CD28通路共刺激对淋巴细胞产生趋化因子 RANTES的影响

目的探讨CD28通路共刺激对淋巴细胞产生趋化因子RANTES的影响与意义,以及免疫抑制剂环孢素(CsA)对RANTES产生的抑制作用.方法分离健康人外周静脉血中的淋巴细胞,实验分为4组①抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激组;②抗CD28mAb刺激组;③抗CD3mAb+抗CD28mAb共刺激组,即CD28共刺激组;④未加任何刺激作为对照组.吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)和CsA以不同终浓度干预CD28共刺激组.采用ELISA法测定培养上清中RANTES含量,流式细胞术检测淋巴细胞CD25和RANTES受体CCR5表达率.结果培养48 h后,CD28共刺激组RANTES产生显著增加(P＜0.05);不同剂量PDTC和CsA对CD28共刺激后淋巴细胞产生RANTES均具有抑制作用;CD28共刺激后淋巴细胞CD25表达率显著增高(P＜0.05),而CCR5表达率显著降低(P＜0.05).结论CD28通路共刺激后淋巴细胞产生RANTES显著增加.淋巴细胞产生RANTES及其对RANTES的反应均受到CD28共刺激信号调控.核因子(NF)-κB的特异性抑制剂PDTC和免疫抑制剂CsA均可抑制淋巴细胞产生RANTES.     

梅毒患者外周血淋巴细胞CD28-B7分子的表达及意义

目的探讨CD28-B7 T淋巴细胞活化协同刺激分子在梅毒发病、发展及转归中的作用。方法应用流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）对60例梅毒患者（早期梅毒患者和血清固定患者各30例）和30例正常人外周血淋巴细胞中B7（CD80/CD86）及CD4＋T淋巴细胞中CD28的表达进行检测。结果①梅毒患者外周血淋巴细胞表面CD28的表达水平低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;血清固定组和早期梅毒组比较,CD28表达水平的差异无统计学意义（P〉0.05）。②梅毒患者外周血淋巴细胞CD80及CD86的表达水平明显低于正常对照组（P〈0.05）,但CD80和CD86的表达水平在血清固定组和早期梅毒组间无统计学意义（P〉0.05）。结论本研究提示梅毒患者外周血淋巴细胞表面CD80、CD86及其受体CD28的表达下调,通过影响CD28-B7协同刺激通路,抑制T细胞尤其是CD4＋T淋巴细胞活性功能,可能参与了梅毒的发病、发展及转归过程。     

小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞T-bet表达的研究

目的 探讨体外转录法合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人淋巴细胞T-bet基因表达及功能的影响.方法 设计并合成4条siRNA(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及siRNA-co),脂质体法转染淋巴细胞.转染后48 h收集转染后细胞,采用RT-PCR方法检测细胞T-bet mRNA的抑制率;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞上清液中IL-4和IFN-γ水平;将淋巴细胞与人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)共培养检测淋巴细胞对ECV304增殖的抑制作用.结果 转染后48h半定量RT-PCR的检测显示siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制率分别为(72.50±1.01)%、(5.40±0.63)%和(30.90±0.90)%,以siRNA-1转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制作用最强(P＜0.05),其细胞上清液中IL-4水平最高,而IFN-γ的水平最低(P＜0.05),siRNA-1转染淋巴细胞对人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)增殖的抑制作用低于siRNA-2及siRNA-3.结论 siRNA可特异性抑制淋巴细胞T-bet基因的表达,从而为进一步研究siRNA在移植免疫耐受中应用提供了理论和实验基础.     

乙型肝炎外周血T淋巴细胞上CD28分子表达与病毒载量的关系

目的：分析HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者、HBeAg阳性乙肝病毒携带者外周血T淋巴细胞上CD28表达情况及其与HBV病毒载量的关系。方法采集健康人、HBeAg阳性乙肝病毒携带者、HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的外周血,抗体标记,采用流式细胞技术检测CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^＋T淋巴细胞,同时检测肝功能HBV DNA。结果慢性乙型肝炎组、乙肝病毒携带组CD4^＋CD28^＋T细胞、CD8^＋CD28^＋T细胞百分率明显低于健康对照组（P〈0.05）;HBV DNA≥107组CD8^＋CD28^＋T细胞百分率低于HBV DNA＜107组（P〈0.05）。结论乙型肝炎病毒感染者CD8^＋T细胞上CD28的低表达与高病毒载量有关。     

