当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1表达的影响

目的:研究当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad信号通路的调控作用,探讨其对DN大鼠的作用及产生该作用可能的机制。方法:采用一次性大剂量(60 mg·kg-1)腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立DN大鼠模型。将DN大鼠随机分为正常组、模型组、厄贝沙坦组及当归-红芪超滤膜提取物低、中、高剂量组,之后开始灌胃给药,每天1次,8周后测空腹血糖(FBG),尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),24 h尿蛋白;光镜观察肾组织结构变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量;免疫组化法检测肾组织TGF-β_1,Smad2/3蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肾组织TGF-β_1,Smad2/3的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平明显升高,ELISA检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量明显升高,肾组织病理结构异常较为明显,TGF-β_1,Smad2/3蛋白量表达明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,当归-红芪超滤膜提取物各组均不同程度降低了DN大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平(P0.05);ELISA检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量降低(P0.05),肾组织病理结构异常得到改善,TGF-β_1,Smad2/3蛋白量表达减少(P0.05,P0.01),TGF-β_1,Smad2/3 mRNA表达减少(P0.05,P0.01)。结论:当归-红芪超滤膜提取物可改善DN大鼠肾功能病变,延缓DN慢性病理进展,其机制可能与其抑制TGF-β_1/Smad信号通路有关。     

尿毒清颗粒调控TGF-β1/SnoN/Smads信号通路改善肾衰竭模型鼠肾间质纤维化的作用和机制

为了初步阐明尿毒清颗粒(uremic clearance granule,UCG)在体内调控转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/SnoN/Smads信号通路而改善肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的作用和机制,将15只大鼠随机分为正常组、模型组、尿毒清组。采用腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管结扎术(unilateral ureteral obstruction,UUO)建立肾衰竭模型。造模后,3组大鼠分别给予UCG悬浊液或蒸馏水,共3周,其间,检测大鼠体重、24 h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,Upro);给药3周后,处死全部大鼠,抽取血液,摘除双肾,称重,观察肾脏外观和肾组织形态特征,检测血清生化指标和肾组织TGF-β1,SnoN,磷酸化Smad2/3(phosphorylated Smad2/3,p-Smad2/3)以及Smad7蛋白表达量。结果表明,经UCG干预后,模型鼠一般情况,肾脏外观、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、尿酸(uric acid,UA)、白蛋白(albumin,Alb)、Upro以及肾组织形态均得到不同程度的改善;UCG还可以下调模型鼠肾组织TGF-β1,p-Smad2/3蛋白表达水平,上调SnoN,Smad7蛋白表达水平。总之,UCG可能在体内多靶点地调控TGF-β1/SnoN/Smad信号通路,从而,减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成,延缓肾衰竭进展。     

复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1/ BMP-7表达失衡及其Smad信号通路的调控作用

目的: 研究复方黄连胶囊(CRCC)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TGF-β1/BMP-7表达失衡及其Smad信号通路的调控作用,探讨CRCC对DN大鼠早期肾损伤的作用及其可能机制。 方法: 以链脲佐菌素(STZ)复制早期DN大鼠模型,动物分为正常组、模型组、消渴丸组(0.8 g·kg^-1)、依那普利组(1 mg·kg^-1)与CRCC 低、中、高剂量组(生药含量分别为1.09,2.18,4.36 g·kg^-1),灌胃给药,每天1次,5周后生化指标检测空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、胰岛素(Ins)、24 h尿蛋白(24 h Upro)及24 h 尿微量白蛋白(24 h UmAlb);光镜观察肾组织形态学的改变;免疫组化法检测肾组织TGF-β1,BMP-7,Smad2/3,Smad1/5及Smad7蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1和BMP-7 mRNA表达。 结果: 与模型组比较,各CRCC治疗组均不同程度降低了DN大鼠FBG,BUN,Scr,24 h Upro 和24 h UmAlb水平,改善肾组织病理形态学异常,TGF-β1与Smad2/3蛋白表达减少,BMP-7,Smad1/5与Smad7蛋白表达增加,TGF-β1 mRNA表达减少,但BMP-7 mRNA表达未增加。 结论: CRCC可改善早期DN大鼠肾功能病变,延缓DN慢性病理进展,其机制可能与通过Smad信号通路调控DN肾组织TGF-β1/BMP-7表达失衡有关。     

消渴平合剂对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠TGF-β_1/Smad7信号转导通路的影响研究

