白头翁总皂苷调控CXCR4/CXCL12信号通路抑制小鼠结肠癌肝转移的机制研究

目的 观察白头翁总皂苷对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用,并探讨其通过调节趋化因子受体4(CXCR4)/趋化因子12(CXCL12)通路发挥作用的机制.方法 将50只BALB/c裸小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、白头翁总皂苷低剂量、高剂量组(100、200 mg/kg),每组10只.以希罗达组(267 mg/kg)作为阳性对照药,采用结肠癌细胞脾脏注射法制备小鼠CT26细胞肝转移模型.白头翁总皂苷低剂量、高剂量组和希罗达组每日灌胃给药,连续治疗3周,假手术组和模型组均给予等量生理盐水灌胃.小鼠处死后取肝、脾组织及瘤组织,比较各组小鼠肝脏、脾脏质量和抑瘤率;ELISA实验检测小鼠血清中白介素-6(IL-6)、转化生长因子-α(TNF-α)水平,免疫组化检测小鼠肝组织中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板内皮细胞黏附分子(CD31)的蛋白阳性表达;Western-blot及RT-PCR检测脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的蛋白和mRNA表达.结果 与假手术组相比,模型组小鼠肝、脾质量明显上升(P<0.01),小鼠血清中IL-6、TNF-α 水平及肝组织中VEGF、CD31的阳性表达明显升高(P<0.01),小鼠脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP-9、MMP-2的蛋白和mRNA表达均显著增多(P<0.01).白头翁总皂苷低、高剂量组小鼠肝、脾质量显著低于模型组,抑瘤率分别为45.8％、52.3％;血清IL-6、TNF-α 水平、肝组织VEGF、CD31阳性表达以及脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP-9、MMP-2的蛋白和mRNA表达较模型组均明显降低(P<0.05,P<0.01).结论 白头翁总皂苷可显著抑制小鼠CT26细胞结肠癌肝转移,其机制可能与下调瘤组织中CXCR4/CXCL12信号通路的表达相关.     

冠心康对microRNA-126和VEC的调控及抗动脉粥样硬化的作用机制研究

目的:观察冠心康对小鼠主动脉及血管内皮细胞miRNA-126及其下游相关信号GRS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1表达的调控,探索中医药抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:体外细胞实验中,将小鼠血管内皮细胞随机分为5组,即对照组、模型组、中药高剂量含药血清组、中药低剂量含药血清组。不同组别VEC分别经不同含药血清干预后,观察细胞增殖和凋亡情况,采用qRT-PCR和Western-blot检测VEC中pri-miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达;体内实验采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度,采用qRT-PCR和Western-blot检测主动脉pri-miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达。结果:体外实验结果显示,与对照组相比,中药高低剂量组的VEC凋亡率和增殖率明显优于模型组(P均0.05),中药高剂量组和中药低剂量组VEC增殖率比较差异不明显(P0.05);与对照组相比,中药高低剂量组VEC中miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1 mRNA表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05);与对照组相比,中药高低剂量组VEC中RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1蛋白表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05)。体内实验结果显示,小鼠主动脉HE染色结果,对照组小鼠主动脉血管管径厚薄均匀,内膜光滑平整,无动脉粥样硬化病灶,模型组小鼠血管管径厚薄不均匀,斑块形成明显,血管管壁厚度、AS斑块截面积显著大于其他各组。中药高低剂量组小鼠主动脉各层结构正常,炎性细胞浸润较轻,病变轻,AS斑块较小,病变程度明显轻于模型组。与对照组相比,中药高低剂量组主动脉miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1 mRNA表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05);与对照组相比,中药高低剂量组主动脉RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1蛋白表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05)。结论:冠心康抑制动脉粥样硬化斑块的形成的作用机制可能与调控miRNA-126及其下游相关信号GRS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1表达有关。     

