补肾方药对老年大鼠学习记忆退化的影响

目的:从糖皮质激素受体-脑源性神经营养因子-NMDAR(GCR-BDNF-NMDAR)信号转导通路角度,探讨老年大鼠学习记忆退化的分子机制及补肾方药——左归丸、右归丸的调整作用。方法:以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,随机分为老年对照组、老年皮质酮(GC)拮抗组、老年左归组和老年右归组,另设一组青年对照组(5月龄)。采用ELISA法检测大鼠血清皮质酮含量、Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力、电生理方法记录在体大鼠LTP变化,Western Blot及免疫组化法观察大鼠学习记忆相关信号转导蛋白表达变化,同时观察补肾方药对上述指标变化的改善作用。结果:与青年对照组相比,老年大鼠血清皮质酮含量显著升高、空间学习记忆能力显著下降(P0.05)、海马CA1区LTP明显受到抑制、与学习记忆相关的信号分子蛋白表达均明显降低(P0.05),左归丸、右归丸能不同程度地改善上述指标的衰老性变化。结论:左归丸、右归丸改善老年大鼠增龄性学习记忆退化的部分机制可能与提高GCR、BDNF、NMDAR、钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、CAMP反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达,拮抗高水平皮质酮对大脑海马区域的毒性作用有关。     

补肾方药对衰老大鼠海马学习记忆相关基因BDNF及其受体TrkB mRNA表达的影响

目的:观察补肾方药左归丸、右归丸对衰老大鼠海马学习记忆相关基因脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB mRNA表达的影响,探讨老年大鼠学习记忆功能减退的部分分子机理,以及左归丸、右归丸的改善作用。方法:以自然衰老SD大鼠为动物模型,随机分设4组:青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用原位杂交技术,观察各组大鼠大脑切片海马各分区(CA1、CA2、CA3、DG)BDNF、TrkB mRNA表达变化。结果:与青年对照组相比,老年对照组大鼠海马各分区的BDNF、TrkB mRNA表达均明显减弱(P<0.05),而左归丸、右归丸能不同程度地提高老年对照组大鼠海马DG、CA1、CA2、和CA3分区低下的BDNF、TrkB mRNA的表达。结论:老年大鼠的学习记忆功能退化,与学习记忆相关的基因BDNF、Trk B表达异常有关。而滋补肾阴方药左归丸、温补肾阳方药有归丸能通过提高BDNF、TrkB基因的表达,进而改善老年大鼠的学习记忆功能,延缓机体衰老。     

左归丸、右归丸对衰老大鼠海马学习记忆相关基因BDNF mRNA表达的影响

目的:观察左归丸、右归丸对衰老大鼠海马学习记忆相关基因脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic fac-tor,BDNF) mRNA表达的影响,探讨老年大鼠学习记忆功能减退的部分分子机理,以及左归丸、右归丸的改善作用。方法:以自然衰老SD大鼠为动物模型,随机分设4组:青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用原位杂交技术,观察各组大鼠大脑切片海马各分区(DG、CA1、CA2、CA3)BDNF mRNA表达变化。结果:与青年对照组相比,衰老大鼠海马各分区的BDNF mRNA表达均明显减弱,而左归丸、右归丸能不同程度地提高老年大鼠海马DG、CA1、和CA3分区低下的BDNF mRNA的表达。结论:老年大鼠的学习记忆功能退化,与学习记忆相关的基因BDNF表达异常有关。而滋补肾阴方药左归丸、温补肾阳方药右归丸能通过提高BDNF基因的表达,进而改善老年大鼠的学习记忆功能。     