目的:观察消渴平合剂对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠TGF-β1/Smad7信号转导通路的影响,探讨其对DN的防治作用及机制。方法:复制DN大鼠模型,随机分为正常组10只,模型组10只、厄贝沙坦组10只和消渴平合剂组10只。12周时处死大鼠,观察各组大鼠24 h尿蛋白变化情况,检测血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、一氧化氮(NO),大鼠肾组织行HE染色,免疫组化检测肾组织TGF-β1及Smad7蛋白。结果:消渴平合剂可以改善DN大鼠的一般状况,明显降低24 h尿蛋白定量(P0.01),减轻肾组织病理性损害。与模型组比较,消渴平合剂组BUN、Scr、TG含量显著降低(P0.01),NO含量明显升高(P0.01);肾组织TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.01),Smad7蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:消渴平合剂可用于治疗糖尿病肾病,其机制可能与抑制DN大鼠肾脏TGF-β1/Smad7信号转导通路的激活有关。     

小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞 TGF-β1 与Ⅳ型胶原蛋白表达的影响

目的:探讨小檗碱对糖尿病肾病(DN)大鼠肾病变的保护作用及其机制.方法:以链脲佐菌素(STZ)复制DN大鼠模型,动物分为正常对照组、模型组、小檗碱低、中、高剂量治疗组(50,100,200mg·kg-1 ·d-1)、消渴丸治疗组( XKW,0.8g·kg-1·d-1),8周后检测空腹血糖(FBG)、肾重/体重比(KW/BW)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及尿蛋白(Upro);免疫组织化学检测肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)与Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)蛋白的表达.结果:ig给药,小檗碱可降低大鼠FBG,KW/BW,BUN,Cr及Upro水平,降低肾小球系膜细胞TGF-与Ⅳ-C蛋白的表达.结论:小檗碱对DN大鼠肾微循环病变具有保护作用,这种作用可能与其抑制肾组织TGF-β1与Ⅳ-C蛋白表达有关.     

刺梨黄酮对诱导大鼠肾纤维化TGF-β1/Smads信号转导干预作用及机制分析

目的:探讨观察刺梨黄酮对UUO模型大鼠肾纤维化TGF-β1/Smads信号转导干预作用,并分析其机制。方法:将75只造模成功的肾纤维化大鼠随机分为5组,即假手术组、模型对照组、氯沙坦钾组、刺梨黄酮中剂量及大剂量组,每组各15只。氯沙坦钾组给予氯沙坦钾灌胃;刺梨黄酮中剂量及大剂量组分别给予刺梨黄酮灌胃。模型组和假手术组均同时给予同等容积的生理盐水。干预14 d后,观察24 h Upro、Scr、BUN,对比各组大鼠肾脏组织TGF-β1、Smad2/3、Smad7蛋白表达水平,分析刺梨黄酮对肾纤维化大鼠作用机制。结果:干预过程中,模型组和氯沙坦钾组各有1只大鼠死亡。模型组、氯沙坦钾组、刺梨黄酮中剂量和大剂量组24 h Upro、Scr和BUN水平较假手术组显著升高(P0.01);治疗后氯沙坦钾组、刺梨黄酮中剂量和大剂量组较模型组显著降低;与氯沙坦钾组相比,刺梨黄酮中剂量组24 h Upro、Scr和BUN表达水平无明显差异(P0.05)。免疫组化显示模型组、氯沙坦钾组和刺梨黄酮不同剂量组中,各组TGF-β1、Smad2/3表达均明显高于假手术组(P0.01),各治疗组的表达水平明显低于模型组(P0.05)。各组Smad7的表达均明显低于假手术组(P0.01),各治疗组的表达水平明显高于模型组(P0.05)。与氯沙坦钾组比较,刺梨黄酮中剂量组TGF-β1、Smad2/3、Smad7表达水平无明显差异。结论:刺梨黄酮中剂量组可显著改善肾纤维化大鼠肾功能指标,推测和抑制TGF-β1、Smad2/3蛋白表达、激活Smad7蛋白表达有关。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的分析化瘀通络中药对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路相关因子表达的影响。方法糖尿病大鼠模型采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立,大鼠分为正常对照组、模型组、中药组和厄贝沙坦组,各组相应药物剂量灌胃。灌胃16周检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量(24hUTP),肾组织行光镜、电镜观察,Real-time PCR检测肾脏TGF-β_1、Smad2、Smad7mRNA的表达。结果与正常对照组比较,模型组各项指标均有差异(P0.05);与模型组比较,两治疗组Scr、BUN、24hUTP及TGF-β_1、Smad2 mRNA表达水平明显下降(P0.05),Smad7 mRNA表达水平明显上升(P0.05),病理损伤明显减轻;与厄贝沙坦组比较,中药组24hUTP明显降低(P0.05)。结论化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smad信号通路有关。     

