化疗药羟喜树碱诱导Wnt信号通路抑制剂DKK-1的表达作用

目的 研究加入抗肿瘤药羟喜树碱后Wnt信号通路抑制因子DKK(dickkopf-1)在人肿瘤细胞株中的表达调控作用.方法 选择四个不同p53状态的人肝癌HepG2(HepG2,含野生型p53;Hep3B,p53缺失)和人大肠癌(LoVo,含野生型p53),人神经胶质瘤细胞(U251,p53突变)加入抗肿瘤药羟喜树碱后,观察抑制剂DKK-1以及反映Wnt信号通路功能变化的β-catenin的表达.以RT-PCR技术检测Wnt信号通路抑制因子DKK-1的表达作用,以流式细胞术检测肿瘤细胞中β-catenin的表达.结果 加人羟喜树碱24 h后DKK-ImRNA表达水平在人肝癌细胞(HepG2,含野生型p53;Hep3B,p53缺失)、人大肠癌细胞(LoVo,含野生型p53)和人神经胶质瘤细胞(U251,p53突变型)中与对照组相比表达水平显著增加.β-catenin的阳性细胞百分比强度与对照组相比表达水平降低.结论 羟喜树碱在人肝癌细胞、人大肠癌细胞、人神经胶质瘤细胞中能够诱导抑制剂DKK-1 mRNA的表达.     

外源性p53对Wnt通路抑制因子Dickkopf-1的表达作用

目的研究外源性p53对W nt通路抑制因子D ickkopf-1(DKK-1)的表达作用。方法将携带p53基因的复制缺陷型腺病毒载体(Adp53)导入到p53完全缺失的人肝癌细胞株Hep3B中,并以p53反以寡核苷酸阻断p53阳性细胞p53的表达,以W nt通路的关键因子-βcaten in的改变为功能指标评价W nt通路的变化。以RT-PCR技术检测W nt通路抑制因子DKK-1表达的调节作用,以流式细胞术检测Adp53的转基因情况,肝癌细胞中p53和β-caten in的表达。结果DKK-1mRNA水平在转染Adp53 20 h后即有明显升高,32 h达最高水平,随后逐渐降低。β-caten in表达水平随着转染时间和转染剂量的增加,阳性细胞百分比强度和平均荧光量强度表达水平逐渐下降。以p53反以寡核苷酸阻断p53阳性细胞p53表达后,抑制剂DKK-1的表达逐渐降低,-βcaten in表达水平逐渐增加。结论外源性p53能明显诱导W nt通路抑制剂DKK-1的表达,进而产生抑制W nt通路的作用。     

化疗药顺铂对Wnt通路抑制因子的表达作用

目的 研究抗肿瘤药顺铂(cisplatin,Pt)对Wnt通路抑制因子FrpHE(frizzled relatd protein)和 DKK-1(dickkopf-1)表达的调节作用.方法 培养人肝癌HepG2、Hep3B、人大肠癌Lovo和人神经胶质瘤U251细胞,并分别加入5 μmol/L Pt作用24 h,以RT PCR技术检测FrpHE和DKK-1mRNA,以流式细胞术检测肿瘤细胞中Wnt通路的关键调节因子β-catenin的表达.结果 顺铂作用24 h后,FrpHE mRNA表达水平在人肝癌细胞较对照组表达水平显著增加(P<0.001).在人大肠癌细胞和人神经胶质瘤细胞中,未见FrpHE mRNA表达.DKK 1mRNA表达水平在加入Pt作用后的人肝癌细胞、人大肠癌细胞和人神经胶质瘤细胞均较对照组表达水平显著增加.β-catenin的阳性细胞百分比和平均荧光强度与对照组相比均降低(P<0.001).结论 化疗药顺铂能够诱导肝癌细胞FrpHE mRNA和人肝癌、肠癌、神经胶质瘤细胞DKK-1 mRNA的表达,抑制Wnt通路.     

