基于能量代谢分析益气解毒方对缺氧损伤的PC12细胞线粒体保护作用的机制

目的:采用Seahorse细胞能量代谢分析仪,通过缺氧损伤的高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)建立一种线粒体能量代谢评价方法并探究益气解毒方的线粒体保护作用.方法:应用缺氧小室体外构建PC12细胞损伤模型,实验设置空白组,模型组(Model),益气解毒方高、中、低剂量组(25,5,1μ.tmol·L-1;YQ高...     

基于微生物-脑-肠轴探讨益气解毒方抗缺血性脑卒中作用机制

目的：从微生物-脑-肠轴(MGBA)角度探讨益气解毒方(YQ)治疗缺血性脑卒中(IS)的可能作用机制。方法：将大鼠随机分为5组,每组6只,分别为假手术组、模型组、YQ低、中、高剂量组(1、5、25 mg˙kg^-1),除假手术组外,其余各组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。首先采用神经行为学评分判断是否建模成功并对YQ的缺血性脑卒中保护作用进行评价,再通过16S rDNA测序技术比较大鼠MCAO造模前后及YQ给药后肠道菌群的变化,并分析该方作用可能相关的生物学通路。最后通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17A(IL-17A)和白细胞介素-10(IL-10)的表达,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin在脑和肠组织中的表达,苏木素-伊红(HE)染色观察脑皮层区和结肠的病理变化,对可能的作用机制进行验证。结果：YQ显著提高了MCAO大鼠的神经行为学评分(P<0.01),对在急性期由于富集病原体和机会致病菌引发的肠道微生物紊乱起到了较好调节作...     

益气解毒方调节线粒体途径阻断气虚染毒大鼠鼻咽上皮细胞癌变发生

目的探讨益气解毒方通过调节线粒体途径阻断气虚染毒大鼠鼻咽癌变的发生。方法 72只SD大鼠随机分为模型组、益气解毒方组和维甲酸组。腹腔注射二亚硝基哌嗪(DNP)和佛波醇酯(TPA),同时进行力竭游泳,建立大鼠鼻咽癌变模型,益气解毒方组和维甲酸组分别给予相应药物进行干预治疗,定期分批处死大鼠,取鼻咽组织做病理检测,免疫组织化学SABC法检测蛋白表达,RT-PCR检测mRNA的表达。结果在诱发性鼻咽癌变进程的单纯性增生阶段,与模型组比较,益气解毒方组和维甲酸组大鼠鼻咽上皮细胞的Bcl-2、Bax、Cytochrome-C和Caspase-3蛋白表达差异均无统计学意义(P0.05)。而在异型增生阶段,益气解毒方组鼻咽上皮细胞的Bcl-2蛋白表达活性显著低于模型组(P0.05),Cytochrome-C和Caspase-3又分别显著高于模型组(P0.05);Bax蛋白表达活性虽然高于模型组,但比较分析结果表明,组间差异却无统计学意义(P0.05)。在同一病理阶段,各组鼻咽上皮细胞的Bax和Bcl-2 mRNA转录活性与各自蛋白的表达活性呈现平行趋势。结论益气解毒方能够有效阻逆大鼠鼻咽上皮细胞癌变进程,其作用与其有效调节线粒体途径关键基因的表达密切相关。     

益气解毒方对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬作用机制

目的:研究益气解毒方对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬作用机制。方法:采用DN大鼠模型,观察益气解毒方对DN的治疗作用。采用苏木素伊红(HE)染色法观察给药后DN大鼠肾脏病理变化,透射电镜观察DN大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬体情况。采用蛋白免疫印迹法检测肾组织中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associatedprotein1lightchain 3Ⅱ,MAP1LC3-Ⅱ,LC3-Ⅱ),自噬标志物p62蛋白(sequestosome-1,p62),促凋亡蛋白Nix(Bcl-2/E1B 19 k Da-interacting protein 3-like,Nix)的表达,并应用实时荧光定量PCR测定Nix mRNA的表达。结果:与模型组比较,益气解毒方能够增加DN大鼠体重,改善DN大鼠血尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),血糖(GLU),甘油三酯(TG)及总胆固醇(CHOL),白蛋白(Alb)等血、尿生化指标(P0.01),并且能抑制由DN导致的肾小管上皮细胞线粒体过度自噬,显著降低LC3-Ⅱ,p62,Nix蛋白的表达(P0.01),同时降低Nix mRNA的表达(P0.01)。结论:益气解毒方对DN有较好的治疗效果,这可能与其调节DN肾小管上皮细胞线粒体自噬紊乱有关。     

