可诱导共刺激分子及其配体与系统性红斑狼疮的研究进展

可诱导共刺激分子(ICOS)及其配体可诱导共刺激分子配体(ICOSL)是CD28/B7家族第三个成员,在系统性红斑狼疮的发生发展中发挥重要作用。近些年,ICOS/ICOSL在SLE的治疗方面的研究逐年深入,为临床SLE治疗提供了新思路。本文主要就ICOS/ICOSL与SLE关系进行概述。     

人源重组ICOSIg对鼠不成熟树突状细胞的生物学作用

目的分析人源可诱导共刺激分子(ICOS)可溶性融合蛋白(ICOSIg)与鼠源不成熟树突状细胞(DCs)是否发生特异性结合及其一般生物学特性。方法通过流式细胞术结合特异性抗体检测了解ICOSIg与不成熟DCs的结合作用;以AnnexinⅤ/PI双染色、活细胞染料CSFE和CCK-8研究ICOSIg对DCs的细胞毒性作用;以[3 H]掺入法研究ICOSIg对于混合淋巴细胞反应的阻断作用。结果 ICOSIg可结合小鼠DCs表面的ICOSL,ICOSIg不引起DCs早期和晚期凋亡,不影响DCs细胞的增殖,可以抑制不同基因小鼠脾细胞的混合淋巴细胞反应。结论本实验室构建的体外表达的ICOSIg具有较强的生物学活性,对鼠DCs无明显的生物学毒性作用,首次从实验角度证实人源ICOSIg可以特异性结合小鼠不成熟DCs表面配体ICOSL,可以用于进一步探讨ICOSL/ICOS共刺激通路的免疫作用。     

阻断ICOS对小鼠移植胰岛功能影响的实验研究

目的：在小鼠胰岛移植模型基础上，通过阻断可诱导共刺激分子（ICOS）。探讨ICOS单克隆抗体（ICOSmAb）对移植胰岛功能的影响。方法：供体为近交系昆明小鼠，受体为C57小鼠。受体小鼠随机分成5组，每组10只。假手术组：受体小鼠仅行开腹手术，不行胰岛移植；对照组：单纯胰岛移植，不给ICOS mAb；实验1、2、3组：分别于胰岛移植后1、3、5d腹腔内注射ICOSmAb50、100、200μg/kg。观察小鼠胰岛移植后移植物存活时间和移植胰岛病理改变，流式细胞仪检测ICOS在T淋巴细胞上的表达。结果：实验2组小鼠移植胰岛存活时间和实验3组相同，统计学分析无显著性差异，而较对照组及实验1组明显延长（P〈0．05）。ICOS在移植术后7d受体小鼠T淋巴细胞上表达明显上调。结论：ICOS分子在小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中表达上调。参与了排斥反应的发生。ICOSmAb通过阻断ICOS共刺激信号途径，诱导小鼠同种异体胰岛移植免疫耐受，减轻排斥反应，延长移植胰岛有功能存活时间。ICOS mAb的最佳给药剂量为100μg/kg。     

人可诱导的共刺激分子转基因细胞的构建及其对B细胞产生抗体的影响

目的构建含人可诱导共刺激分子（ICOS）基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人ICOS基因的L929细胞株,并初步研究ICOS对B细胞产生抗体的影响。方法采用RT-PCR方法从扁桃体激活的T细胞总RNA中扩增出ICOS cDNA,双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72h后,经Zeocin筛选出稳定表达ICOS分子的L929细胞株;采用RT-PCR和流式细胞仪分析ICOS的分子表达,ELISA法研究ICOS信号对B细胞体外产生抗体的作用。结果成功地构建了含ICOS基因的重组逆转录病毒载体;筛选获得能稳定高表达人ICOS分子的L929转基因细胞,ICOS在PWM体外培养体系中,能有效地促进B细胞生长及IgG的分泌。结论 ICOS是CD28家族的新成员,在机体免疫应答过程中起着重要的作用。     

