金钗石斛遗传多样性研究的随机扩增多态DNA-PCR反应体系的建立与优化

目的 对影响金钗石斛随机扩增多态DNA(RAPD)-PCR扩增效果的一些因素进行优化,为进一步研究其遗传多样性奠定基础.方法 对金钗石斛RAPD分析中一些重要影响因素进行比较系统的构建和优化,建立金钗石斛RAPD稳定可靠的反应体系.结果 金钗石斛较适宜的RAPD-PCR反应条件为:10μl PCR反应体系中,5～20 ng模板DNA,3.0mmol·L-1Mg2+,0.34 mmol·L-1dNTPs,0.6 U Taq DNA聚合酶,1.5 μmol·L-1引物,较适宜的退火温度为36℃.结论 所建立的金钗石斛RAPD反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强等特点,可用于金钗石斛的遗传多样性研究.以该优化的RAPD条件进行重复性实验,其实验结果重复性良好.     

铁皮石斛试管苗壮苗培养基的研究

目的:研究铁皮石斛试管苗生产中,壮苗阶段的适宜培养基。方法:对基本培养基、天然提取物、香蕉提取物浓度和激素种类的选择进行了研究。结果:基本培养基以B₅或1/2MS为好;天然提取物应选用香蕉水提物,香蕉水提物浓度为10%;植物激素是2mg/L的NAA较好。结论:以上培养基组成是铁皮石斛试管苗壮苗的适宜培养基。     

金钗石斛的茎段组织培养与植株再生

目的：为了有效加速贵重药用植物金钗石斛的人工繁殖。方法：以带侧芽的金钗石斛茎段作外殖体；不同种类的培养基、同种培养基用于不同配比的激素进行培养，结果：以MS培养基附加6－BA（0.5mg/L）、NAA（0.2mg/L）诱导分化最佳，附加6－BA（3．0mg/L）、NAA（0．5mg/L），增殖最适，附加IBA（0．3mg/L）、NAA（0．1mg/L）对生根最适（生根率95％）。生根小苗在以椰渣，碎火山石块，碎砖块（1：1：1）的基质中覆以蕨长势良好，结论：为确保金钗石斛资源的保持和可持续利用提供有效途径。     

利用细茎石斛种子胚繁育试管苗的不同培养基研究△

目的:建立细茎石斛Dendrobium moniliforme(L.)Sw.种子胚的组织培养和快速繁殖方法.方法:在相同的培养条件下,种子胚接种于8种不同培养基上,选择长势相近的试管苗转接于添加不同浓度激素的1/2 MS培养基上,对不同生长状况的试验结果进行统计和分析.结果:比较适合诱导细茎石斛种子萌发的培养基是1/2 MS+1.0 mg·L-1 NAA,生根的培养基是1/2 MS+1.0 mg·L-1 NAA,壮苗的培养基1/2 MS+1.2 mg·L-1 IBA.结论:适合的培养基对细茎石斛种子胚的生长发育结果有很大差异.     

叠鞘石斛茎段组织培养与花芽诱导

目的 研究叠鞘石斛的快速繁殖及离体开花的培养体系.方法选用野生的叠鞘石斛带侧芽的茎段作为外植体,培养在附加不同激素的培养基上.结果MS培养基附加6-BA(1.0 mg·L-1),NAA(0.5 mg·L-1)对侧芽的诱导效果最佳.而MS培养基附加6-BA(2.0 mg·L-1),NAA(0.4 mg·L-1)最适合丛生芽的增殖.把无菌苗培养在附加6-BA(2.0 mg·L-1)的MS培养基中,少数植株被诱导开花,诱导率为10.0%.结论用带腋芽的茎段作为外植体在MS培养基中,附加一定的6-BA和NAA可以诱导丛生芽的产生.     

佛手组织培养中褐变控制研究

目的:探讨佛手组织培养中褐变的控制方法。方法:以佛手顶芽及带节茎为材料,开展了不同基本培养基、取材时间、激素种类和褐变抑制剂对佛手初代培养中外植体褐变的影响研究。结果:佛手初代培养选用1/2MS为基本培养基并附加1.0 mg/L 6-BA、0.2 mg/L NAA、1.0 mg/L ZT和3 g/L PVP,1～3月份取材,是控制褐变的有效措施。结论:适宜的培养基组分和抗褐变剂能明显减轻佛手组织培养中的褐变,提高组培成功率,初步建立佛手组织培养体系。     

不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱含量比较与分析

目的：研究不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱的含量变化规律。方法：采用气相色谱内标法,测定并比较不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱的含量差异。结果：不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱的含量均有明显差异,4 年生石斛中石斛碱含量高于3 年生,不同部位中石斛碱含量为：茎上段跃茎中段跃茎下段。结论：通过对不同生长年限和不同部位金钗石斛主要成分含量比较分析,为确定石斛采收期及对不同部位石斛资源的合理开发利用提供了参考依据。     

