BXSB狼疮鼠骨髓细胞凋亡的实验研究

目的 通过在体外对BXSB狼疮鼠骨髓细胞进行培养,检测BXSB狼疮鼠骨髓细胞的凋亡情况,从而在干细胞水平上探讨系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制.方法 取4月龄雄性BXSB狼疮鼠和雄性BALB/c小鼠各6只.从小鼠股骨提取骨髓细胞后,用台盼蓝染色法检测骨髓细胞的活性,计数.然后将骨髓细胞悬液加入6孔培养板,每孔加入等量的骨髓细胞.置于37℃、5%CO2中培养24 h后收集骨髓细胞,用TUNEL法检测细胞的凋亡.结果 ①BXSB狼疮鼠骨髓细胞数量明显高于同龄BALB/c小鼠,而且BXSB狼疮鼠与同龄BALB/c小鼠相比,骨髓细胞数/小鼠体重之比也明显升高.②BXSB狼疮鼠骨髓细胞中凋亡水平明显下降.结论 BXSB狼疮鼠的发病可能与其骨髓细胞的凋亡异常有关.     

可诱导共刺激分子及其配体与系统性红斑狼疮的研究进展

可诱导共刺激分子(ICOS)及其配体可诱导共刺激分子配体(ICOSL)是CD28/B7家族第三个成员,在系统性红斑狼疮的发生发展中发挥重要作用。近些年,ICOS/ICOSL在SLE的治疗方面的研究逐年深入,为临床SLE治疗提供了新思路。本文主要就ICOS/ICOSL与SLE关系进行概述。     

狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠肾脏免疫组化的影响

目的：观察中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠肾脏免疫组化的影响。方法；取40只（♀8只，♂32只）BXSB小鼠，8♀BXSB小鼠作为同种阴笥对照组，其余32只♂BXSB小鼠随机分为模型组、中药组，CTX组、CTX＋中药组，每组各8只。各组于用药2周后聚肾脏进行冰冻切片，并用直接免疫荧光染色法，在荧光显微镜下观察各组肾脏IgG荧光梁色阳性肾小球数、荧光染色强度、荧光染色面积。结果：模型对照组绝大多数肾小球毛细血管襻上可见大量IgG呈片状沉积，沉积范围累及整个肾小球，且荧光强度高；经过治疗后，中药组荧光染色阳性肾小球数／肾小球总数比值明显降低，荧光强度明显减弱，累及肾小球荧光染色面积明显减小，分别与模型对照组比较，差异均具有显著性意义（P＜0.01）。结论：中药狼疮静颗粒具有明显清除狼疮性BXSB小鼠肾脏IgG沉积的作用。     

可诱导共刺激分子及其配体在系统性红斑狼疮发病及治疗中的作用

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种复杂的自身免疫性疾病,其特征是免疫耐受性丧失和免疫细胞过度活跃,共同导致多器官多系统中自身抗体的产生和抗体引起的组织损伤,其多器官、多系统损害与T细胞活化、B细胞增殖及炎症因子异常密不可分[1-2].     

大黄素对狼疮样BXSB小鼠的影响

目的 探讨大黄素治疗狼疮性肾炎的作用与机制。方法 已发生狼疮性肾炎的BXSB雌性小鼠35只，随机分5组，分别胃饲不同浓度的大黄素混悬液和生理盐水，30天后检测24h尿蛋白浓度和血清抗核抗体(ANA)满度。结果 与生理盐水组相比，胃饲大黄素的各组小鼠的24h尿蛋白浓度和血清ANA滴度均有所下降(P＜0．05和P＜0．01)，尿蛋白浓度与大黄素剂量(0—6．25mg/kg)呈直线负相关(P＜0．01)；血清ANA滴度与大黄素剂量呈负相关(P＜0．01)；尿蛋白浓度与血清ANA滴度呈正相关(P＜0．01)。结论 大黄素能降低狼疮样BXSB小鼠尿蛋白水平，其机制可能与降低血清ANA滴度有关。     

