复方丹参滴丸对骨髓基质细胞移植后梗塞大鼠心功能及梗塞面积的影响

目的 探讨复方丹参滴丸(CDDP)干预骨髓基质细胞(BMSC)移植治疗急性心肌梗塞(AMI)后,是否对心功能及梗塞面积改善有促进作用.方法 利用SD大鼠建立AMI模型,体外分离、培养、鉴定同种异体大鼠的BMSC,选用3～4代BMSC,移植于心梗模型大鼠体内,移植后给予不同方法干预.术前、术后4周采用超声心动图检测大鼠心脏结构和功能指标.术后4周,取大鼠心肌组织,氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色,测定心肌梗塞面积.结果 ①术前各组心脏结构和功能指标比较,差异无显著性(P>0.05).术后4周,各手术组舒张末期左室后壁厚度(LVPWd)、收缩末期左室后壁厚度(LVPWs)增大;左室舒张末期内径(LVDd)增大、射血分数(EF)降低,与正常组比较差异显著(P<0.05),其中BMSC移植+G-CSF(粒细胞集落刺激因子)组、BMSC移植+CDDP组增大(EF降低)幅度最小,与模型组比较P<0.05,两组之间比较无显著性差异(P>0.05).②术后4周,各手术组心室肌组织均有不同程度梗塞,各治疗组均有减小梗塞面积的趋势,与模型组比较有显著性差异(P<0.01);BMSC移植+CDDP组、BMSC移植+G-CSF组与BMSC移植组比较梗塞面积减轻程度有显著性差异(P<0.05),两组之间无显著性差异(P>0.05).结论 CDDP可能通过干预大鼠AMI后植入干细胞的成活分化,减小心肌梗塞面积,有益心功能改善.     

静脉移植骨髓间充质干细胞对心衰大鼠心肌细胞cx-43表达的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞移植对阿霉素诱导的心衰大鼠模型心功能及细胞缝隙连接蛋白-43（cx-43）的影响。方法 选取雌性Wistar大鼠（n=38），先随机选取8只作为正常对照组，其余30只通过腹腔注射阿霉素（2．5mg／kg，每周1次，连续6周）建立心衰模型。6周后存活大鼠（n=21）再随机分为细胞移植组（n=11）和移植对照组（n=10）。正常对照组大鼠腹腔注射等量的生理盐水。进行体外分离，纯化，增殖骨髓闻充质干细胞（MSCs）并用含有12％胎牛血清的DMEM培养基培养，采用流式细胞仪对体外培养的MSCs表型CD44进行鉴定。取第三代MSCs进行移植，移植前用5-溴-2’脱氧尿苷（BrdU）进行标记。末次阿霉素注射后1周，将5×10^6个MSCs通过鼠尾静脉注射的方法移植到心衰细胞移植组大鼠。移植对照组大鼠注射等量培养基。细胞移植后4周，采用超声测量心功能及心室重塑，心脏切片行病理免疫组织化学了解移植细胞在受体心脏的存活及cx-43表达情况。结果 体外培养的第三代MSCs流式细胞仪鉴定结果显示：CD44阳性细胞数占（99．7±0．9）％，心衰细胞移植组心肌组织中可以见5-溴-2’脱氧尿苷标记的骨髓间充质干细胞（MSCs）归巢并表达cx-43阳性；左室射血分数细胞移植心衰组、对照组与正常对照组分别为（89．36±3．74）％、（72．93±3．08）％和（97．54±2．30）％（P〈0．05），心衰细胞移植相对于心衰对照组左室心功能有统计学意义（P〈0．05）。结论 经静脉移植骨髓间充质干细胞可以归巢心衰大鼠心肌组织而且改善心功能并影响受体心肌组织细胞表达cx-43。     

