毛细支气管炎患儿外周血CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的检测及其意义

目的探讨毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的表达,在毛细支气管炎发生发展机制中的作用。方法用流式细胞术检测48例毛细支气管炎患儿及19例健康对照者外周血中CD4+CD25+Treg的表达水平。结果毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的百分比明显低于健康对照组(P<0.01)。结论毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+Treg数量减少,这种细胞免疫功能失调可能与其免疫学发病机制有关。     

狼疮方对体外扩增小鼠CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:狼疮方对体外扩增小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的影响。方法:免疫磁珠法分离狼疮方治疗组与未治疗组小鼠CD4+CD2+5T细胞;通过流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞Foxp3表达情况;用抗CD3和抗CD28包被的微珠来进行刺激,体外扩增小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞;用CFSE法检测CD4+CD25+调节性T细胞体外抑制CD4+CD2-5T细胞的增殖情况。结果:经抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激后,在TGF-β1和IL-2存在的环境中CD4+CD25+T细胞数量明显升高,扩增后的CD4+CD25+T细胞高表达Foxp3。与此同时,经狼疮方处理后的小鼠CD4+CD25+T细胞扩增后数量增加133.3±18.9倍,未经狼疮方处理的对照细胞数量增加104.7±10.8倍,两者比较有显著性差异(P0.05)。狼疮方治疗组与未治疗组中分离的CD4+CD2+5T细胞和扩增的CD4+CD25+T细胞对CD4+CD2-5T细胞的增殖皆有明显抑制作用,荧光强度分别为32.1±4.8,33.1±4.9,30.1±3.8,32.9±4.2。结论:狼疮方有助于提高小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的扩增效率,扩增的CD4+CD25+调节性T细胞表达Foxp3,具有体外免疫抑制功能。     

肺岩宁方对晚期非小细胞肺癌患者血清调节性T细胞CD_4~+CD_(25)~+的影响

目的:观察益气养精的中药方剂肺岩宁方对晚期非小细胞肺癌患者血清调节性T细胞CD4+CD25+、CD3、CD4、CD8、NK水平以及中医证候的影响。方法:30例确诊为Ⅲa、Ⅲb、Ⅵ期非小细胞肺癌患者,中医辨证为精气亏虚型,中药肺岩宁方治疗2个月,观察患者血清CD4+CD25+、CD3、CD4、CD8、NK以及中医证候的变化。结果:肺岩宁方可以提高晚期非小细胞肺癌患者CD3、CD4及NK细胞水平,同时显著降低CD4+CD25+调节性T细胞水平,对中医证候改善的总有效率为87%,同时观察到治疗前后中医证候积分与CD4+CD25+调节性T细胞水平具有正相关性。结论:肺岩宁方可以明显改善患者细胞免疫功能,这可能是肺岩宁方抑制肿瘤生长以及抗侵袭转移的作用机制之一。     

增血汤联合生血散对特发性血小板减少性紫癜患者外周血CD4^＋T淋巴细胞表面FasL和Fas的影响

目的：观察增血汤联合生血散对特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血CD＋4T淋巴细胞表面FasL和Fas的影响,并评价其在ITP机制研究和治疗中的价值。方法：收集ITP患者26例作为治疗组,同时取35例健康体检者为对照组,应用流式细胞仪检测对照组及ITP患者治疗前后外周血CD＋4T淋巴细胞表面FasL和Fas的水平。结果：对照组及接受以上治疗后ITP患者外周血FasL水平明显低于未治疗者,两者有显著性差异（P〈0.05）,而Fas水平无明显变化。结论：ITP患者外周血淋巴细胞表达FasL增高,增血汤联合生血散可显著减少此类细胞表达,为治疗ITP提供新的方法。     

补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎患者外周血CD4~+T淋巴细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 观察补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4~+T细胞的调节作用.方法 将30例AS患者随机分为补肾强脊颗粒组和柳氮磺吡啶(SASP)组各15例,在治疗前和治疗后12周后分别采集两组患者外周血,分离CD4~+T细胞,采用RT-PCR测定细胞凋亡相关基因Fas、FasL及Bcl-2、Bax mRNA的表达.结果 补肾强脊颗粒可促进AS患者外周血CD4~+T淋巴细胞Fas、FasL的表达(P＜0.05或P＜0.01),而对Bcl-2、Bax的表达无明显影响.结论 补肾强脊颗粒可能是通过Fas-FasL途径影响CD4~+T细胞的激活诱导的细胞凋亡作用.     

