miR-27a对胃癌细胞凋亡影响的体外研究

目的:探讨miR-27a对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:分别构建miR-27a过表达和敲除FOXO1的SGC-7901细胞株,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡和自噬相关蛋白p53、BCL-2、LC3I、LC3II水平,同时检测上调及下调miRNA-27a的胃癌细胞FOXO1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miR-27a的靶基因。实时聚合酶链式反应（Realtime PCR） 检测miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒的转染效率,并检测过表达/敲低miRNA-27a的胃癌细胞中FOXO1 mRNA的水平。结果:（1）上调miR-27a的细胞凋亡率较对照组明显下降,且凋亡相关蛋白BCL-2表达上调,p53水平下降,自噬相关蛋白LC3I、LC3II的表达较对照组下调（P<0.05）。而敲低胃癌细胞中FOXO1后得到了与上调miR-27a相似的实验结果。（2）双荧光素酶报告基因验证结果显示miR-27a与FOXO1存在靶点关系。miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒分别成功转染至胃癌细胞中。上调或下调胃癌细胞中miR-27a后,SGC-7901细胞中FOXO1 mRNA水平无明显变化（P>0.05）,FOXO1基因表达在蛋白水平相应下调或上调。结论:体外实验中,miR-27a可通过靶向抑制FOXO1的表达抑制胃癌细胞凋亡,miR-27a/ FOXO1轴可以为胃癌治疗提供新的策略。     

葡萄籽原花青素的研究进展

葡萄籽原花青素是一种聚多酚类混合物,葡萄籽原花青素有着极强的抗氧化及清除自由基活性,还有抗心血管疾病、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、抗病毒等作用。本文对葡萄籽原花青素的药理作用、食用安全性及开发应用的研究进展做一综述。     

葡萄籽中原花青素提取工艺的研究

目的：探讨葡萄籽原花青素的最佳提取工艺条件。方珐：将乙醇溶液作为提取液，用正交实验优选最佳提取工艺。结果：最佳提取条件为：将样品粉碎成粗粉，脱脂后用60％的乙醇溶液作为提取液，对样品回流提取2次，每次30min。所得产品的原花青素含量为33．8％，收率为19．7％。结论：本研究初步建立了葡萄籽原花青素提取工艺。     

葡萄籽提取物原花青素诱导乳腺癌MCF-7细胞脱落凋亡

目的 检测葡萄籽提取物原花青素诱导乳腺癌MCF-7细胞脱落凋亡的作用。方法 采用DNA ladder检测及软琼脂集落形成试验方法，观察乳腺癌MCF-7细胞对脱落凋亡的敏感性以及原花青素诱导其脱落凋亡的作用。结果 MCF-7细胞具有抗脱落凋亡的特性，而0．1mmol／L原花青素即可引起悬浮培养的MCF-7细胞凋亡。表现为细胞染色质DNA断裂及软琼脂集落形成受阻。结论 原花青素可诱导乳腺癌MCF-7细胞脱落凋亡。     

葡萄籽原花青素生物药理活性的研究进展

原花青素(proanthocyanidins或procyanidins,PC)是天然植物中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称,属于植物多酚类物质.原花青素广泛存在于葡萄,苹果,可可豆,山楂,花生,银杏,花旗松,罗汉柏,白桦树,刺葵,番荔枝,野草莓等植物中,其中以葡萄籽中含量最为丰富.葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins,GSP)是由不同数量的儿茶素和(或)表儿茶素聚合而成,其中最简单的是儿茶素与表儿茶素形成的二聚体,此外还有三聚体、四聚体……十聚体等.二到四聚体称为低聚体原花青素( oligomeric proanthocyanidins,OPC),五以上聚体称为高聚体.     