丹酚酸B干预对移植骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化相关基因表达的影响

目的探讨中药单体丹酚酸B预处理对急性心肌梗塞（AMI）大鼠移植骨髓间充质干细胞（MSCs）向心肌细胞分化相关基因表达的影响。方法体外分离、培养和纯化大鼠MSCs，含0.3μg／mL丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs24h后，结扎大鼠左冠状动脉，制作大鼠AMI模型，40只大鼠随机分为假手术组，模型组，丹酚酸B预处理细胞移植组，细胞移植组。PT-PCR检测心肌分化相关基因NKX2．5和GATA-4mRNA的表达。结果丹酚酸B预处理细胞移植4w后，NKX2．5和GATA-4mRNA表达量分别为2．256、0．524、1．567、0．287，与模型组比较差异显著。结论丹酚酸B预处理骨髓间充质干细胞移植上调了心肌分化基因NKX2．5和GATA-4mRNA的表达，有可能改善心功能。     

Nrf2参与MSCs调节大鼠梗死心肌氧化应激作用的实验研究

目的 探讨间充质干细胞（MSCs）移植对梗死心肌组织氧化应激反应的调节作用及其机制.方法 建立心肌梗死大鼠模型,利用随机数字表进行随机化分组,分为对照组（n=20）、MSC移植组（n=20）和MSC移植＋HO-1抑制剂组（n=20）.以密度梯度离心并贴壁培养获得骨髓源MSCs,于心肌梗死模型建立后经心肌局部多点注射MSCs悬液;细胞移植后不同时间点以测定血浆以及心肌梗死和梗死交界区组织超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷酰甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平;Western Blot检测Nrf2和HO-1蛋白表达的变化.结果 细胞移植后8 h,3组大鼠梗死组织中SOD、GSH表达量开始下降,72 h时达到最低,以后逐渐开始回升,至两周时恢复接近心肌梗死前水平;同时,细胞移植后梗死组织中脂质氧化终产物MDA水平开始增高,3组均在72 h达到高峰（P〈0.05）,以后开始下降,至2周时降至梗死前水平.细胞移植后各时间点,与对照组比较,MSC移植组SOD和GSH含量下降幅度减小、恢复较快（P〈0.05）,且MDA含量减少（P〈0.05）.对照组梗死心肌组织中Nrf2及HO-1蛋白表达轻微升高,72 h时最显著;而MSC移植组中Nrf2和HO-1蛋白表达显著增高,且升高时间提前至细胞移植后24～72 h,且与对照组比较,细胞移植后24 h和72 h,Nrf2和HO-1表达水平均高于对照组（P〈0.05）;MSC移植＋HO-1抑制剂组与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 心肌梗死后移植MSCs可能通过促进局部Nrf2及其下游抗氧化酶靶基因HO-1蛋白表达而调节梗死心肌的氧化应激反应,进而减轻氧化应激诱导的心肌损伤.     

