趋化因子受体CCR5及其配体在类风湿关节炎患者滑液及滑膜中的表达

目的查明趋化因子C-C亚族受体5(CCR5)及其配体在外周血、关节滑膜和滑液的表达及分布,探讨Th1细胞选择性聚集于类风湿关节炎(RA)患者关节中的机制.方法采用两色和三色免疫荧光标记、流式细胞术及激光扫描共聚焦显微技术,对15例RA患者外周血、关节液及滑膜中Th细胞亚群,以及趋化因子受体CCR5和CXCR3的表达细胞,和C-C亚族趋化因子巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1β的产生细胞,进行了测定和分析比较.结果(1)RA患者关节滑液细胞内细胞因子分泌模式明显向Th1偏移,Th1样细胞在关节内占优势.(2)RA患者滑液中T细胞受体CCR5的表达率为52%±8%,CXCR3的表达率为61%±12%,与自身及正常人(外周血单个核细胞)比较明显升高(P＜0.01).(3)RA患者滑膜组织中大量浸润的T细胞(尤其是CD4+细胞)、单核/巨噬细胞(Mo/Mac)、B细胞多表达CCR5的配体MIP-1β.结论RA患者的关节内,T细胞、B细胞、Mo-Mac产生MIP-1β、RANTERS等趋化因子,能趋化表达CCR5、CXCR3的Th1细胞选择性进入关节组织,导致Th1/Th2细胞失衡.     

类风湿关节炎患者RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R水平表达情况

目的:探讨类风湿关节炎(RA)患者核因子 κB受体活化因子(RANK)及其配体(RANKL)、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、白介素-18(IL-18)、IL-33及B淋巴细胞表面表达的B淋巴细胞刺激因子受体(BAFF-R)水平表达情况.方法:临床纳入RA患者72例,同时纳入70例健康体检者作为研究的对照组.分别检测RA组患者以及对照组外周血RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R等水平.结果:①RA组RANK、RANKL表达率差异无显著性;但RA组RANK在CD3+T淋巴细胞、CD14+单核细胞、中性粒细胞上的表达强度要明显低于对照组,差异有显著性;RA组与对照组RANKL表达强度差异无显著性;②RA组caspase-1及其下游因子IL-18、IL-33水平均明显高于对照组,差异有显著性;相关性分析显示,caspase-1与IL-18、IL-33呈现正相关;③RA组BAFF-R水平明显高于对照组,差异有显著性.结论:通过对RA患者进行外周血RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R水平检测,能够综合评估病情的进展.另外,RA的发生及发展是多种机制共同作用的结果.     

Notch信号通路在宫颈癌患者外周血单个核细胞的表达及其临床意义

目的探讨Notch信号通路在宫颈癌发病机制中的作用。方法采用实时荧光定量PCR和流式细胞术,分别从基因转录和蛋白表达水平检测30例宫颈癌患者和30例健康对照者的外周血单个核细胞（PBMCs）中Notch 1,Notch 2,Notch 3,Notch 4,以及Notch的配体Jagged 1,Jagged 2,Delta 1,Delta 3,Delta 4的表达。结果宫颈癌患者PBMCs中的Notch 1,Notch 2,Jaggcd 1,Jagged 2,Delta 1,Delta 4的mRNA和蛋白的表达均明显高于健康对照组（P〈0．01）,Notch 3,Notch 4,Delta 3的基因和蛋白的表达在两者中差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论Notch信号通路的表达在宫颈癌的发病过程中存在一定的变化,可能参与宫颈癌的发生发展,从而为官颈癌的早期诊断和临床治疗提供新线索。     

Notch信号通路在小儿哮喘患者外周血单个核细胞的表达及其临床意义

目的初步探讨Notch信号通路相关分子在小儿哮喘患者中的表达及其临床意义。方法实时荧光定量聚合酶链反应和流式细胞术,分别从基因转录和蛋白表达水平检测20例小儿哮喘患者和20例健康对照者的外周血单个核细胞（PBMC）中Notch1、Notch2、Notch3、Notch4以及Notch的配体Jagged1、Jagged2、DLL1（Delta-like1）、DLL3（Delta-like3）、DLL4（Delta-like4）的表达。结果小儿哮喘患者PBMC中的Notch1、Notch3、Jagged1、Jagged2、Delta1的mRNA和蛋白的表达均明显高于健康对照组（P〈0.01）,Notch2、Notch4、Delta3和Delta4的基因和蛋白的表达在两者中未见明显差异（P〉0.05）。结论 Notch信号通路的表达在小儿哮喘发病过程中有显著改变,可能参与小儿哮喘的发生发展,为深入研究小儿哮喘的发病机制提供思路。     

