HPV6b VLPs检测尖锐湿疣病人血清和宫颈分泌物抗体的意义

目的 :探讨人乳头瘤病毒 (HPV)感染后尖锐湿疣 (CA)病人机体产生的免疫反应及特异性抗体用于HPV感染的诊断价值。方法 :采用重组杆状病毒 昆虫细胞系统制备HPV 6bL1VLPs抗原 ,以酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别检测 4 9例CA病人和 4 5例正常对照的血清抗体、4 6例CA病人和 36例正常对照的宫颈分泌物抗体 ,并用血凝抑制试验检测抗体的中和活性。结果 :CA组HPV6bL1VLPs特异性的血清IgG抗体和分泌物IgA抗体的OD值和阳性率均显著高于正常对照组 (P <0 .0 0 1)。HPV 6型与HPV 11型DNA阳性者的血清IgG和分泌物IgA抗体的阳性率差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。血清IgG和分泌物IgA抗体血凝抑制试验平均效价较正常对照组为高。结论 :生殖道HPV感染后可产生全身和局部生殖道粘膜抗体反应 ,两类抗体均具中和活性。HPV6型与HPV11型感染者的血清和分泌物抗体均存在交叉反应。血清抗体和局部分泌物抗体可能具有用于诊断HPV感染的价值     

人乳头瘤病毒6b L1 VLPs免疫治疗生殖道尖锐湿疣的初步研究

目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)6b型L1蛋白形成的病毒样颗粒(VLPs)对女性生殖道复发性尖锐湿疣(CA)的免疫治疗作用.方法:采用HPV6b L1 VLPs 1μg、5μg、10 μg 3组剂量经0 w、4 w、8 w免疫18例CA复发患者.分别用ELISA法和迟发性超敏反应(DTH)检测血清特异性抗体和细胞免疫效应,同时每周随访观察CA病变情况直到20 w.结果:所有研究对象均能在免疫后的血清中检测到特异性抗体.各剂量组免疫前后比较,血清抗体均值间差异均有统计学意义(均P＜0.05);所有患者DTH试验均呈阳性反应.经免疫治疗后20 w的观察,77.8%(14/18)的患者CA完全消退,61.1%(11/18)的患者CA于9 w之内完全消退,14例CA完全消退对象随访1年未见复发.生殖道CA消退与机体DTH反应有相关性(rs=-0.746,P=0.000).结论:HPV6b L1 VLPs可用于生殖道复发性CA的免疫治疗研究.     

不同浓度重组登革病毒1型病毒样颗粒免疫效果的评价

目的评价毕赤酵母表达的登革病毒1型(DENV-1)病毒样颗粒(VLPs)不同浓度条件下的免疫效果,为登革多价疫苗的研究奠定基础。方法采用毕赤酵母系统构建两种DENV-1 VLPs(即DENV-1 prME-VLPs和DENV-1CprME-VLPs),鉴定、纯化后比较其表达量,选择表达量高的VLPs以不同剂量免疫BALB/c小鼠(试验组分别注射经弗氏佐剂乳化的VLPs 10、25、50μg;对照组分别注射PBS和弗氏佐剂)。通过间接ELISA及中和试验测定免疫小鼠血清特异性抗体效价和中和抗体效价;用VLPs体外刺激免疫小鼠的脾淋巴细胞,MTT法测定其增殖指数;ELISPOT检测IL-4、IFN-γ及TNF-α的抗原特异性淋巴细胞数量。结果以电镜下观察到成功表达的直径约为30nm、形态无明显差异的两种VLPs。两种表达体系中,以DENV-1 prME-VLPs表达量较高。经较高表达量的VLPs免疫小鼠后发现,初次免疫后1周,即可检测到针对DENV-1的抗体,随着时间延长,抗体效价逐渐上升,5周达峰值;其中,VLPs 25μg剂量组与50μg剂量组特异性抗体效价及中和抗体效价均显著高于PBS组、佐剂对照组及VLPs 10μg剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。VLPs 25μg剂量组与50μg剂量组免疫后的小鼠淋巴细胞增殖指数及其分泌IL-4、IFN-γ及TNF-α抗原特异性淋巴细胞数目,均显著高于对照组及VLPs 10μg剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。结论毕赤酵母表达的DENV-1 VLPs免疫剂量为25μg时即可诱导高效价的中和抗体和显著的细胞免疫效应。     