异位性皮炎患者外周血T淋巴细胞CD28和可诱导共刺激分子的表达

目的探讨CD28和可诱导共刺激分子（ICOS）在异位性皮炎（AD）患者外周血T淋巴细胞的表达。方法采用免疫荧光双标记流式细胞术检测25例AD患者外周血T淋巴细胞CD28和ICOS的表达,参照欧洲AD评分标准（SCORAD）对病情严重程度进行评分,分析CD28和ICOS的表达水平与病情严重程度的相关性。结果AD患者组外周血T淋巴细胞CD28和ICOS的表达水平高于正常对照组（P〈0.01）,ICOS的表达水平与SCORAD评分呈正相关（r=0．68,P〈0．01）。结论AD患者外周血T淋巴细胞CD28和ICOS表达增高,ICOS的表达水平可作为反映病情严重程度的一个指标。     

白血病细胞上ICOSL表达在肿瘤免疫及GVL中的作用

可诱导共刺激分子配体(ICOSL)是近年来发现的B7家族新成员,生理状态下低表达在B细胞上.白血病细胞上表达的ICOSL 在肿瘤免疫中起着免疫逃避的作用.对高表达ICOSL的白血病细胞的患者进行造血干细胞移植时,阻断ICOS/ICOSL在减轻GVHD的同时可以增强GVL效应,从而将两者有效地分离开来.     

BAFF-R—IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响

目的研究BAFF—R—IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响。方法体外观察BAFF-R—IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的B细胞活性的影响;100ul的PBS、200ug人IgG4和100ug BAFF-R—IgG4rout融合蛋白分别经腹腔注射10周龄雄性BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周。分别检测狼疮鼠外用血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220^＋CD5^-、CD3^＋CD4^-、CD8^＋T和CD3^＋、CD4^＋、CD8^-T细胞的表达以及狼疮鼠的存活率。结果BAFF-R—IgG4mut融合蛋白组外周血BAFF以及外周血、脾脏组织中B220＋CD5-细胞较对照组下降（P〈0．01）,实验组狼疮鼠存活率较对照组延长（P〈0．01）。结论BAFF-R—IgG4mut融合蛋白可抑制BXSB粮寤鼠B细胞活性．     

抗ICOS单抗与小剂量环孢素A联用对大鼠心脏移植慢性排斥反应的影响

目的：探讨抗可诱导共刺激分子（inducible costimilator,ICOS）单克隆抗体与小剂量环孢素A（cyclosporine,CsA）联用对同种异基因大鼠心脏移植后移植物生存质量和慢性排斥反应的影响。方法：建立大鼠腹腔异位心脏移植模型,术后随机分为同基因移植对照组和同种异基因移植试验组,其中试验组根据术后处理不同又分为安慰剂组、常规剂量CsA组、抗-ICOS-单抗组、小剂量CsA组和抗-ICOS-单抗联合小剂量CsA组,观察各组大鼠移植心脏的存活时间及移植心组织病理学变化,对移植心长期存活（〉100d）的受体,应用流式细胞仪检测其外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。结果：单独使用不同剂量CsA者移植心脏的存活时间较安慰剂组明显延长（P〈0.05）;抗-ICOS-单抗联用小剂量CsA组移植心脏的存活时间较单用小剂量CsA组明显延长（P〈0.05）;与安慰剂组相比,单用抗-ICOS-单抗组移植心脏存活时间差异无统计学意义（P〉0.05）。移植心长期存活受体中,与常规剂量CsA组比较,联合治疗组移植心慢性排斥损伤明显减轻,而外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例有显著升高（P〈0.05）。结论：抗ICOS单抗加小剂量CsA联合免疫治疗,可有效延长大鼠移植心存活时间和减轻慢性排斥反应,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的高水平表达与诱导移植耐受、抑制慢性排斥反应有重要关联。     