左归丸和右归丸对皮质酮所致大鼠海马神经细胞病理模型学习记忆相关信号转导蛋白表达的影响

目的:观察左归丸和右归丸含药鼠血清对皮质酮所致大鼠海马神经细胞病理模型学习记忆相关信号转导蛋白表达的影响。方法:体外采用高浓度皮质酮(10-4M)处理细胞制作皮质酮损伤型大鼠海马病理细胞模型。采用Westernblot和免疫细胞化学法观察模型细胞与学习记忆相关的信号转导蛋白表达变化及左归丸和右归丸含药鼠血清的干预作用。结果:与空白对照组比较,皮质酮模型组细胞与学习记忆相关的信号转导分子pCaMKII、pCREB、pERK、pCREB和Arc蛋白表达、以及相关受体蛋白GR、MR、TrkB、NR1的表达均明显降低(P<0.05);与皮质酮模型组比较,含10%浓度的左归丸和右归丸鼠血清对模型细胞上述各项指标的异常变化均有显著改善作用(P<0.05)。结论:补肾方药—左归丸和右归丸能够改善高浓度皮质酮所致的海马神经细胞内学习记忆相关信号转导蛋白的异常表达。     

左归丸、右归丸对老年大鼠下丘脑氨基酸类神经递质受体表达的影响

目的:观察左归丸、右归丸对老年大鼠下丘脑NMDAR1、GABAARα1蛋白表达的影响。方法:以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,老年左归丸组和老年右归丸组从20月龄起分别服用左归丸和右归丸药液,另设老年对照组、青年对照组(5月龄)。采用Western-blot法检测各组大鼠下丘脑NMDAR1、GABAARα1蛋白表达变化。结果:与青年对照组相比,老年对照组大鼠下丘脑NMDAR1、GABAARα1表达均明显降低,左归丸和右归丸均能显著提高下丘脑NMDAR1、GABAARα1蛋白表达水平。结论:左归丸和右归丸能通过调整下丘脑氨基酸类神经递质受体表达,改善中枢神经系统功能。     

补肾益气方药对老年大鼠空间学习记忆能力及相关蛋白表达的影响

目的观察补肾方药(左归丸)、益气方药(益气聪明汤)及两方合用(合剂)对老年大鼠血清皮质酮水平、海马长时程增强(LTP)、空间学习记忆能力及突触蛋白I(Synapsin-I)表达变化的影响。方法以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,随机分为老年对照组、老年左归组、老年益气组、老年合剂组和老年皮质酮(GC)拮抗组,另设青年对照组(同品系5月龄SD雄性大鼠)。采用ELISA法检测大鼠血清皮质酮含量,Morris水迷宫法观察各组大鼠空间学习记忆能力,电生理方法记录各组大鼠在体LTP变化,Western blotting法检测各组大鼠海马组织Synapsin-I表达变化,同时观察左归丸、益气聪明汤及合剂对上述指标异常变化的改善作用。结果与青年对照组相比,老年对照组大鼠的血清皮质酮含量明显升高(P0.05),空间学习记忆能力显著下降,海马CA1区LTP明显受到抑制(P0.05),Synapsin-I表达明显降低(P0.05);左归丸、益气聪明汤及合剂均能不同程度改善上述指标的异常变化,但合剂对Synapsin-I表达量变化的影响无统计学意义。结论补肾方药左归丸、益气方药益气聪明汤可增加老年大鼠突触可塑性(LTP)和Synapsin-I蛋白表达,进而改善老年大鼠空间学习记忆能力,可能与拮抗高皮质酮对老年大鼠海马神经细胞结构与功能的损伤有关。     

补肾方药对老年大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质所属组织结构形态变化的影响

目的:观察左归丸、右归丸对老年大鼠HPA轴所属组织形态结构变化的影响。方法:以自然衰老大鼠为肾虚证动物模型,HE染色,光镜观察HPA轴所属组织结构的增龄性变化,以及补肾方药(左、右归丸)的改善作用。结果:老年大鼠垂体、下丘脑、肾上腺皮质组织形态结构呈现明显的老年性退化,左归丸、右归丸能不同程度改善这些组织结构。结论:左归丸、右归丸能从组织结构形态方面延缓下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴的老年性变化。     