人脐血单个核细胞静脉移植联合复方丹参滴丸对急性心肌梗死局灶炎症反应的影响

目的观察复方丹参滴丸（CompoundDanshenDrippingPill,CDDP）对急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction,AMI）心肌组织炎症反应的影响,观察人脐血单个核细胞（humanumbilicalcordbloodmononuclearcells,HUCBMCs）静脉移植联合CDDP对家兔AMI心肌组织炎症反应、炎性因子肿瘤坏死因子．仅（TNF．仪）表达及心功能的影响,并探讨其联合治疗对AMl可能的保护机制。方法对40只健康家兔结扎冠状动脉左前降支,制备AMI模型。40只建模成功家兔随机分为4组,即对照组、CDDP组、单纯移植组及联合治疗组,每组10只。对照组：术后24h生理盐水0．5mL耳缘静脉注射,生理盐水5mL,天灌胃;CDDP组：术后24h经耳缘静脉注入生理盐水0．5mL,CDDP270mg／d溶入生理盐水5mL灌胃;单纯移植组：术后24h经耳缘静脉注入含3X10’个绿色荧光蛋白（greenfluorescentpro—tein．GFP）标记HUCBMCs生理盐水0．5mL,生理盐水5mL／天灌胃;联合治疗组：术后24h经耳缘静脉注入含3X10’个GFP标记HUCBMCs的生理盐水0．5mL,C．DDP270mg／d溶入生理盐水5mL灌胃。每组随机选取5只家兔分别于移植术后1、4周超声心动图检测家兔心功能指标,包括左室射血分数（Ieftventricularejectionfraction,LVEF）及左室短轴缩短率（1eftventricularfractionalShorting,LVFS）;HE染色光镜下观察心肌病理变化和白细胞计数;免疫组化检测心肌组织TNF．Ot蛋白表达量;荧光显微镜观测GFP阳性细胞。结果（1）与对照组比较,CDDP组、单纯移植组、联合治疗组术后1、4周心功能指标LVFS及LVEF改善（P〈0．05）,其中联合治疗组心功能指标改善优于单纯移植组、CDDP组（P〈0．05）,而后两组组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）;（2）与对照组比较,CDDP组、单纯移植组、联合治疗组术后1、4周心肌组织白细胞计数及TNF-α蛋白表达均显著减低（P〈0．05）,且联合治疗组心肌组织白细胞计数及TNF—α．蛋白表达均显著低于单纯移植组、CDDP组（P〈0．05）,而后两组组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）;（3）联合治疗组、单纯移植组术后1、4周均可见GFP阳性细胞散在分布于梗死周边区域,且联合治疗组细胞计数多于单纯移植组（P〈0．05）。结论本研究提示HUCBMCs静脉移植联合CDDP治疗AMI,可提高移植细胞在心肌组织内的存活率,并进一步改善心功能。其机制可能与联合治疗减轻心肌局部炎症反应及抑制促炎因子TNF-α蛋白的表达作用增强有关。     

补阳还五汤干预下骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对于脑缺血大鼠神经修复的影响

目的观察中药复方补阳还五汤干预下骨髓间充质干细胞（MSCs）对于缺血性大鼠模型神经修复的影响。方法分空白对照,假手术组,移植组,药物干预移植组。观察12h、2d、7d3个时间点大鼠神经元阳性率及神经生长相关蛋白（GAP-43）的表达。结果药物干预移植组3个时间点神经元阳性表达均高于干细胞移植组,GAP-4312h开始升高,2d达到高峰,7d开始逐渐下降,药物干预移植组表达高于干细胞移植组（均P＜0．05）。结论中药复方补阳还五汤能够提高骨髓基质干细胞移植神经元的阳性表达率。增加神经生长蛋白的表达,促进相关损伤神经的修复。     

丹酚酸B对大鼠骨髓间充质干细胞分化过程中Desmin、α-actin mRNA表达的影响

[目的]探讨丹参单体丹酚酸B（SalB）在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为心肌样细胞的情况及Desmin和d—actinmRNA的表达，确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点。[方法]选用成年近交系Wistar大鼠，利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs，并进行培养扩增。免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定。分别应用10μmol／L5-氮胞苷（5-azacytidine，5-aza）及250μg，LSalB联合5-aza（5-aza＋SalB）对第9代的MSCs进行联合诱导24h，于诱导后第4周，用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测Desmin、α-actinmRNA的表达。[结果]1）第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达，CD34呈阴性表达。2）诱导4周后，细胞体积变小，可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构。5-aza组、5-aza＋SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比，5-aza＋SalB组的Desmin和α—actinm RNA表达明显增强。[结论]SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用。     