益气解毒方对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的:探讨益气解毒方对卡介苗(BCG)联合脂多糖(LPS)所致小鼠免疫性肝损伤模型的保护作用。方法:采用尾静脉注射卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)建立小鼠免疫性肝损伤模型,观察益气解毒方对小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及小鼠肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平的影响,并观察肝组织病理学改变。结果:益气解毒方能降低肝损伤小鼠血清中ALT、AST的水平,并能使肝组织匀浆中SOD、GSH-PX活性升高。病理检查结果显示可减轻肝组织坏死范围及程度,减少炎细胞浸润。结论:益气解毒方对BCG联合LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用。     

益气解毒方对溃疡性结肠炎大鼠线粒体结构与炎性反应因子的相关性影响

目的:观察溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠结肠线粒体结构损伤与炎性反应因子表达之间的相关性,分析益气解毒方在UC急、慢性期2个时期的临床疗效,探讨益气解毒方对不同时期的结肠炎性反应因子与线粒体结构的调节作用。方法:采用家兔结肠黏膜组织致敏加TNBS-乙醇灌肠的免疫复合法造模,将100只Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、益气解毒组和美沙拉嗪组,分别于造模后第1天、给药后第2周末、给药后第6周末3个时间点取材,观察电镜下大鼠结肠黏膜上皮细胞的超微结构,进行结肠线粒体Flameng评分,采用免疫组织化学法测定结肠黏膜TNF-α、ICAM-1的表达水平。结果:大鼠结肠黏膜细胞超微结构的损伤持续存在于UC急性期与慢性期的整个病程中,线粒体的损伤更为严重持久。结肠黏膜的TNF-α、ICAM-1表达显著升高,随着病情的进展这2个指标均有所下降,但至慢性期仍然显著高于正常对照组。UC整个病变过程中,线粒体的损伤与结肠黏膜TNF-α的表达基本同步。美沙拉嗪对急性期线粒体有一定的修复作用,但远期疗效不佳,慢性期其线粒体结构恢复不明显。益气解毒方可持续修复受损的线粒体,效果明显优于美沙拉嗪,至慢性期线粒体结构基本接近正常水平。在调节TNF-α、ICAM-1方面,急性期美沙拉嗪下调的幅度要大于益气解毒方。至慢性期益气解毒方后来居上,其下调幅度明显大于美沙拉嗪,更接近正常值。结论:慢性期线粒体结构损伤与炎性反应因子TNF-α的持续高表达具有相关性,可能是引起UC复发与结肠黏膜损伤的潜在因素。美沙拉嗪可快速地控制炎性反应的急性发作,益气解毒方则对持续的慢性炎性反应有更好的抑制作用,特别是能够持续修复受损的线粒体,对慢性期抗复发更具疗效与优势。     

解毒化浊通络方治疗急性缺血性脑卒中临床研究

目的：观察解毒化浊通络方治疗急性缺血性脑卒中(Acute ischemic stroke, AIS)的临床疗效。方法：选取2021年8月—2022年5月安阳市中医院收治的88例AIS患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组各44例。对照组给予丁苯酞治疗,观察组在对照组基础上给予解毒化浊通络方。经治2周,观察两组患者临床疗效、神经因子水平、血管内皮功能改善情况以及不良反应。结果：观察组临床总有效率为88.64%(39/44),高于对照组的70.45%(31/44),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100B蛋白水平均低于对照组(P<0.05);血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)水平均高于对照组(P<0.05),钙黏蛋白(VE-cadherin)水平低于对照组(P<0.05);两组患者治疗过程中头晕、头痛、恶心呕吐发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：解毒化浊通络方治疗AIS疗效确切,能够有效调节神经因子水平,改善血管内皮功能,且安全性较高。     

