血管通对实验性动脉粥样硬化家兔血管壁血小板衍化生长因子A、B及c－myc基因表达的影响

本实验采用斑点印迹杂交和原位杂交技术，进一步探讨血管通对与血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生相关基因表达的影响。结果表明，高脂组家兔血管壁血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ的ｍＲＮＡ呈高表达，杂交阳性颗粒主要分布在动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块边缘区及新生斑块区的ＳＭＣ胞浆内，而血管通组家兔血管壁ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ表达水平明显低于高脂组；高脂组血管斑块组织ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达水平亦比正常组高，血管通组血管壁ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平下降。上述结果初步说明血管通可能是通过影响血管壁ＰＤＧＦ－Ａ、ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达水平，以抑制ＶＳＭＣ增生，阻止ＡＳ形成。     

中药复方AC_(960)对人肝癌细胞p21~(ras)、bal-2、P~(53)基因表达调控作用的研究

目的：研究中药复方ＡＣ９６０对人肝癌细胞基因、抑癌基因表达的影响,探讨其抗癌作用机制。方法：ＡＣ９６０灌胃给药后,采集大鼠血清,处理人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１,３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和ｐ２１ｒａｓ、ｂａｌ－２、Ｐ５３基因蛋白表达。结果：ＡＣ９６０具有显著抑制 ＳＭＭＣ－７７２１细胞增殖和促进细胞凋亡作用,细胞周期分析,ＤＮＡ直方图上见典型凋亡峰,２４ｈ时为２１．２５％,４８ｈ时为２７．７７％,早期（２４ｈ）Ｓ期细胞比例增加,Ｇ２／Ｍ期减少,后期（４８ｈ）,Ｇｏ／Ｇ１期细胞增多,Ｓ期减少。Ｐ５３、ｂａｌ－２、ｐ２１ｒａｓ在 ＳＭＭＣ－７７２１细胞中都有不同程度表达,ＡＣ９６０处理后,Ｐ５３表达增强,ｂｃｌ－２、ｐ２１ｒａｓ表达降低。结论：抑制癌基因、增强抑癌基因表达,阻断细胞增殖周期,抑制人肝癌细胞增殖,促进癌细胞凋亡可能是ＡＣ９６０抗肝癌主要作用机制。     

血管通对实验性动脉粥样硬化家兔血管壁血小板衍化生长因子…

本实验采用斑点印迹杂交和原位杂交技术，进一步探讨血管通过与血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生相关基因表达的影响。结果表明，高脂组家兔血管壁血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ的ｍＲＮＡ呈高表达，杂交阳性颗粒主要分布在动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块边缘区及新生斑块区的ＳＭＣ胞浆内，而血管通组家兔血管壁ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ表达水平明显低于高脂组；高脂血管斑块组织ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达水平亦比正常组高，血管通组血     

复方白龙片对人胃癌细胞两条信号通路的调控

目的：观察复方白龙片，对人胃癌细胞内两条信号通共调作用。方法：分别测定不同状况下人胃癌ＭＧｃ８０－３细胞内ｃＡＭＰ水平、二酰基甘油（ＤＡＧ）含量、蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性。结果白龙处理ＭＧｃ８０－３细胞３ｈ后，ｃＡＭＰ水平和ＰＫＡ活性分别较对照组升高１１２．７％和１９．７％，而ＤＡＧ含量与ＰＫＣ活性分别下降４７．０％和６４．２％；如用ＧＦ－１０９２０３Ｘ阻断ＰＫＣ通路时发现ｃ     

