脑缺血再灌注损伤中内皮素、自由基PLA_2、TXA_2／PGI_2的相互作用

用四血管阻断法造成大鼠全脑缺血。脑缺血３０ｍｉｎ后再恢复双侧颈总动脉血流３０ｍｉｎ，此时大鼠体内ＰＬＡ＿２活性、ＴＸＢ＿２／６一ｋｅｔｏ一ＰＧＦ＿（１α）比值和ＥＴ、ＬＰＯ含量明显增高，大脑神经细胞和血脑屏障明显损害；预防用氯喹或ＳＯＤ治疗后，上述物质的增多受到抑制，神经细胞和血脑屏障损害也明显减轻。ＰＬＡ＿２、ＴＸＡ＿２／ＰＧＩ＿２、内皮素、自由基与脑组织损伤密切相关。脑缺血再灌注时，ＰＬＡ＿２、ＴＸＡ＿２／ＰＧＩ＿２、ＥＴ、自由基间存在相互作用，并可测定血浆中ＴＸＢ＿２、６一ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）、ＥＴ、ＬＰＯ浓度反映脑组织内的含量。     

磷脂酶A_2抑制剂对家兔内毒素休克血中血小板活化因子活性的调节作用观察

通过家兔内毒素休克模型重点观察了磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）抑制剂磷酸氯喹和地塞米松对血中ＰＬＡ２及其相关脂介质的影响。实验分成４组：（１）假手术组（ＳＯ）；（２）内毒素休克组（ＥＳ）；（３）磷酸氯喹预处理组（ＣＱ）；（４）地塞米松预处理组（ＤＸＭ）．分别于给药前、内毒素或生理盐水注射后５、３０ｍｉｎ，１、３、５、８ｈ取血测ＰＬＡ２血小板活化因子（ＰＡＦ）、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ，同时连续监测平均动脉压（ＭＡＰ）、心率和呼吸，观察动物８ｈ存活率、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ浓度均明显升高，ＰＬＡ２抑制剂能显著抑制ＰＬＡ２及ＰＡＦ活性，其中磷酸氯喹对ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ的抑制最为显著。此外，ＰＬＡ２抑制剂可使家兔８ｈ存活率由４８％提高到７５％（ＣＱ组）和７０％（ＤＸＭ组）。提示，用ＰＬＡ２的抑制剂磷酸氯喹和地塞米松均能显著抑制内毒素休克时ＰＬＡ_２的活性及相关脂介质如ＰＡＦ、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ的升高，提高动物存活率，有效地改善休克动物的预后。     

哮喘豚鼠磷脂酶A2的变化及其抑制剂的作用

目的：探讨磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）在哮喘和气道高反应发生中的作用及机理。方法：采用卵蛋白致敏豚鼠哮模型，观察支气管泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＰＬＡ２活性变化及气管平滑肌条最大收缩反应性（Ｅ－ｍａｘ）的关系，以及ＢＡＬＦ中细胞数、ＬＰＯ、蛋白质含量的变化及ＰＬＡ２抑制剂的防治作用，结果：哮组ＢＡＬＦ中ＰＬＡ２活性及Ｅｍａｘ显著增高，ＢＡＬＦ中细胞计娄航ＬＰＯ、蛋白质含量也显著升高；ＢＡＬＦ中ＰＬＡ２活性与     

人胰磷脂酶A2纯化及单克隆抗体的制备

为建立磷脂酶Ａ２免疫检测法，纯化ＰＩ２Ａ２，将胰组织匀浆加热、离心去除沉积，上清过ＣＭ－ｓｅｐｈａｄｅｘＣ－２５ｓｙｇｇ，ｎｈ ｗｙｓ ｅ ＰＬＡ２的部分，纯化ＰＬＡ２样品经ＳＤＳ－ＦＡＤＥ电 一条区带。纯分的ＰＬＡ２作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，抗体产生后与骨髓瘤细胞融合，在ＰＧＥ－４０００促融下，融合为杂交瘤细胞株经ＥＬＩＳＡ法鉴定筛选出分泌抗ＰＬＡ２的细胞株，扩大培养后将杂交瘤细胞注射小鼠腹     

外源性胰磷脂酶A2对大鼠中枢作用的研究

目的 探讨胰磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２,ＰＬＡ２）在胰性脑损害发生发展中的作用。方法 对ＳＤ大鼠进行ＰＬＡ２血管内及脑内注射,应用苏木精－伊红染色、髓鞘特染（Ｋｌｕｒｅｒ ａｎｄ ｂａｒｒｅｒａ,ＫＢ法）及电镜检查研究观察ＰＬＡ２对动物脑脊髓的作用。结果 ①以每１００ｇ体重８０Ｕ ＰＬＡ２经血管内注射后,６ｈ脑脊髓即见局灶性脱鞘,板层结构局部紊乱及神经元固缩等;２４ｈ病变达高峰,     

