急性颅脑损伤患者外周血MDA含量及SOD活性变化的临床意义

本文检测８９例急性脑损伤患者伤后２４小时内外周血丙二醛（ＭＤＡ）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性。发现脑外伤后急性期，ＭＤＡ含量显著升高，ＳＯＤ活性显著下降，两指标依ＣＴ显示的脑损伤程度不同而有显著差异，脑挫伤并颅内血肿组变化最著，单纯硬膜外血肿次之，脑震荡组最轻。全组病例ＭＤＡ含量与ＳＯＤ活性之间呈负相关（ｒ＝－０．８３７６、Ｐ＜０．０１）。     

慢性粒细胞白血病反义核酸基因治疗的实验研究

目的单独应用ｂｃｒ－ａｂｌ反义硫代磷酸寡聚脱氧核糖核酸（ＡＳＰＯ）或ｃ－ｍｙｂＡＳＰＯ作用于慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）细胞的研究已有报道，但抑制的不彻底性是个主要问题。由于ＣＭＬ的发生是多癌基因协同作用及相互影响的结果，为进一步提高ＡＳ－ＰＯ对ＣＭＬ细胞的作用效果，用互补于两种类型（ｂ２ａ２及ｂ３ａ２）的ｂｃｒ－ａｂｌ基因融合位点两侧各１３个核苷酸的ＡＳＰＯ（ｂ２ＡＳＰＯ和ｂ３ＡＳＰＯ）及ｃ－ｍｙｂ基因起始密码子２－７互补的ＡＳＰＯ（ｍＡＳＰＯ）联合作用于Ｋ５６２细胞株和原代ＣＭＬ细胞。方法硫代磷酸寡核基酸（ＰＳ－ＯＤＮ）的合成由３９２－０５型ＤＮＡ－ＲＮＡ合成仪自动合成，经ＯＰＣ柱纯化；细胞与ＰＳ－ＯＤＮ共培养后２４，４８，９６，１２０ｈ倒置显微镜下活体观察，０．４％台盼蓝拒染法进行死活细胞计数；ＣＦＵ－Ｋ５６２、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ采用０．８％甲基纤维素半固体培养法；采用两对引物ＲＴ－ＰＣＲ半定量法检测细胞ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ表达；通过流式细胞仪检测及电镜观察细胞凋亡情况。结果（１）ＡＳＰＯ能够特异性抑制ｂｃｒ－ａｂｌ基因表达；经ＲＴ－ＰＣＲ的检测发现１０μｍｏｌＡＳＰＯ作用４８ｈ，两种反义     

抗表皮生长因子受体单克隆抗体抑制和杀伤肺癌细胞的机理

目的：探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）单克隆抗体（ｅｇｆ／ｒ３ ＭｃＡｂ）抑制和杀伤肺癌细胞机理。方法：细胞毒活性检测采用ＭＴＴ法，移植瘤膜表面ＥＧＦＲ的检测采用免疫组化法。     

CEA重组痘苗病毒免疫巨噬细胞抑制CEA阳性肿瘤的机制

目的 探讨癌胚抗原重组痘苗病毒（ＣＥＡ－ｒＶ）对癌胚抗原（ＣＥＡ）阳性肿瘤的抑制机制。方法 使用我室构建的ＣＥＡ－ｒＶ腹腔接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠３次,６周后,取其腹腔巨噬细胞（ＭХｓ）转输给携带ＣＥＡ阳性肿瘤的受体小鼠,同时检测供体ＭХｓ及受体脾细胞的体外细胞毒活性。结果 供体ＭХｓ体外细胞毒活性无明显增加,但体内却能明显抑制ＣＥＡ阳性肿瘤的生长,受体脾细胞对同一靶细胞的杀伤活性亦明显增强。结论     

