类器官在中医药研究领域的应用与展望

类器官又称“培养皿中的器官”,因其能够在体外模拟组织器官的生理功能及病理状态,近年来受到国内外学者的广泛关注,被誉为“最佳的临床前模型”。类器官已广泛应用至生命科学及临床医学研究领域,2017年被《Nature》杂志评选为年度最佳生物学技术,成为继人体、动物、细胞之后的全新研究模式体系。中医药以整体观念和辨证论治指导临床实践,依赖于动物和细胞模型的基础研究具有较大局限性,文章从中医学视角出发,探讨类器官模式体系在中医药研究中的应用方向和重要价值,为实现中医药研究的创新突破提供新的思路。     

海蛾提取物对小鼠免免疫器官重量和抗应激能力的影响

海蛾提取物使氢化可的松或环磷酰胺所致免疫低下小鼠的脾脏重量和胸腺重量增加,使老龄小鼠胸腺重量增加;海蛾提取物显著延长小鼠在常压缺氧或氰化钾所至化学性缺氧条件下的存活时间,对小鼠冰水中游泳存活时间也有显著的延长作用,并可明显提高上鼠耐饥渴能力。     

海蛾提取物对小鼠免疫器官重量和抗应激能力的影响

海蛾提取物使氢化可的松或环磷酰胺所致免疫低下小鼠的脾脏重量和胸腺重量增加,使老龄小鼠胸腺重量增加;海蛾提取物显著延长小鼠在常压缺氧或氰化钾所致化学性缺氧条件下的存活时间,对小鼠冰水中游泳存活时间也有显著的延长作用,并可明显提高小鼠耐饥渴能力。     

基于主成分分析法研究干燥方法对黄芪药材质量的影响

目的:研究五种产地加工干燥方法对黄芪药材的外观性状、内在成分的影响规律，以期选出最佳的黄芪药材产地初加工干燥方法。方法:对新鲜黄芪药材进行晒干、阴干、热风干燥(50、60、70℃)的处理，比较干燥速率随干燥时间的动态变化规律，研究其对A药材外观性状、浸出物、复水比；采用HPLC-ELSD测定黄芪甲苷含量；HPLC-UV法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量；UV-Vis测定黄芪多糖含量，最后采用主成分分析法进行综合评价。结果:经对实验数据分析，黄芪物效含量为60℃烘干>晒干>阴干>50℃烘干=70℃烘干，其中60℃烘干和晒干的贡献得率达93.936%,具有绝对优势。阴干，晒干，50℃、60℃、70℃热风干燥五种干燥方法使黄芪达到安全含水(10%)所需时间分别为132 h、60 h、13.5 h、9.5 h、4.5 h。结论:从黄芪外观性状与内在成分含量等因素考虑，其产地加工方法以60℃热风干燥为宜，但综合经济因素考虑，晒干亦较为适宜。     

健脾理气化淤方药对脾虚小鼠胃肠推进运动的影响

采用炭末在胃肠推进百分比为指标,观察了大黄所致小鼠脾虚模型的胃-小肠运动机能,以及四君子汤等健脾、理气、化淤治则代表方药的影响。结果表明:脾虚小鼠的胃肠推进运动呈抑制状态,这种抑制状态在停用大黄后2周才能自然恢复;四君子汤、木香积实合剂、丹参川芎合剂均可显著改善脾虚小鼠的胃肠推进抑制,其兴奋效应强弱依次为四君子汤>木香积实合剂>丹参川芎合剂。     

黄芪甲苷对脑缺血小鼠外周免疫抑制作用的影响

目的 观察黄芪甲苷对脑缺血小鼠外周免疫抑制作用的影响,探讨其保护脑缺血损伤的作用机制.方法 实验小鼠随机分为假手术组、模型组和给药组,采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,给药组腹腔注射黄芪甲苷溶液.TTC法检测脑梗死体积,神经功能缺损评分评价小鼠神经功能,观察小鼠脾脏质量变化,流式细胞术检测脾脏和外周血中自然杀伤(NK...     

黄芪及其活性成分对脓毒症临床和药理作用的研究进展

脓毒症是临床危重病患者死亡的常见原因。中药黄芪由于具有补气升阳、托毒排脓的功效,近年来,临床上使用黄芪及其制剂用于脓毒症治疗的报道越来越多,同时黄芪及其活性成分对脓毒症模型动物的干预效果及其机制研究也成为热点。主要从调节免疫功能、改善炎症反应和微循环障碍、改善多器官损伤等角度,综述了黄芪药材及其活性成分在脓毒症的临床治疗和作用机制研究中的研究进展。     