干蟾皮提取物对胃癌肝转移裸鼠CXCL12-CXCR4轴的影响

目的:观察干蟾皮提取物(华蟾素注射液)对裸鼠胃癌肝转移及CXCL12-CXCR4生物轴的影响。方法:MTT法测定华蟾素注射液对人胃癌BGC-823细胞体外增殖的抑制作用;经小鼠脾脏下极包膜注入BGC-823细胞建立胃癌肝转移模型;32只小鼠随机分为模型组、华蟾素低剂量组[CINO(低)]、华蟾素中剂量组[CINO(中)]、华蟾素高剂量组[CINO(高)];给予相应药物干预,观察不同浓度的华蟾素注射液对BGC-823细胞的抑制作用及对胃癌肝转移裸鼠生存时间、肿瘤抑制率,肿瘤组织中CXCL12、CXCR4的影响。结果:华蟾素对BGC-823细胞的增殖具有抑制作用;CINO高剂量组较模型组肝转移率明显下降(P<0.05);华蟾素注射液对胃癌肝转移组织中CXCL12和CXCR4蛋白的表达均有一定的抑制作用(P<0.05)。结论:华蟾素注射液可抑制BGC-823细胞的增殖,降低胃癌肝转移率,抑制肿瘤生长;其机理可能与其下调胃癌肝转移灶中CXCL12、CXCR4蛋白表达有关。     

肠胃清抑制化疗诱导的小鼠结肠癌肺转移的实验研究

目的研究肠胃清对化疗诱导的小鼠结肠癌肺转移的抑制作用并探讨其机制。方法通过一次性腹腔注射最大耐受剂量(MTD)奥沙利铂,3天后尾静脉注射结肠癌细胞CT26,建立化疗诱导的小鼠结肠癌肺转移模型,24只BALB/c小鼠随机分为模型组、化疗诱导肺转移组(L-OHP)、肠胃清加化疗诱导肺转移组(CWQ+L-OHP)。统计肺结节数目,苏木素-伊红染色(HE)检测肺组织内瘤灶,免疫组化检测肺转移瘤组织微血管密度(MVD);蛋白免疫印迹(Western blot)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺转移灶血管内皮生长因子(VEGF-A)、基质金属蛋白酶2/9(MMP2/9)蛋白和mRNA的表达。结果与L-OHP组比较,CWQ+L-OHP组肺转移结节数目减少(P0.05)、肿瘤组织MVD值下降(P0.01),肺组织VEGF-A、MMP2、MMP9蛋白和mRNA的表达均下调(P0.01)。结论肠胃清能抑制化疗诱导的小鼠结肠癌肺转移,与其下调肿瘤组织VEGF-A、MMP2、MMP9的表达,降低肿瘤组织MVD,减少肿瘤血管生成有关。     

癌痛平胶囊抑制肿瘤转移及其作用机制探讨

目的:观察癌痛平胶囊对H22荷瘤小鼠肿瘤生长转移的抑制作用,探讨其作用机制。方法:ICR小鼠接种H22肝癌细胞株,建立H22荷瘤小鼠模型。将H22荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、癌痛平高、低剂量组,模型组每日ig等容积生理盐水,癌痛平高、低剂量组每日ig癌痛平(36,18 g·kg~(-1)),顺铂组每日ip顺铂(2 mg·kg~(-1))。各组连续给药7 d,处死荷瘤小鼠,剥离瘤体称重,按公式计算抑瘤率。采用免疫组化检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,使用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)以及免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中C-X-C趋化因子配体12(CXCL12)及C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)基因以及蛋白表达的改变。结果:癌痛平高、低剂量显著抑制小鼠H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,癌痛平高剂量显著降低肿瘤组织中VEGF蛋白表达,并抑制CXCL12和受体CXCR4的基因及蛋白表达(P0.01)。结论:癌痛平胶囊对H22荷瘤小鼠肿瘤生长转移具有一定的抑制作用,其作用机制可能是通过降低肿瘤组织VEGF蛋白表达以及干预CXCL12/CXCR4生物轴抑制肿瘤转移。     