异位性皮炎患者外周血T淋巴细胞CD28和可诱导共刺激分子的表达

目的探讨CD28和可诱导共刺激分子（ICOS）在异位性皮炎（AD）患者外周血T淋巴细胞的表达。方法采用免疫荧光双标记流式细胞术检测25例AD患者外周血T淋巴细胞CD28和ICOS的表达,参照欧洲AD评分标准（SCORAD）对病情严重程度进行评分,分析CD28和ICOS的表达水平与病情严重程度的相关性。结果AD患者组外周血T淋巴细胞CD28和ICOS的表达水平高于正常对照组（P〈0.01）,ICOS的表达水平与SCORAD评分呈正相关（r=0．68,P〈0．01）。结论AD患者外周血T淋巴细胞CD28和ICOS表达增高,ICOS的表达水平可作为反映病情严重程度的一个指标。     

老年肺癌患者外周血T淋巴细胞及亚群CD28的表达

目的:检测老年肺癌患者外周血中T淋巴细胞及亚群CD28的表达.方法:采用三色免疫荧光标记流式细胞术检测32例老年肺癌患者与35例老年正常人外周血T淋巴细胞及亚群CD28的表达.结果:老年肺癌组CD3 、CD4 、CD8 T细胞及CD4 CD28 、CD8 CD28 T细胞亚群明显低于老年正常对照组(P＜0.01);CD8 CD28T细胞亚群(P＜0.01)明显高于老年正常对照组;均有明显的统计学差异;两组间CD4 CD28T细胞亚群无明显统计学差异(P＞0.05).结论:老年肺癌患者较正常老年人存在明显的免疫功能紊乱,抗肿瘤能力明显下降,并导致病情恶化.     

小分子干扰RNA对人类白细胞抗原DRβ1*0401基因表达的抑制作用

人类白细胞抗原(HLA)-DR分子、抗原肽及T细胞受体(TCR)三者之间的相互识别以及三分子复合物的形成是类风湿关节炎(RA)发病的始动环节。很多实验室通过抑制三分子复合物的形成,在RA病理过程的免疫反应上游阻碍该病的发生,从而达到RA免疫治疗的目的。但运用的抗体及肽类等免疫治疗制剂由于半衰期较短、易被水解,     

小干扰RNA对Jurkat细胞CXCR4基因表达的影响

目的 研究小干扰PNA(siRNA)对Iurkat细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因表达的影响.方法 用针对CXCR4基因的siRNA转染人急性T细胞性白血病细胞系Iurkat细胞,用RT-PcR方法 检测其CXCR4基因表达水平的变化.结果 CXCK 4siPNA转染Iurkat细胞48 h后,其表达水平下降,能明显抑制CXCR4基因的表达.与空白对照组和阴性对照组比较,其差异有统计学意义(P＜0.01).结论 利用RNA干扰技术能有效抑制靶基因的表达,为下一步有关Iurkat细胞CXCR4基因的研究奠定一定的基础.     

抑制CD147表达对Jurkat T淋巴细胞集落形成的影响

目的研究小干扰RNA抑制CD147基因对Jurkat T淋巴细胞集落形成的影响。方法将CD147特异的siRNA,经LipofectamineTM2000转染Jurkat细胞48 h后,用半定量RT-PCR检测CD147 mRNA水平的变化,Western blot和流式细胞术（FCM）分别检测总蛋白和细胞表面蛋白水平的变化。通过荧光倒置显微镜比较特异性抑制CD147表达后Jurkat细胞集落形成的变化。结果与对照组相比siRNA干扰组细胞CD147 mRNA和蛋白水平的表达均降低,抑制率分别为（38.57±1.55）%和（47.4±1.47）%,细胞表面CD147的平均荧光强度（MFI）下降（50.5±4.7）%（P〈0.05）。随着CD147被抑制,siRNA干扰组细胞集落形成明显少于对照组（P〈0.05）。结论通过siRNA能抑制Jurkat细胞CD147的表达,随着CD147表达下降细胞集落的形成减少,提示CD147可能在炎症细胞粘附聚集中起到一定作用。     