黄芪甲苷、总多糖、注射液对3种人恶性肿瘤细胞增殖的影响

目的:比较黄芪不同制剂、成分对3种人肿瘤细胞株SMMC7721、PC3、HL60增殖的影响。方法:将不同浓度黄芪甲苷、总多糖、注射液,直接加入肿瘤细胞培养液中,MTT法测定各成分对三种肿瘤细胞的增殖影响。结果:黄芪甲苷、总多糖、注射液上述三种人肿瘤细胞增殖无明显抑制作用,且黄芪甲苷在20mg/ml浓度时对SMMC7721、PC3的增殖有一定促进作用。结论:体外实验结果表明黄芪甲苷、总多糖、注射液对三种人肿瘤细胞株增殖无明显抑制作用。     

转录组测序分析昆仑雪菊醇提物黄诺玛苷对胰岛素抵抗小鼠小肠类器官的影响

目的：探讨黄诺玛苷对胰岛素抵抗小鼠小肠类器官转录组的影响。方法：首先建立C57BL/6J和db/db小鼠小肠类器官;采用免疫荧光法检测细胞核核抗原（ki-67）和上皮细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达;将小肠类器官分为3组,分别是以C57BL/6J小鼠小肠类器官为正常组、db/db小鼠小肠类器官为模型组和db/db小鼠小肠类器官黄诺玛苷干预组为给药组（FM组）;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测3组小肠类器官胰高血糖素样肽-1(GLP-1)蛋白的表达;并对3组样本进行转录组测序。结果：小肠类器官培养第6天形成围绕管腔周围的环状结构,初步建立了小肠类器官培养模式;免疫荧光检测结果显示小肠类器官均表达ki-67和E-cadherin;Western blot结果显示黄诺玛苷可增加GLP-1蛋白的表达;差异基因表达分析中,模型组与正常组相比差异表达基因共有1 862个,FM组与模型组相比差异表达基因共有2 282个;通过蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络分析2组共同表达的差异基因,得到Nr1i3、Cyp2c44、Ugt2b1、Gsta1、Gstm2、Ptgs1、G...     

口服云芝多糖对小鼠免疫器官影响的结果及意义

目的：探讨口服云芝多糖能对小鼠免疫器官的影响。方法：48只小鼠随机分小、中、大剂量三个实验组和对照组。试验组依次分别经口服不同剂量云芝多糖（125,250和500 mg.kg-1.d-1）,每日1次,连续28d。分别于7d、14d、21d、28d取各组小鼠胸腺、脾脏称重计算指数。结果：中剂量和大剂量组胸腺和脾脏指数显著增高,中剂量和大剂量组第21d胸腺和脾脏指数显著高于对照组及7d。结论：口服云芝多糖能提高小鼠脾脏和胸腺指数增强免疫功能。为临床应用提供参考及实验依据。     

BZL方对非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠肠黏膜损伤的保护作用

目的:观察中药组分复方BZL方(白术多糖、栀子苷、绿原酸)对高脂饮食诱导的小鼠脂肪性肝炎(NASH)及其肠黏膜损伤的作用。方法:C57BL/6J雄性小鼠27只,随机分为正常、模型和BZL方组,每组9只。除正常组外,其余各组均采用高脂饮食诱导NASH,第14周开始,BZL方组灌胃BZL方,其余各组灌胃等量饮用水,至17周末处死取材。观察各组小鼠体质量、进食量、肝体比,肝组织病理(HE和天狼猩红染色,SAF评分),检测血浆ALT、GGT活性、LPS水平,肝组织TG含量;肝组织胶原I型和IV型、内毒素受体CD14、TLR1、TLR2、TLR4、TLR9及炎性反应因子IL-1β、TNF-αmRNA表达(real-time PCR法);肠组织病理(HE染色);大肠组织紧密连接zo-1、occludin、claudin mRNA表达(real-time PCR法)及蛋白表达(免疫荧光染色)。结果:高脂饮食诱导NASH模型中,模型组血浆ALT、GGT、LPS及肝组织TG含量较正常组显著升高(P 0. 01);肝组织可见脂肪沉积、炎性反应、气球样变及纤维化,SAF评分显著高于正常组,肝组织胶原Col I、Col IV mRNA显著升高,CD14、TLR1、TLR2、TLR4、TLR9及IL-1β、TNF-αmRNA表达升高(P 0. 05,P 0. 01);肠组织病理变化光镜下不明显,大肠组织紧密连接zo-1、occludin、claudin mRNA表达降低(P 0. 01),zo-1、occludin免疫荧光阳性染色减少。BZL方可降低血浆ALT、GGT、LPS、肝组织TG含量(P 0. 05,P 0. 01),改善SAF评分,降低肝组织胶原Col I、Col IV mRNA表达(P 0. 01),降低CD14、TLR2、TLR4、TLR9及IL-1β、TNF-αmRNA表达(P 0. 05,P 0. 01),恢复大肠组织紧密连接zo-1、occludin mRNA表达(P 0. 01),恢复zo-1、occludin免疫荧光阳性染色。结论:BZL方有效减轻高脂饮食诱导的小鼠NASH,该作用与其保护肠黏膜、抑制LPS肠渗漏及肝组织中TLRs及炎性反应因子密切相关。     