Wnt信号通路在乳腺癌中的作用

目的 探讨乳腺癌中Wnt信号通路关键因子β-catenin的突变和表达及靶基因cyclinD1、c-myc的表达及意义.方法 应用免疫组化SP法检测119例乳腺癌,72例乳腺增生症和40例正常乳腺组织中β-catenin、cyclinD1、c-myc的表达,并分析其与乳腺癌临床病理特征的关系.应用PCR和基因测序的方法检测44例乳腺癌β-catenin外显子3的突变情况,同时应用免疫组化SP法检测其β-catenin的表达.结果 40例正常乳腺组织中β-catenin在细胞膜中强表达,cyclinD1及c-myc 阴性表达.乳腺癌β-catenin异常表达率明显高于乳腺增生症,组间比较差异有显著性(78.15%vs44.44%,P<0.01),乳腺癌cyclinD1、c-myc阳性表达率高于乳腺增生症(57.98%vs33.33%;56.30%vs27.78%,均P<0.01).β-catenin异常表达、cyclinD1的过表达与淋巴结转移相关,c-myc的过表达与肿瘤大小和淋巴结转移相关.β-catenin的异常表达与cyclinD1的表达相关,而与c-myc的表达无关.44例乳腺癌组织中未检测到β-catenin基因外显子3的突变,v-catenin的异常表达率为77.30%.结论 β-catenin异常表达是乳腺癌发生发展过程中的重要因子,这个过程可能是通过激活cyclinD1实现的.β-catenin异常表达和cyclinD1、c-myc过表达可作为评估乳腺癌转移预后、指导治疗的指标.乳腺癌组织中细胞内β-catenin异常积聚不是由β-catenin基因突变所致,可能存在其他机制.     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨羟氯喹对烟雾吸入致肺纤维化大鼠的作用机制

背景烟雾吸入致肺纤维化是火灾后常见并发症,病死率高,目前缺乏有效的治疗手段,探索该重症的治疗药物及其机制迫在眉睫。目的 通过构建烟雾吸入性急性肺损伤(smoke inhalation induced acute lung injury,SI-ALI)后肺纤维化大鼠模型,探讨羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)是否通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥抗肺纤维化作用。方法 将140只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、模型组(S组)、磷酸缓冲盐溶液组(S+PBS组)、糖皮质激素组(S+MP组)和羟氯喹组(S+HCQ组),其中S+HCQ组根据HCQ剂量不同(5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg)分为3个亚组,每组20只大鼠。各组大鼠每日实验前1 h,腹腔注射对应剂量的PBS、MP和HCQ,后置于实验箱中开始吸入烟雾,持续30 min,共吸入7 d,继续正常饲养至28 d,比较各组大鼠的存活率、肺组织病理变化;分别用q RT-PCR和Western blot检测大鼠肺组织中α-肌动蛋白(smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ/Ⅲ型...     

Wnt信号通路在脑卒中疾病中作用的研究进展

Wnt信号通路是由配体蛋白Wnt和膜蛋白受体结合激发的一组多下游通道的信号转导途径,分为经典和非经典Wnt通路。其在多细胞生物体轴分化过程中起重要作用,参与了器官发生、大脑形成、海马回发育、生长锥重建、轴突形成,能够多环节、多靶点参与神经元的增值、分化、抑制迁移。脑卒中属急性脑血管疾病,具有高发病率、高死亡率、高复发率。Wnt通路是调控细胞生长、增殖、分化的关键途径,无论是在正常的神经发生、还是神经系统疾病形成和发展过程中,均有Wnt信号通路的参与。Wnt信号通路对神经干细胞的增殖分化发挥着决定作用,为很多脑损伤疾病提供启发与研究方向。研究Wnt通路与中枢神经系统细胞的作用可以为脑卒中在实验机制研究与临床针刺康复治疗提供新的依据与思路。     