电针足三里对MG大鼠神经-肌肉接头传递的影响

本研究复制大鼠重症肌无力（ＭＧ）模型，采用放射性同位素测定法（ＲＩＡ）测定其血清抗乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲＡｂ）滴度，采用玻璃微电极记录法，测定大鼠左侧膈神经－膈肌标本的小终板电位（ＭＥＰＰ）及乙酰胆碱电位（Ａｃｈｐ），同时观察针刺通电刺激足三里穴对ＭＧ大鼠ＡｃｈＲＡｂ滴度、ＭＥＰＰ及Ａｃｈｐ的影响及其作用机制。结果表明：ＭＧ大鼠的ＡｃｈＲＡｂ滴度显著高于健康大鼠（Ｐ＜０．０１）；ＭＥＰＰ与Ａｃｈｐ的振幅均明显低于健康大鼠（Ｐ＜０．０５），但ＭＥＰＰ的频率、Ａｃｈｐ的时程与健康大鼠相比较却无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；针刺足三里能使ＭＧ大鼠的ＭＥＰＰ与Ａｃｈｐ的振幅升高，但对ＭＥＰＰ的频率与Ａｃｈｐ时程没有影响，且针刺前后血清ＡｃｈＲＡｂ滴度也没有明显变化；针刺非经穴处则对上述３项指标均没有明显影响。提示：针刺足三里穴可增强ＭＧ大鼠神经－肌肉接头传递的功能，作用机制可能是通过改变神经－肌肉接头突触后膜乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲ）与乙酰胆碱（Ａｃｈ）或ＡｃｈＲＡｂ的亲和力来实现的     

山椒子化学成分的研究

从山椒子Ｕｖａｒｉａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ枝叶的乙醇提取物中分得１１个化合物，根据理化性质和光谱数据鉴定为：蒲公英萜醇，ｐｉｐｏｘｉｄｅ ｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒｉｎ，ｚｅｙｌｅｎｏｌ，穆坪马兜铃酰胺，Ｎ－（ｐ－ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｅｔｈｙｌ）－ｐ－ｃｏｕｍａｒａｍｉｄｅ，ａｒｉｓｔｏｌｏｌａｃｔａｍ。ＢＩａ，ａｒｉｓｔｏｌｏｌａｃｔａｍ。ＡＩａ以及β－谷甾醇，蒽，苯甲酸，胡萝卜甙。     

人参总皂甙增加白血病细胞对化疗药物的敏感性

目的：探讨人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）化疗药物敏感性的作用。方法：采用白血病祖细胞集落形成（ＣＦＵ－ＡＭＬ）药敏试验法。选用４种化疗药物：高三尖杉酯碱（ＨＨｒ）、阿糖胞苷（Ａｒａ）、阿霉素（Ａｄｒ）和足叶乙甙（Ｖｐ－１６）。结果：ＴＳＰＧ刺激ＣＦＵ－ＡＭＬ在体外增殖，集落数提高３７．９８％，使化疗药物对ＣＦＵ－ＡＭＬ的抑制率从原先的３０．４％￣４７．４％分别提高到５１．２％￣     

硝苯地平和尼卡地平对人成纤维细胞胶原与透明质酸合成及N－乙酰β－氨基葡糖苷酶活性影响

目的：研究硝苯地平（Ｎｉｆ）和尼卡地平（Ｎｉｃ）对人胚肺成纤维细胞胶原与透明质酸（ＨＡ）合成以及Ｎ－乙酰β－氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧ）活性的影响，为应用钙通道阻滞剂防治器官纤维化提供依据。方法：采用３Ｈ－脯氨酸掺入、放射免疫和荧光法分别测定胶原与ＨＡ合成及ＮＡＧ活性。结果：Ｎｉｆ和Ｎｉｃ在１０～４０μｍｏｌ／Ｌ浓度范围内均呈浓度依赖性地抑制胶原与ＨＡ合成；Ｎｉｃ在１０～２０μｍｏｌ／Ｌ浓度时还使细胞培养上清液中ＮＡＧ活性增加。结论：Ｎｉｆ和Ｎｉｃ可望成为抗器官纤维化的有效药物。     