养心通脉有效部位方对BMSCs移植心血瘀阻证心肌的实验研究

目的:观察养心通脉部位方(Active Principle Region of Yangxing Tongmai Formula,apr-YTF)对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Mesemchymal Stem Cells,BMSCs)移植心血瘀阻证心肌后分化为心肌样细胞的作用。方法:采用"冠脉结扎法"结合血流变学改变建立大鼠心血瘀阻证模型。然后将大鼠分为(apr-YTF)+BMSCs组、集落刺激因子(rh G-CSF)+BMSCs组、NS+BMSCs组、NS+DMEM组。原代培养大鼠BMSCs,体外溴氮胞苷(5-bromouracil Deoxyriboside Brdu)标记后注射至大鼠心肌,采用双染法观察心肌组织中心肌结蛋白Desmin-Brdu和肌球蛋白重链(Myosin Heavy Chain MHC)-Brdu的表达。结果:apr-YTF干预BMSCs移植心血瘀阻证心肌28 d后经心肌结蛋白Desmin-Brdu抗体染色后,NS+DMEM组梗死边缘未见双染表达,在NS+BMSCs组、(rh G-CSF)+BMSCs和(apr-YTF)+BMSCs组均可有猩红色Brdu抗体和棕色Desmin蛋白的同时表达,其中(rh G-CSF)+BMSCs和(apr-YTF)+BMSCs组阳性细胞计数高于NS+BMSCs组(P<0.05);(rh G-CSF)+BMSCs组和(apr-YTF)+BMSCs组两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:apr-YTF能促使移植于心血瘀阻证心肌环境后BMSCs向心肌细胞的方向分化。     

虫草多糖联合骨髓间充质干细胞移植对肝硬化大鼠MMP-13和TIMP-1表达的影响

目的 探讨虫草多糖联合骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对四氯化碳(CCl4)诱导的肝硬化大鼠MMP-13和TIMP-1表达的影响。方法 取SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、MSCs移植组、虫草多糖组及MSCs移植+虫草多糖组,除正常对照组外所有大鼠皮下注射40 % CCl4橄榄油溶液12周制备大鼠肝硬化模型,MSCs移植组与MSCs移植 虫草多糖组注入绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的MSCs;虫草多糖组、MSCs移植 虫草多糖组在移植后24 h给予虫草多糖悬浊液灌胃,正常对照组、模型组、MSCs移植组给予等量生理盐水灌胃,每天1次。4周末处死大鼠,取肝脏,行冰冻切片荧光检测、肝组织Masson染色、免疫组织化学法检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表达。结果 各治疗组均能减轻肝硬化组织病理改变,减少胶原沉积;与模型组比较,各治疗组MMP-13的表达显著升高(P < 0.05),TIMP1表达下降(P < 0.05);MSCs移植 虫草多糖组与MSCs移植组和虫草多糖组比较,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论 MSCs能迁移定植于受损肝脏,虫草多糖联合MSCs移植能降低肝组织TIMP-1表达,进一步增强MMP-13表达,明显促进胶原降解,减少胶原沉积。     

健脾补肾清肠化湿方对静脉移植MSCs向溃疡性结肠炎大鼠结肠迁移分化的影响

目的:观察健脾补肾清肠化湿方对静脉移植的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向溃疡性结肠炎模型大鼠结肠迁移归巢的影响。方法:体外分离培养SD大鼠MSCs,传至第3代,制备细胞悬液,加入0.78 mg·L-1健脾补肾清肠化湿方共培养,并以4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)荧光标记备用。大鼠分为空白组,模型组,MSCs组,干预MSCs组和联合组。2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,空白组、模型组大鼠尾静脉分别iv 1 m L生理盐水,MSCs组大鼠,iv 1 m L MSCs(1×106个),干预MSCs和联合组大鼠分别尾静脉iv体外中药干预的MSCs(1×106个),联合组再予健脾补肾清肠化湿方13.6 g·kg-1,ig 10 d。第5,10天每组各处死5只大鼠,结肠标本进行大体形态和组织学评估,共聚焦显微镜观察各组DAPI标记MSCs在结肠内迁移情况,免疫组化检测肠干细胞标记物神经细胞RNA结合蛋白(Musashi-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠可见广泛充血水肿,伴糜烂,肉眼可见溃疡形成,提示造模成功。除模型组和正常组外,各移植组结肠组织均能检测到DAPI标记的MSCs,且数量随时间的延长而逐渐增加;各治疗组均能改善大鼠结肠组织大体形态和组织病理,且第10天联合组优于MSCs组(P0.05);各移植组能提高Musashi-1的表达,第10天联合组和干预MSCs组优于MSCs组(P0.05)。结论:健脾补肾清肠化湿方能促进MSCs向结肠溃疡部位的迁移和分化,并能修复受损的结肠黏膜。     