左归丸和右归丸对老年大鼠杏仁核促肾上腺皮质激素释放激素表达与HPA轴活性作用的实验研究

目的 观察老年大鼠杏仁核促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)表达和血清皮质酮(CORT)含量变化和左归丸、右归丸对其的影响,探索老年肾虚大鼠CRH多肽表达与下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴活性的相关性及左归丸和右归丸的作用.方法 以自然衰老SD雄性大鼠(24月龄)为肾虚衰老模型,大鼠随机分为老年对照组、左归丸组和右归丸组,每组35只,另设青年对照组(5月龄)35只,共4组.老年对照组大鼠常规喂养至24月龄.左、右归丸组大鼠自20月龄始,均按相当于左、右归丸生药7.5g·kg-1(成人临床用量的15倍)自由饮用稀释药液,每周停药2 d,连续4个月;采用Western Blot检测大鼠杏仁核CRH多肽表达, 放免检测血清CORT含量.结果 与青年对照组比较,老年对照组大鼠杏仁核CRH多肽表达及血清CORT含量显著增高(P＜0.05),与老年对照组相比,左归丸组及右归丸组大鼠杏仁核CRH多肽表达及血清CORT含量显著下降(P＜0.05).结论 左归丸、右归丸通过调节杏仁核CRH多肽表达进而调节衰老大鼠HPA轴功能.     

补肾方药对D-半乳糖致衰大鼠心肌组织氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:观察补肾方药对D-半乳糖致衰大鼠心肌组织氧化应激及细胞凋亡的影响。方法:2 months雄性SD大鼠40只,随机分为青年对照组、衰老组、左归丸组、右归丸组,每组10只。衰老组每日腹腔注射D-半乳糖400mg·kg-1,连续60天;青年对照组每日腹腔注射等体积生理盐水;左归丸组和右归丸组处理同衰老组,同时分别按每日相当生药量4.97g·kg-1和4.94g·kg-1灌胃给药。采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸(TBA)法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;采用Western Blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平并测定组织Caspase-3相对活性。结果:与青年组对照组相比,D-半乳糖致衰组大鼠心肌组织SOD活性下降、MDA含量升高,Bcl-2蛋白表达下调、Bax蛋白表达上调,Caspase-3活性升高;给予左归丸、右归丸能显著改善D-半乳糖致衰大鼠心肌组织氧化应激水平,减少细胞凋亡。结论:补肾方药左归丸、右归丸可通过提高抗氧化能力和减少细胞凋亡而发挥其延缓心肌组织衰老的作用。     

补肾方对自然衰老大鼠海马组织Nestin和Ki-67蛋白表达的影响

目的观察自然衰老大鼠海马组织Nestin和Ki-67蛋白表达变化及补肾方作用,探索衰老与海马NSCs变化的相关性及补肾方延缓衰老的作用机理。方法 SD雄性大鼠,SPF级,分为老年组、左归丸组、右归丸组和青年组,共4组。常规喂养饲料,自由饮水。老年组大鼠常规喂养至24月龄;左归丸组和右归丸组大鼠自20月龄始,每天分别喂以含有左归丸和右归丸生药7.5g/kg的饲料,连续4个月。采用Western blot法检测大鼠海马组织Nestin和Ki-67蛋白表达。结果与青年组大鼠比较,老年组大鼠海马组织Nestin和Ki-67蛋白表达均下调(P0.05);与老年组比较,左归丸组和右归丸组大鼠海马组织Nestin和Ki-67蛋白表达均上调(P0.05)。结论自然衰老大鼠海马NSCs分裂和增殖能力减弱,左归丸和右归丸通过上调海马组织Nestin和Ki-67蛋白的表达,进而促进NSCs的增殖可能是其延缓衰老的机理之一。     