胃癌患者外周血T淋巴细胞CD4、CD25、CD8和CD28的表达及临床意义

机体发生肿瘤时免疫系统能产生抗肿瘤免疫应答，其中细胞免疫在抗肿瘤免疫应答中发挥着重要作用。但是，许多肿瘤仍能在机体内继续生长。甚至使人体死亡。肿瘤细胞如何逃避宿主免疫系统的攻击，或是通过何种机制影响机体不能产生有效的抗肿瘤免疫应答，机制相当复杂，涉及到肿瘤细胞本身和宿主免疫系统的多个方面。     

小干扰RNA抑制肝癌细胞株BEL7402 ICAM-1基因表达的研究

目的研究小干扰RNA（siRNA）抑制肝癌细胞系BEL7402基因ICAM-1表达的可行性。方法根据ICAM-1基因设计shRNA片断，构建pGenesil-1／ICAM-1表达载体，转染BEL7402细胞，实时定量PCR和免疫组织化学方法检测肝癌细胞中ICAM-1基因表达抑制情况。结果该实验已成功构建了针对ICAM-1基因的pGenesil-1／ICAM-1质粒。实时定量PCR检测结果显示，BEL7402细胞经特异性siRNA作用后ICAM-1基因的表达受抑制，其Ct值由28．8降低到21．6，免疫组织化学结果显示：RNA干扰（RNAi）能特异而有效地抑制BEL7402细胞中ICAM-1基因的表达。结论构建的pGenesil-1／ICAM-1重组质粒能有效抑制ICAM-1基因在肝癌细胞株BEL7402中的表达，为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。     

肺癌患者血中T淋巴细胞及CD8+/CD28+亚群的变化

目的:检测细胞毒T细胞(CD8+/CD28+)与CD3+、CD4+、CD8+及NK细胞在肺癌患者血中表达的变化,探讨细胞免疫在肿瘤免疫中的作用。方法:肺癌患者50例,男36例,女14例,年龄37-78岁,平均56岁,全部病例按1997年抗癌联盟会议TNM分期评定为Ⅲb、Ⅳ期。对照30例系体检正常者,年龄30～68岁,平均51岁。美国BD公司的FACSCalibur流式细胞仪,荧光标记小鼠抗人IgG单抗CD3+、CD4+、CD8+、CD3-/CD16+56+,CD8+/CD28+ IgG FITC和PE同型对照均购自     

高碳酸因素对大鼠活化T淋巴细胞CD28／B7和CD2／CD48（LFA－3）信号转导通路的影响

目的：探讨高碳酸因素对大鼠活化T淋巴细胞CD28／B7和CD2／CD48（LFA－3）信号转导通路的影响。方法采集体重200～250 g的健康Wistar大鼠外周静脉血样，分离T淋巴细胞，培养于含有植物血凝素（ PHA）的无菌16孔培养板中。采用随机数字表法，将其分为3组：对照组常规培养；高碳酸组和缓冲液组于O2－N2－CO2混合气体培养箱中培养，维持培养液PaCO280～100 mmHg；缓冲液组用NaH－CO3缓冲液调节，维持培养液pH值7．2～7．4。分别于给予植物血凝素前和给予植物血凝素细胞培养1、2、4 h（ T0～3）时，随机取4孔，收集细胞和培养液，采用流式细胞仪测定T淋巴细胞坏死率、凋亡率、CD28和CD2阳性率；采用ELISA法测定培养液IL－2、IFN－γ、IL－4和IL－10的浓度。结果3组T细胞T0～3时坏死率和凋亡率比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与对照组比较，高碳酸组和缓冲液组T1～3时培养液IL－2和FN－γ的浓度降低，IL－4和IL－10的浓度升高，T2，3时T淋巴细胞CD28和CD2阳性率降低（P＜0．05或P＜0．01）；与高碳酸组比较，缓冲液组T1～3时培养液IL－2和IFN－γ的浓度升高，IL－4和IL－10的浓度降低（ P＜0．05或P＜0．01），各时点T淋巴细胞CD28和CD2阳性率差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论高碳酸因素可能通过抑制CD28／B7和CD2／CD48（LFA－3）信号转导通路，减少T淋巴细胞的活化，这是CO2直接作用和其酸性环境共同完成的。     