Wnt/β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用

[目的]探讨Wnt/β-catenin通路的枢纽分子β-catenin和β-catenin/Tcf复合体在不同分化程度鼻咽癌中的表达,进而阐明Wnt/β-catenin通路对鼻咽癌分化的作用.[方法]采用免疫组化方法检测13例鼻咽粘膜慢性炎症和74例不同分化类型的鼻咽癌组织中β-catenin的表达;转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒,检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量.[结果]β-catenin在鼻咽癌中的异常表达主要出现在细胞浆内过表达.在角化性鳞癌、分化型非角化性癌中β-catenin胞浆内的过表达相对少,而在未分化癌中胞浆内累积明显增多.未分化癌与角化性癌、未分化癌与分化型非角化性癌相比较,β-catenin的表达有统计学差异,P值分别为0.0195和0.0003.通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin/Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2和HONE-1)中的表达是高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)的80～123.6倍.[结论]低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的胞浆内β-catenin和核内β-catenin/Tcf的表达,说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中,提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用.     

Wnt/β-catenin通路异常在卵巢癌中的研究进展

如何早期诊断早期治疗成为当今卵巢癌研究的重要课题。β-catenin作为Wnt信号通路的细胞粘附和信号转导分子,被认为在卵巢癌发生过程中起到了关键作用,被认为在卵巢癌发生过程中是早期事件。预示着β-catenin有可能成为临床发现与治疗卵巢癌的分子靶标。     

Wnt信号通路对肝细胞肝癌的影响

目的：探讨Wnt信号通路Wnt5a和β－catenin的表达与肝细胞肝癌的关系及临床意义。方法选取肝细胞肝癌患者癌组织及其癌旁组织各82例,采用免疫组织化学法检测β－catenin与Wnt5a的水平,分析两者与肝细胞肝癌患者临床病理参数间的关系及两者的相关性。结果肝细胞肝癌组织与癌旁组织Wnt5a的阳性表达率分别为35．0％和71．7％,β－catenin的阳性表达率分别为65．9％和23．2％,两者相比差异均有统计学意义（P＜0．01）。在肝细胞肝癌组织内Wnt5的表达与TMN分期和血清 AFP水平相关（P＜0．05）,而与患者年龄、性别、肿瘤分化程度以及有无肝硬化无明显相关（P＞0．05）;β－catenin的表达与TMN分期和肿瘤分化程度及是否有肝硬化有相关性（P＜0．05）,而与患者年龄、性别、血清AFP水平无明显相关（P＞0．05）。在肝细胞肝癌组织中,Wnt5a与β－catenin的表达呈负相关（r＝－0．418,P＜0．05）。结论 Wnt信号通路Wnt5a与β－catenin的表达与肝细胞肝癌的发生、发展具有密切的关系,可为临床治疗肝细胞肝癌提供一定理论基础。     

紫朱软膏对糖尿病足溃疡Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的:观察糖尿病足溃疡患者中Wnt/β-catenin信号通路基因表达的变化及紫朱软膏外用对此信号通路的影响。方法:观察糖尿病足溃疡患者60例外用紫朱软膏后创面愈合情况,治疗前后肝肾功能等安全性评价及创面组织中Wnt/β-catenin信号通路相关指标基因的表达变化。结果:紫朱软膏能促进糖尿病足溃疡的愈合,且未对患者肝、肾功能造成影响;与治疗前比较,紫朱软膏能上调糖尿病足溃疡患者创面组织中β-catenin、c-Myc、Rspo-3等基因表达,下调GSK-3β表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:紫朱软膏可能通过激活表达低下的Wnt/β-catenin信号通路促进糖尿病足溃疡愈合。     

抑癌基因p53诱导Wnt通路抑制因子sFRP的表达

目的研究p53对Wnt通路抑制因子sFRP表达的调节作用。方法将携带p53基因的复制缺陷型腺病毒载体(Adp53)导入到p53缺失的人肝癌细胞株Hep3B中,以流式细胞术检测Adp53转基因情况,以RT-PCR技术检测p53对sFRP表达的调节作用。结果sFRP mRNA水平在转染p53 20 h后即有明显升高,其中以32 h达最高水平,随后逐渐降低。量效关系研究表明在转染剂量为0.05、0.5、5、50 pfu/cell的Adp53 sFRP mRNA表达均有显著增高,尤以5 pfu/cell时表达水平最高。结论p53能明显诱导Wnt通路抑制剂sFRP的mRNA表达。     