药用植物景天三七离体培养技术研究

目的探究建立完整的药用植物景天三七离体培养体系的方法。方法以药用植物景天三七的叶片为外植体,选用MS为基本培养基,附加激素6-BA、NAA、IBA和2,4-D,研究了不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导、不定芽诱导及丛生芽增殖的影响。结果诱导愈伤组织的培养基以MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA1.0mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4.5g·L-1的效果最佳;诱导不定芽的培养基以MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4.5g·L-1的效果最好;增殖培养以MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA0.01 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4.5 g·L-1为佳;生根培养是以1/2MS+NAA0.3mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4.5g·L-1的培养基最好。结论筛选出了愈伤组织诱导、不定芽诱导、增殖和生根适宜的培养基,建立了药用植物景天三七的离体培养体系。     

药用植物茅苍术的组织培养

目的针对茅苍术野生资源濒危的情况,系统地探讨了以组织培养为手段进行快速繁殖的途径。方法以叶柄和叶片为外植体,在MS培养基上添加不同的激素配比进行培养。结果较适宜诱导叶柄形成愈伤组织的激素组合是2,4-D 4.0 mg.L-1+Kt 0.4 mg.L-1,叶片适宜诱导愈伤组织的激素组合是2,4-D4.0 mg.L-1+Kt 0.4 mg.L-1;对于芽的增殖,较适宜的激素组合是6-BA2.0mg.L-1+IBA0.4 mg.L-1或6-BA3.0 mg.L-1+IBA0.4mg.L-1;而根的诱导则在MS+IAA0.5 mg.L-1或MS+NAA0.5 mg.L-1培养基上进行最好。结论采用组织培养方式可以进行茅苍术的快速繁殖,为确保这一珍稀药用植物资源的保护和可持续利用提供了有效途径。     

铁皮石斛茎段原球茎的诱导增殖与分化

目的:探讨植物生长调节剂、基本培养基、蔗糖质量浓度以及相关添加物对铁皮石斛茎段原球茎的诱导、增殖、分化以及根部生长等方面的影响。方法:通过正交试验方式,要求没有添加激素下,对铁皮石斛茎段原球茎进行消毒处理、试验培养基的配备、对原球茎进行诱导、对原球茎进行增殖和分化处理、生根的培养等,分析不同植物生长调节剂、基本培养基配比对于茎段原球茎的诱导影响,不同基本培养基、马铃薯泥以及蔗糖浓度增殖分化原球茎效果,以及香蕉泥、萘乙酸(NAA)和马铃薯泥对铁皮石斛茎段原球茎生根效果。结果:1)最适宜诱导铁皮石斛茎段原球茎的培养基组合是NAA 0.1 mg/L+1/2MS(Murashige and Skoog)培养基+6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)4 mg/L。2)铁皮石斛茎段原球茎增殖最佳的培养基是:MS+蔗糖30 g/L;分化的最佳培养基是:马铃薯泥10%+蔗糖10 g/L+1/2 MS。3)铁皮石斛茎段原球茎的生根最佳培养基组合是马铃薯泥10%+1/2 MS+NAA 1 mg/L+香蕉泥10%。结论:在没有添加激素的前提下,基于正交试验方式发现变化蔗糖含量和基本培养基能够对铁皮石斛茎段原球茎增殖和分化效果进行调节,并找出了最理想的组合模式。     

铁皮石斛带节茎段的组培快繁体系研究

目的：建立铁皮石斛带节茎段为外值体的快速繁殖体系,保护和合理利用铁皮石斛资源.方法：以铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）的带节茎段作外植体,比较不同培养基、激素等因素对铁皮石斛诱导、增殖及生根的影响.结果：最适茎段诱导腋芽的培养基为1/2MS＋ 2.0mg L-1 6-BA＋ 0.2mgL-1 NAA,腋芽诱导率可达93.3％;最适丛生芽增殖的培养基为1/2MS＋ 1.5mgL-1 6-BA ＋0.5mgL-1 NAA,平均增殖系数达到5.46;最适的生根培养基是1/2MS＋0.5mgL-1 IBA ＋0.5mgL-1 NAA＋ 0.2％ AC,组培苗生根多,生根率达到72％.以上各种培养基琼脂粉浓度均为0.8％,蔗糖浓度均为2％,pH5.6 ～5.8.同时研究发现,组培苗的移栽基质以细木屑为优,具有疏松透气、排水良好等优点,成活率可达88％.结论：利用带节茎段能够实现铁皮石斛快速繁殖,为其人工扩大栽培奠定了良好基础.     