防风多糖增强巨噬细胞抗肿瘤作用的实验研究

观察了防风多糖体内对Ｓ１８０移植瘤生长的影响,以及对Ｓ１８０瘤细胞免疫小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍφ）吞噬活性的影响;同时,将Ｓ１８０瘤免疫小鼠腹腔Ｍφ再与Ｓ１８０瘤细胞混合后接种给小鼠,观察防风多糖对该Ｍφ直接抗肿瘤活性的影响。进一步用硅胶体内阻断Ｍφ功能,观察对防风多糖体内抗肿瘤效果的影响。结果表明,防风多糖体内应用能明显抑制Ｓ１８０实体瘤的生长（抑瘤率为５２９２％）,提高Ｓ１８０瘤免疫小鼠腹腔Ｍφ的吞噬活性（Ｐ＜０．０１）,并能提高Ｓ１８０瘤免疫小鼠腹腔Ｍφ与Ｓ１８０瘤细胞混合接种时的抗肿瘤活性（Ｐ＜０．０１）;但是,用硅胶阻断Ｍφ机能后,防风多糖的抗肿瘤作用大大下降,抑瘤率由５２９２％降到１１８２％,表明防风多糖的抗肿瘤作用与Ｍφ密切相关     

反义bcr／abl寡核苷酸诱导K562细胞凋亡时Caspase3表达及？…

用反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸片段诱导Ｋ５６２细胞凋亡,观察Ｃａｓｐａｓｅ３表达及活性变化,以阐明Ｃａｓｐａｓｅ在慢性髓性白血病（ＣＭＬ）发病机制中的作用。方法：用反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸片段ＡＳ和对照无义片段ＮＳ自理５６２,ＳＷＩＭＸＬＥＱＵＭＦ ＹＮＶ ＥＹ display status     

柴胡皂甙对FSC激活及合成细胞外基质的实验研究

观察柴胡有效成分柴胡皂甙对原代培养贮脂细胞（ＦＳＣ）激活及合成细胞外基质（ＥＣＭ）的作用。结果：治疗组库普弗细胞条件培养基（ＴＫＣｎｃｍ）、治疗ＣＣｌ４损伤库普弗细胞条件培养基（ＴＫＣｔｃｍ）、ＴＫＣｎｃｍ加肝细胞条件培养基（ＰＣｎｃｍ）组ＦＳＣ内结蛋白阳性反应明显减弱,对细胞表型转化的形态学特征有一定改善,各治疗组ＦＳＣ的ＤＮＡ合成及３Ｈ－脯氨酸掺入量均呈不同程度降低,ＦＳＣ内Ⅰ型胶原含量明显减少。说明柴胡皂甙对肝细胞具有保护作用,直接抑制ＦＳＣ内ＤＮＡ的合成,还可抑制ＦＳＣ的激活,从而抑制ＦＳＣ合成ＥＣＭ的能力。     

雌三醇及他莫昔芬对大肠癌细胞株增殖的影响

采用ＭＴＴ比色分析法和流式细胞仪检测不同浓度的雌三醇，不同浓度的他莫昔芬以及雌三醇加他莫昔芬对存在雌激素受体的ＨＴ－２９人结肠癌细胞株增殖的影响，结果显示雌三醇能提高细胞增殖率，其浓度对数值与此增殖率呈显著正相关（ｒ＝０．９７５，Ｐ＜０．００５），细胞周期各时相分布显示Ｓ期细胞数目明显增加；他莫昔芬有抑制细胞增殖作用，其浓度值与此增殖率呈显著负相关（ｒ＝－０．９５７，Ｐ＜０．０５）；他莫昔芬对雌三醇的增殖作用有部分抑制。结果提示雌三醇对雌激素受体阳性的ＨＴ－２９细胞株有增殖效应，这种效应能被雌激素受体拮抗剂他莫昔芬部分阻断，为临床用他莫昔芬治疗雌激素受体阳性的结肠癌提供了依据。     

8—Br—cAMP对肺癌NSCLC—3细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人肺癌ＮＳＣＬＣ－３细胞凋亡相关基因表达的影响。方法：将体外培育的ＮＳＣＬＣ－３细胞分为实验组和对照组,采用原位杂交方法观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对ＮＳＣＬＧ－３细胞ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达的影响。结果：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后的实验且较未加８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ的对照组－ｃ－ｍｙｃ,ｂｃｌ－２基因表达降低（Ｐ〈０．０１）。结论：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可下调与ＮＳＣＬＣ－３     