葡萄籽原花青素研究现状的文献计量学分析

以中国生物医学文献数据库(SinoMed)和MEDLINE为数据源,采用文献计量学方法对2000-2011年葡萄籽原花青 素（GSP）的研究现状和发展趋势进行了分析,为基础和临床研究提供有益借鉴。     

微波法提取葡萄籽中原花青素的工艺研究

目的采用微波提取技术从葡萄籽中提取原花青素。方法考察微波提取工艺中5个影响收率的因素:提取温度、微波输出功率、溶剂体积分数、微波加热时间、固液比例。结果最佳生产工艺条件:使用80%乙醇,在微波输出功率600W,温度80℃条件下,持续加热3min,固液比例为1∶8。原花青素收率可达到22.73%。结论本研究建立了适合于工业化生产的微波提取葡萄籽中原花青素的工艺条件。     

慢病毒介导的miR-27a下调对U87胶质瘤细胞的影响

目的:探讨下调miR-27a对U87胶质瘤细胞的影响?方法:分别用慢病毒干扰质粒miRZip-27a anti-miR-27a microRNA construct或慢病毒空质粒pGreenPuro Scramble Hairpin Control-Construct与慢病毒包装质粒混合物共转染293T细胞,获得慢病毒颗粒命名为Lt-I和Lt-NC?然后分别用慢病毒Lt-I和Lt-NC感染U87胶质瘤细胞,通过流式细胞仪筛选出稳定感染的U87胶质瘤细胞?通过定量PCR法分别检测稳定感染的U87细胞和未感染的空白U87细胞miR-27a,CCK-8法检测胶质瘤细胞增殖情况,Transwell侵袭试验检测胶质瘤细胞的侵袭能力?结果:相对于未感染慢病毒的空白U87胶质瘤细胞,稳定感染Lt-I的U87胶质瘤细胞miR-27a表达明显下调?细胞增殖减缓?侵袭能力降低,而感染Lt-NC组(阴性对照组)则未见此改变?结论:miR-27a的下调能有效抑制U87胶质瘤细胞的增殖,降低U87胶质瘤细胞的侵袭能力?     

葡萄籽原花青素对肺癌放射增敏作用的实验研究

目的研究葡萄籽原花青素提取物对肺癌SPC—A-1细胞X射线放疗的增敏作用。方法应用MTr法和集落形成法研究葡萄籽原花青素放疗增敏效应,单因素方差分析确定增敏剂量和增敏作用,单击多靶模型曲线拟合计算增敏比及相关参数。结果MTT法检测结果表明,单独应用葡萄籽原花青素对SPC—A-1细胞抑制作用较弱;细胞药物处理后对X射线的敏感性增强,单因素方差分析表明药物和X射线有协同作用（P〈0．05）,药物剂量为100μg/ml时表现出增敏效应。集落形成法结果表明,药物剂量为100μg／ml对X射线增敏作用明显,增敏比为2．56。结论葡萄籽原花青素对肺癌SPC—A-1细胞有显著的放疗增敏作用。     

急性冠状动脉综合征患者血清miR-27a、miR-34a表达及其临床意义

目的探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清miR-27a、miR-34a表达及其与冠状动脉病变程度的相关性。方法选取2016年7月至2018年2月在解放军总医院第四医学中心进行冠状动脉造影术的患者为研究对象,其中ACS患者86例(ACS组)、稳定型心绞痛(SAP)患者70例(SAP组),另外同期选取72例体检健康志愿者为对照组。根据SYNTAX评分标准将ACS患者分为轻度病变组(22例)、中度病变组(27例)、重度病变组(37例)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组血清miR-27a、miR-34a表达水平,并采用Pearson法分析ACS患者血清miR-27a、miR-34a与ACS患者临床指标的相关性。采用Logistic回归分析ACS患者冠状动脉病变程度的影响因素。结果与对照组相比,SAP组与ACS组患者血清miR-27a、miR-34a表达水平升高(P <0. 05),且ACS组高于SAP组(P <0. 05); Pearson分析显示miR-27a、miR-34a表达呈正相关(r=0. 492,P <0. 05),且均与总胆固醇、糖化血红蛋白、高敏C反应蛋白呈正相关(r=0. 413,0. 536,0. 415; r=0. 276,0. 395,0. 274,P <0. 05),而与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关(r=-0. 560,-0. 372,P <0. 05);与轻度病变组相比,重度病变组与中度病变组ACS患者血清miR-27a、miR-34a表达水平显著升高(2. 23±0. 37、1. 85±0. 62比1. 22±0. 20; 2. 20±0. 37、1. 61±0. 27比1. 35±0. 23,P <0. 05),且重度病变组显著高于中度病变组(P <0. 05); Logistic回归分析结果显示,miR-27a(OR=2. 225,95%CI 1. 812～2. 732,P=0. 031)、miR-34a(OR=2. 072,95%CI 1. 629～2. 635,P=0. 022)均为ACS患者冠状脉病变的影响因素。结论 ACS患者血清miR-27a、miR-34a呈高表达,并与冠状动脉病变程度密切相关,且均可作为临床预测冠状动脉病变的重要指标。     

