糖肾宁对高糖培养的小鼠系膜细胞TGF-β1和P38MAPK表达的影响

目的观察糖肾宁对高糖培养的小鼠系膜细胞转化生长因子-1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated protein kinases,P38MAPK)表达的影响。方法以体外高糖培养的小鼠系膜细胞为研究对象,实验分为正常对照组、高糖培养组、高糖+缬沙坦组和高糖+糖肾宁高、中、低剂量组,使用大鼠含药血清给药分别处理24小时,用ELISA法检测细胞上清液中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量水平;运用Western Blot方法检测P-P38MAPK、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)、TGF-β1的蛋白水平。结果与正常对照组比较,高糖培养组系膜细胞上清液中FN蛋白表达明显升高(P0.05);与高糖组比较,糖肾宁组能明显抑制P38MAPK及其下游核转录因子CREB的水平,下调TGF-β1和FN的表达(P0.05)。结论糖肾宁能够抑制细胞外基质增生,可能与下调TGF-β1,抑制P38MAPK/CREB信号通路的激活,从而抑制FN等细胞外基质的合成有关。     

肾络宁对IgA肾病大鼠系膜细胞及细胞外基质的影响

目的：通过建立IgA肾病大鼠模型，观察肾络宁对IgA肾病大鼠系膜细胞及细胞外基质的影响。方法：通过建立大鼠IgA肾病模型，同时给予肾络宁治疗，16周后检测α-肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）在肾小球系膜的表达。结果：正常组均有基础表达，模型组明显增高，治疗后明显下降。结论：肾络宁既能降低IgA肾病大鼠系膜细胞α-SMA的表达，又能降低FN、ICAM-1的表达，表明肾络宁对IgA肾病的系膜细胞损伤厦细胞外基质增生有一定的治疗作用．     

IgA肾病中肾小球系膜细胞表型转化及肾络宁的防治作用

目的探讨IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞的表型转化及中药复方肾络宁的作用。方法SD大鼠随机分为正常组、模型组、肾络宁组、肾炎康复片组;采用牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B复合感染的方法建立大鼠IgA肾病模型;常规检测尿红细胞、尿蛋白、血肌酐,光镜、电镜、荧光免疫观察肾组织病理;免疫组织化学染色和计算机图象分析系统观察大鼠肾小球系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达情况。结果模型组肾小球系膜区α-SMA、FN、ICAM-1明显阳性表达(P<0.01),系膜区重度IgA沉积,系膜细胞中度增生,基质增多,毛细血管狭窄,血尿及蛋白尿、血肌酐明显增高;肾络宁及肾炎康复片组α-SMA、FN、ICAM-1表达明显减低(P<0.01),IgA轻度沉积,系膜细胞及基质轻度增多,血尿、蛋白尿及血肌酐明显减低。结论IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞发生表型转化,中药复方肾络宁可明显抑制IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞的表型转化,改善临床及病理变化,肾络宁是防治IgA肾病的有效方药。     

保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响

目的观察保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为正常对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组,每组5只。保肾通络方低、中、高剂量组大鼠分别予浓度为0.5、1.0、2.0 g/mL的保肾通络方颗粒剂药液灌胃,正常对照组大鼠予等容积蒸馏水灌胃。各组大鼠均连续灌胃7 d,通过腹主动脉取血并分离出含药血清。将永生化小鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组。正常对照组肾小球系膜细胞予DMEM低糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,高糖对照组肾小球系膜细胞予含30 mmol/L葡萄糖的高糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,保肾通络方低、中、高剂量组肾小球系膜细胞分别予高糖培养基+10%的保肾通络方低、中、高剂量含药血清培养。培养24 h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性情况,免疫荧光法检测细胞外基质蛋白胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ)及纤维连接蛋白(FN)表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达情况。结果高糖对照组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与正常对照组比较明显升高(P 0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与高糖对照组比较明显降低(P 0.05),但保肾通络低、中、高剂量组细胞增殖活性组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与正常对照组比较均升高(P 0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与高糖对照组比较均降低(P 0.05),但保肾通络方低、中、高剂量组CollagenⅣ及FN灰度值组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与正常对照组相比均明显上调(P 0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与高糖对照组比较均明显下调(P 0.05),但保肾通络方各剂量组CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论保肾通络方可以降低DN肾小球系膜细胞增殖活性,抑制细胞外基质增生,减少CollagenⅣ及FN蛋白的表达,并能够下调CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达,从多途径对DN进行干预治疗。     

复方中药糖耐康对高糖诱导大鼠系膜细胞外基质的影响，

目的观察复方中药糖耐康对高糖环境下大鼠系膜细胞外基质的纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原蛋白（IV—C）及转化生长因子TGF-β1。含量的影响。方法大鼠肾小球系膜细胞按1×10^5孔接种24孔板,实验分为6组：正常葡萄糖组、高糖对照组、中药糖耐康高、中、低浓度干预组、西药吡格列酮组。每组设平行孔4孔,培养24h后检测指标。采用双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测FN、IV-C及TGF-β1,含量。结果与空白对照组比较,高糖模型组MCs的上清中的FN、IV-C、TGF-β1含量均显著升高,差异有统计学意义（P均〈0．05）;与高糖组比较,治疗组FN、IV-C、TGF-β1,含量均显著降低,差异有统计学意义（P〈0．01）;与吡格列酮组比较,糖耐康中、低剂量组FN、IV-C、TGF-β1。含量差异有统计学意义（P〈0．01）,而糖耐康高剂量组各指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论糖耐康对糖尿病肾病肾脏的保护作用之一,是通过抑制系膜细胞外基质中FN、IV-C、TGF-β,的分泌、产生,从而抑制了系膜细胞的增值,起到保护糖尿病患者。肾脏的作用。     