利用Sm抗原模拟表位肽构建狼疮样鼠模型

目的利用Sm抗原模拟表位肽免疫BALB/C小鼠,构建狼疮样鼠模型。方法用鼠Sm单克隆抗体对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选,将筛选的噬菌体阳性克隆行双抗体夹心ELISA检测、DNA序列测定并推导其氨基酸序列,初步确定Sm抗原模拟表位;进而用混合噬菌体阳性克隆皮下免疫BALB/C小鼠,ELISA法检测小鼠血清IgG型抗Sm抗体、抗双链DNA（dsDNA）抗体和抗核抗体（ANA）水平;直接免疫荧光检测小鼠肾脏IgG型免疫复合物的沉积以及HE染色观察小鼠肾脏组织病理损伤情况。结果免疫筛选获得的5个ELISA强阳性的噬菌体克隆的氨基酸序列IR、SQ、PP出现频率增加;实验组小鼠血清中第28天出现Sm抗体、dsDNA抗体、ANA抗体,且滴度不断升高;第33天出现蛋白尿;肾脏可以检测到IgG型免疫复合物沉积及明显的肾脏病理改变。对照组小鼠无明显自身抗体产生和肾脏病变。结论利用Sm抗原噬菌体模拟表位肽可成功构建狼疮样小鼠模型。     

ICOSL/ICOS在母胎免疫耐受中的研究进展

共信号分子指细胞表面的配体与T细胞表面受体相互作用向细胞内传递刺激或抑制信号，来调节免疫反应的一类分子。共信号分子在肿瘤及自身免疫性疾病等方面发挥了重要作用。目前研究认为共信号分子也参与了母胎免疫耐受的调节，共信号分子的异常会导致母胎免疫耐受失衡从而引起复发性流产、子痫等妊娠并发症。ICOSL/ICOS是共刺激信号的配体和受体，通过参与T细胞分化、Th1、Th2细胞因子分泌调节母胎免疫耐受。因此，本文就ICOSL/ICOS结构、母胎界面中的分布及其在妊娠过程中的免疫调节进行综述，旨在为今后研究共信号分子异常引起的妊娠并发症的免疫治疗提供新思路。     

补肾固精方治疗BXSB小鼠狼疮性肾炎的实验研究

目的:探讨中药补肾固精方对BXSB小鼠狼疮性肾炎的治疗作用。方法:BXSB小鼠随机分为模型组(生理盐水)、中药组(补肾固精方)、激素组(地塞米松)与中西药结合组(补肾固精方与地塞米松合用)。各组均连续用药45d,于第46天取材。考马斯亮蓝G250法检测尿蛋白定量,ELISA法测定血清抗ds-DNA抗体,HE染色光镜下观察肾脏病理改变,直接免疫荧光法观察肾组织中IgG沉积。结果:与模型组比较,中药组尿蛋白定量显著减少,血清抗ds-DNA抗体显著降低,免疫复合物沉积减少,肾脏病理损害有所改善;中西药结合组与模型组相比有显著差异,且优于中药组与激素组。结论:补肾固精方可以降低尿蛋白定量和血清抗ds-DNA抗体水平,改善肾脏损害,其与激素有协同作用。     

红斑狼疮样雄性BXSB小鼠模型肾脏受累状况的研究

目的 :探讨系统性红斑狼疮样动物模型雄性BXSB小鼠肾脏病变进展状况。方法 :分别测定不同月份的BXSB小鼠的 2 4h尿蛋白含量及其肾脏免疫复合物沉积状况。结果 :雄性BXSB小鼠 2月龄出现肾脏病理改变 ,3月龄出现临床指标改变。结论 :雄性BXSB小鼠 2月龄出现肾脏病理改变 ,3月龄肾脏出现临床指标改变 ,且随着鼠龄的增加其疾病症状呈加重趋势     

大黄素对狼疮样BXSB小鼠的影响

目的 探讨大黄素治疗狼疮性肾炎的作用与机制。方法 已发生狼疮性肾炎的BXSB雌性小鼠35只，随机分5组，分别胃饲不同浓度的大黄素混悬液和生理盐水，30天后检测24h尿蛋白浓度和血清抗核抗体(ANA)满度。结果 与生理盐水组相比，胃饲大黄素的各组小鼠的24h尿蛋白浓度和血清ANA滴度均有所下降(P＜0．05和P＜0．01)，尿蛋白浓度与大黄素剂量(0—6．25mg/kg)呈直线负相关(P＜0．01)；血清ANA滴度与大黄素剂量呈负相关(P＜0．01)；尿蛋白浓度与血清ANA滴度呈正相关(P＜0．01)。结论 大黄素能降低狼疮样BXSB小鼠尿蛋白水平，其机制可能与降低血清ANA滴度有关。     