宫颈癌患者HPV16感染及其血清抗体检测分析

目的：探讨宫颈癌与人乳头瘤病毒16（HPV16）感染及其血清抗体的关系，为HPV感染及宫颈癌的临床诊断提供理论依据。方法：选择28例宫颈癌患，用PCR方法检测宫颈癌组织的HPV型别；并采用重组杆状病毒－昆虫细胞系统制备HPV16病毒样颗粒（VLPs），用ELISA方法检测其血清HPV16VPLs抗体，同时以36份尖锐湿疣患血清及72份健康体检查血清作为对照。结果：宫颈癌HPV通用型DNA阳性率为50％（14／28），HPV16DNA阳性率为42．9％（12／28），HPV18DNA阳性率为3．5％（1／28），较健康对照组阳性率为1．4％（1／72）、中位数－0．0220）－0．0265）和尖锐湿疣组阳性率为8．3％（3／36）、中位数为0．0165（0．0145）差异具显性意义（P＜0．01）。HPV16DNA检测法与HPV16VLPsELISA血清抗体检测法两间呈中度相关（K＝0．471，P＜0．05）。结论：本组宫颈癌以HPV16感染为多见，HPV16VLPs血清ELISA抗体检测可用作HPV16感染的血清学诊断和宫颈癌的免疫学研究。     

HPV16 L1-E7蛋白疫苗诱导小鼠产生抗体及细胞免疫应答的研究

目的：探讨嵌合性病毒样颗粒HPV16 L1－E7蛋白疫苗接种于动物体内诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法：以本室构建的HPV16 L1－E7嵌合蛋白疫苗腹腔注射免疫BALB／c小鼠，在初次免疫后，分别于第3，4，5周采血ELISA检测特异性抗体的产生。并耳皮下注射HPV16L1蛋白，检测特异性DHT反应，在末次免疫2周后，取小鼠脾细胞，用HPV 16 L1－E7蛋白刺激，检测T细胞增殖反应及血清IFN－γ水平。结果：HPV16 L1－E7蛋白疫苗免疫小鼠可有效产生HPV16 L1抗体及特异性DTH反应，加强免疫后，抗体水平升高，两者水平均高于对照组（P＜0．01），HPV16 L1－E7嵌合蛋白疫苗免疫后取小鼠脾细胞，在特异性HPV16 L1－E7蛋白抗原刺激下，特异性T淋巴细胞明显增殖，被免疫小鼠血清中出现高水平IFN－γ。结论：嵌合母亲产颗粒HPV16 L1－E7蛋白可诱导小鼠产生高滴度抗体，HPV16L1特异性TDH参与的超敏反应及细胞免疫应答的细胞因子，这为研究预防HPV感染和治疗HPV相关性肿瘤的疫苗提供了实验资料。     

HPV6b L1 VLPs经三种途径免疫小鼠的实验研究

目的：探讨加HPV6bL1VLPs经三种途径免疫小鼠后的免疫反应，以选择机体获得免疫保护的最佳途径。方法：小鼠以鼻腔吸入、阴道免疫、肌肉注射加HPV6bL1VLPs分为三组，经间隔2w三次免疫后取血、肺冲洗液和阴道冲洗液标本，用ELISA法检测血清IgG和分泌物IgA抗体，并用血凝抑制试验检测抗体的中和作用。结果：加HPV6bL1VLPs经肌肉注射、鼻腔吸入均能诱导产生血清蜘和呼吸道、阴道粘膜的IgA抗体，经阴道免疫可产生血清IgG和阴道粘膜的IgA抗体；抗体均具有中和活性；其中肌肉注射组产生的血清IgG抗体滴度最高，鼻腔免疫产生的粘膜I醇抗体滴度最高。结论：加HPV6bL1VLPs具较强抗原性；肌肉注射和鼻腔吸入免疫可刺激小鼠产生全身和局部粘膜的中和抗体，鼻腔吸入免疫可能是诱导机体产生粘膜免疫的最佳途径。     