左归丸、右归丸对老年大鼠海马糖皮质激素受体mRNA表达的影响

目的：观察左归丸、右归丸对老年大鼠海马糖皮质激素受体（GR）mRNA表达的影响，探讨海马对下丘脑－垂体－肾上腺（HPA）轴的调节作用，以及左归丸、右归丸延缓老年大鼠神经内分泌调控退的作用机制。方法：以自然衰老大鼠为动物模型，采用原位杂交法，观察药物对大鼠海马各分区（DG、CA1、CA2、CA3）GRmRNA表达变化，结果：老年大鼠海马各分区GRmRNA表达均明显减弱，而左归丸、右归丸能不同程度地提高老年大鼠海马DG、CA1和CA3分区低下的GRmRNA的表达，结论：左归丸、右归丸通过提高GRmRNA表达，进而改善海马对HPA轴的抑制性调控作用，以延缓机体衰老。     

左、右归丸对去卵巢骨质疏松症大鼠模型骨密度及骨代谢的影响

目的:观察左、右归丸对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度及骨代谢的影响。方法:通过切除6月龄SPF级SD雌性大鼠双侧卵巢的方法建立绝经后骨质疏松症大鼠模型。造模10周后,将80只模型大鼠随机分为左归丸高、中、低剂量组(n=10),右归丸高、中、低剂量组(n=10),阳性药组(n=10),模型组(n=10),造模时只切除腹腔内部分脂肪组织而未切除卵巢的实验大鼠设为假手术组(n=10),并分别ig给予相应药物或蒸馏水,各给药剂量分别为左、右归丸高剂量组20 g·kg-1·d-1;左、右归丸中剂量组10 g·kg-1·d-1;左、右归丸低剂量组5 g·kg-1·d-1;阳性药组为戊酸雌二醇片0.1 mg·kg-1·d-1;假手术组和模型组ig 10 m L·kg-1·d-1生理盐水。干预10周后,检测实验大鼠股骨骨密度(BMD)、骨组织形态学改变,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)、骨保护素(OPG)的含量。结果:与假手术组相比较,模型组大鼠BMD,OPG显著降低,而BALP,OC显著升高(P0.05),其病理改变与绝经后骨质疏松症患者改变一致;与模型组相比较,左、右归丸干预组大鼠BMD增加,骨组织形态改善,血清OPG含量升高、血清BALP,OC含量降低(P0.05)。结论:左、右归丸能够抑制骨吸收,纠正骨代谢失衡对绝经后骨质疏松症具有一定的治疗作用。     

补肾方药对老年大鼠下丘脑-垂体-肾上腙皮质所属组织结构形态变化的影响

目的：观察左归丸、右归丸对老年大鼠HPA轴所属组织形态结构变化的影响。方法：以自然衰老大鼠为肾虚证动物模型，HE染色，光镜观察HPA轴所属组织结构的增龄性变化，以及补肾方药（左、右归丸）的改善作用。结果：老年大鼠垂体、下丘脑、肾上腺皮质组织形态结构呈现明显的老年性退化，左归丸、右归丸能不同程度改善这些组织结构。结论：左归丸、右归丸能从组织结构形态方面延缓下丘脑-垂体-肾上腺皮质（HPA）轴的老年性变化。     