四君子汤对两种脾虚模型大鼠肠道菌群紊乱的影响

目的 观察两种脾虚模型大鼠肠道菌群的变化,研究四君子汤对肠道菌群紊乱的影响。     

四君子汤、六味地黄汤对环磷酰胺致小鼠免疫抑制的拮抗作用实验研究

目的:探讨四君子汤、六味地黄汤对环磷酰胺致小鼠免疫抑制的拮抗作用机理。方法:采用体重20g左右的ICR纯种小鼠32只,随机分成正常组、环磷酰胺组、四君子汤和六味地黄汤两个用药组,连续给药10天后,进行脾指数、脾细胞凋亡率和胸腺细胞周期测定。结果:环磷酰胺能明显降低小鼠脾指数,抑制胸腺细胞增殖,诱导脾细胞凋亡,而四君子汤和六味地黄汤能显著提高脾指数,促进胸腺细胞增殖及抑制脾细胞凋亡。结论:四君子汤和六味地黄汤能拮抗环磷酰胺的免疫抑制作用,提高机体的免疫功能。     

四君子汤、四物汤对亚急性衰老模型雌性小鼠IL-2影响的实验研究

目的:探讨四君子汤、四物汤对亚急性衰老模型雌性小鼠IL-2影响的差异性。方法:以D-半乳糖致衰老模型雌性小鼠为研究对象,观察四君子汤、四物汤对D-半乳糖致衰老模型雌性小鼠免疫因子IL-2水平的影响。结果:四君子汤组雄性小鼠的IL-2水平显著高于四物汤组和模型对照组的雄性小鼠;四物汤组雌性小鼠的IL-2水平显著高于四君子汤组和模型对照组的雌性小鼠。结论:四君子汤与四物汤对D-半乳糖致衰老模型雌性、雄性小鼠免疫因子IL-2的影响具有一定的差异性。     

早期肠内应用四君子汤对消化道肿瘤术后患者免疫功能的影响

目的评价早期肠内应用四君子汤对消化道肿瘤患者手术创伤后免疫功能的影响：方法92例消化道恶性肿瘤手术患者随机分为常规肠内营养组（简称对照组）和四君子汤干预肠内营养组（简称研究组）。两组均从手术后第1天开始等热量、等氮肠内营养支持1周,研究组同时以四君子汤治疗1周：于手术前1天,手术后第1天清晨,研究结束时检测血清细胞因子白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度,外周血淋巴细胞总数,B淋巴细胞数,T淋巴细胞及亚群（CD3、CD4、CD8及CD4／CD8）,免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）浓度,血清C反应蛋白（CRP）浓度。结果研究结束时,研究组IgA、IgG、IgM浓度,外周血淋巴细胞总数,CD3、CD4及CD4／CDR均明显高于对照组（P〈0．05）;血清IL-2也明显高于对照组（P〈0．05）,而IL-6、TNF-α浓度及CRP水平则明显低于对照组（P〈0．05）。结论胃肠道术后患者早期肠内营养基础上加用四君子汤治疗可以减轻患者术后的应激和炎症反应程度,增强机体免疫功能。     

加味四君子汤对巨结肠患儿肠屏障功能影响的临床观察

目的研究加味四君子汤对巨结肠患儿肠屏障功能是否有保护作用。方法 32例巨结肠患儿随机分为2组,治疗组(16例)于术前10天起每日除清洁灌肠外予加味四君子汤口服,对照组(16例)予清洁灌肠,于根治术中分别切取两组患儿病变结肠组织制成切片,免疫组化法检测结肠黏膜固有层浆细胞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)水平,光镜下检测结肠黏膜腺体密度,电镜下观察结肠上皮间紧密连接、上皮微绒毛、线粒体和内质网等细胞器形态。结果治疗组高倍镜视野下结肠黏膜腺体数目平均值及黏膜下固有层浆细胞SIgA值均高于对照组,电镜下观察到治疗组结肠黏膜细胞器形态较对照组更完整。结论加味四君子汤可以通过改善肠黏膜细胞增殖以维持肠黏膜完整性,增强肠道局部免疫力,从而加强肠道的屏障功能,对先天性巨结肠患儿的肠屏障功能有一定保护作用。     

四君子汤对衰老模型小鼠mtDNA缺失的影响

目的 探讨四君子汤对衰老模型小鼠mtDNA缺失的影响及其分子生物学作用机制.方法 取昆明种小鼠,按体重随机分为6组,即正常对照组,模型对照组,四君子汤高、中、低剂量组(灌胃20,10,5 g·kg-1)和维生素E组(灌胃250 mg·kg-1),每组20只,分笼饲养.以D-半乳糖法制备小鼠衰老模型,运用水迷宫实验,通过对小鼠空间辨别性学习能力进行训练来评估其学习记忆能力,观察四君子汤对衰老模型小鼠mtDNA(Mitochondrial DNA,线粒体DNA)缺失的影响.结果 模型对照组和四君子汤低剂量组(5 g·kg-1)小鼠海马mtDNA中存在着约3.87 kb片断缺失.四君子汤高、中剂量组(20,10 g·kg-1)未见缺失片断.结论 四君子汤具有防御模型小鼠脑mtDNA缺失突变的作用,可能是其延缓衰老的分子生物学作用机制.     