针灸对类风湿性关节炎患者免疫─神经─内分泌系统影响的临床研究

对１６例类风湿性关节炎（ＲＡ）患者温针治疗前后血浆中白细胞介素１（ＩＬ－１）、白细胞介素６（ＩＬ－６）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、亮脑啡肽（ＬＥＫ）、前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）、环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）等指标进行了观察，并与正常对照组进行比较，结果表明：ＲＡ患者血浆中ＩＬ－６、ＴＮＦ含量较正常组显著增高，ｃＡＭＰ含量降低（Ｐ＜０．０５）；ＩＬ－１、ＴＮＦ、ＰＧＥ２与正常组相比无显著差异；针灸治疗后ＬＥＫ、ＰＧＥ２含量显著增高（Ｐ＜０．０５）；ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ、ｃＡＭＰ含量无明显变化（Ｐ＞０．０５）。结合我们以前的研究结果，我们认为，针灸对免疫－神经－内分泌系统网络具有一定的调节作用。     

大蒜素对血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察大蒜素对培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖细胞核抗原（ＰＣ－ＮＡ）表达的影响。方法：用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达，同时测定培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、前列环素（ＰＧＩ２）及环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）的含量。结果：大蒜素能增加ＳＯＤ活性，降低ＬＰＯ，升高ＰＧＩ２和ｃＡＭＰ水平，抑制ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达（Ｐ〈０．０５－０．０１）。结论：大蒜素有抑     

中药白龙片与HMBA对人胃癌不同周期细胞癌基因与抑癌基因表达调控的共性研究

目的：探讨复方中药白龙片与环六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对人胃癌（MGC80－3）细胞不同周期时相细胞癌基因c-H-ras、c-myc，抑癌基因Rb、p53和p21以及PKC－α基因表达的影响。方法：采用Northern印迹法检测基因表达情况。结果：MGC80－3细胞不同周期时相用中药白龙片或HMBA处理，癌基因c-H-ras和c-myc的表达下降，多数周期的抑制率达50．0％以上；促增殖的信使激酶亚类PKC－α基因的表达基本与癌基因表达抑制相似。两类药物对抑癌基因的影响则有显著差异。HMBA处理细胞后，Rb与p21在G1期的表达不是增加而是下降，抑制率分别为39．5％和33．3％，Rb在S期也抑制3．0％。而中药白龙片对Rb与p21在各个周期内均是促进表达的作用，有的周期升高1－2倍以上。但是中药白龙片对抑癌基因p53的表达作用和HMBA都很近似，各个周期都有显著增加，多数时相达125．0％－233．4％。结论：（1）中药白龙片对癌基因和抑癌基因的调节作用基本与诱导分化剂HMBA相似，但中药白龙片的作用优于HMBA。（2）中药白龙片或HMBA对MGC80－3细胞增殖抑制和促分化作用的分子机理和两类药物对细胞周期内癌基因与抑癌基因调节相关。     

中药白龙与HMBA对人癌周期细胞CKI-P16的调控

目的：研究中药白龙与西药环六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对人癌细胞中周期蛋白抑制因子P16的表达与调节。方法：采用Northern blot、Western blot等方法检测人癌细胞在白龙或HMBA作用下P16的表达调节。结果：在白龙或HMBA作用下癌细胞G1期P16的表达增加，这一作用与cAMP-PKA和DAC－PKC两套信号通路共调节作用密切相关。当以PKA抑制剂阻断PKA通路时，P16表达下降，相反当PKC通路被阻断时P16表达水平升高。结论：（1）癌细胞G1期P16的低表达（与其他时相比较）可能是P16不能有效抑制癌细胞恶性变化的重要原因。（2）白龙和HMBA对肿瘤细胞的增殖抑制机理与G1期细胞P16表达升高相关。（3）白龙和HMBA对人癌细胞内P16的表达调节表现了中西药对肿瘤细胞调节机理的共性。（4）首次阐明了P16上游调控与cAMP/PKC信号通路密切相关。     