人乳头瘤病毒6b型病毒样颗粒免疫活性的研究

目的：了解人乳头瘤病毒（HPV）6b型病毒样颗粒（VLP）的免疫活性及其诱导的保护性抗体对HPV11型VLP和牛乳头瘤病毒1型（BPV1）VLP的交叉免疫反应。方法：将HPV6b、HPV11和BPV1晚期基因L1的开放读码框架（ORFs）分别重组到杆状病毒中,该重组病毒在感染的昆虫细胞（Sf9细胞）中表达,表达的L1蛋白可自行组装成HPV6b、HPV11和BPV1 VLP。取50μg纯化的HPV6bVLP分别在第0天和第21天经肌肉免疫Balb/c鼠。第二次免疫后1周及3个月取血,检测血清抗HPV6b、HPV11和BVP1 VLP和BPV1 VLP IgG滴度;血凝集抑制试验检测HPV6bVLP免疫产生的抗血清是否能阻止HPV11 VLP和BPV1 VLP与鼠红细胞凝集。结果：免疫后1周,应用ELISA方法检测抗HPV6b VLP、HPV11 VLP和BVP1 VLP血清IgG滴度分别为1：6400、1：600和1：600。3个月后,抗HPV6bVLP、HPV11 VLP 和BVP 1VLP血清IgG滴度分别为1：800、1：400和1：100。血凝集抑制试验显示HPV6bVLP产生的抗血清能够阻止高度同源性的HPV6b VLP和HPV11 VLP与鼠红细胞结合。结论：HPV6b VLP具有很强的免疫原性,免疫后产生的抗血清具有阻止HPV6b VLP和HPV11 VLP与细胞结合的能力。HPV6b和11型间确实存在交叉反应的中和表位,HPV6b VLP有可能用于防治HPV6b及HPV11感染的疫苗。     

ELISPOT检测特异性抗体形成细胞功能

目的：建立一种简便的ELISPOT方法，用于检测和评价特异性抗体形成细胞的功能，并观察HPV16L1蛋白疫苗接种小鼠诱发体液免疫的效应。方法：将HPV16L1抗原或抗鼠IgG的俘获抗体包被在预先贴有硝酸纤维素膜的培养板微孔内，取被HPV16Ll蛋白疫苗免疫的鼠脾细胞，经HPV16Ll抗原刺激后加到微孔内，已固定的抗原／抗体可与细胞分泌出的抗体结合。再加入RAM-HRP标记的羊抗鼠IgG和沉淀性底物溶液(DAB)，可在有HPV16Ll特异抗体产生细胞的位置产生棕褐色的斑点，每个斑点代表一个分泌细胞。同时ELISA法检测血清与脾细胞上清液中HPV16Ll特异性IgG水平。结果：免疫组HPV16Ll特异性抗体生成细胞的频数明显高于对照组。结论：ELISPOT法较ELISA法更灵敏，HPV16L1疫苗可有效刺激小鼠产生特异性抗体。     

尖锐湿疣组织HPV6b和11型L1基因多态性及蛋白特性分析

目的：调查温州地区尖锐湿疣组织HPV6b和11型感染情况，分析其L1基因多态性及蛋白特性变化，为基因工程重组L1蛋白疫苗的应用提供理论依据。方法：采用HPV6b和11型L1基因特异性引物对31份温州地区尖锐湿疣组织标本进行PCR扩增，并各取7份阳性PCR产物直接测序，用软件分析HPV6b和11型L1基因多态性及蛋白特性。结果：31份标本中，HPV6b和11型阳性率分别为35．5％和45．2％。与标准基因序列比较，HPV6b和11型L1基因分别形成5和6种突变模式，同源性分别为99．8%～99．9％和99．7％～99．9%。HPV6b型L1基因中仅1处碱基突变引起所编码氨基酸的变异（S→P），但其编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性上无明显变化；HPV11型L1基因的碱基突变均为无义突变，所编码氨基酸与标准株完全一致。结论：HPV6b和11型是温州地区尖锐湿疣的主要感染型别；HPVBb和11型L1基因序列高度保守。     

