作用。【方法】采用BALB/c小鼠RSV感染模型,通过观察小鼠体质量变化、肺病毒滴度、肺内炎症因子m RNA表达及肺组织病理变化评价药物的体内抗病毒药效。【结果】连花清瘟颗粒高剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内病毒滴度(P0.05)。连花清瘟高、低剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内炎症因子白细胞介素IL-6,IL-1βm RNA的表达量(P0.01);肺组织病理检查结果显示:连花清瘟颗粒高、低各剂量组均可以缓解病毒所致肺组织病理性炎症。【结论】连花清瘟颗粒可有效抑制RSV感染小鼠肺内病毒滴度,对小鼠病毒性肺炎具有一定的改善作用。     

糖尿病大鼠心肌超微结构及钙离子调控蛋白基因表达的改变

目的:研究糖尿病心肌细胞的结构变化及Ca2 调控蛋白基因表达的改变.方法:经大鼠尾静脉注射四氧嘧啶(40 mg/kg ) 复制糖尿病大鼠模型,对照组注射生理盐水,分别于2、4、6周处死,取心尖部组织行普通光镜及透射电镜观察大鼠心肌结构的改变.应用逆转录-聚合酶反应技术以肌动蛋白为内参,测定钙离子调控蛋白基因表达的改变.结果:4周、6周大鼠的心脏/体重比显著大于正常对照组.电镜下糖尿病组大鼠心肌细胞的亚细胞器出现重构,表现为肌原纤维含量明显减少,排列紊乱,内质网扩张,线粒体变性等改变.6周的糖尿病组大鼠心肌肌浆网Ca2 -ATP酶的 mRNA表达无明显变化,但磷酸受纳蛋白的mRNA表达显著高于对照组,1,4,5三磷酸肌醇受体2型,兰尼碱受体2型的mRNA表达显著低于对照组.结论:糖尿病大鼠心肌细胞的亚细胞器出现重构,肌浆网磷酸受纳蛋白的mRNA表达增加,RyR2、IP3R2的mRNA表达下降.     

补肾健脾法对卵巢早衰小鼠抑制素B含量及基因表达的影响

【目的】观察补肾健脾法中药复方对卵巢早衰(POF)小鼠抑制素B(INHB)含量及基因表达的影响。【方法】选用雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、中药预防组和中药治疗组。除正常对照组外,其他3组采用SD大鼠卵巢抗原与弗氏佐剂注射免疫法复制自身免疫性卵巢功能衰退小鼠模型。中药预防组于第1次免疫后开始灌服中药复方汤剂,连续17 d,中药治疗组于第3次免疫后开始灌服中药复方汤剂,连续5 d,剂量均为20 g.kg-1.d-1。采用酶联免疫吸附法检测各组血清INHB含量,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组卵巢组织INHB mRNA表达水平,并观察各组小鼠卵巢病理改变。【结果】模型组小鼠血清INHB含量、卵巢组织INHB mRNA相对表达量均显著降低(P0.05或P0.01),光镜下未见明显生长或成熟卵泡;中药预防组血清INHB含量、卵巢组织INHB mRNA相对表达量均显著升高(P0.05或P0.01),卵泡数目略减少,无明显病理改变;中药治疗组卵巢组织INHB mRNA相对表达量显著升高(P0.05),而对血清INHB含量无影响(P0.05),生长成熟卵泡减少,且卵巢组织出现病理改变。各组小鼠血清INHB含量与卵巢组织INHB mRNA表达变化呈相似趋势,且中药预防组作用优于中药治疗组。【结论】补肾健脾法中药复方治疗卵巢早衰的作用与其能增强卵巢组织INHB mRNA表达,升高INHB含量,改善卵巢的储备功能有关。     