外周血CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞对老年脓毒症患者预后的预测价值

目的 探讨外周血CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞对老年脓毒症患者预后的预测价值。方法 采用回顾性队列研究,选取2015年2月—2016年8月西安交通大学第二附属医院重症医学科住院的年龄≥60岁的脓毒症患者75例,依据ICU结局分为存活组(n=54)及死亡组(n=21)。收集患者一般资料,诊断脓毒症当天进行急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分及序贯器官衰竭(SOFA)评分,检测外周血液标本TNF-a、IL-10及CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞。结果 死亡组平均年龄大于存活组(P<0.05)。死亡组较存活组有更高的APACHEⅡ评分、SOFA评分及休克比例,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组外周血CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞、TNF-a、IL-10较存活组更高(P<0.05)。存活组的耐药菌感染比例低于死亡组,但差异无统计学意义(P>0.05)。无论单因素还是对一系列协变量进行调整的多因素Logistic回归分析均显示,较高的外周血CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞比例与高的ICU死亡率相关(OR, 1.21;95%CI...     

CD28、CD40通路共刺激对淋巴细胞增殖反应的影响及CsA的抑制作用

目的：探讨CD28、CD40通路共刺激后淋巴细胞增殖反应的变化及免疫抑制剂环孢素A(CsA)、抗CTLA4单克隆抗体对共刺激通路激活后淋巴细胞增殖反应的影响。方法：采用单克隆抗体与淋巴细胞表面CD3、CD28及CD40L分子结合产生相应刺激信号,根据刺激条件不同设组为：①抗CD3单抗单刺激(A组)(剂量为10μg／L、100μg／L、1000μg,／L);②抗CD3单抗 抗CD28单抗(B组);③抗CD3单抗 抗CD40L单抗(C组);④抗CD3单抗 抗CTLA4单抗(D组)共刺激(A、B、C、D组中抗CD3单抗剂量固定为100μg／L,其余3种单抗各设10μg／L、100μg／L、1000μg／L3种剂量);⑤抗CD3单抗 抗CD28单抗 抗CD40L单抗(E组);⑥抗CD3单抗 抗CD28单抗 抗CTLA4单抗(F组)共刺激(E、F组中抗CD3单抗和抗CD28单抗的剂量固定为100μg／L,抗CD40L单抗和抗CTLA4单抗的剂量各设10μg／L、100μg／L、1000μg／L);⑦CsA干预组：抗CD3单抗 CsA(G组);⑧抗CD3单抗 抗CD28单抗 CsA(H组);⑨抗CD3单抗 抗CD28单抗 抗CD40L单抗 CsA(I组),G、H、I组中所有单抗浓度均固定为100μg／L,CsA浓度设为10μg／L、100μg／L、1000μg／L。采用[^3H]-TdR同位素掺人法测定淋巴细胞增殖水平,液体闪烁计数仪测定放射性计数值。结果：用抗CD3单抗 抗CD28单抗共刺激后,淋巴细胞增殖反应明显高于抗CD3单刺激,而在抗CD3单抗 抗CD40L单抗刺激组,淋巴细胞增殖反应低于抗CD3单刺激组。抗CTLA4单抗所提供的刺激信号可抑制抗CD3单刺激及抗CD3 抗CD28共刺激导致的淋巴细胞增殖反应,并且随着抗CTLA4单抗剂量的增加,抑制作用增强。CsA对共刺激后的淋巴细胞增殖反应有抑制作用,且随着剂量增大其抑制作用也增强,但对单刺激后增殖反应的抑制作用更为明显。结论：CD28共刺激通路在淋巴细胞活化中起着关键作用。抗CD40L单抗的刺激作用可能被其对T细胞与抗原递呈细胞(APC,包括B细胞等)间的阻断效应所掩盖。抗CTLA4单抗及CsA对共刺激后淋巴细胞的增殖反应均有抑制作用。     