人参皂苷Rg1上调miR-298抑制胰腺癌肿瘤生长

目的 探讨人参皂苷Rg1对胰腺癌的影响及调控机制。方法 采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）检测0、2.5、5、10、20μmol/L人参皂苷Rg1对人胰腺癌细胞PANC-1细胞活力的影响,流式细胞术检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞凋亡的影响,Western blot检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞BCL-2相关X蛋白（BAX）和B淋巴细胞瘤-2蛋白（BCL2）表达的影响,Transwell实验检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞miR-298水平的影响;将胰腺癌细胞分为三组：对照组、人参皂苷Rg1组和人参皂苷Rg1+miR-298 inhibitor组,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测BAX和BCL2蛋白的表达;构建胰腺癌荷瘤小鼠,进行人参皂苷Rg1处理,观察瘤体组织大小和重量变化,Western...     

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用

目的 观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthoeyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72 h)对COC1/DDP的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 GSPE对COC1/DDP具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变.流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高.Western blot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加.结论 原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞COCl/DDP的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关.     

miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响

目的研究miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响。 方法构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。细胞实验分为空白对照组(HEC-1-A不做任何处理)、NC-miR组(转染miR-27a空载体)及miR-27a inhibitor组(转染miR-27a抑制剂)。qRT-PCR法检测各组细胞miR-27a表达情况;MTT比色法和平板克隆技术检测各组细胞增殖能力。 结果成功构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。miR-27a inhibitor组miR-27a水平及细胞增殖能力均低于NC-miR组及空白对照组(P＜0.05)。 结论miR-27a低表达抑制子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖能力。     

顺铂诱导SPC-A1人肺腺癌细胞凋亡过程中miR-27a的表达及意义

目的:检测miR-27a在顺铂(DDP)体外诱导人肺腺癌细胞株SPC-A1凋亡过程中的表达变化,探讨其与细胞凋亡之间的相关性及其检测的临床意义?方法:体外培养SPC-A1细胞,实验组加入终浓度为2.5 μg/ml DDP,同时设置不加DDP的对照组?观察12?24?48和72 h后显微镜下细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,real-time PCR检测培养上清液中和SPC-A1细胞内miR-27a的表达变化?结果:DDP(2.5 μg/ml)组SPC-A1细胞形态呈凋亡改变,在48和72 h凋亡率分别为(59.3 ± 2.5)%和(76.4 ± 3.1)%,均显著高于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)?DDP (2.5 μg/ml)组培养上清液中和SPC-A1细胞内miR-27a含量在24?48和72 h均显著高于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)?DDP (2.5 μg/ml)组培养上清液中miR-27a含量在12?24?48和72 h逐渐升高,两两比较差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:miR-27a在DDP诱导的SPC-A1细胞凋亡中表达升高,提示其可能参与细胞凋亡调控;对miR-27a进行定量检测有望用于对肺腺癌化疗疗效的评估?     