加味当归芍药散对淀粉样蛋白42诱导脑内炎症因子及CD45、磷酸化tau蛋白表达的影响

[目的]观察淀粉样蛋白(Aβ) 42沉积对大脑海马炎症因子和CD45、磷酸化tau蛋白(p-tau)表达的影响及中药复方加味当归芍药散的干预作用.[方法]选用SD大鼠,随机分为正常对照组,假手术组,AD模型组,中药高、低剂量组(剂量分别为70.654、35.327 g·kg-1·d-1),西乐葆组(剂量为0.183 g·kg-1·d-1);除前2组外,其他组大鼠均应用立体定位注射方法一次性大脑海马定位注射纤丝状Aβ42复制阿尔茨海默病(AD)病理模型,并给予药物进行干预,采用免疫组织化学方法检测炎症因子及CD45、p-tau表达情况,并用分析软件进行图像分析.[结果]与假手术组比较,AD模型组的白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6及CD45、p-tau的阳性细胞染色面积均显著增加,而染色灰度值均显著下降(P＜0.05或P＜0.01);与AD模型组比较,各给药组的IL-1β、IL-6阳性染色面积均显著下降(P＜0.05或P＜0.01);除中药低剂量组IL-1β及西乐葆组IL-6的染色灰度值仅表现为增加的趋势外,其他各给药组的IL-1β、IL-6染色灰度值均显著增加(P＜0.05或P＜0.01);此外,中药低剂量组和西乐葆组的CD45阳性染色面积均显著下降(P.＜0.05或P＜0.01);各给药组的p-tau染色面积显著下降(均P＜0.01);中药低剂量组和西乐葆组的CD45、p-tau染色灰度值均显著升高(P＜0.05或P＜0.01). [结论]抑制小胶质细胞的激活及IL-1β、IL-6等炎症因子的产生,进而抑制tau蛋白的过度磷酸化,可能是加味当归芍药散拮抗AD的主要作用机制.     

黎氏哮喘Ⅰ号方对哮喘小鼠嗜酸性粒细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响

[目的]通过观察黎氏哮喘Ⅰ号方对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡及bcl-2基因表达的影响,进一步探讨哮喘Ⅰ号方治疗哮喘的作用机制.[方法]采用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏与雾化吸入激发的方法复制小鼠支气管哮喘模型.将60只符合实验标准的SPF级雄性昆明小鼠随机分为6组:正常组,哮喘模型组,地塞米松组(剂量为...     

丹皮总甙对小鼠化学性肝损伤的影响

目的观察丹皮总甙（ＴＧＭ）的抗肝炎作用。方法采用ＣＣｌ４和ＤＧａｌＮ诱导小鼠化学性肝损伤模型。结果ＴＧＭ可降低ＣＣｌ４和ＤＧａｌＮ所致血清ＡＬＴ、ＡＳＴ的升高,减轻ＣＣｌ４和ＤＧａｌＮ所致肝脏变性和坏死程度,预防给药效果优于治疗给药,其中以５０ｍｇ·ｋｇ－１剂量组给药７天效果最佳。结论ＴＧＭ对化学性肝损伤有一定程度的保护作用。     

安宫牛黄丸对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1基因表达及髓过氧化物酶活性的影响

【目的】观察安宫牛黄丸对盲肠结扎穿孔术致脓毒症模型大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGBI）mRNA表达及髓过氧化物酶（MPO）活性的影响。【方法】75只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,脓毒症模型组（cI．P组）,1α-氰基-（3,4-羟基）N-苄苯乙烯胺组[AG490组,术前0．5h皮下注射8mg／kg的Janusk激酶2（JAK2）抑制剂AG490],雷帕霉素（RPM）组[RPM组,术前0．5h皮下注射0．4111g／kg的信号转导和转录激活子（STAT）抑制剂RPM],安宫牛黄丸低、中、高剂量纽（术前0．5h和术后6h按1．0、2．0、3．0g／kg剂量灌胃）。于造模后24h活杀动物,留取肺组织,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肺组织HMGBI mRNA表达水平,同时测定MPO活性。【结果】与正常对照组比较,CLP组肺组织HMGB1 mRNA表达显著增强（P〈0．01）,MPO活性显著增高（P〈0．05）。与CLP组比较,AG490组、RPM组以及安宫牛黄丸低、中、高剂量组HMGB1 mRNA表达显著下调（P〈0．01）,AG490组、RPM组以及安宫牛黄丸低、中剂量组MPO活性显著降低（P〈0．05或P〈0．01）、【结论】安宫牛黄丸治疗脓毒症的作用与AG490、RPM等JAK/STAT信号通路抑制剂相似,可下调肺组织HMGB1基因表达,降低肺组织MPO活性,减轻腹腔感染所致的急性肺损伤。     