健脾合剂对脾虚腹泻型肠易激综合征小鼠肠道菌群的干预研究＊

目的 通过观察健脾合剂对脾虚腹泻型肠易激综合征（IBS-D）模型小鼠的肠道菌群的干预作用，研究健脾合剂对脾虚型IBS-D肠道微生物的影响。方法 将清洁级幼龄 ICR 雄性小鼠 48 只随机分为四组（n=12），并建立脾虚型IBS-D 小鼠模型（3n=36），造模评价成功后，空白组和模型组分别予双蒸水（10 ml·kg^-1）、西药组予复合乳酸菌（0.26 g·kg^-1）、中药组予健脾合剂（16 ml·kg^-1）灌胃，治疗周期均为 14 天。治疗周期结束后，每组随机抽取 5 只小鼠，分别标记为B1、B2、B3、B4组，随后通过 16SrDNA 高通量基因测序法分析治疗前后小鼠肠道菌群的变化。结果 本研究测序深度充分，样品均具有良好的丰富度与多样性。与B1组比较，B2组小鼠的肠道菌群多样性明显降低（P < 0.05）；与B2组比较，B3、B4组小鼠的肠道菌群多样性明显提高（P < 0.05）；与B1组比较，B3、B4组小鼠肠道菌群多样性无明显差异（P > 0.05），说明健脾合剂和复合乳酸菌的干预均能调节脾虚型IBS-D小鼠肠道菌群达到或接近健康小鼠的肠道菌群稳态；且B3与B4组间的小鼠肠道菌群多样性无明显差异（P > 0.05），推测健脾合剂有益生元样作用；健脾合剂干预后，在门水平，Tenericutes、Actinobacteria、Saccharibacteria丰度上调（P < 0.05），Proteobacteria丰度下调（P < 0.05）；在属水平，Alistipes、Ruminiclostridium、Candidatus_Saccharimonas、Rikenella、Intestinimonas、Lachnoclostridium、Oscillibacter、Coprococcus、Faecalibaculum、Enterorhabdus、Peptococcus、Romboutsia、Papillibacter丰度上调（P < 0.05），Lactobacillus、Bacteroides、Parasutterella、Escherichia、Erysipelatoclostridium、Parabacteroides、Candidatus_Stoquefichus丰度下调（P < 0.05）。结论 健脾合剂干预可以增加脾虚型IBS-D小鼠肠道菌群多样性，并调节到与健康小鼠相似的平衡状态。     

加味四君子对宫颈癌大鼠模型癌组织中Caspase-3、Caspase-7、Survivin表达的干预作用

目的:观察加味四君子汤对宫颈癌模型癌组织Caspase-3、Caspase-7、Survivin表达的影响,以探明加味四君子汤治疗宫颈癌的机制。方法:将30只Wistar雌性大鼠随机分为空白组、模型组及干预组,其中空白组10只,模型组及干预组各9只。其中空白组大鼠不接受造模及干预,模型组大鼠仅接受模型制备,干预组大鼠接受模型制备及加味四君子汤灌胃,连续治疗8周,疗程结束后比较各组宫颈癌病灶大小,同时用免疫组化法检测各组宫颈癌组织Caspase-3、Caspase-7、Survivin的水平表达变化。结果:1)空白组未出现宫颈癌病灶,模型组病灶体积(1 573. 48±11. 24) mm3,干预组病灶体积(683. 23±4. 81) mm3,各组宫颈癌病灶大小差异有统计学意义(P 0. 05),干预组明显较模型组小。2) 2组接受造模术大鼠Caspase-3、Caspase-7浓度均有不同程度下调,Survivin表达升高,其中干预组大鼠经过为期8周的干预后Caspase-3、Caspase-7浓度上调,Survivin浓度下降,干预组改善明显优于模型组,差异有统计学意义(P 0. 05)。3)经过相关分析显示,癌灶体积与Caspase-3、Caspase-7呈负相关关系,与Survivin有正相关关系。结论:加味四君子可明显缩小宫颈癌病灶体积,其作用机制可能与调节Caspase-3、Caspase-7、Survivin表达有关。