益气逐瘀解毒方抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用研究

目的:研究益气逐瘀解毒方(YQZYJD)对四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:将SD雄性大鼠给予CCl_4橄榄油混合液进行皮下注射7周,制备肝纤维化大鼠模型,随机分为YQZYJD高、中、低剂量组、阳性对照组、模型组,给予相应治疗,5周后处死大鼠,检测外周血生化指标ALT、AST和GGT,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN),肝组织HE、MASSON染色分别检测肝组织损伤及肝纤维化程度,免疫组化法分别检测大鼠肝组织中α-SMA及TGF-β1表达水平。结果:与阳性对照组相比,YQZYJD高剂量组GGT、HA和LN水平显著降低(P0.05),病理组织学检测发现,YQZYJD治疗各组的肝组织结构回复均优于模型组,而高剂量组优于阳性对照组;YQZYJD各剂量组α-SMA表达均较模型组显著降低(P0.05),YQZYJD高剂量组TGF-β1的表达较阳性对照组显著降低(P0.01)。结论:YQZYJD可促进CCl_4诱导肝纤维化大鼠模型的肝组织结构回复,过度沉积的ECM降解,抑制HSCs的活化,降低TGF-β1的表达水平,改善CCl_4诱导肝纤维化大鼠的肝纤维化程度。     

补肾益气凉血活血软坚解毒方临床毒性观察

我们曾报道了补肾益气凉血活血解毒方药对慢性肝炎肝纤维化的初步临床观察结果，现将此方远期临床治疗研究结果及临床毒性观察报告如下：１资料和方法１．１临床资料本组４８例均属门诊病例，其中男性３０例，女性１８例，年龄２７～６１岁，平均４４岁。病程均在３年以上...     

益气通络解毒方中葛根素渗漉提取工艺的实验研究

目的：考察复方对葛根素溶出率的影响。方法：通过正交试验确定复方中葛根素的最佳提取工艺。结果：乙醇浓度、颗粒大小、浸泡时间均对提取率有显著性的影响。结论：益气通络解毒方中葛根素最佳提取工艺为24目,85%乙醇,浸泡48h。     

益气养阴解毒方对肺癌患者血清血管内皮生长因子及免疫功能的影响

目的：观察益气养阴解毒方对非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清血管内皮生长因子（VEGF）及免疫功能的影响。方法：51例NSCLC患者，随机分为中药组、化疗组和化疗＋中药组，观察各组疗效以及临床证候、体力状况、免疫指标、血清VEGF变化情况。结果：中药组和化疗＋中药组治疗后肿瘤稳定率均高于化疗组，但差异无显著性，临床症状、体力状况改善均明显优于化疗组（均P〈0．05）。中药＋化疗组能明显提高白细胞介素2水平，下调可溶性白细胞介索2受体（SIL-2）水平（均P〈0＋01），且疗效明显优于化疗组（P〈0．05）；中药组能显著提高T细胞总数，下调SIL-2水平（P〈0．05或P〈0．01）。中药＋化疗组治疗后血清VEGF水平明显下降（P〈0．01）。结论：益气养阴解毒方治疗NSCLC，有缩小稳定瘤灶，提高免疫功能和生存质量，降低血清VEGF水平的作用。     

解毒扶阳方对2型糖尿病大鼠炎症因子的影响

目的： 探讨解毒扶阳方对2型糖尿病（T2DM）模型大鼠炎症因子的调节作用。方法： 取雄性大鼠,随机分为正常对照组,高脂高糖模型（模型）组,模型+二甲双胍（降糖）组,模型+解毒扶阳（试药）高、中、低剂量组,共6组,除正常对照组外,其他各组按60 mg·kg^-1剂量尾静脉一次性快速注射链脲佐菌素制备动物模型,并于模型制作当日各给药组大鼠分别ig给予药物治疗,每日1次,连续12周。每10 d称量各组动物体重1次;给药最后1 d取血测定空腹血糖;取血清采用酶联免疫吸附分析方法测定血清瘦素（LEP）、胰岛素（INS）、白细胞介素（IL）-1、IL-6、C-反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,计算胰岛素敏感指数（ISI）。结果： 实验结果显示,解毒扶阳方与模型组比较,低剂量组有显著差异。血清LEP与模型组比较,试药3个剂量组均显示有非常显著的差异。ISI与模型对照组比较,3个剂量组均有非常显著性的差异。与模型组比较,中剂量组IL-1具有显著差异,高剂量组具有非常显著性差异。解毒扶阳方对TNF-α含量有降低作用,与模型组比较,高、中、低3个剂量组均有非常显著差异。结果表明,对CRP也有调节作用,与模型组比较,高、中、低3个剂量组均具有非常显著的差异。结论： 解毒扶阳方对T2DM所致血糖、LEP、INS、IL-1、IL-6、CRP、TNF-α含量升高,均有一定调节作用,使之降到正常或接近正常水平。提示解毒扶阳方对T2DM所致炎症因子含量升高以及糖代谢紊乱,有调节作用。     