左归丸对大鼠卵泡发育与卵巢血管生成的影响

目的:探讨左归丸对大鼠卵巢卵泡发育与血管生成的影响.方法:将SD大鼠(160～170 g)随机分为空白对照组(A组)、结合雌激素组(B组)、左归丸成药低(C组)、高剂量组(D组)、左归丸浸膏低(E组)、高剂量组(F组),各组n=10.分别灌服蒸馏水20 g·kg-1、结合雌激素混悬液65μg·kg-1、左归丸混悬液1.875,5.625 g·kg-1、左归丸浸膏相当于生药11,33 g·kg-1,每日1次,连续15d.计数大鼠卵巢各级卵泡及黄体;计算生殖器官(卵巢、子宫及阴道)脏器指数;采取酶免疫分析法测定血清雌二醇(E2)水平.将大鼠随机分为空白对照组、结合雌激素组(65μg·kg-1)、左归丸成药组(5.625 g·kg-1)、左归丸浸膏组(相当于生药33 g·kg-1),各组n=6.应用墨汁灌注法观察卵巢血管.结果:D,F,B组均可增加大鼠窦状卵泡数(21.70±10.40,15.60±2.22,15.60±8.04)个及卵泡总数(32.10±11.57,25.30±5.06,29.10±18.62)个,B～F组均可增加大鼠卵巢指数(0.68±0.11,0.55±0.05,0.68±0.08,0.61±0.10,0.68±0.03),D～F,B组均可提高大鼠血清E2水平(86.92±5.05,68.98±9.19,87.16±10.37,87.39±12.81)ng·L-1,均P＜0.01或P＜0.05.结合雌激素组、左归丸成药组、左归丸浸膏组的卵巢血管密度和管腔明显增大.结合雌激素组、左归丸浸膏组组可增加卵巢小血管数(13.33±2.50,13.17±3.87)个,结合雌激素组、左归丸成药组、左归丸浸膏组均可增加大鼠卵巢大血管数(33.00±5.44,34.33±8.59,35.83±7.63)个及血管总数(46.33±7.82,45.00±10.84,49.33±11.11)个,P＜0.05或P＜0.01.结论:左归丸可促进160～170 g大鼠卵泡发育和卵巢血管生成,其促卵泡发育作用与提高雌激素水平、增加雌激素样效应及增加卵巢血管数有关.左归丸浸膏较成药丸剂作用更明显.     

补肾方对自然衰老大鼠海马CA1区GR、MR基因mRNA表达的影响

目的从海马GR、MR基因mRNA表达的变化探讨自然衰老的机理及补肾方的作用机制。方法以自然衰老SD雄性大鼠（24月龄）为肾虚模型,左归丸和右归丸进行干预,大鼠自20月龄始,左归丸、右归丸均按相当于生药7.5g.kg-1（成人临床用量的15倍）自由饮用稀释药液,每周停药2天,连续4个月;原位杂交检测海马CA1区神经元GR、MR基因mRNA表达。结果与青年组比较,老年组大鼠海马CA1区GR、MR mRNA表达水平均下降（P〈0.05）;与老年组比较,左归组和右归组大鼠海马CA1区GR、MR mRNA表达水平均升高。差异均有显著性（P〈0.05）。结论大鼠衰老与海马GR、MR mRNA表达变化密切相关,补肾方可通过调节海马CA1区神经细胞GR、MR基因mRNA的表达,改善海马功能、延缓机体衰老。     

右归丸对实验性甲状腺功能减退大鼠骨骼肌GluT4 mRNA表达水平的影响

目的：研究温阳补肾中药右归丸对实验性甲状腺功能减退症大鼠的治疗作用及对骨骼肌葡萄糖转运蛋白4（GluT4 mRNA表达的影响。方法：采用丙基硫氧嘧啶灌胃给药造成实验性甲减大鼠模型．然后给予不同的治疗方案．治疗8周后处习大鼠，取血检测甲状腺功能，取肌肉组织检测GluT4 mRNA表达量。结果：模型组大鼠骨骼肌GluT4 tuRNA表达显著降低．约相当于正常表达水平的14．37％。治疗后右归丸中剂量组、右归丸高剂量组、中西药合用组GluT4 mRNA表达明显提高，大至恢复正常范围；而西药组、右归丸低剂量组、自拟方组与模型组相比无明显变化。结论：右归丸能上调甲减大鼠骨骼肌GluT4 mRNA表达水平，促进骨骼肌对葡萄糖的转运，从而改善骨骼肌细胞的能量代谢．这可能是中药能有效治疗甲状腺功能减越症的作用机理之一。