c-fos mRNA在损伤Balb/c 3T3细胞中的表达

本文以划线损伤方法在Balb/c 3T3细胞造成了纤维母细胞损伤模型,以Northernblot检测了这种刺激对c-fos mRNA表达的影响。结果表明,损伤 30min后就可在 Balb/c 3T3细胞中检出 c-fos mRNA。     

新生Balb/c鼠脑神经元和星形胶质细胞纯培养的实验研究

目的 探讨纯培养神经元和星形胶质细胞的合适方法.方法采用Balb/c鼠尾胶原、大鼠尾胶原、阿糖胞苷、贴壁处理及传代培养等方法纯培养Balb/c鼠神经元和星形胶质细胞.结果纯培养Balb/c鼠神经元的纯度为90%,纯培养星形胶质细胞的纯度为97%.结论纯培养神经元宜选择Balb/c尾胶原为生长基质并经3 mg·L-1阿糖胞苷处理.纯培养星形胶质细胞宜用大鼠尾胶原为生长基质和培养10天左右采用二次差速贴壁处理及传代培养.     

不同剂量刀豆蛋白A诱导Balb/c小鼠肝纤维化的量效关系

目的观察不同剂量刀豆蛋白A（Con A）诱导小鼠肝纤维化的效果,探讨建立小鼠肝纤维化动物模型所需最佳剂量及成模时间。方法实验组Balb/c小鼠18只,再分为A组、B组、C组,每组6只,经尾静脉分别注射10 mg/kg、12.5 mg/kg、15 mg/kg的Con A,每周1次。对照组6只,经尾静脉注射等量PBS,每周1次。各组均于每次注射后24 h采血,测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）;于实验第5、7、9周,每组各处死2只小鼠,取血清检测血清透明质酸,留肝脏作病理检查。结果A组第9周、B组第7周出现肝纤维化,C组第5周出现肝纤维化,但死亡2只。实验组ALT、AST、明显高于对照组（P〈0.05）。结论12.5 mg/kg Con A经尾静脉注射小鼠是合适的剂量,每周1次,注射6次可建立肝纤维化动物模型。     

Balb/C鼠尾胶原与大鼠尾胶原对新生Balb/C鼠脑细胞培养的影响

目的确定鼠脑细胞体外培养的适宜生长基质。方法以Balb/C鼠尾胶原与大鼠尾胶原作为生长基质,培养新生Balb/C鼠脑细胞。结果 Balb/C鼠尾胶原有利于神经元的生存、生长与分化,而大鼠尾胶原则利于星形胶质细胞的生存、生长、分化与增殖。结论 2种鼠尾胶原均为培养鼠脑细胞适宜的生长基质,培养1个月左右宜用Balb/C鼠尾胶原而长期培养则宜选择大鼠尾胶原。     