MiR-199a-3p在胰腺癌中的表达水平及生物信息学分析

目的:探讨miR-199a-3p在胰腺癌中的表达水平及作为胰腺癌的诊断指标的意义,并进行生物信息学分析。方法:从GEO数据库收集胰腺癌和正常胰腺组织中miR-199a-3p的数据。汇总数据绘制受试者工作特征曲线,进行Meta分析,采用生物信息学方法预测miR-199a-3p的靶基因,并对靶基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。结果:收集到6个GEO数据,4个数据的ROC曲线表现出显著的诊断意义,Meta分析结果显示miR-199a-3p在胰腺癌中表达水平高于正常胰腺组织,差异有统计学意义（P<0.001）。预测到221个miR-199a-3p潜在的靶基因,其功能主要富集在基因表达的调控,细胞代谢的调控,蛋白质域特异性结合等生物学过程（P<0.001）,KEGG分析结果显示主要集中在PI3K-Akt通路、黏着斑、肌动蛋白细胞骨架调控、癌症通路、Hippo通路、鞘脂通路、ErbB通路、MAPK通路等通路（P<0.05）。结论:相比正常胰腺组织,miR-199a-3p在胰腺癌为高表达,可作为胰腺癌的一个潜在诊断指标,并可能在胰腺癌的发生发展中起到重要作用,为胰腺癌的研究和治疗提供了新的方向。     

miR-181a靶向作用CARF基因抑制胰腺癌细胞凋亡

目的：探讨miR-181a与CARF基因是否存在靶向关系,并研究其在调节胰腺癌细胞增殖凋亡过程中的作用。方法：利用Real-time PCR检测胰腺癌组织细胞中miR-181a的表达水平,通过miR-181a拮抗剂下调胰腺癌细胞中miR-181a浓度,并用MTT检测其细胞增殖能力变化。建立包含CARF基因3’-UTR序列的PGL-3载体,结合双荧光素酶报告基因系统验证CARF基因是否存在miR-181a的作用靶点,然后通过激动剂及拮抗剂调节胰腺癌细胞中miR-181a浓度,用Western blot检测相应细胞CARF基因蛋白表达情况。结果：miR-181a在胰腺癌组织/细胞中的表达水平明显高于正常胰腺组织/细胞（P＜0.05）。转染miR-181a拮抗剂可显著下调胰腺癌细胞中miR-181a的表达,并使其增殖能力明显下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因系统提示miR-181a与包含CARF基因3’-UTR序列的载体共转染,可明显下调荧光素酶活性,且下调水平与miR-181a剂量呈负相关（P＜0.05）;CARF蛋白表达情况和胰腺癌细胞中miR-181a水平呈显著负相关（P＜0.05）。结论：miR-181a在胰腺癌细胞中存在高表达,通过下调CARF靶基因促进细胞增殖而推动胰腺癌的发展。     

HBX在肝癌细胞中通过下调miR-199a增强AKT的表达

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)调节miR-199a的表达在HBV相关性肝癌发生中的分子机制.方法 重组HBX腺病毒(Ad-HBX)感染人肝癌HepG2细胞,HBX的siRNA转染稳定表达HBV基因的人肝癌HepG2.2.15细胞,荧光定量PCR方法检测HBV相关性肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、miR-199a、AKT的mRNA表达水平及运用Western blot检测肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、AKT的蛋白表达水平;分别用miR-199a mimics和miR-199a inhibitor的转染肝癌细胞后,荧光定量PCR方法检测肝癌细胞中AKT的mRNA表达水平及运用Westem blot检测肝癌细胞中AKT的蛋白表达水平.结果 miR-199a在HepG2.2.15细胞中表达水平显著低于HepG2细胞,并且证实其表达下调受到了HBX的调控(P＜0.05),HepG2.2.15细胞中AKT表达水平显著高于HepG2细胞(P＜0.05),在HepG2.2.15细胞中过表达miR-199a能明显下调AKT表达水平以及在HepG2细胞中抑制miR-199a能明显上调的AKT表达水平(P＜0.05),此外,miR-199a的表达量在HBV相关性肝癌组织比相应的癌旁组织表达降低.结论 HBX可以通过miR-199a调节AKT导致HBV相关性肝癌发生.     

Grape seed proanthocyanidin extract induced mitochondria-associated apoptosis in human acute myeloid leukaemia 14.3D10 cells

The important aim in cancer treatment is the selective killing of cancer cells without damaging healthy cells and the most commonly used chemotherapy for eliminating cancer is achieved by activating the mitochondrial apoptotic pathway.1 Therefore, identification of new agents that can selectively kill cancer cells becomes crucial in cancer clinical treatment. Grape seed proanthocyanidin extract (GSPE), a flavonoid in fruits, has been shown in vitro and in vivo, to possess superior antioxidan…