移植Toll样受体3处理脐带间充质干细胞对小鼠狼疮性肾炎的治疗效果及其机制

目的 探讨Toll样受体3（TLR3）激活对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）移植治疗狼疮性肾炎（LN）的效果,并初步阐明其作用机制。 方法 培养hUC-MSCs并鉴定,10 mg·L^－1聚肌胞苷酸处理hUC-MSCs。45只MRL/Lpr雌性小鼠随机分为模型组、hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组,另取15只C57BL/6C雌性小鼠作为对照组;小鼠尾静脉注射hUC-MSCs或聚肌胞苷酸处理的hUC-MSCs。给药后,每2周测定1次小鼠24 h尿蛋白水平;8周后采血并取肾组织,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清中抗双链DNA（dsDNA）抗体水平和肾组织中肿瘤坏死因子α（TNF?α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素17（IL-17）水平。HE染色和PAS染色观察各组小鼠肾组织病理形态表现,免疫荧光染色检测各组小鼠肾组织中IgG和补体C3沉积。Western blotting法检测各组小鼠肾组织中蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和自噬相关蛋白表达水平。 结果 hUC-MSCs具有典型的间充质干细胞特征。与对照组比较,模型组小鼠血清中抗dsDNA抗体水平明显升高（P<0.05）,肾组织中TNF?α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显升高（P<0.05）,肾组织中出现肾小球系膜细胞增生、肾小管萎缩坏死和炎症细胞浸润现象,肾组织中IgG和C3沉积明显（P<0.05）,肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,而微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）和酵母ATG6的同系物（Beclin1）蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与模型组比较,给药4周时TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平降低（P<0.05）,6和8周时hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平均明显降低（P<0.05）,血清中抗dsDNA抗体水平降低（P<0.05）,肾组织中TNF?α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05）,肾组织病变有一定程度的改善,肾组织中IgG和C3沉积减少（P<0.05）,且TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织改善更为明显;hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与hUC-MSCs组比较,TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 TLR3能够增强hUC-MSCs移植治疗小鼠LN的作用,可抑制肾组织炎症反应并调节细胞自噬水平。     

新疆地区狼疮肾炎患者尿液单核细胞趋化因子1水平及临床意义

目的探讨狼疮肾炎（lupus nephritis,LN）患者尿液中单核细胞趋化因子1（monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1）的水平及其临床意义。方法采用横断面调查研究分析方法,ELISA法检测33例活动期狼疮肾炎患者和35例缓解期狼疮肾炎患者尿液中 MCP-1水平。结果活动期狼疮肾炎患者 MCP-1水平[468．0（205～1990）pg/mg Cr]明显高于缓解期狼疮肾炎患者[131．5（69～734）pg/mg Cr],差异有统计学意义（P ＝0．000）。活动期狼疮肾炎组患者年龄（25．9±3．7）岁,缓解期狼疮肾炎组患者年龄（29．7±3．5）岁,两组年龄有统计学差异（P ＜0．05）,活动期狼疮肾炎组患者抗 ds-DNA抗体阳性率高于缓解期狼疮肾炎组患者（P ＜0．05）。两组在性别和族别上无统计学差异（P ＞0．05）。活动期狼疮肾炎组患者尿液中MCP-1水平与24 h尿蛋白定量及24 h尿白蛋白/肌酐（Urinary albumin-to-creatinine,UACR）呈正相关（r＝0．916,P＝0．000;r＝0．936,P＝0．000）。结论活动期狼疮肾炎患者尿液中 MCP-1水平升高,对狼疮肾炎的活动性及复发具有可靠稳定的临床诊断意义。需进行前瞻性研究进一步明确其临床意义。     