黄芪-莪术配伍对结肠癌原位移植瘤模型小鼠SDF-1/CXCR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨黄芪-莪术抑制结肠癌原位移植瘤模型小鼠肿瘤生长的可能作用机制。方法 运用分子对接技术预测黄芪、莪术中主要活性成分与通路靶点蛋白基质细胞衍生因子-1（SDF-1）,趋化因子受体4（CXCR4）,核转录因子-κB p65（NF-κB p65）的分子间相互作用。建立CT26.WT结肠癌原位移植瘤模型进行体内实验验证。将60只BALB/c雄性小鼠随机分为假手术组,模型组,5-氟尿嘧啶（5-Fu）组、黄芪-莪术低、中、高剂量组,每组10只。假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,5-Fu组（30 mg·kg^-1）腹腔注射,黄芪-莪术低、中、高剂量组（0.32,0.64,1.28 g·kg^-1）灌胃。干预15 d后,完整剥离原位瘤,取肿瘤相邻结肠组织5~6 cm。测量并计算肿瘤体积,苏木素-伊红（HE）染色观察肿瘤组织及结肠组织病理学变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中趋化因子SDF-1及其受体CXCR4,磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织趋化因子SDF-1及其受体CXCR4,NF-κB p65,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）,癌基因c-Myc蛋白及mRNA表达水平。结果 与模型组比较,5-Fu与黄芪-莪术治疗均能降低原位瘤体积（P<0.05,P<0.01）,5-Fu组抑瘤率最高（61.38±2.34）%,黄芪-莪术中剂量组抑瘤率（43.43±3.71）%。与模型组比较,各药物组肿瘤与结肠组织的病理学改变转轻。与模型组比较,黄芪-莪术显著下调了肿瘤小鼠结肠组织SDF-1,CXCR4,p-NF-κB p65蛋白表达水平（P<0.01）,对肿瘤组织SDF-1,CXCR4,NF-κB p65,Cyclin D₁,c-Myc的蛋白及mRNA表达明显下调（P<0.05,P<0.01）。结论 黄芪-莪术能够抑制结肠癌原位移植瘤的生长,其干预机制可能与调节SDF-1/CXCR4/NF-κB信号通路中相关蛋白及其mRNA表达有关。     

基于CXCL8-CXCR1/2轴探讨二陈汤加味对COPD大鼠的抗炎机制

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织CXC趋化因子配体(CXCL)8-CXC趋化因子受体(CXCR)1/2表达的影响,探讨二陈汤加味对COPD抗炎作用的分子机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、二陈汤加味组和急支糖浆组,每组10只。以香烟烟雾联合脂多糖(LPS)制备COPD大鼠模型。二陈汤加味组以10 g·kg^-1灌胃(ig)给药,急支糖浆组以10 g·kg^-1剂量ig,正常组、模型组ig等量生理盐水,连续干预14 d。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中趋化因子(Chemokines)CXCL1,CXCL8含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肺组织匀浆中CXCL8,CXCR1,CXCR2 mRNA及蛋白表达,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织的病例变化,免疫组织化学(IHC)检测肺组织中CXCL8,CXCR1和CXCR2的蛋白定位表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠BALF中CXCL1,CXCL8含量显著升高(P<0.01),肺组织CXCL8,CXCR1,CXCR2 mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,二陈汤加味组显著降低CXCL1,CXCL8含量(P<0.01),明显降低CXCL8,CXCR1,CXCR2 mRNA及蛋白表达(P<0.05),且明显改善肺组织病理学损伤。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用,其机制可能与抑制CXCL8,CXCR1,CXCR2 mRNA及其蛋白的表达,减少趋化因子CXCL1,CXCL8的释放有关。     