重组腺病毒及其基因组裸DNA免疫效果差异的初步分析

目的:研究重组腺病毒及其基因组裸DNA免疫效果的差异,探讨重组腺病毒疫苗免疫接种的新途径。方法:构建人乳头瘤病毒重组腺病毒rAd5-L1E7,用TCID50微量滴定法测定病毒滴度。将0.1ml滴度为10-4重组腺病毒和10μg重组腺病毒基因组DNA分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠,在接种后第1～5周分离小鼠血清。以HPV16L1E7重组蛋白为抗原,用ELISA方法检测血清HPV16特异性抗体水平。通过T细胞增殖试验和检测脾细胞IFN-γ水平确定疫苗诱导的细胞免疫,并分析二者之间的差异。结果:重组腺病毒及其基因组裸DNA免疫接种均能有效地诱导体液和细胞免疫,抗体达到高峰的时间不同,二者在第3和第4周血清抗体IgG水平差异有统计学意义(P<0.05)。T淋巴细胞增殖试验结果和脾细胞分泌IFN-γ水平差异无统计学意义。结论:重组腺病毒基因组裸DNA接种能够有效地诱导细胞和体液免疫应答,是腺病毒疫苗接种的一种新途径。     

孕周与母儿血甲状腺激素含量的关系

目的：观察不同孕周与母儿血甲状腺激素的关系。方法：应用放射免疫分析法对67例中、晚期妊娠要求引产患者，10例早产及78例孕足月自然分娩患者进行了母血及胎儿脐静脉、脐动脉血中TSH、T3、T4的测定。结果：TSH值在母血及胎儿血中随着孕周的增加而增加．T3值在胎儿血中与母血中比较，显示低T3血症，T4值接近正常母体水平。结论：测定母血中的甲状腺激素，可动态观察不同孕周甲状腺激素变化，可及时发现胎儿低甲血症。     

褪黑素载药纳米粒的优化设计及研制

目的：探讨采用复合乳液-溶剂挥发法制备褪黑素载药纳米粒的最佳工艺条件。方法：以聚乳酸、壳聚糖可降解生物材料为载体，明胶为分散剂，span-80和tween-80混合液为微乳液，根据微粒的表面形态、粒径大小、分布、包封率、载药量选择最佳工艺条件，制备褪黑素载药纳米粒。结果与结论：原子力显微镜下可见纳米粒表面圆滑，分布均匀。正交设计效应曲线图直观分析和方差分析结果显示，搅拌速度、溶剂挥发温度、聚乳酸与褪黑素投药比、壳聚糖浓度是影响制备工艺的主要因素。在30℃，1000r／min搅拌速度，搅拌时间45min，m(褪黑素)：m(聚乳酸)为1：5，V(Tween-80)：V(Span-80)为5：1，壳聚糖质量浓度为1％条件下，可制备成平均粒径为45．84nm，包封率为38．33％，载药量为8．35％的褪黑素载药纳米粒。     

高效液相色谱法检测人血浆中咖啡因及其3种去甲基代谢产物

以８－氯茶碱作为内标，利用高效液相色谱同时测定人血浆中咖啡及其３种去甲基代谢产物－－副黄嘌呤、可可碱和茶碱的方法。这４种物质可以在一个固定相柱子上被同时分离；流动相为甲；０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠（３０：７０）（Ｖ／Ｖ）；流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ；紫外检测器，波长２７４ｎｍ。实验表明这４种物质的最小检出量均在７５ｎｇ／ｍｌ，并具有较好的线性、重复性及较高回收率。     