叶氏狼疮方对狼疮肾炎患者T细胞表面共刺激分子表达谱的影响

目的 了解叶氏狼疮方对狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子表达谱有无作用.方法 轻中度活动期LN患者15例及健康志愿者10例入选.双色标记流式细胞术检测健康对照和叶氏狼疮方治疗前后的LN患者空腹外周血单个核细胞(PBMCs)中CD3~+ T细胞表面分子CD28,CD40L,LFA-1a和CTLA-4的表达阳性率.其表达水平与系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)相关分析采用Pearson相关分析.3组间比较采用单因素方差分析.结果 LN患者外周血T细胞表面CD28、CD40L、LFA-1a和CTLA-4表达阳性率较健康对照组均明显升高(CD28:46.34±12.11 vs 27.66±4.27,CD40L:21.52±6.91 vs 6.13±1.44,LFA-1a:9.67±3.07 vs 4.54±1.12,CTLA-4:9.87±1.93 vs 4.80±1.56,均P<0.001);狼疮方治疗前后比较,LN患者PBMCs中T细胞表面分子CD40L和LFA-1a表达水平差异有显著性(CD40L:21.52±6.9l vs 15.81±2.31:LFA-1a:9.67±3.07 vs 8.07±1.15;均P<0.05),而CD28和CTLA-4表达水平差异无显著性(46.34±12.11 vs 44.69±9.93.9.87±1.93 vs 8.96±1.65,P均>0.05).在相关分析研究中,LN患者外周血T细胞表达CD40L、LFA-1a水平与SLEDAI呈明显正相关(r_1=0.667,r_2=0.654,均P<0.05),而CD28和CTLA-4水平与SLEDAI水平均无相关性.结论 叶氏狼疮方可能通过修正LN个体T细胞表面共刺激分子表达谱异常,诱导LN患者免疲耐受重建.     

BAFF-R—IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响

目的研究BAFF—R—IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响。方法体外观察BAFF-R—IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的B细胞活性的影响;100ul的PBS、200ug人IgG4和100ug BAFF-R—IgG4rout融合蛋白分别经腹腔注射10周龄雄性BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周。分别检测狼疮鼠外用血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220^＋CD5^-、CD3^＋CD4^-、CD8^＋T和CD3^＋、CD4^＋、CD8^-T细胞的表达以及狼疮鼠的存活率。结果BAFF-R—IgG4mut融合蛋白组外周血BAFF以及外周血、脾脏组织中B220＋CD5-细胞较对照组下降（P〈0．01）,实验组狼疮鼠存活率较对照组延长（P〈0．01）。结论BAFF-R—IgG4mut融合蛋白可抑制BXSB粮寤鼠B细胞活性．     

白血病细胞上ICOSL表达在肿瘤免疫及GVL中的作用

可诱导共刺激分子配体(ICOSL)是近年来发现的B7家族新成员,生理状态下低表达在B细胞上.白血病细胞上表达的ICOSL 在肿瘤免疫中起着免疫逃避的作用.对高表达ICOSL的白血病细胞的患者进行造血干细胞移植时,阻断ICOS/ICOSL在减轻GVHD的同时可以增强GVL效应,从而将两者有效地分离开来.     

雄黄对狼疮鼠肾功能的近期影响

目的 :研究雄黄对狼疮鼠肾功能的影响。方法 :将 1 6只狼疮鼠随机分为 3组 ,分别给予雄黄、雄黄 +强的松、强的松的淀粉悬液灌胃 ,治疗 3个月 ,每月 1次测定小鼠血清尿素、肌酐、白细胞、血红蛋白、转氨酶。结果 :3种治疗方法对狼疮鼠肾损害均有治疗作用 ,3组间疗效差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;且对造血和肝脏无明显的毒性作用。结论 :雄黄对狼疮鼠肾损害有一定的治疗作用 ,早期未见造血抑制和肝毒性     

T细胞免疫防治BXSB小鼠系统性红斑狼疮的实验研究

目的 :探索用自身反应性 T细胞免疫防治 BXSB雄性小鼠发生类似人系统性红斑狼疮 (SL E)的可行性。方法 :用活化的 BXSB小鼠自身反应性 T细胞克隆 (ATL 1)从小鼠尾静脉注射进行免疫 (1× 10 6 /只 ,共 3次 ) ,然后从不同角度监测病情发展情况。 结果 :在免疫后的第 1、2、4周 ,T细胞免疫组小鼠血清中抗 ds DNA抗体水平明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,在免疫后第 4、8、12、16周 ,T细胞免疫组小鼠的死亡率明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,但是两组尿蛋白的浓度在各时间段均未见显著差异。结论 :T细胞免疫能在一定程度上延缓 BXSB小鼠 SL E的进程 ,延长小鼠的生存时间。其机制可能与 T细胞免疫诱导了针对自身反应性 T细胞的调节性免疫应答有关。     