益气化瘀方调控颈椎间盘细胞基因表达谱的研究

目的：分析正常、退变SD大鼠颈椎间盘基因表达水平的变化，研究益气化瘀方对大鼠退变颈椎间盘基因表达谱的调节作用。方法：建立动、静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型，分别从正常、退变和益气化瘀方组大鼠颈椎间盘中抽提mRNA，经反转录后分别用Cy3、Cy5荧光标记，获得动物椎间盘cDNA的探针，再与512点cDNA基因表达谱芯片杂交，激光扫描仪扫描并进行图像分析、标准化处理、ratio值分析、聚类分析。结果：模型组与对照组比较，共筛选出18条表达有差异的基因，11条基因表达量明显下降(ratio＜0．4)，7条基因表达量明显上升(ratio＞2．5)。益气化瘀方与模型组比较，共筛选出22条表达有差异的基因，益气化瘀方上调18条基因(ratio＞2．5)，下调4条基因(ratio＜0．4)。其中在上述检测中表达最明显的是信号传导类基因，益气化瘀方能够上调多数细胞信号传导类基因(如PTK等)。结论：初步筛选出大鼠迟变椎间盘中相关基因，与已报道基因在颈椎间盘退变的表达模式类似，说明大鼠椎间盘退变受到各种基因的调控，初步阐明了颈椎病在基因水平上的发病机理。益气化瘀方参与了椎间盘细胞内相关基因的调控，参与椎间盘细胞内外的信号传导过程，从基因表达角度解释了中药治疗颈椎病的药效机理，丰富了中医气血理论。     

高良姜素对缺血性脑卒中大鼠脑线粒体代谢相关酶的影响

目的:观察高良姜素对缺血性脑卒中大鼠脑线粒体能量代谢相关ATP酶的影响,探讨高良姜素通过干预线粒体能量代谢障碍发挥缺血性脑卒中保护作用的可能机制。方法:将120只雄性SD大鼠随机分成两大组,即术前给药组和术后给药组,每大组中又分为假手术组、模型组、阳性药银杏叶提取物EGb761组(mg·kg-1)及高良姜素高、中、低剂量组(100,50,25 mg·kg-1),每组10只。大鼠行中动脉栓塞手术前15 min或者术后6 h灌胃给药或给予等量生理盐水,于手术后24 h进行神经功能学评分,制备缺血侧脑组织线粒体悬液,并对其Na+-K+ATP酶,Ca2+-ATP酶,Mg2+-ATP酶,Ca2+-Mg2+ATP酶活性进行检测。结果:高良姜素中剂量和高剂量组,Na+-K+ATP和Ca2+-Mg2+ATP酶活性均有明显提高(P<0.05),低剂量组酶活性无明显改变;相比较,Ca2+-ATP酶,Mg2+-ATP酶活性各组之间没有明显的差别。结论:高良姜素能明显提高缺血性脑卒中大鼠脑线粒体Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶活性,缓解缺血脑细胞的能量代谢障碍,是其发挥脑缺血保护作用的可能机制之一。     

清热解毒方对急性细菌性腹膜炎大鼠血清内毒素及细胞因子的影响

目的 : 观察清热解毒方对腹腔感染大鼠血清内毒素及细胞因子水平的影响。 方法 : Wistar大鼠随机分为4组:对照组、模型组、清热解毒方组、头孢克肟组,ig1次,给药30 min后大肠杆菌ip造成大鼠急性细菌性腹膜炎模型,于6,12,18,24 h后分别检测各组动物血浆内毒素,肿瘤坏死因子α(TNF-α),IL-6,IL-10水平。 结果: 造模后模型组大鼠血清内毒素,TNF-α,IL-6,IL-10较对照组明显升高(P<0.01),清热解毒方组与头孢克肟组上述指标较模型组明显降低。 结论: 清热解毒方能有效降低大肠杆菌腹腔感染大鼠血清内毒素及TNF-α,IL-6,IL-10水平。     