抑癌基因p53诱导Wnt通路抑制因子sFRP的表达

目的 研究p53对Wnt通路抑制因子sFRP表达的调节作用。方法 将携带p53基因的复制缺陷型腺病毒载体（Aap53)导入到p53缺失的人肝癌细胞株Hep3B中，以流式细胞术检测Adp53转基因情况，以RT—PCR技术检测p53对sFRP表达的调节作用。结果 sFRP mRNA水平在转染p53 20h后即有明显升高，其中以32h达最高水平，随后逐渐降低。量效关系研究表明在转染剂量为0．05、0.5、5、50pfu／cell的Adp53 sFRP mRNA表达均有显著增高，尤以5pfu／cell时表达水平最高。结论 p53能明显诱导Wnt通路抑制利sFRP的mRNA表达。     

GPP34激活结肠癌细胞Wnt信号通路促进癌细胞增殖的研究

探讨人结肠癌细胞中高尔基相关蛋白34（ 34）基因高表达,激活经典Wnt信号通路,促进癌细胞增殖的机制。方法将SW620 结肠癌细胞株分为4 组：对照组、siRNA 转染组、Tricinbine 组及TWS119组,分别培养;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测结肠癌细胞转染后的沉默效果;分别用Topflash报告基因活性法、噻唑蓝（MTT）、流式细胞技术检测各组癌细胞Wnt 信号通路活性、生长抑制率、细胞凋亡率;Western blot检测各组结肠癌细胞中GPP34、β-catenin、pS9- 糖原合酶激酶-3β（pS9-GSK-3β）蛋白的表达。结果转染siRNA 后,沉默结肠癌细胞GPP34 表达效果佳;与对照组比较,各实验组癌细胞的生长抑制率和凋亡率升高,且Wnt信号通路活性抑制。Western blot检测结果显示,siRNA-GPP34 组GPP34 蛋白表达下降,其余两组GPP34蛋白表达比较,差异无统计学意义;siRNA转染组、Tricinbine组和TWS119组的β-catenin和pS9-GSK3β蛋白表达降低。结论SW620 结肠癌细胞中34 基因的高表达可通过激活经典Wnt 细胞信号通路,促进癌细胞增殖并抑制其凋亡。     

氯化锂通过激活Wnt信号通路促进神经干细胞增殖

目的观察氯化锂（LiCl）作用于神经干细胞（NSCs）后对细胞周期等生物学性状的影响以及经LiCl处理过的神经干细胞在分化过程中Wnt信号通路的主要信号分子β-catenin、GSK-3β的表达改变,评估LiCl激活Wnt信号通路后对NSCs增殖和分化的影响。方法应用分离培养的NSCs体系,流式细胞仪检测不同浓度的LiCl（1、5、10、100mmol/L）处理48h后NSCs细胞周期等生物学性状改变,Western Blot检测LiCl处理后的NSCs中β-catenin、GSK-3β的表达以及动态变化。结果 LiCl处理后的NSCs体系细胞团块分散,呈悬浮状态生长,并能抑制血清诱导下的干细胞分化,分化细胞贴壁时间明显延长。流式细胞仪检测表现为S期、G2/M期细胞数百分比的增加和G0/G1期细胞数百分比的相对减少,其效应呈现一定的剂量依赖关系（P〈0.01）。Western Blot检测显示NSCs中的β-catenin分子在LiCl处理后表达明显增强,GSK-3β分子的表达明显下调,表现出正相关的量效关系（P〈0.01）。结论 LiCl通过激活Wnt信号通路能促进培养NSCs的增殖,抑制干细胞分化,其作用可能与胞内效应分子β-catenin的表达增多有关。     