补肾壮骨颗粒含药血清对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：探讨补肾壮骨颗粒含药血清对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞（ MSCs）体外增殖的影响。方法：选用10只6月龄SD大鼠去卵巢制作骨质疏松模型,对骨质疏松骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,传代后的 MSCs分为OP组、OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组和OP＋空白血清组,倒置显微镜观察各组MSCs的生长情况,进行形态学观察,并用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法测定生长曲线。结果：OP＋含药血清组,MSCs呈典型的集落生长,细胞呈长梭形,突起细长且多,细胞增殖较旺盛,细胞数量不断增加,随着传代次数的增多,细胞增殖速度减慢。OP组及OP＋空白血清组MSCs接种后胞体立体感下降,体积较大,细胞偏圆形,突起收缩,增殖速度较慢,细胞数量减少;随着传代次数的增多,细胞增殖速度显著减慢。OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组骨髓间充质干细胞增殖能力明显提高,生长曲线有显著性差异。结论：补肾壮骨颗粒含药血清能促进去卵巢骨质疏松大鼠MSCs的增殖。     

参地糖脉宁对糖尿病大鼠免疫系统的影响

目的观察参地糖脉宁对糖尿病大鼠外周血T淋巴细胞及其细胞因子和免疫器官系数的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为糖尿病组（DM组）、糖尿病阿司匹林干预组（AD组）、糖尿病参地糖脉宁干预组（SD组）、对照纽（NC组）。流式细胞术检测CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T细胞计数，酶联免疫吸附双抗体夹法（ELISA）测定各组大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-6（IL-6），测定并计算免疫器官系数。结果DM组CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T细胞和胸腺指数显著低于NC组（P〈0．01），而IL-6和TNF-α显著高于NC组（P〈0．01）；SD组和AD组的CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T细胞和胸腺指数显著高于DM组（P〈0．05），TNF-α和IL-6显著低于DM组（P〈0．01）；与AD组比较，SD组上述指标有明显改善（P〈0．05）。结论参地糖脉宁对糖尿病大鼠免疫系统有保护作用。     

调补肺肾三法对COPD大鼠T淋巴细胞亚群及CD4+CD25+的影响及远后效应

目的评价调补肺肾（补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾）三法对慢性阻塞性肺疾病（chronicob—structivepulmonarydisease,COPD）大鼠T淋巴细胞亚群及CD4＋CD25＋的影响及远后效应。方法120只大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,每组20只。除对照组外,其余大鼠均采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD模型,于第9周起3个中药组及氨茶碱组分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱灌胃至第20周。分别于第20、32周观察肺组织病理、外周血和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF）中T淋巴细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋）及CD4＋CD25＋的变化。结果第20、32周时,模型组肺组织损伤明显,外周血和BALF中CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋CD25＋水平较对照组明显降低（P〈0．05,P〈0．01）,3个中药组及氨茶碱组上述指标较模型组升高（P〈0．05,P〈0．01）;3个中药组外周血和BALF中CD3＋、CD4＋显著高于氨茶碱组（P〈0．05,P〈0．01）;补肺健脾组外周血CD4＋较补肺益肾组、益气滋肾组升高（P〈0．01）。第20周时,补肺健脾组较氨茶碱组升高（P〈0．01）;3个中药组CD4＋水平较氨茶碱组明显升高（P〈0．05,P〈0．01）。第32周时,3个中药组和氨茶碱组CD4＋／CD8＋水平较模型组升高（P〈0．05）;补肺健脾组和补肺益肾组CD4＋较氨茶碱组升高（P〈0．05,P〈0．01）。与第20周比较,补肺健脾组第32周BALF中CD4＋／CD8＋显著升高（P〈0．05）,益气滋肾组外周血和BALF中CD4＋CD25＋显著降低（P〈0．05）。结论调补肺肾三法治疗COPD的疗效和远后效应机制可能与调节T淋巴细胞亚群及CD4＋CD25＋水平有关,其中补肺健脾方在调节外周血和BALF中CD4＋、CD4＋／CD8＋方面疗效突出。     