叉状头/翅膀状螺旋转录因子在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达

目的观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达,探讨Foxp3在狼疮性肾炎中可能的免疫耐受诱导作用及机制。方法选取8周龄及16周龄雄性BXSB小鼠各6只,以8周龄C57BL/6雄性小鼠6只为正常对照,用免疫组织化学及实时荧光定量PCR方法,检测Foxp3在小鼠肾脏中的表达。结果正常对照组C57BL/6小鼠肾组织Foxp3阳性表达,细胞呈深棕色着色,广泛分布于肾小管;8周龄及16周龄BXSB小鼠肾脏组织Foxp3弱阳性表达,细胞呈浅棕色着色,分布于肾小管。8、16周龄BXSB组小鼠肾组织内Foxp3mRNA表达水平[(0.55±0.06),(0.51±0.07)]均较正常对照组(1.02±0.08)降低,差异有统计学意义(均P<0.01);16周龄BXSB组小鼠的Foxp3mRNA表达水平较8周龄BXSB组降低,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 BXSB小鼠狼疮肾炎的发病机制可能与调节性T细胞的Foxp3表达下调相关。     

白介素—1受体拮抗剂对BXSB狼疮小鼠的治疗作用观察

利用基因工程技术获得高纯度人白介素-1受体拮抗剂（IL－1ra），连续性尾静脉注射4．5月龄雄性BXSB狼疮小鼠，发现其尿蛋白水平和ANA滴度的增加幅度减少，肾脏IgG、C3沉积减轻，血清白细胞介素-6（IL－6）活性和肾脏IL－6蛋白表达减弱。提示IL－1在BXSB狼疮小鼠发病中的病理性作用及IL－1ra对该鼠可能的治疗作用。     

补肾固精方治疗BXSB小鼠狼疮性肾炎的实验研究

目的:探讨中药补肾固精方对BXSB小鼠狼疮性肾炎的治疗作用。方法:BXSB小鼠随机分为模型组(生理盐水)、中药组(补肾固精方)、激素组(地塞米松)与中西药结合组(补肾固精方与地塞米松合用)。各组均连续用药45d,于第46天取材。考马斯亮蓝G250法检测尿蛋白定量,ELISA法测定血清抗ds-DNA抗体,HE染色光镜下观察肾脏病理改变,直接免疫荧光法观察肾组织中IgG沉积。结果:与模型组比较,中药组尿蛋白定量显著减少,血清抗ds-DNA抗体显著降低,免疫复合物沉积减少,肾脏病理损害有所改善;中西药结合组与模型组相比有显著差异,且优于中药组与激素组。结论:补肾固精方可以降低尿蛋白定量和血清抗ds-DNA抗体水平,改善肾脏损害,其与激素有协同作用。     

BXSB小鼠肾组织中MCP-1的异常表达及甲泼尼龙的干预作用

目的:探讨BXSB狼疮鼠肾组织单核细胞趋化因子1(MCP1)的表达情况及甲泼尼龙(MPS)是否可通过抑制MCP1的表达而缓解狼疮肾炎(LN)。方法:将18周龄雄性BXSB自发性狼疮小鼠随机分成BXSB治疗组(n=6)和对照组(n=6);另随机抽取同龄雄性BALBc小鼠6只为正常对照组。MPS组小鼠每日腹腔注射MPS25mg·kg-1;BXSB小鼠对照组及BALBc小鼠按体质量每日同一时间腹腔注射等体积生理盐水,连续3周。用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)研究BXSB小鼠肾脏MCP1mRNA的表达,并观察小鼠24h尿蛋白排泄量。结果:BXSB治疗组与对照组小鼠肾组织均检测到MCP1mRNA的表达,而BALBc正常对照组小鼠未见表达;BXSB治疗组小鼠肾组织MCP1mRNA表达量显著低于对照组(P<0.01);BXSB治疗组24h尿蛋白排泄量显著低于对照组(P<0.01)。结论:MCP1可能参与介导LN的发生、发展;MPS可能通过抑制肾组织MCP1的表达而减轻蛋白尿,从而缓解LN。     