HepG2 细胞谷胱甘肽含量和谷胱甘肽转移酶活力的诱导

目的：建立一种具有较高ＧＳＨ含量和ＧＳＴ活力的肝细胞系。方法：将ＨｅｐＧ２细胞在０．１,０．３,０．５ｍｇ／Ｌ浓度的ＣＤＤＰ间歇作用下传代１２个月后得到三种稳定的ＣＤＤＰ耐药细胞系ＨｅｐＧ２／ＣＤＤＰ０．１,ＨｅｐＧ２／ＣＤＤＰ０．３,ＨｅｐＧ２／ＣＤＤＰ０．５细胞的ＧＳＨ含量和ＧＳＴ活力,结果用显著性ｔ检验方法作统计学处理。结果：诱导刺激后的子代ＨｅｐＧ２／ＣＤＤＰ０．１,ＨｅｐＧ２／ＣＤＤＰ０     

清醒豚鼠的耳蜗电图

在面神经管内长期植入电极记录清醒豚鼠的耳蜗电图，测量了耳蜗电图中各项指标的正常值。耳蜗微音器电位的波幅以短纯音２ｋＨｚ刺激时为最大，其次是０．５、１、４ｋＨｚ，以８ｋＨｚ时为最小。面神经管法记录的总和电位（ＳＰ）的极性均为负性，在短声刺激时ＳＰ／ＡＰ为０．０８４±０；０４３。动作电位（ＡＰ）Ｎ，波的反应阈值在短声刺激时为２．６±４．２ｄＢ，在０．５和ｌｋＨｚ短纯音刺激时分别为５３．２±５．４和４２．４±７．３ｄＢ。在０．５、１．２、４ｋＨｚ短纯音刺激时均可见频率跟随反应，在０．５和１ｋＨｚ时，其波幅大于同频率ＡＰ（Ｎ１）波幅，其反应阈值低于同频率ＡＰ（Ｎ１）反应阈值。     

应用重组促红细胞生成素治疗长期血透患者的贫血

作者应用重组促红细胞生成素(rHuEPO)治疗68例依赖输血的透析患者(醋酸盐血透32例,碳酸氢盐血透24例,血液滤过12例)。治疗前 Hb 52.7±8.0g/L,Ht19.4±2.2%,血清铁蛋白>100μg/L。rHuEPO 治疗剂量150～300 u·kg~(-1)/周,静脉推注。当 Hb>100～120g/L,Ht>30%～35%时将 rHuEPO 减至维持量。疗程6.2±4.3个月。所有患者经 rHuEPO 治疗后不再输血,Hb 和 Ht 均有不同程度上升。其中39例 Hb 净增大于60g/L,Ht 增加大于10%,分别占治疗病例的57.4%。结果表明,rHuEPO 剂量为150～300 u·kg~(-1)/周是安全有效的,副作用远较国外报道为低。     

和田地区维、汉族老年居民血清生化指标的测定

目的:探讨新疆和田地区不同民族同年龄段老年居民血清钙(Ca)、磷(P)、镁(Mg)、铁(Fe)、转铁蛋白(TRF)、碱性磷酸酶(AKP)等生化指标的差异。方法:对186例60～79岁维吾尔族(维族)和汉族老年人血清Ca、P、Mg、Fe等水平进行了测定,比较两民族间各生化指标的差异。结果:汉族血清Ca、P、Mg、Fe水平明显高于维族(P<0.01～0.001),两民族血清TRF、AKP水平差异无统计学意义(P>0.05);汉族女性血清Ca、P、Mg、Fe水平明显高于维族(P<0.05～0.001),汉族男性血清P、Fe水平明显高于维族,AKP水平明显低于维族(P<0.05～0.001);汉族女性血清P、Mg、AKP、TRF水平明显高于男性(P<0.05～0.001),维族男性血清Fe水平明显高于女性(P<0.05)。结论:新疆和田地区同年龄段维族和汉族老年居民血清Ca、P、Mg、Fe生化指标的差异可能和两民族居民不同生活习惯有关。     