复方苦参注射液对结肠癌荷瘤裸鼠YAP/TAZ表达的影响

目的:观察复方苦参注射液(CKI)对人HT-29结肠癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用。方法:建立裸鼠异种移植瘤模型。实验分为空白对照组、CKI低剂量组、CKI高剂量组、奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)组共4组,每组10只Balb/c裸鼠。CKI低剂量组和高剂量组每天施用不同剂量的CKI[1. 0和4. 0 m L/(kg·d)],持续给药28 d,L-OHP干预组予以L-OHP干预(10 mg/kg),每隔48 h给药一次,持续28 d。每天观察移植瘤的生长并测量肿瘤体积。末次给药12 h后处死取材。通过q PCR法检测移植瘤组织中YAP、TAZ mRNA相对转录水平,免疫组化法检测移植瘤组织中YAP、TAZ、MMP2和MMP9蛋白表达情况。结果:不同剂量的CKI干预可抑制移植瘤的生长(P 0. 05 vs.对照组),高剂量组具有最佳抑制作用(P 0. 05 vs. CKI低剂量组)。不同剂量的CKI干预均可以下调移植瘤组织中YAP和TAZ的mRNA转录和蛋白表达水平(P 0. 05 vs.对照组),且高剂量组抑制作用更为显著(P 0. 05 vs. CKI低剂量组); L-OHP干预显著下调移植瘤组织中YAP和TAZ的mRNA转录和蛋白表达(P 0. 05 vs.对照组),与CKI高剂量干预组比较,差异具统计学意义(P 0. 05)。CKI和L-OHP干预均抑制移植瘤组织中MMP2和MMP9蛋白表达,其中,CKI高剂量组优于低剂量组(P 0. 05),L-OHP优于CKI高剂量组(P 0. 05)。结论:CKI可抑制裸鼠人HT-29结肠癌皮下移植瘤的发展,其作用机制可能是通过调控Hippo信号通路,抑制下游YAP/TAZ活性,并进一步下调MMPs的表达来实现的。     

从分子水平探讨益气活血方对肾间质纤维化的干预

目的:从分子水平探讨益气活血方对肾间质纤维化的干预。方法:雄性SD大鼠100只随机分为6组,假手术组10只,模型组10只,血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)组20只,中药低、中、高剂量组各20只。采用单侧输尿管梗阻(UUO)制备肾间质纤维化大鼠模型。假手术组、模型组均给予等剂量生理盐水灌胃,ACEI组给予稀释成0.1 mg/mL的洛汀新2 mL灌胃,中药低剂量组给予0.25 g/mL制剂2 mL灌胃,中药中剂量组给予0.5g/mL制剂2 mL灌胃,中药高剂量组给予1.0 g/mL制剂2 mL灌胃。各组均连续灌胃14 d。结果:与假手术组比较,其余各组BUN和Scr含量,NF-κB及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白表达升高,而TGF-β1、TIMP-1、MMP1、MMP2和MMP9 mRNA表达降低(P0.05);与模型组比较,ACEI组、低剂量组、中剂量组和高剂量组BUN和Scr含量,NF-κB及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白表达降低,而TGF-β1、TIMP-1、MMP1、MMP2和MMP9 mRNA表达升高(P0.05);与ACEI组比较,中剂量组和高剂量组BUN和Scr含量,NF-κB及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白表达降低,而TGF-β1、TIMP-1、MMP1、MMP2和MMP9 mRNA表达升高(P0.05);与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组BUN和Scr含量降低,而TGF-β1、TIMP-1、MMP1、MMP2和MMP9 mRNA表达升高(P0.05);中剂量组和高剂量组BUN和Scr含量,NF-κB及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白表达,TGF-β1、TIMP-1、MMP1、MMP2和MMP9 mRNA表达比较无统计学差异(P0.05)。结论:益气活血方可改善肾间质纤维化大鼠肾功能,降低NF-κB及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白表达,增加TGF-β1、TIMP-1、MMP1、MMP2和MMP9 mRNA表达,具有重要研究意义。     

清热解毒方对小鼠移植性肝癌抗肿瘤作用及趋化因子的影响

目的探讨清热解毒方对小鼠移植性肝癌抗肿瘤作用及趋化因子的影响。方法建立小鼠CBRH-7919原位移植性肝癌模型,随机分为中药低、中、高剂量组和对照组,观察清热解毒方的抗肿瘤效应。采用趋化因子芯片筛选出不同剂量组间的差异基因(差异倍数至少为3),继而使用免疫组化及Western blotting方法对差异基因加以验证。结果 (1)不同剂量清热解毒方均有不同程度的抗肿瘤作用(与对照组相比P0.01),组间比较显示高剂量组抑瘤作用更为明显(P0.01);(2)趋化因子芯片检测筛选出CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCR2及IL-1β为差异基因,其中中药干预组CXCL1、CXCL2、CXCL3及IL-1β基因表达下调,CXCR2基因上调,均以高剂量组最为明显(PO.05);(3)免疫组化和Western blotting方法分别在蛋白水平上验证了以上差异基因。结论清热解毒方具有显著下调小鼠移植性肝癌模型中趋化因子CXCL1,CXCL2,CXCL3及IL-1β表达,上调趋化因子受体CXCR2的作用,其抗肿瘤作用的机制可能与此有关。     