体外检测近交系小鼠HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞方法的建立

通过磷酸钙法用含ＨＢＶＳ基因的质粒ｐＲｃ／ＣＭＶＳ与含筛选标记基因—ｎｅｏｒ基因的质粒ｐＳＶ２ｎｅｏ对ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株—Ｐ８１５细胞进行了质粒共转染，并经Ｇ４１８筛选得到了Ｇ４１８抗性细胞，即Ｐ８１５Ｓ细胞。斑点杂交和免疫组化实验分别证实Ｐ８１５Ｓ细胞内有ＨＢＶＳ基因的存在；Ｐ８１５Ｓ细胞浆内和膜上有ＨＢｓＡｇ的表达。表明了Ｐ８１５Ｓ细胞可作为体外检测ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ的靶细胞。进一步对Ｐ８１５Ｓ细胞成功地进行５１Ｃｒ标记，以及标记靶细胞５１Ｃｒ最大释放值和自然释放值的测定表明：利用５１Ｃｒ释放法体外检测近交系小鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ功能的方法被建立。     

Neuronal differentiation of PC12 cells induced by sciatic nerve and optic nerve conditioned medium

Background Previous work has shown that optic nerve and sciatic nerve conditional medium had neurotrophic activity on neurons. In order to find if the optic nerve conditioned media （CM） had a similar activity to make PC12 cells differentiate as sciatic nerve CM did, we explored the neurotrophic activity in optic nerve CM in the same in vitro system and compared the neurotrophin expression levels in optic and sciatic nerves under both conditions. Methods PC12 cells were used to examine the effects of neurotrophins secreted by the sciatic nerve and optic nerve. RT-PCR and real-time QPCR showed that the sciatic nerve and optic nerve produced a range of neurotrophins including nerve growth factor （NGF）, brain derived neurotrophic factor （BDNF） and neurotrophin-3 （NT-3）. Results The effects of sciatic nerve and optic nerve CM on neurite outgrowth were tested against a range of neurotrophins, and they had different neuritogenic activities. Only NGF and sciatic nerve CM had obvious neuritogenic activities, although the concentration of NGF in the sciatic nerve CM was very low. Conclusions Our experiment showed that sciatic nerve CM had a higher neurotrophic activity on PC12 cells than optic nerve CM. These results suggested that peripheral nervous system （PNS） and central nervous system （CNS） had different expression levels of neurotrophin, which may in part explain the lack of ability to regenerate the CNS.     

感觉、运动神经匀浆对兔成骨细胞增殖与成骨功能的影响

目的 研究兔周同感觉、运动神经匀浆对兔骨髓间充质干细胞来源的成骨细胞增殖与成骨能力的影响.探讨周围神经影响成骨的可能原因.方法 提取大隐神经、坐骨神经肌支分别作为感觉、运动神经组织,制备匀浆.体外培养兔骨髓间充质干细胞,常规成骨诱导后鉴定备用.以含感觉、运动神经匀浆的诱导培养基、成骨诱导培养基、无地米诱导培养基及对照培养基作用于干细胞来源的成骨细胞,观察其增殖、分化及矿化情况.结果 感觉神经组较其他各组显著促进成骨细胞增殖(P<0.01),成骨诱导组及对照组抑制细胞增殖(P≤0.001);感觉神经匀浆显著促进成骨细胞总蛋白及碱性磷酸酶(ALP)的合成(P<0.05),成骨诱导组及对照组ALP蛋白比活性显著高于运动神经组及无地米组(P<0.05);感觉神经组、成骨诱导组及对照组茜素红结合量显著高于无地米组及运动神经组(P<0.001),前三组之间无显著性差异.结论 感觉神经成分能显著促进成骨细胞的增殖、分化与矿化,运动神经成分未见促成骨作用.     

嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

目的:研究嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用.方法:30只SD大鼠随机分为OECs组和对照组,每组15只; 切除3 mm右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的OECs和生理盐水; 术后4、8和12周分别行电生理和组织学检查.结果:术后4、8和12周,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0.05).结论:外源性OECs移植能明显促进大鼠坐骨神经再生.     

不同方式损伤周围神经后许旺细胞钾通道基因的表达

目的:观察不同方式损伤兔坐骨神经电后受损区域神经许旺细胞Kv1.5钾通道基因的表达水平。方法:随机将实验动物分为3组:50V电损伤组、100V电损伤组、神经切割伤组,双酶消化法分离受损区域坐骨神经许旺细胞并体外培养,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术比较各组许旺细胞Kv1.5 mRNA的表达水平。结果:3组动物损伤区域神经许旺细胞均有Kv1.5基因的表达,其中损伤后3～7dKv1.5基因的表达最为显著;50V组及神经切割伤组两组之间比较无显著性差异(P>0.05);而100V组Kv1.5基因的表达水平较低,与其他两组有显著性差异(P<0.05)。结论:坐骨神经损伤后许旺细胞Kv1.5基因的表达与损伤后时间及损伤电压大小有关,可能与许旺细胞的增殖有密切关系。     

大鼠坐骨神经节段不同剂量放射后再植的研究

目的　探索杀灭肿瘤细胞而最大程度保存神经干再生能力的放射剂量 ,为肿瘤侵犯神经干时保存肢体提供理论依据。方法　 35只大白鼠随机分 5组 ,切取大白鼠右侧坐骨神经中段约 10mm ,A组切断后原位再植 ;B、C、D、E组分别以 4 0 0 0、6 0 0 0、80 0 0、10 0 0 0cGy高能X线离体照射后原位再植。定期观察动物受试肢体功能恢复情况。12周后测定各组大白鼠坐骨神经指数、电生理指标 ,并在光镜电镜下观察实验坐骨神经节段形态学改变。结果　坐骨神经指数、神经传导速度及在光镜下轴索数均表明 :A组与C、D、E组之间有显著性差异 (P <0 .0 1) ;B组与C、D、E组之间有显著性差异 (P <0 .0 1) ;A组与B组之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。C、D、E组之间无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论　 4 0 0 0cGy高能X线照射可以作为杀灭肿瘤细胞而最大程度保存神经干再生能力的理想放射剂量     

成年大鼠周围神经损伤后远侧端雪旺细胞变化的体外研究

目的:体外观察大鼠坐骨神经损伤不同时间段远侧端雪旺细胞的变化。方法:切断成年SD大鼠坐骨神经,以远侧端为研究对象,术后1、2周和1个月取材,进行雪旺细胞体外培养,倒置相差显微镜,S-100免疫荧光染色及激光扫描共聚焦显微镜观察雪旺细胞的形态,MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期。结果:神经被切断后,雪旺细胞形态发生改变,1月组最明显;细胞活力和增殖能力也发生变化,切断1周组活力和增殖能力最强,随后逐渐变弱。结论:周围神经损伤后雪旺细胞形态发生变化,细胞的活力和增殖能力随着时间的推移逐渐下降但仍未停止增殖。     

超声联合神经刺激仪引导窝坐骨神经、股神经和隐神经阻滞的临床应用

目的：观察超声联合神经刺激仪引导窝坐骨神经、股神经及追加隐神经阻滞后在膝关节以下手术的临床效果,探讨其临床应用的优缺点。方法择期行膝部以下手术患者60例,ASA 分级Ⅰ～Ⅲ级,年龄20～75岁。采用随机数字表法将其分为两组（n ＝30）：A 组超声联合神经刺激仪引导窝坐骨神经、股神经和隐神经阻滞,B 组则仅阻滞窝坐骨神经、股神经。记录阻滞前（T0）、阻滞后10 min（T1）、30 min（T2）、术毕（T3）的收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、心率（HR）;记录神经阻滞完成时间、阻滞起效时间、术中舒芬太尼使用率及术后第1次使用镇痛药时间和患者满意度。结果两组患者年龄、性别、体重、ASA 分级及手术时间比较差异无统计学意义。A 组起效时间较 B 组明显缩短（P ＜0．05）;B 组术中舒芬太尼使用率要明显高于 A 组;且 A 组患者术后第1次使用镇痛药时间较 B 组明显延长（P ＜0．05）;A 组满意度比 B 组显著提高（P ＜0．05）。结论超声联合神经刺激仪引导窝坐骨神经、股神经阻滞应用于膝关节以下手术,定位准确,操作简单,血流动力学稳定且并发症少;若追加隐神经阻滞,则能缩短起效时间,镇痛更加完善,延长术后镇痛时间,患者满意度高,是一种更好的麻醉选择。     

