天然水蛭素对实验性肝纤维化大鼠肝脏结缔

目的 观察水蛭素对肝纤维化大鼠肝脏组织结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor, CTGF)mRNA表达的影响.方法SD大鼠60只随机分为空白对照组、模型组和水蛭素组共3组,每组20只,用40%四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)复制大鼠肝纤维化模型,水蛭素干预12周后处死大鼠,采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝组织CTGF mRNA的表达.结果模型组CTGF mRNA 2-ΔΔCt值(3.59±0.52)显著高于正常对照组(1.02±0.23)(P<0.05),表明模型组CTGF mRNA表达上调.与模型组比较,水蛭素组CTGF mRNA 2-ΔΔCt值(1.83±0.34)显著降低(P<0.05),表明CTGF mRNA表达下调.结论水蛭素可能通过下调CTGF mRNA的表达,抑制肝脏细胞外基质异常增生发挥抗肝纤维化作用.     

天然水蛭素对实验性肝纤维化大鼠肝脏结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的观察水蛭素对肝纤维化大鼠肝脏组织结缔组织生长因子（Connective tissue growth factor，CTGF）mRNA表达的影响。方法SD大鼠60只随机分为空白对照组、模型组和水蛭素组共3组，每组20只，用40％四氯化碳（carbon tetra-chloride，CCl4）复制大鼠肝纤维化模型，水蛭素干预12周后处死大鼠，采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝组织CTGFmRNA的表达。结果模型组CTGFmRNA2^-ΔΔCt值（3．59&#177;0．52）显著高于正常对照组（1．02&#177;0．23）（P〈0．05），表明模型组CTGFmRNA表达上调。与模型组比较，水蛭素组CTGFmRNA2^-ΔΔCt值（1．83&#177;0．34）显著降低（P〈0．05），表明CTGFmRNA表达下调。结论水蛭素可能通过下调CTGFmRNA的表达，抑制肝脏细胞外基质异常增生发挥抗肝纤维化作用。     

大黄素对肝纤维化大鼠肝脏组织Sm ad3表达的影响

目的:观察大黄素对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏组织Smad3 mRNA和蛋白表达的影响。方法:50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(10只)、CCl4组(20只)和大黄素+CCl4组(20只),共3组。CCl4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,同时大黄素灌胃干预,12周后处死大鼠。采用VG胶原染色法检测大鼠肝脏组织病理学改变,免疫组织化学法检测肝脏组织Smad3蛋白表达,实时定量RT-PCR检测肝脏组织Smad3 mRNA表达。结果:与CCl4组比较,大黄素可显著降低CCl4诱导的肝纤维化程度(P<0.05),减少肝脏组织Smad3蛋白和mRNA表达(P<0.05)。结论:大黄素可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能通过下调Smad3 mRNA和蛋白表达有关。     

海马注射β-淀粉样蛋白对BACE1 mRNA的影响及通络救脑口服液的干预作用

目的:探讨大鼠大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40对BACE1mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其的干预作用。方法:采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测BACE1mRNA表达。结果:模型组BACE12-ΔΔCt为4.67±0.52,2-ΔΔCt显著多于假手术组(1.07±0.08,P<0.01),表明模型组BACE1mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多萘哌齐组(1.80±0.23)、通络救脑口服液48mg、24mg、12mg/kg·d分别为2.92±0.22、1.54±0.25和0.54±0.11,2-ΔΔCt显著减少,表明BACE1mRNA表达下调。结论:大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后大鼠海马组织BACE1mRNA表达水平明显增高,通络救脑口服液可以抑制海马组织BACE1mRNA的表达,从而发挥其抗老年性痴呆的作用。     