急性心肌梗死心力衰竭患者血浆肌钙蛋白Ⅰ、高敏C-反应蛋白和NT-proBNP的变化及心脉隆干预疗效

目的研究急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)心力衰竭(简称心梗心衰)患者血浆中肌钙蛋白(Ⅰcardiac troopingⅠ,cTnI)、高敏C-反应蛋白(high-sensitivity creactive protein,hs-CRP)、N末端脑钠肽前体(N-terminal-pro-brain-natriuretic-peptide,NT-proBNP)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)的变化,探讨心脉隆对急性心梗心衰患者干预的疗效。方法选取35例健康者为正常对照组;42例急性心梗心衰患者为心梗组,并随机将其中21例患者分为心脉隆组,21例为常规治疗组,两组均按急性心肌梗死治疗指南进行处置,常规治疗组患者接受抗血小板、抗凝、降脂、扩张冠状动脉、抗心衰等方面治疗,心脉隆组在此基础上加用心脉隆静脉滴注;心脉隆的使用方法为5%的葡萄糖中加入6mL心脉隆2次/d,疗程为14d。结果与正常健康人比较,急性心梗心衰患者肌钙蛋白I、高敏C-反应蛋白、NT-proBNP、肌酸激酶同工酶及左心室收缩末期容量指数(left ventricular ...     

同型半胱氨酸与缺血性心肌病和扩张性心肌病的关系探讨

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）水平变化与缺血性心肌病和扩张性心肌病的关系及意义。方法：选取我院冠心病患者198例,其中缺血性心肌病患者80例（A组）,扩张性心肌病患者53例（B组）,普通冠心病患者65例（对照组）,入选者均行冠状动脉造影。比较三组的一般临床资料。采用酶联免疫法测定并比较三组血清同型半胱氨酸水平,测定相关生化指标。采用彩色多普勒超声诊断仪测定三组左房内径,左室舒末内径及左室射血分数。结果：B组与对照组相比,同型半胱氨酸水平无明显差异,A组同型半胱氨酸水平明显高于对照组（P〈0.05）,A组同型半胱氨酸水平与B组相比显著增高（P〈0.05）,A组年龄高于B组及正常对照组（P〈0.05）。三组一般临床资料,如糖尿病、血脂、高血压、吸烟饮酒、叶酸、维生素B12水平等方面比较,差异无统计学意义。与对照组相比,A组与B组的左房内径、左室舒末内径明显增大（P〈0.05）,左室射血分数明显降低（P〈0.05）。结论：检测同型半胱氨酸水平在临床上可对鉴别缺血性心肌病和扩张性心肌病提供帮助。     

辅助诊断冠心病新指标探讨

目的 研究总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸(HCY)等新指标与冠心病的关系.方法 选取2014年12月至2016年4月在我院心内科住院并行冠脉造影的患者497例,其中冠心病组333例,非冠心病组164例.记录每例患者的基本资料,以及TBIL、DBIL、IBIL、hs-CRP、HCY等检测水平,分析各项指标与冠心病的关系.结果 冠心病组患者的TBIL、IBIL明显低于非冠心病组[(10.54±3.5)μmol/L vs(14.03±3.78)μmol/L,(7.85±2.73)μmol/L vs(11.44±3.24)μmol/L],而hs-CRP、HCY明显高于非冠心病组[(6.91±3.15)mg/L vs(3.24±2.21)mg/L,(11.79±3.80)μmol/L vs(6.87±2.40)μmol/L],差异均有显著统计学意义(P<0.01);两组患者的DBIL比较差异无统计学意义[(3.46±1.55)μmol/L vs(3.68±1.54)μmol/L,P>0.05);随着冠心病冠脉病变支数的增加,TBIL、IBIL逐渐降低(P<0.01),hs-CRP、HCY逐渐增加(P<0.01),而DBIL随冠心病的病变支数增加则无明显变化(P>0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,TBIL、IBIL与冠心病的发生呈负相关性(OR分别为0.838、0.787,P<0.01);DBIL与冠心病的发生未见明显相关性(P=0.651);hs-CRP、HCY与冠心病的发生呈现正相关性(OR分别为1.399、1.539,P<0.01).结论 TBIL、IBIL水平降低,hs-CRP、HCY水平升高与冠心病密切相关,低水平TBIL、IBIL与高水平hs-CRP、HCY均为冠心病患者的独立危险因素,可以作为评估冠状动脉病变的辅助新指标.