乳酸杆菌CL22菌株治疗Balb/c小鼠Hp感染性胃炎模型的有效性研究

目的: 观察乳酸杆菌对Balb/c小鼠Hp感染性胃炎的治疗作用,探讨一种非抗生素治疗Hp的可能方式. 方法:通过接种Hp,建立Balb/c小鼠Hp感染胃炎动物模型,将造模成功的32只Balb/c小鼠随机分为4组,每组8只:第1组(PPI三联干预治疗组)、第2组(乳酸杆菌CL22处理组)、第3组(乳酸杆菌CL24处理组)、第4组(生理盐水对照组),用相应干扰剂分别连续灌胃治疗10 d.另8只正常小鼠为第5组(空白对照组).最后一次灌胃4周后处死小鼠,HE染色判断小鼠胃黏膜组织学损伤,并用快速尿素酶试验、Giemsa染色和细菌培养进行Hp的检测.结果: 5组间胃窦黏膜病理组织学评分比较有统计学差异(F＝7.932,P＝0.000),其中第1组、第2组、第3组、第5组的胃窦黏膜病理组织学评分均低于第4组(P＜0.05),第1组、第2组、第5组两两比较差异无统计学意义(P＞0.05),第3组与第5组比较差异有显著性(P＜0.05);胃体黏膜病理组织学评分5组比较有统计学差异(F=6.241,P＝0.001),其中第1组、第2组、第3组、第5组的胃体黏膜病理组织学评分均低于第4组(P＜0.05),第1组、第2组、第3组、第5组两两比较差异无统计学意义(P＞0.05).胃窦部Hp根除率5组间比较有统计学差异(χ2=16.923,P=0.002),其中第1组、第2组明显高于第4组(P＜0.05),第3组与第4组比较,无统计学差异(P＞0.05);胃体部Hp根除率5组间比较有统计学差异(χ2=14.295,P=0.006),其中第1组、第2组明显高于第4组(P＜0.05),第3组与第4组比较,无统计学差异(P＞0.05).结论:乳酸杆菌CL22菌株可有效抑杀Balb/c小鼠Hp感染性胃炎模型体内Hp,疗效与PPI 抗生素相当,可以成为非抗生素治疗Hp的又一选择.     

Balb/c小鼠单纯疱疹病毒性脑炎模型的建立

目的:建立稳定的Balb/c小鼠单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型。方法:40只Balb/c小鼠颅内(20只)(颅内接种组)或鼻内(20只)(鼻内接种组)接种单纯疱疹病毒1型F株104空斑形成单位(滴度为3.5×105PFU/ml),另20只Balb/c小鼠以生理盐水分别行颅内(10只)和鼻内(10只)假性接种作为对照组,分析小鼠的行为学和病理改变来确定是否建立HSE模型。结果:Balb/c小鼠颅内接种单纯疱疹病毒1型后出现毛发紊乱、活动减少、精神萎靡、激惹、癫痫发作和死亡等;接种后3 d开始发病,6 d开始有小鼠死亡,发病于7～10 d达高峰,14 d以后没有明显的行为学改变;发病小鼠的病理检查可见脑膜和脑实质炎性浸润,脑组织变性坏死、胶质增生及血管周围淋巴套等脑炎的典型改变。鼻内接种组仅1只小鼠出现毛发紊乱。对照组均无行为学及病理改变。颅内接种组小鼠出现病变的阳性率均明显高于鼻内接种组和对照组(P0.01)。结论:颅内接种104PFU的单纯疱疹病毒1型F株能建立稳定的单纯疱疹病毒性脑炎模型。     

Balb/C小鼠甘露聚糖结合凝集素-A糖识别域的原核表达

目的 获取具有生物学活性的Balb/C小鼠血清型甘露聚糖结合凝集素(MBL-A)糖识别域(CRD)蛋白.方法 应用PCR从含Balb/C小鼠MBL广A基因的质粒pmMBL-A中扩增目的 基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的 蛋白.表达产物(包涵体)经洗涤和复性处理后,利用GST柱纯化,以SDS-PAGE、Western blotting和ELISA进行分析鉴定.结果 从pmMBL-A中扩增到约450 bp的DNA片段,构建重组载体pET41a-mMBL-A-CRD,经酶切和测序鉴定后,将其导人大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体形式存在,其相对分子质量约47 000.包涵体经洗涤及复性处理,GST柱纯化后,融合蛋白的纯度达90%以上.Westemblotting显示重组融合蛋白与抗GST抗体特异性反应,糖结合试验表明表达产物具有生物学活性.结论 成功获得了具有生物学活性的Balb/C小鼠MBL-A CRD蛋白,为MBL-A分子的研究奠定了一定基础.     