急性重复缺氧动物脑组织中单胺类神经递质含量的对比研究

以昆明小鼠为实验对象，用萤光法检测急性重复缺氧动物脑组织中ＤＡ、ＮＥ、５－ＨＴ，５－ＨＩＡＡ等４种单胺类物质的含量。结果发现：与未经缺氧处理的对照组（Ａ）、缺氧１次的实验对照组（Ｂ）及急性重复缺氧４次后饲养２ｄ实验对照组（Ｄ）等３组动物相比，急性重复缺氧４次实验组（Ｃ）动物脑组织中ＤＡ、５－ＨＩＡＡ含量显著升高，ＮＥ含量显著降低；５－ＨＴ较缺氧１次组显著上升，而Ａ、Ｂ、Ｄ３组动物脑组织中上述４种成分含量接近。结果提示脑组织中单胺类物质可能参与急性重复缺氧动物对缺氧耐受的形成。     

蛋白质负荷对肾血流量,肾小球滤过率及肾前列腺素的影响

测定２３例肾功能正常的原发性肾小球肾炎（ＰＧＮ）患者蛋白质负荷（ＰＬ）前后ＥＲＰＦ、Ｃｃｒ及尿ＰＧＥ２、６－ｋｅｔｏ一ＰＧＦ（１ａ）、ＴＸＢ２排泄量，并与９例健康人对照。结果显示，对照组ＰＬ后ＥＲＰＦ、Ｃｃｒ显著升高，尿ＰＧＥ２排泄增多，而ＰＧＮ组均无显著变化；ＰＧＮ组ＰＬ前后尿ＴＸＢ２及ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ（１ａ）均高于对照组。提示ＰＬ后ＧＦＲ的升高主要与肾ＰＧＥ２的合成增加有关，肾储备功能下降与ＰＬ后肾ＰＧＥ２合成无显著增加有关，一定程度上与ＴＸＡ２／ＰＧＩ２值有关。     

模拟高原大鼠梭曼中毒后肺中磷脂酶A2,ACE及TNFα的变化

目的：阐明高原缺氧条件下梭曼中毒肺损伤的特点及机理。方法；应用微量滴定，酶联免疫技术，伊文思蓝标记白蛋白技术测定了在模拟高原４０００ｍ梭曼中毒后大鼠肺组织及肺灌洗液的磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性和肺组织肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）伊文思蓝（ＥＢ）含量的变化。结果：中毒４８ｈＰＬＡ２，ＡＣＥ，ＴＮＦα和ＥＢ含量显著高于１２，２４ｈ，在同一时相点，高原中毒组显著高于其它组，结论：提     

牛磺酸预防急性出血坏死性胰腺炎并发肺损伤的实验研究

急性出血坏死性胰腺炎（ＡＨＮＰ）大鼠随着时间延长，肺间质及肺泡水肿，肺不张，肺系数增加，且肺间质中性粒细胞浸润增多，其发病机制之一为肺微血管受损，血管通透性增强。而体内血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）和前列环素（ＰＧＩ２）比值失调，磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）活性增高，脂质过氧化物（ＬＰＯ）增加在此过程中起重要作用；牛磺酸能有效地降低ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的比值，恢复其平衡，降低体内ＬＰＯ水平及ＰＬＡ     

实验性急性出血坏死性胰腺炎血浆及脑组织氧自由基与磷脂 …

目的：探讨大鼠急性出血坏死性胰腺炎（ＡＨＮＰ）并发胰性脑病的机理及评价纳屈酮治疗效果。方法：应用５％牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射诱发大鼠ＡＨＮＰ并发脑组织损害模型。实验分为对照组、胰性脑病（ＰＥ）组及纳屈酮（ＮＴＸ）治疗组：分别于６、１２、２４ｈ检测血浆及脑组织指质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）含量、磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）活性、氧自由基清除剂超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、脑指数及胰腺和脑组织病理学改变。结     

磷脂酶A2在模拟高原梭曼中毒性脑损伤中的变化

目的 探讨磷脂酶A2（PLA2）在缺氧复合梭曼中毒脑损伤的作用机制。方法 应用微量滴定，放免法从动物整体水平观察了高原缺氧，梭曼中毒单一与复合致伤后12、24、48h大鼠脑组织含水率（WCB）、伊文思蓝（EB）含量，PLA2的活性，环磷酸腺苷（cAMP)含量的变化。结果 高原中毒组脑组织伊文思蓝含量，PLA2的活性，ADP、AMP、cAMP含量在中毒后24、48h明显高于平原中毒组，高原对照组和正常对照组，应用钙通道阻断剂尼莫地平可明显降低PLA2活性，减轻缺氧中毒后脑组织水肿。结论 磷脂酶A2、腺苷酸环化酶的激活可能参与高原缺氧复合梭曼中毒脑损伤。     