结直肠癌转移模型裸鼠血管因子变化及健脾消癌方干预作用

目的:探讨结直肠癌裸鼠转移模型组织中血管内皮生长因子(VEGF),内皮抑素(ES),血管生成素(ANG),血管抑素(AS),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)变化及健脾消癌方干预的机制。方法:在BALB/C-nu裸鼠盲肠内注射HCT116细胞50μL,造裸鼠结直肠癌转移模型。将模型裸鼠分为模型组、健脾消癌方组(40 g·kg-1),另设空白组。所有动物灌胃给予相应药物4周后,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定裸鼠结肠、肝、肺及盲肠肿瘤组织中相关血管因子蛋白表达。结果:HCT116结直肠癌模型裸鼠的结肠、肝、肺与肿瘤组织的VEGF,MMP-9,TIMP明显升高(P0.05,P0.01);ANG在结肠、肝与肿瘤组织也明显升高(P0.05,P0.01);ES在结肠、肺与肿瘤组织显著降低,AS在肝、肺及肿瘤组织显著降低(P0.05)。健脾消癌方组的结肠MMP-9,肿瘤TIMP,肝组织ANG,MMP-9及肺组织VEGF明显降低,肺组织AS明显升高(P0.05)。结论:HCT116结直肠癌模型裸鼠VEGF,ANG,MMP-9在结肠、肝、肺及肿瘤组织中蛋白表达升高,ES,AS降低,TIMP升高;健脾消癌方能比较全面地改善机体抗肿瘤血管生成的能力。     

健脾消癌方对小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:通过体内实验研究健脾消癌方对小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨其抗大肠癌复发转移的作用机制。方法:通过皮下注射结肠癌细胞CT-26构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型,随机分为模型组,健脾消癌方低(15.75 g·kg~(-1)),中(31.5 g·kg~(-1)),高(63 g·kg~(-1))剂量组及5-氟尿嘧啶(5-Fu)组,分别给药14 d后,处死小鼠,剪取瘤体、称取瘤质量后剪碎瘤组织,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,并采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果:与模型组比较,健脾消癌方(15.75,31.5,63 g·kg~(-1))组瘤质量均减轻(P0.05),细胞凋亡率均升高(P0.05);B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)表达增高(P0.05),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达降低(P0.05);与健脾消癌方(15.75,31.5 g·kg~(-1))组比较,健脾消癌方(63 g·kg~(-1))组Bax,Caspase-3,Caspase-8增高明显(P0.05)。结论:健脾消癌方可通过促进小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡实现抑瘤作用,其机制可能与其调节细胞凋亡相关蛋白表达有关。     