剥脱综合征白内障者单个核细胞中 Notch2基因及其靶蛋白表达研究

目的 探讨信号通路重要受体基因Notch2及靶蛋白在剥脱综合征白内障患者、健康正常人外周血单个核细胞中的表达水平和意义。方法 采用实时荧光定量PCR法检测Notch2基因在18例剥脱综合征白内障患者外周血单个核细胞中的表达水平,同时检测对照组正常人群18例。运用免疫印迹法检测Notch2蛋白在剥脱综合征白内障患者和正常人群中的表达量。结果 剥脱综合征患者外周血单个核细胞中Notch2基因相对表达水平为0.157±0.137,正常人群的表达水平为0.035±0.033,剥脱综合征患者显著高于正常健康人群,差异有统计学意义(t=3.662,P<0.05)。免疫印迹检测Notch2蛋白结果显示,剥脱综合征白内障患者蛋白表达量为0.785±0.092,正常人群为0.304±0.091,剥脱综合征患者显著高于正常人群,差异有统计学意义(t=15.795,P<0.01)。结论 Notch2基因在剥脱综合征白内障患者外周血单个核细胞中的表达显著高于正常人群,其靶蛋白Notch2在剥脱综合征患者中的表达也高于正常人群。推测作为Notch信号通路重要受体基因Notch2异常表达正调控其靶蛋白Notch2参与剥脱综合征白内障的发病过程。     

应用荧光定量PCR验证干扰素诱导表达基因在系统性红斑狼疮患者中的表达

目的 应用荧光定量聚合酶链反应技术验证由基因芯片发现的干扰素(IFN)诱导基因表达谱在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎(RA)和正常人中的表达。方法 测定40例SLE患者、28例RA患者和29名正常人外周血白细胞Ly6e、IFIT1、OAS2 IFNw、IFNa13表达，初步分析外周血分离出来的T、B及单核细胞中这些基因的表达。结果 与正常人相比，SLE组的Ly6e、IFIT1、OAS2基因表达显著增高，其中Ly6e、OAS2基因的表达较RA组也显著增高，但IFNw、IFNa13基因表达反而降低．这组基因在单核细胞的表达最高。结论 IFN诱导的基因在SLE患者中呈高表达，IFN及其免疫调控通路在SLE发病中可能扮演重要角色。     

CCL28-CCR10通路在类风湿关节炎单核细胞迁移中的作用

目的: 观察类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者关节中单核/巨噬细胞趋化因子受体CCR10的表达,探讨趋化因子CCL28与其受体CCR10在RA单核细胞迁移中的作用及机制。方法: 采用免疫组织化学法分析8例RA患者、4例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者和4例正常对照者滑膜组织中CCR10的表达并进行细胞染色评分(0~5分),流式细胞术检测26例RA患者和20例健康对照者外周血、15例RA患者滑液CD14⁺单核细胞中CCR10阳性细胞比例,Transwell迁移实验检测CCL28对RA和健康对照单核细胞的趋化性,Western blotting检测CCL28干预RA单核细胞的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路磷酸化。结果: CCR10表达在RA滑膜衬里层细胞及衬里下层的巨噬细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞;RA滑膜衬里层细胞和衬里下层巨噬细胞的CCR10表达明显高于OA和正常对照的滑膜(P均 < 0.01)。RA患者外周血CD14⁺单核细胞表达CCR10明显高于健康对照者[(15.6±3.0)% vs. (7.7±3.8)%, P < 0.01];RA患者滑液单核细胞CCR10的表达为(32.0±15.0)%,明显高于RA外周血(P < 0.01)。体外实验中,10~100 μg/L的CCL28能有效诱导RA和健康对照外周血CD14⁺单核细胞迁移(P均 < 0.01);抗CCR10单抗能明显抑制CCL28对RA单核细胞的趋化(P < 0.01)。CCL28干预RA单核细胞明显增加ERK和Akt的磷酸化(P均 < 0.05);ERK抑制剂(U0126)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂(LY294002)可明显降低CCL28诱导的RA单核细胞迁移(P均 < 0.01)。结论: RA患者外周血、滑液及滑膜单核/巨噬细胞CCR10表达增高,CCL28与CCR10结合并通过激活ERK、PI3K/Akt信号通路促使RA单核细胞迁移;CCL28-CCR10通路可能参与招募单核细胞进入RA关节,从而促进滑膜炎症和骨破坏。     