藿朴夏苓汤对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用及其机制

目的研究藿朴夏苓汤(HPXLT)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)通路及相关下游调控蛋白的影响,探讨其对DN的肾脏保护作用及机制。方法采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg·kg~(-1))制备DN大鼠模型。大鼠随机分为正常对照组,模型组,HPXLT高、中、低剂量组(2,1,0.5 g·kg~(-1)),格列本脲组(5 mg·kg~(-1)),连续灌胃给药6周。测定各组大鼠体质量、肾脏系数、24 h排尿量及尿蛋白;生化指标检测大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)以及尿素氮(BUN)的含量;采用免疫印迹法检测肾组织TGF-β1通路及相关下游调控蛋白(Nephrin、Podocin、p38MAPK、p-p38MAPK、Caspase-3、Smad2/3、p-Smad2/3)的表达;采用免疫组化测定肾组织TGF-β1的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠体质量明显下降,而肾脏系数、24 h排尿量和尿蛋白、FBG、Scr、BUN含量则显著升高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);肾组织Nephrin、Podocin表达明显下降,而TGF-β1及其下游蛋白Caspase-3、p-p38MAPK和p-Smad2/3表达则显著升高,差异均有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,HPXLT高、中、低剂量组的大鼠体质量显著增加,而肾脏系数、24 h排尿量和尿蛋白、FBG、Scr、BUN含量则明显降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);HPXLT高、中剂量组可显著增强Nephrin、Podocin蛋白的表达,降低TGF-β1、Caspase-3蛋白的表达水平,抑制磷酸化p38MAPK和Smad2/3的活性,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01),并呈一定的量效关系。结论 HPXLT可能通过抑制TGF-β1信号通路的表达,提高足细胞Nephrin、Podocin的表达,从而缓解足细胞凋亡,起到保护DN肾脏的作用。     

藿朴夏苓汤对糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的保护作用及机制研究

目的 研究藿朴夏苓汤对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）通路及相关下游调控蛋白的影响,探讨其对DN的防治作用及机制。方法 采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ,65 mg?kg-1）制备DN大鼠模型。大鼠随机分为正常组,模型组,藿朴夏苓汤高、中、低剂量组（2,1,0.5 g?kg-1）和格列本脲组,连续灌胃给药6周。测定各组大鼠体质量、肾脏系数、24h排尿量及尿蛋白;生化指标检测大鼠空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）以及尿素氮（BUN）的含量;采用免疫印迹法检测肾组织TGF-β1通路及相关下游调控蛋白（Nephrin、Podocin、p38MAPK、p-p38MAPK、Caspase-3、Smad2/3、p-Smad2/3）的表达;采用免疫组化测定肾组织TGF-β1的表达。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠体质量明显下降,而肾脏系数、24 h排尿量和尿蛋白、FBG、Scr和BUN含量则显著升高（P<0.05,P<0.01）;肾组织Nephrin和Podocin表达明显下降,而TGF-β1及其下游蛋白Caspase-3、p-p38MAPK和p-Smad2/3表达则显著升高（P<0.05,P<0.01）,进而导致损害肾组织病理。与模型组比较, 藿朴夏苓汤高、中、低剂量组显著增加大鼠体质量（P<0.01）,而降低肾脏系数、24 h排尿量和尿蛋白、FBG、Scr和BUN含量则（P<0.05,P<0.01）;藿朴夏苓汤高、中、低剂量组剂量依赖性提高Nephrin和Podocin的表达（P<0.01）,而在不同程度地降低TGF-β1、Caspase-3、p-p38MAPK和p-Smad2/3的表达（P<0.05,P<0.01）,导致改善肾组织病理损害。 结论 藿朴夏苓汤可能通过抑制TGF-β1信号通路的表达,提高足细胞Nephrin和Podocin的表达,从而减轻足细胞凋亡,起到保护DN肾脏的作用。     

抗纤灵方对肾纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路表达的影响

目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除所致肾纤维化大鼠的治疗效果,并探讨其分子作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组(n=10),假手术组(n=10),5/6肾切除肾纤维化造模组(n=30)。将造模成功的大鼠随机分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦钾组。氯沙坦钾组、抗纤灵方组每日分别给予氯沙坦钾(33. 3 g·kg-1)及抗纤灵方(21 g·kg-1)灌胃治疗,其余组都用等体积的生理盐水。持续8周灌胃后处死,检测各组大鼠血肌酐(SCr),尿素氮(BUN),24 h尿蛋白(24 h-Pro);苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学改变;马松(Masson)染色观察肾脏纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测肾脏转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad2,Smad3,Smad7蛋白和mRNA在肾脏组织中的表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠的SCr,BUN,24 h-Pro上升,纤维化面积和肾脏损伤评分增加,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白表达升高,Smad7 mRNA与蛋白表达显著下降(P 0. 01)。与模型组相比,氯沙坦钾组、抗纤灵方组可减少纤维化面积,降低肾脏损伤评分,SCr,BUN,24 h-Pro,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白的表达水平,Smad7mRNA与蛋白表达显著上调(P 0. 01),但低于正常组与假手术组的水平。结论:中药抗纤灵方可通过抑制TGF-β_1/Smad通路来延缓肾纤维化。