应用机器学习和神经网络模型识别结直肠癌“炎癌转化”过程的关键基因及防治中药预测

目的 应用公共数据库挖掘结直肠癌“炎癌转化”过程的关键基因，结合机器学习和神经网络模型的算法优势进行基因筛选，验证关键基因作为预测指标的可行性及免疫相关性，进而预测潜在防治中药。方法 利用基因表达数据库（Gene Expression Omnibus，GEO）2个GSE66407和GSE166925数据集，筛选由正常结肠到炎症结肠（溃疡性结肠炎），最后进展到肠癌的过程中出现的差异基因；通过构建蛋白质-蛋白质相互作用网络（protein-protein interaction，PPI）进一步筛选核心基因；运用梯度提升机、随机森林和决策树3种分类机器学习算法进行结局的预测学习，将3种机器学习算法筛选出的核心基因取交集，构建深度学习框架下的人工神经网络模型，对模型预测准确性进行内部及外部验证；实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-PCR）联合人蛋白质图谱数据库（Human Protein Atlas，HPA）的免疫组化数据分析关键基因在初发结直肠癌患者癌组织及正常组织中的表达；运用单样本基因集富集分析（single sample gene set enrichment analysis，ssGSEA）算法分析核心基因与免疫细胞之间的关联；通过生存分析筛选对结直肠癌具有预后意义的基因；最后通过核心基因进行相关中药的预测分析。结果 在结直肠炎癌转化全过程中，共鉴定出152个共同的差异基因。这些基因参与肿瘤免疫反应、炎症反应等生物过程；经由3种机器学习算法的筛选，最终确定了8个核心基因，包括组织金属蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinases 1，TIMP1）、基质金属蛋白酶1（matrix metalloproteinase 1，MMP1）、趋化因子CXC配体13（C-X-C motif chemokine ligand 13，CXCL13）、普列克底物蛋白（Pleckstrin，PLEK）、颗粒酶B（granzyme B，GZMB）、CXCL5、CXCL3和CXCL8。在深度学习框架下的神经网络模型中，训练集中对正常组和肿瘤组的预测准确率分别为86.3%、92.3%；外部验证集中对正常组和肿瘤组的预测准确率分别为80.0%、80.6%。8个核心基因同时涉及多种免疫浸润过程；RT-PCR结合HPA数据库分析显示TIMP1、MMP1、GZMB、CXCL5、CXCL8、CXCL3在结直肠癌患者癌组织中表达显著升高（P<0.05），CXCL13在癌组织中表达显著降低（P<0.05），PLEK在癌组织中表达降低但差异不显著；TIMP1、CXCL13和CXCL8对患者的整体生存具有显著影响。对实验验证有显著差异的7个核心基因进行防治中药预测分析，结果显示预测中药以清热药和补虚药为主，四气以寒、温和平性为主，五味以苦、辛、甘味比例最大。结论 TIMP1、MMP1、CXCL13、GZMB、CXCL5、CXCL3和CXCL8可以作为预测结直肠癌“炎-癌”转化过程的关键分子，对这些分子进行中药的早期干预，可能对结直肠癌的早期诊疗具有重要意义。     

肠胃清粗提物协同奥沙利铂抑制人结肠癌HCT116细胞及其作用机制研究

目的 探讨中药复方肠胃清(黄芪、党参、白术、八月札、薏苡仁、野葡萄藤、大血藤、猪苓)粗提物与奥沙利铂联合应用抑制人结肠癌HCTll6细胞的协同增效作用及机理.方法 奥沙利铂、肠胃清提取物分别单独以及联合作用于人结肠癌HCTll6细胞,采用MTT法检测半数抑制质量浓度(IC50),通过TransweⅡ实验检测侵袭转移抑制作用,并利用Western Blotting技术检测侵袭转移与凋亡相关蛋白的表达变化.结果 肠胃清提取物、奥沙利铂以及联合肠胃清提取物(0.15 mg/mL)时奥沙利铂对人结肠癌HCTll6细胞的半数抑制质量浓度分别为(3.24±0.06) mg/mL、(15.74±0.53)μg/mL及(10.32±0.37)μg/mL,联合用药组半数抑制质量浓度降低,侵袭抑制率提高,ADAM-17、MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达下调(P＜0.05),P53蛋白表达升高(P＜0.01).结论 中药复方肠胃清粗提物具有一定的抗人结肠癌细胞HCTll6作用,在与奥沙利铂联用时表现出明显的协同作用,其机制可能与降低ADAM-17、M MP-2、MMP-9、BCL-2蛋白以及提高P53蛋白的表达有关.     

健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响

目的:研究健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达的影响,探讨其拮抗大肠癌肝转移的作用机制。方法:随机抽取10只BALB/C-nu裸鼠作为空白组,其余裸鼠建立人大肠癌细胞肝转移裸鼠模型,建模3 d后取存活裸鼠30只,随机分为模型组,健脾消癌方组(41.6 g·kg-1),人参皂苷Rg3组(5.2 mg·kg-1),各组裸鼠灌胃相应药物及生理盐水4周后脱颈处死,观察各组裸鼠肝转移情况,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝组织第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN),磷酸化第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(p-PTEN),Akt,磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达情况。结果:健脾消癌方及人参皂苷Rg3组肝转移率明显低于模型组(P0.05);与空白组比较,模型组中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组肝组织中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显降低(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组p-PTEN,p-Akt表达差异无统计学意义。与空白组比较,模型组PTEN,Akt蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达量明显升高(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达差异无统计学意义。结论:健脾消癌方可拮抗大肠癌肝转移,其作用机制可能与升高PTEN蛋白表达,降低p-PTEN,p-Akt蛋白表达有关。     