加味凉血消风散调控寻常型银屑病(血热证)治疗前后外周血白细胞Notch通路中Notch1、Hes-1表达的初探

目的:探讨寻常型银屑病(血热证)患者外周血中性白细胞Notch信号通路Notch1受体及下游靶基因Hes-1表达情况,以及"加味凉血消风散"对其治疗前后Notch1受体及s下游靶基因Hes-1表达的影响。方法:分离30例寻常型银屑病(血热证)患者治疗前、后外周血白细胞,以β-actin为内参,采用RT-PCR定量检测Notch1受体及下游靶基因Hes-1的表达,治疗前并与健康人相比较。结果:健康人与寻常型银屑病(血热证)患者Notch1的表达(P0.05),两者有统计学意义;健康人与寻常型银屑病(血热证)患者Hes-1的表达(P0.05),两者有统计学意义,寻常型银屑病(血热证)患者外周血中性白细胞Notch信号通路Notch1受体及下游靶基因Hes-1高表达。经配对t检验Notch1在治疗前后(P0.01),有统计学意义;采用非参数Wilcoxon符号配对设计资料的秩和检验,治疗前后Hes-1扩增值(P0.05),有统计学意义,表明"加减凉血消风散"可下调Notch1基因、Hes-1基因的表达。结论:我们推测加味凉血消风散可能通过减少银屑病患者外周血中性白细胞的活化来发挥其抗炎作用。但中性白细胞是否将通过细胞间Notch信号通路调控影响着角质形成细胞的角化,加味凉血消风散是否能阻断其分化信息的传递有待我们进一步研究。     

CD4+CD25+T细胞表面GITR及血清中IL-6、IL-17在类风湿关节炎中的作用及意义

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者外周血糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关基因(GITR)在CD4+CD25+T细胞中的表达及细胞因子IL-6、IL-17的浓度水平变化,探讨两者在RA发病中的作用.方法 流式细胞术检测GITR在CD4+CD25+T细胞的阳性表达率,ELISA法检测血清中IL-6、IL-17的浓度水平并分析GITR阳性表达率与RA患者DAS28的关系.结果 RA组中的CD4+CD25+Treg细胞表面GITR阳性表达率(3.03±1.95)%明显低于健康对照组(7.68±2.01)%,RA组中IL-6,IL-17浓度水平明显高于健康对照组(P<0.05).GITR阳性表达率与DAS28呈明显负相关.结论 RA患者GITR+CD4+CD25+T细胞阳性表达率低下,与RA发病及疾病的活动性有一定的相关性.     

类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞趋化因子受体CCR7的表达及其临床意义

目的 探讨CC族趋化因子受体CCR7在类风湿关节炎(RA)发病机制中的作用及其临床意义.方法 选取30例RA患者(RA组)和20例健康体检者(正常对照组).应用流式细胞检测术检测两组受检者外周血淋巴细胞表面CCR7的表达,并根据患者的触痛关节数、肿胀关节数、红细胞沉降率计算出患者的疾病活动性积分(DAS28),分析CCR7的表达与疾病活动性的关系.结果 RA组患者外周血CD+4T细胞和CD+8T细胞上CCR7的表达率[(74.5±13.7)%与(57.9±11.8)%]均显著高于正常对照组[(16.7±2.0)%与(16.6±1.6)%],差异有统计学意义(P＜0.01);且RA组患者外周血CD+4T细胞上CCR7的表达率显著高于CD+8T细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).RA组患者外周血CD+4T细胞CCR7的表达与DAS28呈正相关(r=0.836,P＜0.01).结论 CCR7在RA患者外周血淋巴细胞上的表达异常增加,尤其是在CD+4T细胞上;CCR7在CD+4T细胞上的异常表达可能是导致RA病情活动的重要因素之一.     