垂盆草总黄酮调控Smads通路抑制肝星状细胞活化的抗肝纤维化机制研究

通过皮下注射CCl_4复制大鼠肝纤维化模型,观察垂盆草总黄酮对大鼠肝纤维化的干预作用及其可能作用机制。将60只SD雄性大鼠随机分成正常组,模型组,垂盆草总黄酮低、中、高剂量组(100,200,400 mg·kg~(-1))和水飞蓟素组(200 mg·kg~(-1)),共6组,每组10只;给予40%CCl_4橄榄油溶液皮下注射造模,每周2次,连续6周;造模后,给药组分别给予相应药物,正常组、模型组分别给予0.9%NaCl溶液,每天1次,连续5周。实验结束,观察大鼠一般状况和肝组织病理变化;检测各组大鼠血清肝功能(ALT,AST)和肝纤维化指标(HA,LN),肝脏Smad2/3,Smad4,Smad7,α-SMA的蛋白和相关mRNA的表达。结果显示,与模型组比较,垂盆草总黄酮能明显增加大鼠体质量,抑制肝纤维化大鼠肝脾指数上升;同时,该药可显著降低大鼠血清ALT,AST及HA,LN的含量,减轻大鼠肝纤维程度;进一步研究表明垂盆草总黄酮能明显降低肝纤维化大鼠肝脏Smad2/3,Smad4,α-SMA蛋白和相关mRNA的表达,提高Smad7蛋白和mRNA的表达。垂盆草总黄酮能显著改善大鼠肝纤维化程度,其作用机制可能与干预肝纤维化Smads通路,从而抑制HSC活化有关。     

加味茵芍散对肝纤维化家兔TGF-β1、Smad2、Smad4 mRNA表达的影响

目的:从加味茵芍散对肝纤维化家兔转化生长因子-β1(TGF-β1)、丝/苏氨酸激酶2(Smad2)、丝/苏氨酸激酶4(Smad4)mRNA表达的影响探讨该方对肝纤维化的可能作用机制。方法:按0.10mL/kg的用量腹腔注射CCl4诱导复制家兔肝纤维化模型,50只家兔随机分成模型组,秋水仙碱组,加味茵芍散高、中、低剂量组5组,每组10只,通过肝脏病理取材确定肝纤维化病变,同时实时定量逆转录一聚合酶链反应法检测TGF-β1、Smad2 mRNA、Smad4 mRNA的表达。结果:与模型组相比,秋水仙碱组和加味茵芍散高、中、低剂量组家兔肝组织TGF-β1、Smad2 mRNA、Smad4 mRNA表达明显减弱(P0.05);加味茵芍散中、高剂量组与秋水仙碱组相比TGF-β1、Smad2 mRNA、Smad4 mRNA的表达量显著降低(P0.05)。结论:加味茵芍散能减轻纤维组织增生,可以下调TGF-β1、Smad2 mRNA、Smad4的表达。该方对CCl4诱导家兔肝纤维化模型具有一定保护作用、可以延缓肝纤维化的进展,其作用机制可能与调节TGF-β/Smad信号通路有关。     

芪蚣抗纤方对免疫损伤性肝纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路影响

目的:观察芪蚣抗纤方(QF)对免疫损伤性肝纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路影响。方法:采用猪血清攻击法复制免疫损伤性肝纤维化大鼠模型;用双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清LN、HA、TGF-β1含量;免疫组化法观察TGF-β1、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA表达。观察QF抗肝纤维化的分子机制。结果:①血清学指标结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清TGF-β1、LN、HA含量明显升高(P<0.05或P<0.01)。经QF干预后,大鼠血清TGF-β1、LN、HA含量明显下降(P<0.01)。②免疫组织化学结果:模型组大鼠肝组织TGF-β1胞浆强阳性表达,Smad2棕色阳性着色由胞浆转至胞核,Smad7无阳性表达。QF干预组大鼠肝组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达下调(P<0.01)。结论:QF通过调节TGF-β1/Smads信号通路,能保护和修复受损的肝细胞,抑制胶原纤维的形成,发挥抗肝纤维化作用。     