Tenascin-C表达降低抑制成骨细胞分化并促进骨质疏松的机制

目的探讨Tenascin-C在成骨细胞分化中的作用及机制,并分析其表达变化对骨质疏松的调控。方法以免疫印迹法检测 去卵巢致骨质疏松的小鼠股骨松质骨的Tenascin-C 表达变化。体外诱导成骨前体细胞MC3T3-E1 分化,检测瞬时转染 Tenascin-C的siRNA后其碱性磷酸酶的活性。以蛋白质相互作用预测软件STRING筛选与Tenascin-C可能存在相互作用的蛋 白质。在上述候选蛋白中,以免疫沉淀法验证了Tenascin-C与Wnt通路内源性抑制蛋白Dickkopf-1（Dkk-1）的相互作用,并以 免疫印迹检测Tenascin-C对DKK-1的调控。此后进一步采用荧光素酶报告基因系统检测了Tenascin-C对Wnt信号通路转录活 性的影响。结果去卵巢骨质疏松的小鼠股骨松质中Tenascin-C 蛋白表达急剧下降。降低Tenascin-C 的表达能够阻遏 MC3T3-E1向成熟成骨细胞分化,反之,在此基础上过表达β-Catenin可逆转前者导致的成骨细胞分化阻滞。Tenascin-C结合于 DKK-1,敲低Tenascin-C可上调DKK-1的表达并降低Wnt通路的转录活性。结论Tenascin-C的下调可能通过减弱对DKK-1 的负调控从而抑制Wnt通路的转录活性,进而抑制成骨细胞的分化并介导骨质疏松。     

Wnt信号通路调控肠癌细胞GRP78表达与细胞膜转位

 目的 本研究旨在探讨Wnt/β catenin信号通路和葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)两者在肠癌细胞中的调控关系。方法 本研究采用氯化锂(LiCl)处理肠癌HT 29和DLD1细胞,激活其Wnt/β catenin信号通路。通过Western blot和荧光定量PCR,检测Wnt信号活化对GRP78表达的影响;通过对细胞组分的分离和免疫荧光染色技术分析Wnt信号活化对GRP78细胞膜转运的影响。结果 LiCl处理能够显著激活HT 29和DLD1细胞中的Wnt/β catenin信号通路,GRP78蛋白在HT 29细胞膜表面呈独特的“簇状”分布,LiCl处理明显提高了细胞中GRP78的转录和翻译水平,且GRP78在细胞表面的分布水平也有明显增加。结论 肠癌细胞中GRP78的表达和细胞膜转位受Wnt/β catenin信号通路活性的调控。     

双氯芬酸抑制肝癌细胞增殖和促进环氧合酶-2 mRNA作用的表达

目的 观察环氧合酶抑制剂双氯芬酸钠对体外培养的肝癌细胞HepG2、Hep3B和正常肝细胞系QSG-7701增殖的作用以及药物对环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达的影响,探讨COX-2与肝癌细胞增殖的关系。方法 采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞计数法测定药物作用24、48、72h后细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应检测各种细胞系COX-2 mRNA的表达水平以及药物作用对基因表达的影响。结果双氯芬酸在10～200μmol/L浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖,50μmol／L作用48h后抑制率分别为40．47％和54．49％,半数抑制浓度分别为70．54和48．39μmol／L。双氯芬酸对正常肝细胞株QSG-7701的抑制作用较弱,作用48h的半数抑制浓度为189．91μmol／L。HepG2、Hep3B细胞均表达COX-2 mRNA,QSG-7701细胞几乎不表达COX-2 mRNA。双氯芬酸和化疗药5-氟尿嘧啶均可增强HepG2和Hep3B细胞COX-2 mRNA的表达。结论 双氯芬酸特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞HepG2和Hep3B的增殖,并且诱导COX-2 mRNA表达上调,提示COX-2在肝癌细胞增殖中具有重要意义。