过表达microRNA-224骨髓间充质干细胞对大鼠坐骨神经损伤的作用及其机制研究*

目的 探讨过表达microRNA-224（miR-224）骨髓间充质干细胞（BMMSC）对大鼠坐骨神经损 伤的治疗效果及其机制。方法 将Sprague Dawley大鼠分为5组：假手术组、模型组、BMMSC组（坐骨神经损 伤+BMMSC）、LV-BMMSC 组 （坐骨神经损伤+LV-BMMSC） 和 miR-224-BMMSC 组 （坐骨神经损伤+ miR-224-BMMSC）,利用钳夹法复制坐骨神经损伤模型,BMMSC组、LV-BMMSC组和miR-224-BMMSC组 大鼠分别于手术当天注射BMMSC、LV-BMMSC和miR-224-BMMSC。检测各组大鼠在手术当天、术后第12天 和第24天的BBB运动评分和坐骨神经功能指数（SFI）。采用Western blotting检测脑源性神经营养因子（BDNF）、 髓鞘碱性蛋白（MBP）和生长相关蛋白-43（GAP-43）的蛋白相对表达量,流式细胞术检测各组大鼠坐骨神经 的凋亡情况。结果 5组大鼠的BBB评分和SFI在不同时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）。与模型组 比较,BMMSC组BBB评分升高,SFI降低（P <0.05）;与BMMSC组比较,miR-224-BMMSC组BBB评分升 高,SFI降低（P <0.05）。miR-224-BMMSC组坐骨神经组织BDNF、MAP和GAP-43蛋白相对表达量高于模型 组和BMMSC组（P <0.05）。miR-224-BMMSC组大鼠坐骨神经凋亡率低于模型组和BMMSC组（P <0.05）。 结论 过表达miR-224可以增强BMMSC对坐骨神经损伤的治疗作用,其机制与抑制BMMSC凋亡有关。     

神经膜细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体的实验研究

目的探索神经膜(旧称许旺细胞)与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体。方法用10μmol/mlBrdU标记体外培养纯化的许旺细胞与ECM凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人工神经桥接体,移植入SD大鼠坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中。S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白的共培养,石蜡切片抗BrdU免疫组化染色观察体外培养纯化的许旺细胞在体内的生长情况。结果体外培养的许旺细胞能黏附于人发角蛋白上进行良好的生长,移植入神经缺损处4周后,坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中的桥接体内的人发角蛋白开始降解,黏附于该人发角蛋白上的许旺细胞均见成活并分裂增殖。结论许旺细胞可与人发角蛋白进行三维培养,构建成人工神经桥接体,填补神经缺损。     

神经膜细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体的实验研究

目的探索神经膜（旧称许旺细胞）与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体。方法用10μmol／ml BrdU标记体外培养纯化的许旺细胞与ECM凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人T神经桥接体，移植入SD大鼠坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中。S-100蛋门免疫组化染色鉴定许旺细胞，倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白的共培养．石蜡切片抗BrdU免疫组化染色观察体外培养纯化的许旺细胞在体内的生长情况。结果体外培养的许旺细胞能黏附于人发角蛋白上进行良好的生长，移植入神经缺损处4周后，坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中的桥接体内的人发角蛋白开始降解．黏附于该人发角蛋白上的许旺细胞均见成活并分裂增殖。结论许旺细胞可与人发角蛋白进行三维培养．构建成人工神经桥接体．填补神经缺损。