Herpes virus entry mediator/CD160介导人调节性T细胞对CD4~+效应性T细胞的抑制作用

目的研究HVEM、CD160在不同CD4+T细胞亚群,不同功能状态下的表达以及HVEM-CD160通路对CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)免疫调节作用的影响。方法采用流式细胞分析术分别检测3例不同个体CD4+CD25+Tregs及CD4+CD25-T细胞在1 000 IU/ml人重组IL-2、与细胞数量1∶1的抗CD3/CD28 mAb包被磁珠的刺激下第0、3、5天HVEM或CD160的表达情况。采用1.25、2.5、5μg/ml HSV1gD蛋白处理4例不同个体Treg,培养5 d后,将处理的Treg与Teff在体外以1∶1混合并加入300 IU/ml IL-2及等量抗CD3/CD28 mAb包被磁珠,行混合淋巴细胞共培养,于培养结束前18 h加入3H-TdR,共培养7 d后检测各组细胞CPM增殖情况。5μg/ml gD蛋白处理5例不同个体Treg后将其细胞浓度调整为5×106并接种于6孔培养板内,加入500 IU/ml IL-2共培养7 d,行RT-PCR(Realtime PCR)分析Treg Foxp3基因表达。结果 HVEM在初始CD4+CD25+Tregs表面呈中度表达,平均表达率为42%,且随着Treg的活化其表达HVEM上调;CD160在初始CD4+CD25-T细胞表面呈低度表达,平均表达率仅7%,但伴随其活化,表达CD160有所上调。采用不同浓度HSV1gD蛋白处理Treg后2.5μg/ml与5μg/ml浓度组抑制CD4+CD25-T细胞增殖作用与空白对照组(276±35)相比明显下降,CPM值分别为(2 014±202)、(6 535±531),差异具有统计学意义(P<0.05),且具有浓度依赖性;RT-PCR分析发现Treg经5μg/ml gD蛋白处理后Foxp3基因表达率下降,仅为空白对照组的48%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论机体接受免疫刺激后Treg通过上调HVEM表达与CD4+CD25-效应性T细胞(ef-fective Tcell,Teff)表面上调表达的受体CD160交联从而上调Treg Foxp3基因的表达,最终介导了Treg对Teff活化、增殖的抑制作用,HVEM-CD160通路对Treg免疫调节作用具有重要意义。     

CD137和CD28分子对衰老T细胞bcl-2表达的调控

目的 观察两种共刺激分子CD137及CD28对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠及自然衰老小鼠T细胞活化后的bcl-2表达的调控,分析这两种共刺激分子调节衰老T细胞凋亡的可能机制.方法 7周龄BALB/c雄性小鼠每日背部皮下注射D-半乳糖溶液(120 mg/kg,溶于0.1 ml蒸馏水中),连续注射5个月,建立亚急性衰老模型组;自然衰老组为16月龄BALB/c雄性小鼠.分离小鼠的脾脏T细胞,分别用conA IgG、conA CD137单抗、conA CD28单抗体外活化,48h后用流式细胞术及半定量RT-PCR分析各组T细胞bcl-2的表达.结果 (1)衰老模型组T细胞经conA IgG、conA CD137单抗、conA CD28单抗活化48 h后,胞内bcl-2蛋白表达率分别为(24.4±1.5)%、(34.4±2.4)%、(45.1±2.7)%,自然衰老组T细胞经conA lgG、conA CD137单抗、conA CD28单抗活化48 h后,胞内bcl-2蛋白表达率分别(19.6±2.0)%、(26.3±1.9)%、(48.5±2.2)%;(2)衰老模型组T细胞经conA IgG、conA CD137单抗、conA CD28单抗活化48 h后,胞内bcl-2 mRNA表达率(IOD(bcl-2)/IOD(β-actin)分别为0.309±0.039、0.547±0.036、0.780±0.041,自然衰老组T细胞经conA IgG、conA CD137单抗、conA CD28单抗活化48 h后.胞内bcl-2 mRNA表达率分别0.283±0.038、0.535±0.041、0.771±0.063.结论 CD137单抗及CD28单抗.均可以显著提高衰老模型组及自然衰老组小鼠T细胞bcl-2mRNAbcl-2蛋白的表达,这可能是CD137分子及CD28分子抑制衰老T细胞凋亡、维持衰老T细胞功能的主要机制之一.     