肾康注射液对系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)、p27~(KIP1)表达的影响

目的观察肾康注射液对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)(p21)、p27~(KIP1)(p27) mRNA及蛋白质表达的影响。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为6组,分别为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加肾康注射液高、中、低剂量组,用[~3H]胸腺嘧啶核苷([~3H]TdR)及[~3H]亮氨酸([~3H] Leu)掺入法反应细胞DNA及蛋白质的合成情况,RT-PCR、Western blot检测p21mRNA及p21、p27蛋白质表达情况。结果高糖培养肾小球系膜细胞蛋白质合成增加,DNA合成减少,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达增加；肾康注射液组与高糖组比较,蛋白质合成减少,DNA合成增加,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达降低。结论肾康注射液可能部分通过降低p21、p27过表达来阻止高糖诱导肾小球系膜细胞的肥大反应。     

芪蓟肾康方对AngⅡ所致大鼠肾小球系膜细胞增殖变化中JNK-AP1影响

目的：探讨芪蓟肾康方通过JNK信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用血管紧张素Ⅱ刺激系膜细胞增生,给予芪蓟肾康方黄酮干预,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肾小球系膜细胞上清液 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、活化蛋白1（AP-1）、纤维粘连蛋白（FN）蛋白表达;实时定量 PCR 法检测 JNK、AP-1 mRNA 的表达。结果：与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显升高（P〈0.05或 P〈0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显降低（P〈0.05或 P〈0.01）。与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA 表达明显升高（P〈0.05或 P〈0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA明显降低（P〈0.05）。结论：芪蓟肾康方可以通过下调肾小球系膜细胞JNK、AP-1 mRNA及蛋白的表达水平,抑制 JNK 信号转导,降低 AP-1的活性,减少 FN 的增殖,从而减轻 GMC 增生,延缓肾小球的损伤,防止肾小球的硬化。     

加味芪黄饮对糖尿病肾病的作用及其机制研究

目的研究加味芪黄饮治疗糖尿病肾病(DN)的作用及其机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分成正常对照组、模型对照组及加味芪黄饮低、高剂量组(400、800 mg·kg-1·d-1)。以高糖高脂饮食及链脲佐菌素复制DN大鼠模型。给药12周后,测定各组大鼠24 h尿白蛋白(24 h UAlb)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)等指标,HE染色观察大鼠肾组织病理改变,Western Blot法检测大鼠肾组织中胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达。结果与模型对照组比较,加味芪黄饮低、高剂量组大鼠24 h UAlb、Scr、BUN、FBG、FINS水平均较明显降低(P0.05),ISI则明显升高(P0.05),且有一定的量效关系;能减轻DN大鼠肾小球肥大,系膜细胞、系膜基质弥漫增生等病理改变;使大鼠肾组织IRS-1表达明显升高(P0.05)。结论加味芪黄饮能保护DN大鼠的肾功能,减轻DN大鼠肾组织损伤,其可能通过上调IRS-1表达,以改善胰岛素抵抗状态而发挥作用。     

芪蓟肾康方对AngII 所致大鼠肾小球系膜细胞增殖变化中JNK-AP1 影响

目的：探讨芪蓟肾康方通过JNK 信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用血管紧张素域刺激系膜细胞增生,给予芪蓟肾康方黄酮干预,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肾小球系膜细胞上清液c-Jun氨基末端激酶（JNK）、活化蛋白1（AP-1）、纤维粘连蛋白（FN）蛋白表达;实时定量PCR 法检测JNK、AP-1 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中JNK、AP-1及FN蛋白表达明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中JNK、AP-1及FN蛋白表达明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中JNK、AP-1 及FN mRNA 表达明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中JNK、AP-1及FN mRNA明显降低（P＜0.05）。结论：芪蓟肾康方可以通过下调肾小球系膜细胞JNK、AP-1 mRNA及蛋白的表达水平,抑制JNK信号转导,降低AP-1的活性,减少FN的增殖,从而减轻GMC增生,延缓肾小球的损伤,防止肾小球的硬化。     

黄芪、小蓟对NF-κB信号通路的影响

目的:探讨黄芪、小蓟通过NF-κB信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用血管紧张素Ⅱ刺激系膜细胞增生,分别给予黄芪、小蓟,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肾小球系膜细胞上清液NF-κB和FN的表达。结果:与正常组比较,模型组和黄芪高、低剂量组,小蓟高、低剂量组大鼠肾小球系膜细胞中NF-κB和FN表达均升高且差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,黄芪高、低剂量组、小蓟高、低剂量组均可降低NF-κB信号转导通路中NF-κB及FN的表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论:黄芪、小蓟可能通过下调肾小球系膜细胞NF-κB和FN蛋白表达的水平,从而调整核因子信号转导通路的兴奋性,减轻肾小球的损伤,减缓肾小球的硬化。