脑表面大体摄影评价小鼠局灶性脑缺血后24 h内血脑屏障通透性变化

目的:建立脑表面大体摄影结合图像分析的方法,观察小鼠局灶性脑缺血后24 h内血脑屏障通透性的变化.方法:采用线栓法诱导小鼠局灶性脑缺血,于缺血后10、30 min和1、3、6、12、24 h取脑,用数码相机拍摄全脑及脑切片照片,观察脑表面和切面的出血和伊文思蓝(EB)渗出,以及血脑屏障通透性变化;并用荧光法测定脑内EB含量,以干湿重法检测脑水分含量. 结果:脑表面图像分析显示,缺血后3 h 开始出现明显的出血和EB渗出,与脑切片的结果一致,具有较好的相关性;荧光法显示缺血后30 min缺血侧脑组织EB含量开始增高,缺血后1 h脑水分含量开始增加.结论:脑表面大体摄影结合图像分析,可对局灶性脑缺血后血脑屏障通透性的变化进行半定量评价,还发现脑缺血后早期血脑屏障的通透性就有增加.     

海水浸泡对创伤性脑水肿影响的实验研究

目的:研究海水浸泡对创伤性脑水肿的影响,为海战条件下颅脑损伤的救治提供依据.方法:建立海水浸泡兔创伤性脑水肿模型.测量脑组织水含量、离子含量;用伊文蓝(EB)、胶体金(CG)示踪血脑屏障(B BB)通透性变化.结果:海水浸泡后脑组织的水含量、离子含量、EB 含量均增高.光镜及电镜可见有更多CG颗粒透过BBB入脑.结论:海水是一个重要的致伤因素,它可通过增加BBB通透性和加剧脑组织离子失衡等多个环节变化, 加重创伤性脑水肿.     

一氧化氮的胰腺保护作用与胰腺组织磷脂酶A_2活性的关系

为探讨内源性一氧化氮(NO)对实验性急性坏死性胰腺炎的作用及其与胰腺组织磷脂酶A_2(PLA_2)活性的关系,以5％牛磺胆酸钠溶液胰胆管注射(1mL/kg)制成大鼠急性坏死性胰腺炎模型,以L-硝基精氨酸(L-NNA)为内源性NO的阻断剂,观察内源性NO对胰腺损伤程度和胰腺组织PLA_2活性的影响。发现牛磺胆酸钠胰胆管注射可造成胰腺组织明显的水肿和坏死,部分大鼠发生胰腺实质内出血,但胰腺组织内PLA_2的活性并没有显著变化。以L-NNA阻断内源性NO明显加重胰腺损伤,却对胰腺组织局部的PLA_2活性没有影响。结果提示:内源性NO具有胰腺保护作用,但其保护作用可能与胰腺组织局部的PLA_2活性无关。     

大鼠脑水肿模型脑含水量与伊文思蓝含量的相关分析

向左颈内动脉内注射百日咳菌液，造成Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠脑水肿模型，同法注射生理盐水和正常手术后处死作为对照。分别测定注菌（盐水）后１ｈ、４ｈ、２４ｈ及正常组脑含水量和甲酰胺法伊文思蓝Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ（ＥＢ）含量，以确认脑水肿的存在和血脑屏障（ＢＢＢ）的损伤以及两者间的相互关系。结果显示注射百日咳菌液能引起脑水肿，脑含水量与ＥＢ含量在注菌４ｈ组呈密切相关（ｒ：０．８６２５）（左），Ｐ＜０．００２；０．８３５７（右），Ｐ＜０．００５）；注菌２４ｈ组ＥＢ含量明显低于注菌１ｈ和４ｈ组（Ｐ＜０．００１）。提示本模型早中期ＢＢＢ损伤和脑水肿形成均已明显，后期脑水肿依然严重，而ＥＢ含量明显降低可能与ＢＢＢ损伤的修复或ＥＢ本身的排泄有关。     

氯沙坦对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性和MMP-9表达的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ受体阻断药氯沙坦对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法：采用血管内栓线阻断法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型， 于脑缺血2h、再灌注24h后测定脑组织含水量、伊文斯蓝（EB）含量， 免疫组织化学方法测定MMP 9表达。结果：脑缺血2h、再灌注24h， 大鼠脑组织含水量及EB含量增加， MMP-9呈现高表达。 而氯沙坦组脑组织含水量、 EB含量及MMP-9表达明显低于脑缺血再灌注组（P＜0.05）。 结论：氯沙坦通过降低脑缺血再灌注大鼠基质金属蛋白酶 9的活性及血脑屏障通透性， 从而发挥其脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