中药白龙与HMBA对人癌周期细胞CKI-P16的调控

目的 :研究中药白龙与西药环六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)对人癌细胞中周期蛋白抑制因子P16的表达与调节。方法 :采用Northernblot、Westernblot等方法检测人癌细胞在白龙或HMBA作用下P16的表达调节。结果 :在白龙或HMBA作用下癌细胞G1期P16的表达增加 ,这一作用与cAMP PKA和DAC PKC两套信号通路共调节作用密切相关。当以PKA抑制剂阻断PKA通路时 ,P16表达下降 ,相反当PKC通路被阻断时P16表达水平升高。结论 :(1)癌细胞G1期P16的低表达 (与其他时相比较 )可能是P16不能有效抑制癌细胞恶性变化的重要原因。 (2 )白龙和HMBA对肿瘤细胞的增殖抑制机理与G1期细胞P16表达升高相关。 (3)白龙和HMBA对人癌细胞内P16的表达调节表现了中西药对肿瘤细胞调节机理的共性。 (4 )首次阐明了P16上游调控与cAMP/PKC信号通路密切相关。     

补肾化瘀生新法协同静脉注射骨髓间充质干细胞对延缓大鼠衰老作用

目的:观察补肾化瘀生新法协同静脉注射骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)延缓大鼠衰老的有效性,明确中医药协同静脉注射BMSCs治疗延缓机体衰老的可行性。方法:75只SD大鼠随机分为补肾化瘀生新方高、中、低剂量组、模型组和正常组。每组12只,按照125 mg·kg~(-1)·d~(-1)的剂量颈背部皮下每日1次注射D-半乳糖溶液,连续45 d,建立大鼠衰老模型。补肾化瘀生新方高、中、低剂量组(27.28,13.64,6.82 g·kg~(-1))灌胃给药,模型组生理盐水灌胃,正常组不给药,早晚各1次,连续45 d。同时尾静脉注射BMSCs注射3.0×10~6个/m L的BMSCs,每周1次,连续4次。免疫荧光法测定脑、肝、肺、心中CD105,p53,p21,p16~(INK4a)阳性细胞数,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠的脑、肝、肺、心中p16~(INK4a),p53,p21 mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠脑、心脏、肺脏、肝脏中CD105阳性细胞数明显降低,p16~(INK4a),p21,p53阳性细胞数明显升高(P0.05),大鼠的脑、心脏、肺脏、肝脏中p16~(INK4a),p53,p21 mRNA表达明显上调(P0.05);与模型组比较,补肾化瘀生新各剂量组大鼠脑、心脏、肺脏、肝脏中CD105阳性细胞数明显升高,p16~(INK4a),p53,p21阳性细胞数明显降低(P0.05),补肾化瘀生新各剂量组均能明显降低脑、肝、肺、心组织中p16~(INK4a),p53,p21阳性细胞数mRNA表达明显下降(P0.05)。结论:补肾化瘀生新法协同静脉注射BMSCs可能影响p16~(INK4a)/Rb和p53/p21途径上的关键基因p16~(INK4a),p53,p21的表达而延缓BMSCs衰老,显示了中医药协同静脉注射BMSCs抗衰防衰的可行性。     

赤芍总苷诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究

目的:采用赤芍总苷(TGC,从赤芍中提取的中药单体),作用于荷瘤小鼠,较系统对TGC诱导肿瘤细胞凋亡进行观察,为TGC的开发应用提供实验依据.方法:采用SABC免疫组化法检测bcl-2、p16及原位杂交法测定c-myc mRNA表达.结果:瘤鼠造模后,采用赤芍总苷作用,实验组与模型组bcl-2、c-myc阳性表达显著性差异,下调相关基因bcl-2蛋白和c-myc mRNA表达水平,上调相关基因p16蛋白表达水平.结论:赤芍总苷诱导肿瘤细胞凋亡,其机理可能与下调bcl-2和c-myc,上调p16基因蛋白mRNA表达水平密切相关.     