RNA干扰对小鼠脾淋巴细胞TNF-α表达的影响

目的:触发哺乳动物细胞内RNA干扰,研究肿瘤坏死因子(TNF-α)特异性小片断双链RNA对活化的小鼠淋巴细胞TNF-α表达的影响。方法:原代培养小鼠脾淋巴细胞并用脂多糖激活,确立细胞分泌TNF-α的峰值,将针对TNF-α靶序列的干扰片断经PCR扩增后转染入细胞,ELISA法检测TNF-α浓度,RT-PCR法检测TNF-αmRNA的表达。结果:终止刺激后48h淋巴细胞分泌TNF-α达高峰,TNF-α特异RNA干扰组与阴性对照组比较TNF-α浓度降低近30%,TNF-αmRNA表达抑制率达54.5%。结论:TNF-α小片断双链RNA可特异性抑制哺乳动物淋巴细胞TNF-α的表达;RNA干扰具有严格的序列特异性,只特异的沉默靶基因而不影响其他基因的表达。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD4~+T细胞共刺激分子CD28/CTLA-4的变化

目的通过检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者CD3^＋CD4^＋T细胞表面CD28^＋和CTLA-4^＋分子水平,探讨两者在MDS发病机制中的作用。方法用流式细胞技术检测38例初治MDS患者和11例正常对照组外周血CD3^＋CD4^＋T细胞表面CD28^＋和CTLA-4^＋表达率。结果（1）MDS组CD3^＋CD4^＋CD28^＋表达率为（79.82&#177;8.99）%[难治性贫血（RA）（78.65&#177;10.4）%、伴原始细胞增多性难治性贫血（RAEB）/转变中的原始细胞增多性难治性贫血（RAEB-t）（80.10&#177;7.28%）],低于正常对照组的（89.56&#177;3.06）%,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）;（2）MDS组CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋表达率为（2.14&#177;1.25）%[RA（1.51&#177;0.80）%、RAEB/RAEB-t为（2.65&#177;1.33）%],显著高于正常组的（0.11&#177;0.12）%,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）;随MDS疾病的进展,RAEB/RAEB-t组CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋的表达率与RA组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;（3）CTLA-4/CD28免疫应答中相互拮抗的共刺激分子对比值在MDS-RA组中为2.14&#177;0.97,RAEB/RAEB-t组为3.58&#177;1.55,高于正常对照组的0.11&#177;0.11,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）;并且RA组和RAEB/RAEB-t组之间的差异亦有高度统计学意义（P﹤0.01）。结论（1）MDS患者骨髓的CD3^＋CD4^＋T细胞表面的共刺激分子表达异常,CD28下调,CTLA-4上调,T细胞处于抑制状态;（2）随着MDS骨髓中原始细胞的增多,CD28/CTLA-4比值增高,进一步说明CD28/CTLA-4异常与MDS疾病的发生及进展相关。     

RNA干扰阻断受者树突状细胞表面CD80/CD86通过诱导T细胞凋亡调控T细胞低反应

Background Despite extensive research, the mechanisms of immature dendritic cells (DCs) induced immune hyporesponsiveness remain incomplete. Methods Recipient DCs from C3H mouse bone marrow cells were incubated with donor antigen from splenic lymphocyte of C57BL/6 mouse, these DCs were transfected with CD80/86 specific siRNA using lentiviral vectors. Flow cytometry was used to evaluate expression of CD80/86 on the antigen-pulsed recipient DCs. Immune regulatory activity was examined by mixed lymphocyte reaction, in which irradiated DCs were cultured with C3H spleen T cells. After the reaction, IL-2, IL-4, IL-10 and INF-γ levels of mixed lymphocyte reaction culture supernatant were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. The apoptotic T lymphocytes were identified by Annexin V and CD3 staining. Results There was a significant inhibition of CD80/86 expression in DCs transfected with CD80/86 lentiviral vectors compared with the control groups (P <0.05), indicating the specificity of RNA interference. Enzyme-linked immunosorbent assay results showed a significant reduction of INF-γ, IL-2 and IL-10 in the CD80/86 lentivirus transfected group compared to the control groups (P <0.05). There was no significant difference in IL-4 levels between the groups (P >0.05). We also showed that CD80/86 low DCs loaded with alloantigen 1) stimulated low T cell proliferative responses via the indirect recognition pathway and 2) enhanced apoptotic activity (P <0.05) in co-cultured T cells. Conclusions Lentiviral vector transfection can effectively and specifically knock down target genes in DCs. The CD80/86 low DCs may show tolerogenic activity via induction of T-cell apoptosis, thereby modulating activity of recipient-derived DCs. The use of this approach may potentially be clinically applicable.