左归丸和右归丸对自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响

目的通过观察左归丸与右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型大鼠脑、脊髓组织淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响，探讨滋阴补肾法与温阳补肾法治疗EAE作用机制。方法应用髓鞘碱性蛋白与完全福氏佐剂，按体积比1：1制成抗原并于Lewis大鼠双后足垫下注射，建立EAE模型。120只Lewis大鼠随机分为正常组、模型组、激素组、左归丸组及右归丸组，每组24只，正常组和模型组给予生理盐水灌胃，3mL／（只·d）；激素组免疫后给予生理盐水灌胃，3mL／（只·d），发病后改为醋酸泼尼松混悬液灌胃，5mg／（kg·d）；左归丸组免疫后给予左归丸混悬液，2g／（kg·d）；右归丸组免疫后给予右归丸混悬液，3g／（kg·d）。直至处死。分别于急性期（免疫后15d）和缓解期（免疫后27d）随机选取各组大鼠，取脑和脊髓组织切片进行CD4^＋、CD8^＋、CD3^＋、CD19^＋免疫组化染色。结果造模后第15日及第27日，模型组脑和脊髓组织中CD4^＋免疫组化表达均较正常组升高（P〈0．01），CD8^＋表达降低（P〈0．05），CD4^＋／CD8^＋比值升高（P〈0．01）；同模型组比较，左归丸组、右归丸组、激素组CD4^＋免疫组化表达均降低（P〈0．01），且在造模后第27日，左归丸组和右归丸组脊髓组织CD4^＋表达较激素组显著降低（P〈0．01）；造模后第15日，右归丸组和激素组CD8^＋表达较模型组升高（P〈0．01），造模后第27日，左归丸组和激素组CD8^＋表达较模型组升高（P〈0．01）；不同时点激素组、左归丸组及右归丸组CD4^＋／CD8^＋比值均显著低于模型组（P〈0．05）；造模后第15日及第27日，模型组中枢神经系统CD19^＋免疫组化表达均较正常组升高（P〈0．01），急性期左归丸组、右归丸组、激素组脊髓组织CD19^＋表达较模型组降低（P〈0．01），缓解期则见左归丸组和右归丸组CD19^＋表达减少（P〈0．01）。结论EAE大鼠CD4^＋／CO8^＋比值升高，这在EAE发病中发挥重要作用。滋阴补肾法和温阳补肾法可下调CD4^＋表达，下调CD4^＋／CD8^＋比值来治疗EAE。     

蓬草除痹汤对类风湿关节炎免疫调节作用的实验研究

目的观察蓬草除痹汤(PCCB)对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型外周血中细胞因子IL-17、IL-1β、TNF-α及T细胞亚群CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T的干预作用,探讨PCCB治疗类风湿关节炎(RA)的抗炎免疫作用机制。方法建立CIA大鼠模型,随机分为PCCB组、雷公藤组、空白组及模型组,连续给药28 d,采用酶联免疫吸附(ELISA)法、流式细胞术评价PCCB对CIA大鼠关节炎指数(AI)及大鼠血清IL-17、IL-1β、TNF-α和CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T表达的影响。结果治疗28 d后,PCCB组、雷公藤组关节肿胀度及AI显著改善(P均0.01);血清IL-17、IL-1β、TNF-α水平明显降低(P均0.01);CD4+T降低,CD8+T升高,CD4+T/CD8+T显著降低,且PCCB组的抑制作用明显优于雷公藤组(P0.05)。结论 PCCB能有效改善CIA大鼠关节炎指数,下调大鼠血清中致炎因子IL-17、IL-1β、TNF-α的水平,调节大鼠血清中CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T比例,这可能是PCCB治疗RA的主要机制,为临床应用及进一步研究奠定了基础。     