益气健脾中药对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨益气健脾中药血清体外诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)分析、透射电镜、流式细胞仪分析、DNA电泳分析检测细胞凋亡；应用Northern印迹检测bcl-2、c-myc和p53基因表达活性。结果：经中药血清处理的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC)，可出现典型的凋亡特征，DNA电泳呈梯状图谱；流式细胞仪分析显示G0／G1期细胞阻滞现象，亚二倍体凋亡细胞增多，出现典型的凋亡峰，细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示，30％中药血清可抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，上调促凋亡基因c-myc和p3 mRNA水平。结论：益气健脾中药通过影响凋亡相关基因bcl-2、c-myc和p53的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

Effect of aloe-emodin on c-myc gene expression of cultured vascular smooth muscle cells of injured artery]

OBJECTIVE: To study the molecular mechanism of aloe-emodin (AE) in inhibiting smooth muscle cells' (SMC) proliferation. METHODS: Deendothelialization was performed in abdominal aorta of Japanese white ear rabbits by using 3F Fogarty arterial embolectomy catheter. The media of abdominal aorta was isolated 48 hrs later for performing primary SMC culture. Cells were synchronized with G0/G1 phase by serum starvation, the AE was then added to the culture medium of experimental group, at a concentration of 20 micrograms/ml, and to the control group, equal volume of culture solution was added instead. The c-myc mRNA and protein expressions were examined 3 hrs later by using techniques of Northern blotting, Western blotting and immunocytochemistry respectively. RESULTS: In comparing with the control group, neither the expression of c-myc mRNA nor the expression of c-myc protein was changed after addition of AE. CONCLUSION: The inhibition of AE on SMC might not be due to influencing c-myc expression, but via other pathway.     

淫羊藿总黄酮保护衰老细胞端粒长度缩短的实验研究

目的探讨淫羊藿总黄酮(EF)延缓人胚肺二倍体成纤维细胞衰老以及保护端粒缩短的作用机制。方法采用含EF的血清对人二倍体成纤维细胞2BS细胞株进行处理,观察2BS细胞寿命;采用荧光实时定量PCR法检测p16基因mRNA的表达;ELISA法检测细胞视网膜母细胞瘤(retinoblastoma．Rb)蛋白和磷酸化Rb蛋白的含量;TRAP—Hyb单管一步法检测细胞端粒酶活性;端粒限制性片段(TRF)southernblot法检测2BS细胞端粒长度变化、结果淫羊藿总黄酮能够延长2BS细胞的传代寿命：下调2BS细胞p16基因mRNA的表达;增加磷酸化Rb蛋白的含量;延缓衰老细胞端粒长度的缩短,而不是激活细胞端粒酶活性。结论2BS细胞衰老时,p16基因mRNA的表达增加,磷酸化Rb蛋白含量减少,细胞端粒长度缩短;淫羊藿总黄酮可能通过抑制p16基因表达,促进磷酸化Rb蛋白的产生,从而延缓衰老细胞端粒长度的缩短,具有延缓细胞衰老的作用,而不是通过激活细胞端粒酶的活性。     

心脑宁诱导增生VSMC凋亡及对相关基因表达的影响

目的 :探讨活血化瘀中药血清体外诱导增生血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 :采用流式细胞仪分析 ,DNA电泳分析检测细胞凋亡 ;应用Northen印迹检测bcl- 2、c-myc基因表达活性。结果 :经中药血清处理的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmuclecell,VSMC) ,可出现典型的凋亡特征 ,DNA电泳呈梯状图谱 ;流式细胞仪分析显示G0 /G1期细胞阻滞现象 ,亚二倍体凋亡细胞增多 ,出现典型的凋亡峰 ,细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示 ,2 0 %中药血清可抑制抗凋亡基因bcl- 2的表达 ,上调促凋亡基因c -myc的mR NA水平。结论 :活血化瘀中药可通过影响凋亡相关基因bcl- 2、c -myc的表达活性而诱导VSMC凋亡。