异基因脐血干细胞穴位移植对类风湿关节炎大鼠外周血CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:观察异基因脐血干细胞(h UCBSCs)穴位移植对类风湿关节炎大鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的干预作用及相关机制。方法:先进行脐血CD34+细胞分选,将100只大鼠随机分为正常对照组、模型组对照组、h UCBSC尾静脉注射治疗组、h UCBSCs外关穴注射治疗组、甲氨喋呤(MTX)灌胃治疗组,每组20只。采用邓安梅法建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型。于大鼠免疫后第31天(除正常组及模型组用等体积蒸馏水)向外关穴、尾静脉注射0.5 m L氯化钠注射液和0.5m L h UCBSCs悬液(含干细胞2×107/m L),4周后采用流式细胞仪,对外周血CD4+CD25+细胞的百分含量及其在CD4+T淋巴细胞中所占的比例进行检测。结果:h UCBSCs外关穴注射治疗组外周血CD4+CD25+细胞的百分含量及其在CD4+T淋巴细胞中所占的比例与甲氨喋呤组比较明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),h UCBSC尾静脉注射治疗组与甲氨喋呤组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论:h UCBSCs外关穴穴位注射治疗可能通过上调CD4+CD25+调节性T细胞水平,抑制关节炎症和关节骨破坏吸收,有助于类风湿关节炎的治疗。     

中药复方对免疫性疾病中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞是机体内主要发挥免疫耐受作用的T细胞功能群,通过细胞间直接接触、分泌抑制性细胞因子等多种途径发挥作用。近年来国内外研究发现:中药复方对系统性红斑狼疮、复发性流产、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、支气管哮喘、免疫性血小板减少性紫癜、肿瘤及慢性乙型肝炎等免疫相关性疾病中的CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞有明显的影响,通过其表达的上调、下调或功能的抑制、激活,从而影响疾病的发生、发展和转归。     

CD_4~+CD_(25)~+Treg细胞介导的肿瘤免疫机制探析

机体抗肿瘤免疫包括体液免疫和细胞免疫,T淋巴细胞介导的细胞免疫为抗肿瘤免疫的主要方式,其中,CD4+CD25+Treg细胞与肿瘤的免疫逃避与耐受密切相关,同时也是维持自身内环境稳定不可缺少的因素之一。拟通过分析CD4+CD25+Treg细胞的生物学特点,初步阐释CD4+CD25+Treg细胞与肿瘤免疫的相关性及其介导肿瘤免疫的可能机制,为CD4+CD25+Treg细胞在肿瘤免疫上提供前期研究基础。     

升血小板胶囊对免疫性血小板减少性紫癜CD_4~+CD_(25)~+Treg细胞的影响

目的:探讨升血小板胶囊对免疫性血小板减少性紫癜患者外周血CD+4CD+25Treg细胞计数和分泌因子水平的影响。方法:选取医院收治的免疫性血小板减少性紫癜患者66例,以随机数字法分为两组;对照组常规泼尼松治疗,观察组在对照组的基础上服用升血小板胶囊,对比临床疗效;并分别于治疗前后抽取患者空腹静脉血,以流式细胞法测定CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞计数,以ELISA试剂盒测定IL-10及TGF-β1血清含量。结果:两组患者的总有效率无显著差异,但观察组的整体临床疗效和显效率均显著高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞计数比和血清IL-10、TGF-β1血清含量无显著差异(P>0.05);治疗后,两组患者各项指标均有不等程度的升高,且观察组显著高于对照组(P<0.05)。结论:CD+4CD25调节性T细胞数量减少或功能缺陷可能参与了免疫性血小板减少性紫癜的发病进程,升血小板胶囊可能能够通过该环节发挥治疗作用。     