强直性脊柱炎患者外周血单核及T淋巴细胞CD147的表达及意义

目的 观察强直性脊柱炎(AS)患者外周血单核及T淋巴细胞中CD147的表达情况,初步探讨CD147在AS发病及疾病活动中的意义.方法 入组AS患者、类风湿关节炎(RA)患者及健康对照者(HC)各30例,以流式细胞术分析比较各组间外周血单核及T淋巴细胞CD147表达的差异,并经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测比较其外周血单个核细胞(PBMC)CD147 mRNA表达的差异;进而将AS患者单核及T淋巴细胞CD147表达水平与常用的疾病活动性指标行相关分析.结果 AS、RA及HC组外周血单核细胞CD147的平均荧光强度(MF1)分别为213.5±37.8、228.7±49.7及163.6±44.8,T淋巴细胞CD147的MFI则分别为36.8±10.1、40.2±10.5及28.3±10.6,AS组单核及T淋巴细胞CD147的表达水平均略低于RA患者,但差异均无统计学意义(均P＞0.05),而AS与RA组单核及T淋巴细胞CD147的表达水平均高于HC组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);AS与RA组PBMC中CD147 mRNA表达水平均高于HC组(P＜0.05),而AS与RA组间差异无统计学意义(P＞0.05);AS患者单核及T淋巴细胞CD147 MFI与其ESR及CRP均存在正相关(P＜0.05).结论 AS患者单核及T淋巴细胞中CD147的表达较正常升高,其水平与患者ESR及CRP存在正相关,提示CD147可能是AS患者疾病发生发展的重要影响因素.     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴及单核细胞表面B7-H1表达研究

目的 探讨B7家族共刺激分子B7-H1在慢性乙型病毒性肝炎(乙肝)患者外周血淋巴细胞及单核细胞表面的表达情况.方法 利用荧光抗体标记结合多色流式技术,检测慢性乙肝患者外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞群体表面B7-H1分子的表达.结果 在慢性乙肝患者,T、B淋巴细胞表面B7-H1低表达,与健康对照无差异;单核细胞表面B7-H1的表达率为(19.17±11.64)%,显著高于健康对照的(7.30±5.49)%(P＜0.01),且B7-H1的表达与患者血浆ALT水平成正相关(r=0.423,P＜0.01).结论 慢性乙肝患者外周血T、B淋巴细胞表面B7-H1低表达,单核细胞B7-H1表达上调,且与ALT水平正相关,提示B7-H1可能与乙肝病毒感染慢性化相关.     

类风湿关节炎患者外周血中糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关基因及其配体的表达和意义

目的:研究糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关基因(GITR)与其配体(GITRL)在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的表达及其与临床指标的相关性,探讨GITR/GITRL 在RA中的意义.方法:采用实时荧光定量PCR法检测RA组(n=53)、骨关节炎(OA)组(n=35)及正常对照组(n=35)外周血GITR/GITRL mRNA含量,同时利用流式细胞仪检测上述三组患者的GITR在CD4 CD25 T细胞的表达,并研究GITR mRNA与RA患者DAS28评分、抗环瓜氨酸(CCP)抗体、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)及类风湿因子(RF)的关系.结果:RA患者外周血GITR mRNA水平和GITRL mRNA水平(分别为12.38±5.72,16.41±10.16)明显高于正常对照组(分别为8.75±3.78,11.99±8.42)及OA组(分别为9.59±5.87,12.09±7.53;均P＜0.05).RA患者与OA组及正常对照组比较,外周血CD4 CD25 GITR T细胞的比例也明显增高[分别为(28.12±16.85)%,(21.01±14.42)%,(19.98±9.40)%,均P＜0.05].RA患者GITR mRNA表达水平与DAS28评分及ESR呈明显正相关(r值分别为0.361和0.427,P＜0.01).结论:RA患者GITR/GITRL表达增多,与RA发病及疾病活动度有关.     

长链非编码RNA在类风湿性关节炎患者和健康人PBMCs中差异表达及其发病机制

目的 探究长链非编码RNA(IncRNA)在类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)和健康人PBMCs中的差异表达,并对其分析以进一步阐明RA的发病机制.方法 选取2016年1-4月在该院风湿免疫科就诊的RA患者22例作为观察组,22例健康人作为对照组.采用Agilent Human IncRNA芯片测定5例RA患者和5例健康人的PBMCs中的In-cRNA和mRNA的差异表达;利用GO以及Pathway分析检测出差异表达的IncRNA的功能分布,构建起IncRNA-mRNA的共表达网络,采用Trans-与Cis-预测其中与RA发病相关的IncRNA.结果 IncRNA在RA患者的PBMCs和健康人的PBMCs中共存在1 623条差异表达,mRNA差异表达则有851条.GO、Pathway分析表明,差异表达的mRNA的主要功能是参与蛋白激酶、核苷酸、金属离子的结合和转录调节,还参与B细胞受体信号通路、TNF信号通路的调节.经过Cis-和Trans-分析预测和Re-al-time PCR验证后找到3个IncRNA可能与RA发病有关,分别为NONHSAT 120696、uc.80+、NONHSAT 031501.结论 IncRNA在RA患者PBMCs和健康人PBMCs中存在差异表达,NONHSAT 120696、uc.80+、NONHSAT 031501 3个IncRNA可能与RA的发病有关.     