红斑狼疮样雄性BXSB小鼠模型肾脏受累状况的研究

目的 :探讨系统性红斑狼疮样动物模型雄性BXSB小鼠肾脏病变进展状况。方法 :分别测定不同月份的BXSB小鼠的 2 4h尿蛋白含量及其肾脏免疫复合物沉积状况。结果 :雄性BXSB小鼠 2月龄出现肾脏病理改变 ,3月龄出现临床指标改变。结论 :雄性BXSB小鼠 2月龄出现肾脏病理改变 ,3月龄肾脏出现临床指标改变 ,且随着鼠龄的增加其疾病症状呈加重趋势     

BXSB狼疮小鼠胸腺上皮细胞培养方法的建立

目的：比较不同培养条件下原代狼疮小鼠胸腺上皮细胞生长情况。 方法：分别采用剪切法、剪切加胶原酶消化法、剪切加胰蛋白酶消化法建立培养体系获取自发性系统性红斑狼疮小鼠（BXSB小鼠）胸腺上皮细胞;用光镜、免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定。 结果：含血清的培养基与含生长因子的培养基均能培养出较纯的胸腺上皮细胞;剪切法成纤维细胞污染较多,剪切加胰蛋白酶消化法细胞生长状态较差,经剪切加胶原酶消化的BXSB胸腺植块,生长状态好,成纤维细胞污染少;当原代培养的细胞长满瓶壁的90％左右时可传代,角蛋白染色阳性细胞纯度达95％以上。 结论：剪切加胶原酶消化法仅用含血清的培养基即可培养出符合实验要求的BXSB小鼠胸腺上皮细胞,是低成本、简便易行的系统性红斑狼疮模型鼠胸腺上皮细胞培养体系。     

BXSB狼疮鼠骨髓粒-巨噬细胞集落形成单位异常与发病的关系

目的：研究BXSB自发性狼疮鼠骨髓粒-巨噬细胞系的增殖情况与狼疮发病的关系。 方法：雄性BXSB小鼠按4、8、12、16及20周龄分组,每组6只,采用甲基纤维素半固体培养方法体外培养骨髓单个核细胞（BMMC）,计数粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）及小鼠外周血单核细胞(PBMC),并检测尿蛋白。相同周龄的C57BL小鼠作为正常对照组。 结果：12周龄雄性BXSB小鼠尿蛋白（+）,20周龄时尿蛋白（）,4、8周龄BXSB小鼠及各周龄C57BL小鼠尿蛋白（-）。8周龄雄性BXSB小鼠骨髓CFU-GM为（96.00±18.11）/2×10⁵ BMMC,PBMC计数为（111.33±10.97）×10⁶•L^-1,均明显高于4周龄BXSB小鼠及正常C57BL小鼠（P<0.05）,随着周龄增加,CFU-GM和PBMC进一步增多。 结论：BXSB小鼠粒-巨噬细胞系造血异常及外周血单核细胞增多参与了自身免疫疾病的发病过程。     

δ-ALA-PDT对BXSB小鼠淋巴细胞凋亡及肾脏免疫复合物的影响

目的 :探讨δ ALA PDT对BXSB小鼠外周血淋巴细胞凋亡率及其肾脏免疫复合物沉积状况的影响。方法 :将 3月龄BXSB小鼠随机分成 4组 ,分别给予NS、δ ALA、PDT、δ ALA PDT治疗 ,观察其 2 4h尿蛋白的含量、外周血淋巴细胞凋亡率及其肾脏免疫复合物的沉积状况。结果 :δ ALA PDT组 2 4h尿蛋白的含量及其肾脏免疫复合物的沉积状况均低于其他组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;而外周血淋巴细胞凋亡率δ ALA PDT组明显高于NS组和δ ALA组 (P <0 .0 5 )。结论 :δ ALA PDT可减缓BXSB小鼠的疾病进展状况