补肺液对哮喘豚鼠脾脏CD_4~+CD_(25)~+Tr细胞数量的影响

目的:观察不同剂量补肺液灌服对哮喘豚鼠体内脾脏CD4+CD+25Tr(CD4+CD2+5Tregulatorycell,+CD4CD+25调节性T细胞)细胞的影响。方法:将50只SPF清洁级豚鼠随机分为5组,分别为模型组(A)、正常对照组(B)、低剂量补肺液组(C)、中剂量补肺液组(D)和高剂量补肺液组(E),除B组外各组均进行哮喘造模,采用流式细胞仪检测豚鼠脾细胞悬浊液中CD+4CD2+5Tr细胞数量。结果:模型组哮喘豚鼠脾脏细胞悬浊液中CD4+CD2+5Tr细胞数量明显降低(P0.01),给予补肺液后各组豚鼠脾细胞悬浊液中CD+4CD+25Tr细胞数量明显升高,其中B组与E组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:哮喘豚鼠脾细胞悬浊液中CD+4CD2+5Tr细胞数量减少,补肺液可有效提高+CD4CD2+5Tr细胞数量,调节其免疫,且给药剂量与细胞数量呈正相关。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞与妊娠期高血压病子痫前期发生关系的探讨

目的:观察具有免疫抑制作用的CD4+CD25+T细胞的数量以及相关因素雌激素与妊娠期高血压病子痫前期发生的关系。方法:流式细胞技术分析,测定CD4+CD25+T细胞的数量,放射免疫测定血清雌激素。结果:妊娠期高血压病子痫前期患者,其CD4+CD25+T细胞的数量减少,且血雌三醇水平有不同程度的降低。结论:①CD4+CD25+T细胞数量的改变在妊娠期高血压病的发病机制中起重要的作用。②雌激素能帮助维持免疫耐受。     

益气补肾中药对自然流产模型小鼠脾脏和母胎界面CD4~+CD25~+T细胞表达的影响

目的 观察益气补肾中药对自然流产模型小鼠脾脏和母胎界面CD4+CD25+ T淋巴细胞表达的影响。     

苏木、苏木+黄芪对荷瘤小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞及相关调控分子的干预作用

目的:观察苏木、苏木+黄芪对荷瘤小鼠脾CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达及相关调控分子的干预作用。方法:复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌动物模型,动态观察苏木、苏木+黄芪抑瘤率、肺转移抑制率,流式细胞术检测小鼠脾CD4+CD25+Treg表达,免疫磁珠分选小鼠脾CD4+CD25+细胞,RT-PCR检测小鼠脾CD4+CD25+细胞和瘤组织Foxp3、CTLA-4mRNA表达。结果:苏木组6d、苏木+黄芪组10d瘤重低于荷瘤对照组(P0.05);苏木+黄芪组20d肺转移抑制率为77.75%;15d苏木+黄芪组小鼠脾CD4+CD25+细胞表达低于荷瘤对照组(P0.05);苏木+黄芪组荷瘤小鼠瘤组织CTLA-4、Foxp3mRNA表达及脾CD4+CD25+分选后细胞Foxp3 mRNA表达低于荷瘤对照组(P0.05)。结论:益气活血中药组方苏木+黄芪可调节荷瘤小鼠脾Treg及相关调控分子表达,并且在淋巴组织和肿瘤微环境中都表现出作用。     

Beneficial therapeutic effect of Chinese herbal Bushen formula on CHB patients with mildly elevated alanine aminotransferase by down-regulating CD4+CD25+T cells

Ethnopharmacological relevance

To investigate the clinical effects of the Bushen formula on chronic hepatitis B (CHB) patients with mildly elevated alanine aminotransferase (ALT) (1–2 times ULN) and its relevant immune mechanism.

Materials and methods

Fifty CHB patients were enrolled, and they were categorized into two groups according to infection state, including CHB carrier group(24 patients) and mildly elevated ALT (1–2 times ULN) group (26 patients), and 12 healthy volunteers were collected as normal control group. In addition, patients with mildly elevated ALT were taking the Bushen formula for 6 months. Biochemical assessment, viral load quantitation and HBV markers were examined at the Department of Clinical Laboratory, Shanghai Shuguang Hospital. Peripheral blood mononuclear cells were separated from patients and healthy volunteers. T cells were separated from healthy blood, and Hepatitis B core antigen (HBcAg) was added to the culture media. The percentage of CD4+CD25+T cells and the expression levels of IFN-γ and IL-4 were examined by flow cytometry and the expression level of FoxP3 was examined by real-time PCR and flow cytometry. The Chinese medicine symptom complex score was calculated.