急性肝衰竭小鼠Occludin表达与血脑屏障通透性的关系

目的探讨乙酰氨基酚/扑热息痛(acetam inophen/paracetam ol,APAP)导致的急性肝衰竭(acute liverfailure,ALF)小鼠模型中血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性与脑组织紧密连接(tight junction,TJ)蛋白O ccludin表达的关系。方法应用APAP复制ALF小鼠模型,检测脑中伊文思蓝(evans blue,EB)的含量反映BBB通透性,电镜下观察TJ的结构变化。应用W estern blotting方法检测脑组织中O ccludin蛋白的表达。结果小鼠脑组织EB含量于2 h开始升高(2.29±0.42)μg/g,6 h达到峰值(3.61±0.33)μg/g,脑组织中O ccludin蛋白表达2 h开始下降,6 h表达最低,同时电镜下观察到TJ结构出现破坏。结论在APAP所致的ALF动物模型中,BBB通透性增加,表明血管源性脑水肿机制参与脑水肿形成,与其相反,O ccludin表达呈下降趋势,提示脑水肿的发生与O ccludin表达下降引起TJ结构破坏有关。     

肿瘤坏死因子α对急性肝功能衰竭小鼠中血脑屏障紧密连接的影响及机制

目的探讨急性肝功能衰竭中肿瘤坏死因子α(TNF-α)对血脑屏障(BBB)渗透性的影响。方法通过施加D-氨基半路糖(D-GalN)和脂多糖或D-GalN和TNF-α形成急性肝功能衰竭小鼠模型。通过依文思蓝染色研究BBB的渗透性,并在电镜下观察其形态改变。Western blot检测Occludin蛋白的表达。结果在急性肝功能衰竭小鼠中BBB渗透性增加,电镜下观察到组织的紧密连接瓦解和内皮细胞皱缩,并伴随囊泡和空泡增加。此外,急性肝功能衰竭小鼠的脑组织紧密连接相关蛋白Occludin的表达显著降低。结论 TNF-α在急性肝功能衰竭小鼠脑水肿中的形成过程中起到重要的作用,BBB渗透性增加可能是由于紧密连接丧失和其相关蛋白Occludin下调所致。     

幼年鼠内毒素性脑水肿模型及脑组织钙离子和钙调素表达的研究

目的：建立简单、易复制的幼年鼠内毒素性脑水肿模型，并从Ca^2 、钙调素(CaM)水平探讨脑水肿的发生发展。方法：45只幼鼠，随机分内毒素组(36只)和对照组(9只)，分别于腹腔内注射内毒素(LPS)10mg/Kg和等容量生理盐水，并用电镜观察其病理、用常规生化法测定脑含水量和伊氏蓝(EB)含量、用荧光标记术和免疫印迹法分别测定脑组织细胞内[Ca^ ]和CaM表达。结果：脑组织含水量和EB含量显高于对照组；细胞内[Ca^2 ]明显增高，脑组织CaM表达增强；电镜显示血脑屏障(B1ood—brainbarrier，BBB)受损、神经元变性、胶质细胞肿胀、坏死等特征。结论：LPS导致了BBB通透性改变，并引起了混合性脑水肿。LPS引起了细胞内[Ca^2 ]增高，并激活了CaM，从而启动了Ca^2 —CsM信号通路，这可能与其增加BBB通透性并导致脑水肿形成有密切关系。     

老年小鼠血脑屏障在术后认知功能障碍中的作用

 目的    观察老年小鼠在异氟醚暴露或阑尾切除术后学习和记忆能力变化及海马区血脑屏障通透性变化情况,寻找血脑屏障改变的原因。方法    30只C57BL 老年小鼠(18月龄)随机分为3组:对照组(C组)不予任何干预,手术组(S组)接受阑尾切除术,吸入组(I组)吸入异氯醚。采用伊文思蓝(Evans-blue,EB)透过率检测各组海马区血脑屏障通透性的改变,并通过Western blot检测occludin和claudin-5 蛋白,观察手术后紧密连接蛋白的变化,检测MMP-2和MMP-9的改变。结果    相比于吸入组及对照组,手术组的潜伏期延长,平台穿越次数减少,EB透过率增加,紧密连接蛋白occludin表达减少,MMP-2和MMP-9表达增加。结论    通过增加MMP-2和MMP-9的表达,引起紧密连接蛋白occludin表达的减少,并导致血脑屏障破坏,最终引起术后认知功能障碍的发生。