致敏小鼠树突状细胞和T细胞Notch配体/受体的表达及大剂量过敏原的影响

目的探讨致敏小鼠Notch信号表达缺陷及大剂量过敏原对其影响。方法RT-PCR法分别检测致敏及正常小鼠树突状细胞Notch配体及T细胞Notch受体的mRNA表达情况,并观察大剂量过敏原作用对其表达的影响。结果（1）致敏小鼠树突状细胞Notch配体Jagged1,Jagged2和Delta1的mRNA表达均显著低于正常小鼠,致敏小鼠T细胞Notch1和Notch3的mRNA表达也显著低于正常小鼠（P〈0.05）。（2）10mg/ml的OVA作用下,Jagged1和Notch3的mRNA表达水平较对照组显著升高（P〈0.05）。结论致敏小鼠Notch信号表达缺陷,大剂量过敏原（10mg/ml的OVA）可上调Jagged1和Notch3表达。     

类风湿关节炎患者外周血Treg细胞及其分泌IL-35水平检测与临床意义

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血中调节性T细胞(Treg)的数量,以及其所分泌的白细胞介素(IL)-35表达水平与RA发病的相关性.方法 采集45例RA患者(RA组),22例骨关节炎(OA)患者(OA组),26例健康体检者(对照组)的外周血,流式细胞术检测CD4+ CD25+ foxp3+ Treg数量,ELISA检测血浆IL-35水平.分析Treg细胞及其表达的IL-35与临床指标间的相关性.结果 RA组外周血中Treg细胞占CD4+T细胞的百分率[(5.65±2.33)％]较对照组[(4.12±1.75)％]明显升高(P＜0.05);OA组与RA组比较,差异无统计学意义(P=0.086).3组对象foxp3平均荧光强度比较,差异无统计学意义(P＞0.05);DAS28评分越高的患者,其外周血Treg细胞数量和foxp3荧光强度越低.RA组血浆IL-35[(34.22±14.35)ng/L]水平明显低于OA组[(78.63±24.58)ng/L]和对照组[(67.56±25.43)ng/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).RA患者Treg细胞数量与红细胞沉降率(ERS)、DAS28评分呈负相关(r=-0.223、-0.343,P=0.023、0.011),而与类风湿因子、C反应蛋白、抗CCP抗体无相关性.结论 RA患者外周血中Treg细胞数量增高,IL-35水平降低;Treg细胞功能缺陷致负调控能力减弱.     

慢性HBV感染者外周血单个核细胞中miR-194-5p和MagT1表达水平检测及其意义

目的：检测慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-194-5p和镁离子（Mg²⁺）转运蛋白1（MagT1）表达水平,阐明其可能的临床意义。方法：收集40例健康体检者（健康对照组）、40例HBV携带者（HBV携带组）、40例轻中度慢性乙型肝炎（轻中度CHB组）和40例重度慢性乙型肝炎（重度CHB组）患者的临床资料。采集各组研究对象外周血并利用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PBMCs,采用RT-PCR法检测各组研究对象PBMCs中miR-194-5p及MagT1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组研究对象PBMCs中MagT1蛋白表达水平,检测各组研究对象外周血和PBMCs中Mg⁺水平,流式细胞术检测各组研究对象PBMCs中CD8+T淋巴细胞表面分子程序性死亡受体1（PD-1）和自然杀伤细胞受体2群D分子（NKG2D）表达水平。在293T细胞中分别转染miR-194-5p mimic质粒（miR-194-5p mimic组）和miR-NC质粒（miR-NC组）,应用双荧光素酶报告基因实验检测2组293T细胞中荧光素酶活性。结果：与健康对照组比较,HBV携带组、轻中度CHB组和重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均明显降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。与HBV携带组和轻中度CHB组比较,重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T细胞表面分子PD-1表达水平降低（P<0.05）。与HBV携带组比较,轻中度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验,MagT1是miR-194-5p靶基因。结论：miR-194-5p可能通过靶向下调MagT1表达,引起MagT1介导的Mg²⁺内流障碍,造成CD8+T淋巴细胞免疫活性降低,导致乙型肝炎慢性发展。     

骨转移瘤患者89SrCl2治疗前后外周血CD4+ CD25+调节性T细胞及Foxp3mRNA的表达变化

目的 探讨骨转移瘤患者89SrCl2治疗前后外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞及Foxp3 mRNA的表达变化.方法 采用流式细胞术检测57例骨转移瘤患者89SrCl2治疗前后外周血CD4+ CD25+调节性T细胞的水平,并与25例健康成人进行比较.同时采用RT-PCR方法检测患者89SrCl2治疗前后及对照组外...