益气解毒活络方对早期糖尿病肾病大鼠的防治作用

目的:观察益气解毒活络方对早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠血流变和纤维蛋白原(Fib)及前列腺素E2(PGE2)的影响。方法:采用高脂高糖饲料喂养合并腹腔注射小剂量链尿佐菌素(streptozocin,STZ)方法建立糖尿病(DM)大鼠模型。以西药盐酸贝那普利作阳性对照,中药干预以益气解毒活络中药复方(12.78 g·kg-1)分别灌胃治疗8,10周。实验结束后,检测大鼠空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血β2微球蛋白(β2-MG)及尿微量白蛋白(MALB);光镜观察肾组织形态结构变化(HE染色);血流变仪测定全血黏度(高切、中切、低切);凝血4项分析仪测定血浆Fib;酶联免疫吸附实验(Elisa法)检测血浆及肾组织PGE2的含量。结果:模型组大鼠FBG,HbA1c及血β2-MG、全血黏度、血浆Fib、尿MALB较正常组明显升高(P<0.05),PGE2含量升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠FBG,HbA1c及血β2-MG、全血黏度、血浆Fib、尿MALB显著降低(P<0.05),PGE2含量下降(P<0.05);模型组大鼠出现明显的肾脏形态学异常,各治疗组肾脏病变明显减轻。结论:DN的发病机制可能与血流变、Fib的异常及PGE2密切相关,益气解毒活络中药复方防治DN的发生发展可能是通过调节血流变、血浆Fib及纠正PGE2的异常实现的。     

益气化瘀方对大鼠颈椎间盘软骨终板内血管的影响

目的：探讨益气化瘀方对椎间盘软骨终板内血管状态的影响。了解椎间盘营养供应的情况。方法：选择8月龄清洁级SD雄性大鼠50只，选择5月对照组，5月模型组为本实验观察时段，大鼠随机分为对照组，模型组，益气化瘀方，活血通络方，芬必得组，每组10只，雌雄各半，体视学分析，Dissector自动计数分析软骨终板内血管芽的数量，面积；免疫组化检测血管内皮生长因子（VEGF）在软骨终板的表达情况，进行VEGF与血管芽之间的相关性分析。结果：益气化瘀方可以增加血管芽的数量和面积，与活血通络方作用相似，优于芬必得；模型组软骨终板内VEGF表达明显，但表达率减少；益气化瘀方VEGF表达量降低，但表达率增加明显。VEGF的表达与血管芽密度有正相关。结论：益气化瘀方可以增加血管芽数量和VEGF的表达，促进血管修复，再生和增加椎间盘营养供应的作用。     

补肾解毒方与健脾解毒方对慢性乙肝患者不同阶段的T淋巴细胞功能影响的研究

目的:比较补肾解毒方和健脾解毒方对乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)慢性感染患者在不同免疫状态下外周血T淋巴细胞(Ts)功能影响。方法:选取本院感染科2013年9月至2014年5月门诊慢性HBV感染患者40例,据患者不同免疫状态分为清除组和耐受组,另选本院健康职工10例作为对照组。采用大鼠补肾解毒药物血浆和健脾解毒药物血浆进行干预。以T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD28+分子的表达及干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的水平作为研究指标,判断干预对外周血T淋巴细胞(Ts)功能影响情况。结果:各组健脾组和补肾组血浆在干预后CD3+、CD4+、CD8+、CD28+的表达均显著升高,耐受组中P<0.05,补肾组血浆干预后CD28+及CD8+分子显著高于健脾组,P<0.05;两种药物血浆分别干预后,CD28+分子表达均显著高于清除组同期,P<0.05。结论:健脾解毒法和补肾解毒法均能促进慢性HBV感染患者T细胞功能的恢复,免疫耐受期可能是中医药治疗的一个重要时期,补肾解毒药物效果优于健脾毒药物,需要分子实验和临床实验提供更多循证依据。     

解毒益气活血方改善严重脓毒症患者免疫功能的机制研究

目的:探讨解毒益气活血方对严重脓毒症患者免疫功能的影响及临床疗效。方法:选择ICU严重脓毒症患者63例,随机分为对照组(31例,采用西医治疗)和治疗组(32例,采用西医治疗加解毒益气活血方)。分析比较两组患者治疗前及治疗后5、10天相关免疫学指标、APACHEⅡ评分、机械通气时间、住ICU时间及28天病死率的情况。结果:与对照组相比,治疗组治疗后TNF-α、IL-6、IL-10明显下降,IgG水平、淋巴细胞计数、CD4+T淋巴细胞水平及CD1+4单核细胞HLA-DR表达明显上升,住ICU时间明显缩短,28天病死率明显下降(P0.05或P0.01)。结论:解毒益气活血方结合西医治疗能调节患者的免疫功能,改善严重脓毒症患者病情和预后。