海马注射β-淀粉样蛋白对APP mRNA的影响及加减地黄饮子的干预作用

目的:探讨SD大鼠海马立体定向注射A1β-40后APP mRNA表达的变化及加减地黄饮子对其干预作用。方法:选用100只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术对照组、模型对照组、盐酸多奈哌齐对照组、加减地黄饮子组共5组,每组20只。通过海马立体定向注射A1β-40诱导老年性痴呆动物模型。药物干预4w,第5周处死大鼠,应用实时定量PCR法检测海马组织APP mRNA表达。结果:模型组APP mRNA 2-ΔΔCt值显著高于假手术组,表明模型组APP mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和加减地黄饮子组APP mRNA 2-ΔΔCt值显著降低,表明APP mRNA表达下调。结论:大鼠大脑海马注射Aβ1-40后海马组织APP mRNA表达水平明显增高,加减地黄饮子提取物可以抑制海马组织APP mRNA的表达,从而发挥抗老年性痴呆的作用。     

通络救脑口服液对AD模型大鼠Bax和Bcl-2 mRNA的影响

目的:探讨大鼠大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40对Bax和Bcl-2mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其干预作用。方法:140只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为空白对照组、假手术组、阴性对照组、阳性对照组、实验组(12、24、48mg.kg-1.d-1)共7组。采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测Bax和Bcl-2mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Bax2-ΔΔCt明显升高,而Bcl-22-ΔΔCt明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),表明模型组Bax mRNA表达上调,而Bcl-2mRNA表达下调。与模型组比较,盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组Bax2-ΔΔCt显著降低,表明Bax mRNA表达下调;而盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组Bcl-22-ΔΔCt显著升高,表明Bcl-2mRNA表达上调。结论:大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后大鼠海马组织Bax mRNA表达水平明显增高,Bcl-2表达明显降低,而通络救脑口服液可以抑制海马组织Bax mRNA的表达和促进Bcl-2mRNA表达,从而发挥其抗老年性痴呆神经细胞凋亡的作用。     

柴竭抑肝纤对硫代乙酰胺诱导的大鼠肝纤维化的影响

目的:研究中药复方柴竭抑肝纤(Chaijie Yiganxian,CJYGX)对抗大鼠肝纤维化的作用及其机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,阳性组(鳖甲煎丸),CJYGX高、中、低剂量组。除正常组外,其余5组通过腹腔注射硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导建立肝纤维化模型。自造模第4周开始,阳性组给予鳖甲煎丸1 g·kg~(-1)·d-1灌胃,CJYGX高、中、低剂量组分别给予CJYGX 7.96,3.98,1.99 g·kg~(-1)·d-1灌胃,模型组灌服生理盐水,每日灌胃1次,共5周。于末次灌胃24 h后,水合氯醛轻度麻醉大鼠,留取血清及肝组织,称肝脏湿重并计算肝脏指数;全自动分析法检测大鼠肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP);酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝纤维化血清学标志物层粘连蛋白(laminin,LN),透明质酸酶(hyaluronidase,HA),Ⅳ型胶原(Ⅳcollagen,CⅣ),Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ);马松(Masson)染色观察肝脏纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),Smad2,Smad3,Smad4,Smad7 mRNA表达;免疫组化检测肝脏组织血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)和TGF-β1蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肝脏指数显著升高;肝功能指标ALP,AST,ALT的含量显著升高;肝纤维化指标LN,HA,Ⅳ-C,PCⅢ和HYP显著升高; Masson染色观察到肝纤维化程度显著增加; TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4 mRNA表达显著升高,Smad7 mRNA表达显著降低; TGF-β1,PDGF和α-SMA蛋白表达显著升高(P0.01)。与模型组比较,各剂量的CJYGX能不同程度的降低肝功能指标ALP,AST,ALT的水平;肝纤维化指标LN,HA,Ⅳ-C,PCⅢ和HYP都明显的降低; Masson组织观察到肝纤维化程度显著减轻; TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4 mRNA表达明显下调,Smad7 mRNA表达明显上调; TGF-β1,PDGF和α-SMA蛋白表达显著下调(P0.05,P0.01)。结论:中药复方"柴竭抑肝纤"可能通过干预TGF-β1/Smad信号通路,保护TAA诱导的大鼠肝纤维化损伤。