脑不对称影响Balb/c小鼠海马白细胞介素-6蛋白水平的研究

目的 :研究Balb c小鼠海马内细胞因子白细胞介素 6 (IL 6 )含量与脑不对称的关系。方法 :用伸爪取食法将小鼠分为左利、右利和双利鼠。实验组于腹腔注射细菌脂多糖 (LPS) ,正常对照组腹腔注射无菌NS ,2h后快速断头杀鼠 ,冰上迅速分离海马 ,制备海马脑组织匀浆 ,用酶联免疫吸附测定法测定海马中IL 6蛋白含量。结果 :正常对照组海马IL 6水平为右利 >左利 >双利 (P <0 0 0 1) ;注射LPS 2h后 ,右利、左利和双利鼠海马IL 6水平变化趋势是右利、双利略有升高 (P =0 4 5 9)。结论 :海马IL 6水平与脑不对称有关     

肝龙胶囊对Balb/c裸鼠腋下移植瘤的影响

目的 探讨肝龙胶囊对Balb/c裸鼠腋下移植瘤的影响。方法 将人肝癌敏感株BEL-7402接种于裸鼠腋下造模,造模成功后将其分为模型组、索拉非尼组、CII-3组、脱脂膏组、肝龙胶囊高、中、低剂量组,正常裸鼠为空白组,连续给药14d。比较各组的抑瘤率、脏器指数、生化指标、缺氧微环境相关蛋白及其mRNA表达水平。结果 各药物治疗组均能抑制肿瘤生长,其中肝龙胶囊中剂量组的平均抑瘤率最高;与模型组相比,各药物治疗组裸鼠的心脏指数、肾脏指数、肝脏指数、肺脏指数均有所升高,脾脏指数均有所下降,但多数变化不大;各项生化指标显示,肝龙胶囊安全性良好,并未出现明显的组织损伤;索拉非尼组、肝龙胶囊中剂量组裸鼠的低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2）的mRNA表达均显著低于模型组（P<0.05）;免疫组织化学结果显示,各药物治疗组的VEGFR2、HIF-1α、VEGF、Ki-67和CD31蛋白表达均表现出不同程度的抑制,其中以索拉非尼组、肝龙胶囊中剂量组及CII-3组的抑制作用较强。结论 肝龙胶囊可有效抑制Balb/c裸鼠腋下移植瘤的生长,并下调移植瘤中缺氧微环境相关蛋白及其mRNA表达水平。     

三种制作Balb/c小鼠下肢缺血模型方法的比较

目的采用高位结扎并离断一段股动脉、单纯性高位结扎和单纯性低位结扎股动脉三种术式,制作Balb/c小鼠下肢缺血模
型。通过比较3种术式的优缺点,为制作用于再生医学研究的缺血模型提供理论依据。方法选8周龄的雄性Balb/c小鼠30只,
随机分成3组,分别按3种方法制作缺血模型。术后连续观察5 d。第2天行激光多普勒检测。结果激光多普勒显示3种模型
中手术侧的下肢血流阻滞。高位结扎并离断股动脉组中小鼠整个肢体坏疽并脱落;单纯性高位结扎组小鼠中出现小腿及脚爪
坏疽;单纯性低位结扎小鼠脚掌干燥并有脱皮现象,个别脚爪坏死,组织学见大片肌组织坏死及再生俢复反应。结论单纯性低
位结扎股动脉是制作Balb/c小鼠下肢缺血模型比较好的方法。