消癌解毒方对H22荷瘤小鼠移植瘤的抗肿瘤作用机制

目的:通过消癌解毒方(XAJD)对H22荷瘤小鼠移植瘤肿瘤组织全基因组芯片的检测以及对相关蛋白的表达影响,探讨其抑制肿瘤的作用机制。方法:ICR小鼠随机分组,接种H22荷瘤小鼠腹水,移植瘤模型成功后,将模型小鼠随机分为空白组,XAJD低、中、高剂量组(10,30,90 g·kg~(-1)·d~(-1)),顺铂组(1 mg·kg~(-1)·d~(-1))。给药结束,动物处死并取各组动物瘤体组织,无菌生理盐水洗去血渍,称重,计算肿瘤抑制率,取部分新鲜瘤体组织进行全基因组表达谱芯片检测,部分瘤体组织用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其相关mRNA及蛋白表达。结果:与空白组比较,消癌解毒方低、中、高剂量能够显著降低移植瘤瘤重(P0.05),消癌解毒方中剂量组与顺铂组效果优于消癌解毒方低、高剂量组(P0.01),抑瘤率分别达42.8%,58.6%;全基因组芯片检测分析发现,基质金属蛋白酶家族(matrix metalloproteinases,MMPs)和组织金属蛋白酶抑制剂(tissueinhibitor of metalloproteinase,TIMPs)相关蛋白在消癌解毒方不同剂量组中均发生了明显的改变。Real-time PCR,Western blot检测显示,与空白组比较,MMP-9 mRNA及蛋白在消癌解毒方低、中、高剂量组及顺铂组中表达均显著降低(P0.01),MMP~(-1)2 mRNA及蛋白在消癌解毒方中、高剂量组及顺铂组中表达均显著降低(P0.01),TIMP2 mRNA及蛋白在消癌解毒方中、高剂量组及顺铂组中表达均明显升高(P0.05)。结论:消癌解毒方能够抑制H22荷瘤小鼠移植瘤生长,可通过抑制MMPs相关蛋白的表达,降低肿瘤的转移和复发可能是其抗癌机制之一。     

肠胃清逆转结肠癌HCT116/L-OHP细胞草酸铂耐药作用及对Pt-DNA加合物的影响

目的探讨中药复方肠胃清(黄芪、白术、党参、猪苓、薏苡仁、八月札、野葡萄藤、红藤等)对结肠癌HCT116/L-OHP细胞草酸铂耐药的逆转作用及对Pt-DNA加合物的影响。方法将HCT116/L-OHP细胞种植于裸小鼠皮下,建立肿瘤耐药模型,随机分为5组,A组为对照组,B组为草酸铂组,C组为肠胃清组,D组为草酸铂+肠胃清低剂量组,E组为草酸铂+肠胃清高剂量组,治疗前后测量移植瘤体积及荷瘤鼠体质量;采用细胞增殖抑制实验MTT法观察肠胃清药物血清对HCT116/L-OHP细胞株耐药性的逆转作用,并采用原子吸收分光光度法检测细胞内铂(Platinum,Pt)药物及核内Pt-DNA水平。结果肠胃清联合草酸铂组与肠胃清或草酸铂单独用药组相比,有更高的肿瘤抑制率(P0.01),其中肠胃清高剂量联合草酸铂组抑瘤率最高;与对照组相比,含肠胃清组荷瘤鼠体质量减轻好于单用草酸铂;MTT结果显示7.5%肠胃清药物血清能够增加耐药细胞株HCT116/L-OHP对草酸铂敏感性,逆转指数为2.74;肠胃清药物血清可以增加HCT116/L-OHP细胞内草酸铂水平,并能使细胞核内Pt-DNA加合物水平增加15.74%。结论肠胃清能够逆转HCT116/L-OHP细胞对草酸铂的耐药性,其机制与肠胃清增加细胞内Pt-DNA加合物水平有关。