Results

The percentage of CD4+CD25+T cells and the expression level of Foxp3 in two CHB patient groups were higher than that in the normal control group, and the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression level of Foxp3 in the CHB carrier group were highest. The experiment in vitro showed that both the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression of Foxp3 were elevated by HBcAg in CD4+T cells separated from normal peripheral blood. In patients with mildly elevated ALT, the serum ALT level was significantly decreased from 81.77±18.24 U/L to 64.92±20.60 U/L and the serum HBV DNA level was significantly decreased from 6.54±0.95 (log) to 5.15±2.22 (log), and symptom scores were significantly decreased from 6.19±3.99 to 2.77±1.66 after administration of the Bushen formula. In addition, we found that the frequency of CD4+CD25+T cells correlated negatively with the expression level of IFN-γ in CD4+T cells from CHB patients with mildly elevated ALT, and the percentage of CD4+CD25+T cells was decreased from 11.07±4.30% to 8.70±3.49% and the expression level of IFN-γ in CD4+T cells was increased from 13.98±3.25% to 15.85±3.43% after administration of the Bushen formula.

Conclusion

In CHB patients, the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression of Foxp3 in peripheral blood were increased, which can be repeated in HBcAg-stimulated healthy CD4+T cells. The Bushen formula has positive effects on CHB patients with mildly elevated ALT (1–2 times ULN) by reducing serum ALT and HBV DNA levels, which is relevant with the decreasing of the percentage of CD4+CD25+T cells and the increasing of the expression level of IFN-γ in CD4+T cells.     

乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠CD4^＋／CD8^及Fas、FasL蛋白表达的实验研究

目的：观察乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠CD4^＋／CD8^及Fas、FasL蛋白表达的影响。方法：采用雌性BALB／c小鼠皮下多点注射小鼠透明带多肽,建立免疫性卵巢早衰模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、己烯雌酚组、六味地黄丸组、乌鳖颗粒大、中、小剂量组。另设正常组和佐剂组,共灌胃给药4周。实验末应用免疫组化法测定脾脏CD4^＋、CD8^,计算CD4^＋／CD8^的比值。应用免疫组化法测定卵巢Fas、FasL蛋白的表达。结果：模型组小鼠脾脏CD4^＋／CD8^比值明显高于正常组和佐剂组（P〈0．05）。乌鳖颗粒各剂量组小鼠脾脏CD4^＋／CD8^比值明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）。模型组小鼠卵巢Fas蛋白表达低于正常组,Fas—L蛋白表达明显高于正常组,卵巢Fas、Fas—L蛋白表达和Fas／Fas—L比值与正常组比较具有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。乌鳖颗粒大剂量组和中剂量组小鼠Fas蛋白表达明显高于模型组,（P〈0．05,P〈0．01）。乌鳖颗粒各剂量组Fas—L蛋白表达明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）。乌鳖颗粒大剂量组、中剂量组小鼠Fas／Fas—L比值与模型组比较具有显著性差异（P〈0．01）。结论：乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠具有调节CD4^＋／CD8^比值和Fas／FasL系统的作用。     

2型糖尿病及大血管病变患者 CD4＋CD28-T细胞、CD4＋CD25＋T细胞亚群的变化及意义

目的：观察外周血CD4＋CD28-T细胞、CD4＋CD25＋T细胞亚群在2型糖尿病患者及大血管病变患者的变化,探讨其在2型糖尿病及大血管病变发病中的作用。方法：应用免疫荧光标记技术和流式细胞仪,检测36例初诊2型糖尿病（单纯DM组）患者和28例糖尿病并大血管病变患者、20例健康对照者的外周血T细胞亚群变化。结果：DM并大血管病变组、单纯DM 组 CD4＋CD28-T 细胞明显高于健康对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;而 CD4＋CD25＋T 细胞明显低于健康对照组（P〈0.05）;DM并大血管病变组CD4＋CD28-T细胞高于单纯DM组（P〈0.05）,CD4＋CD25＋T细胞低于单纯DM组。结论：机体细胞免疫异常在2型糖尿病及大血管病变的发生、发展中发挥着一定的作用。