紫草素对NZB／WF1小鼠狼疮性肾炎的疗效及其作用机制

目的探讨紫草素对NZB／WF1狼疮样小鼠的疗效及作用机制。方法将60只28周龄NZB／WF1狼疮样小鼠随机分为赋型剂组和紫草素低剂量组、高剂量组灌胃治疗14周．分别检测各组治疗前、后小鼠的尿蛋白和血。肾功能、抗双链DNA抗体、血清可溶性黏附分子,并观察各组小鼠肾组织病理学改变,同时采用RT—PCR法检测各组肾组织可溶性血管细胞黏附分子（VCAM一1）和可溶性细胞问黏附分子（ICAM一1）mRNA的表达水平。结果紫草素各组小鼠尿蛋白、血肾功能、血清可溶性黏附分子水平、肾组织VCAM一1和ICAM-1mRNA表达水平及肾小球损伤分级均较赋型剂组显著降低（均P〈0．05或0.01）。结论紫草素可减少NZB／WF1狼疮样小鼠尿蛋白水平,并可改善其肾功能和减轻肾脏病理损害,其作用机制可能与调节肾组织VCAM一1和ICAM一1mRNA表达水平有关。     

Experimental study on intramuscular injection of eukaryotic expression vector pcDNA3- IL-6 on BXSB mice.

OBJECTIVE: To study the role of IL-6 in systemic lupus erythematosis (SLE). METHODS: We constructed eukaryotic expression vector pcDNA3- IL-6 encoding for IL-6 and injected it intramuscularly into BXSB mice. 22 of the 3.5-month-old male BXSB mice were divided into two groups. One group was injected with the pcDNA3-IL-6 100 micrograms per mouse twice at the interval of 20 days. Another group was injected with plasmid pcDNA3 at the same time as control. The ANA and proteinuria were monitored every 10 days, and the IL-6 activity in serum, IgG, C3 deposition and IL-6 expression in kidney detected at the 40th day. RESULTS: IL-6 encoding plasmid had harmful effects on murine SLE with increased ANA level, proteinuria, IgG, C3 deposition and IL-6 expression in kidney, but there was no difference of serum GPT levels between the two groups. CONCLUSION: Excessive production of IL-6 could play an important pathogenic role in SLE. Blocking or reducing IL-6 secretion might be a new therapy for SLE.     

益气解毒活血方对NZB/W F1狼疮鼠肾炎肾纤维化的干预作用

目的:观察益气解毒活血方对NZB/W F1狼疮鼠肾炎肾纤维化的干预作用,并探讨其可能的作用机制。方法:随机将5月龄狼疮鼠分为空白对照组(空白组)、益气解毒活血小复方治疗组(中药组)、骁悉治疗组(西药组)、益气解毒活血小复方+骁悉治疗组(中西组)。持续干预治疗8周,并分别于实验第0、2、4、6周收集狼疮鼠24 h尿液进行蛋白定量检测,干预结束后观察不同组别狼疮鼠肾脏病理、肾脏羟脯氨酸(Hyp)含量及肾组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达情况。结果:不同治疗组均对NZB/W F1狼疮鼠24 h尿蛋白定量、肾脏Hyp含量、肾脏病理、肾组织TGF-β_1与CTGF mRNA表达有改善作用,但各治疗组之间比较无统计学差异;而肾脏病理显示益气解毒活血小复方+骁悉治疗组肾脏病变程度最轻。结论:益气解毒活血方具备降低NZB/W F1狼疮鼠蛋白尿,改善肾纤维化作用,其机制可能与下调致纤维化因子TGF-β_1、CTGF mRNA表达相关。     

来氟米特对MRL/1pr狼疮鼠疗效及单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的：观察来氟米特（LEF）对MRI/1pr狼疮鼠的疗效及与单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）之间的关系。方法：采用考马斯亮蓝染色、ELISA、HE染色及免疫荧光技术检测尿蛋白、抗ds-DNA抗体、血清肌酐;通过ELISA、免疫组化、Westem B1ot及RT-PCR技术了解LEF组及对照组血清、尿液、肾脏中MCP-1的表达水平。结果：（1）LEF组24h尿蛋白、抗ds-DNA抗体滴度、血肌酐均显著低于对照组,肾小球硬化、间质纤维化程度、炎性细胞浸润、新月体形成率、IgG及IgM沉积较对照组均显著降低;（2）LEF组血清、尿液及肾脏组织中的MCP-1水平较对照组显著降低。结论：LEF通过抑制MCP-1的表达而发挥治疗狼疮性肾炎（LN）的作用。