祛痰通络中药对大鼠脑梗死后原位干细胞增殖 分化及神经功能恢复的影响

目的：观察大鼠脑梗死后脑内自体神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）的增殖、迁移与分化以及祛痰通络中药对其影响。方法：Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组（N组）、生理盐水组（A组）、祛痰通络中药治疗组（B组）,比较各组大鼠在脑梗死模型建立后24h、3天、7天、14天各时间点神经功能缺损评分,并应用免疫组化法检测并比较各时间点自体神经干细胞增殖情况、免疫荧光双标后观察增殖干细胞的分化情况。结果：脑梗死后第14天祛痰通络中药治疗组评分低于生理盐水组（P〈0.05）,第3天开始增殖细胞、第7天开始分化为神经元样细胞数均多于A组（P〈0.05）。结论：祛痰通络中药可促进脑梗死后自体神经干细胞的增殖并且更多的分化为神经元,从而促进脑梗死大鼠的神经功能恢复。     

舒心通脉方对心肌重构小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的 观察舒心通脉方对心肌重构小鼠T淋巴细胞亚群的影响.方法 将51只Balb/c小鼠随机分为6组（正常组、正常加中药中剂量组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组）,采用腹主动脉结扎法建立心肌重构小鼠模型.予舒心通脉方灌胃干预30d,检测血清与心肌CD4＋和CD8＋含量.结果 模型组小鼠血清与心肌的CD4＋含量以及CD4＋/CD8＋值较正常组显著降低（P＜0.05）,中药中、高剂量组血清与心肌的CD4＋含量以及CD4＋/CD8＋值较模型组显著上升（P＜0.05）.结论 舒心通脉方可调节心肌重构小鼠的CD4＋/CD8＋失衡,可能有一定的改善心肌重构作用.     

腹安汤对腹泻型肠易激综合征大鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的:观察腹安汤对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)大鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的影响。方法:48只Wistar大鼠随机分成正常组,模型组,腹安汤高、中、低剂量组、得舒特组;用寒冷-束缚刺激法制备腹泻型肠易激综合征大鼠模型;采用流式细胞仪检测各组大鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群水平。结果:给药7天后,模型组与正常组比较,大鼠血中CD4+水平及CD4+/CD8+比值降低,CD8+水平升高,差异有统计学意义(P0.05);腹安汤高、中、低剂量组及得舒特组与模型组比较,血中CD4+水平及CD4+/CD8+比值升高,CD8+水平降低,差异有统计学意义(P0.05);各组大鼠CD3+变化均无统计学意义(P0.05)。结论:腹安汤可升高腹泻型肠易激综合征大鼠外周血中CD4+水平及CD4+/CD8+比值,降低CD8+水平,从而提高和改善细胞免疫功能,达到治疗D-IBS的目的。     

益气解毒方对中晚期鼻咽癌患者CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞的影响

目的探讨益气解毒方对中晚期鼻咽癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞的影响。方法用流式细胞仪检测18例经益气解毒方加常规治疗的中晚期鼻咽癌患者(观察组)及l5例常规治疗的中晚期鼻咽癌患者(对照组)外周血CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞比例,RT-PCR法检测Foxp3 mRNA和ROR-γt mRNA转录水平,ELISA法检测血清白细胞介素-6(IL-6)和转化生长因子-β(TGF-β)水平。结果观察组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例和Foxp3 mRNA的相对表达量均低于对照组(P0.05),而Th17细胞占CD4+T细胞的数量比例和ROR-γt mRNA的相对表达量均高于对照组(P0.05);观察组患者血清IL-6水平高于对照组(P0.05),而TGF-β水平低于对照组(P0.05)。结论益气解毒方可影响中晚期鼻咽癌CD4+CD25+调节性T细胞的比例与功能,增强Th17细胞的分化,其机制可能是通过调节IL-6和TGF-β水平而逆转鼻咽癌免疫耐受。