安徽药菊茎尖组织培养技术的研究

目的 :研究安徽药菊茎尖组织培养技术 ,建立最佳培养条件。方法 :取药菊的茎尖 0.5mm左右 ,分别在不同的培养基中培养 ,诱导其为完整植株。结果与结论 :以MS+6-BA 2mg·L^-1+NAA 0.2mg·L^-1为茎尖诱导培养基较好 ,40d后 ,芽诱导率达 80%以上 ;以MS+6BA2mg·L^-1+NAA0.5mg·L^-1为芽增殖培养基 ,25～30d后 ,芽增殖系数达 4～7倍 ;生根培养基以MS +NAA 0.5mg·L^-1为宜 ,生根率 100% ,根系粗壮 ,移栽易于成活。     

石斛毛状根诱导及培养条件的优化

目的:建立石斛毛状根体系.方法:用发根农杆菌A4菌株诱导石斛外植体获得毛状根,并对毛状根的培养条件进行优化.结果:以蔗糖(3%)为碳源,添加水解乳蛋白(1g/L)的1/2MS培养基为毛状根的最佳生长条件.     

珍稀药用金钗石斛组培苗遗传稳定性直接扩增长度多态性检测

目的 研究珍稀药用金钗石斛DNA指纹图谱,初步探讨直接扩增长度多态性(DALP)分子标记技术在石斛组织培养过程中遗传稳定性检测上的应用.方法 采用直接扩增长度多态性(DALP)技术对金钗石斛野生移栽苗和组培苗进行基因组DNA多态性分析.结果 从12对引物组合中筛选出6对能获清晰条带的引物组合,分别利用琼脂糖和聚丙烯酰胺对DALP-PCR产物进行凝胶电泳,发现两组苗扩增的DNA带型基本一致,未发现明显变异,说明金钗石斛茎尖离体继代培养具有较高的遗传稳定性.结论 DALP分子标记技术可用于石斛遗传稳定性和遗传多样性研究.     

金钗石斛及其提取物的红外光谱整体解析

[目的]采用红外光谱技术对金钗石斛原药材及两种提取物所含化学成分的红外谱图进行整体分析。[方法]采用傅里叶红外光谱法对金钗石斛原药材、水提醇沉提取物、无水乙醇提取物进行结构分析及鉴别。[结果]金钗石斛原药材一维红外光谱图反映出2 923 cm~(-1)、2 855 cm~(-1)、1 738 cm~(-1)、1 155 cm~(-1)、1 081 cm~(-1)、1 019 cm~(-1)等特征峰,推测金钗石斛中含有脂类、芳香类和淀粉类成分。原药材二阶导数谱分析进一步验证了以上结果,同时出现了1 318 cm~(-1)附近以及783 cm~(-1)附近的草酸钙吸收峰。金钗石斛水提醇沉提取物和无水乙醇提取物的红外谱图中均出现了脂类、芳香类和糖类的特征峰,且与原药材相比峰数、峰强都有改变。金钗石斛水提醇沉物一维和二阶导数谱中均出现了较强的淀粉特征峰,说明水提物中主要是水溶性多糖,且多糖主要以淀粉形式存在。而无水乙醇提取物谱图更清楚的出现了脂类和芳香类的相关特征峰,且峰数与峰形和油类标准品比对,重叠性高。[结论]金钗石斛中主要含有多糖类以及脂肪类物质,多糖主要是以淀粉存在,且金钗石斛中的脂肪类含量较高。不同的提取溶剂所出现的谱图存在很大的差异性,完美诠释了"相似相溶"原则。红外光谱适合于金钗石斛的快速鉴别及质量评价与控制。     

金钗石斛多糖调控炎性小体NLRP3对非酒精性脂肪肝大鼠的保护作用

目的:研究金钗石斛多糖对NAFLD大鼠的干预作用,并从NLRP3信号通路分析作用机制。方法:将72只SD大鼠分为正常、模型、金钗石斛多糖高、中、低剂量和多烯磷脂酰胆碱干预组,除正常组外,NAFLD模型构建成功治疗4周后处死,取出肝脏检测肝脏病理学和NLRP3、Caspase-1蛋白及mRNA表达,收集血液检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)含量。结果:正常组肝小叶清晰,细胞核分布均匀,模型组有明显脂肪空泡和炎症反应浸润,金钗石斛多糖与多烯磷脂酰胆碱组明显改善;与正常组比较,模型组AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C、IL-1β、IL-18、Caspase-1和NLRP3蛋白及mRNA均升高(P<0.05),与模型组比较,金钗石斛多糖组和多烯磷脂酰胆碱组上述指标均降低(P<0.05),此外金钗石斛多糖组与多烯磷脂酰胆碱组AST、ALT和HDL-C没有差异,高剂量组TG、TC和LDL-C低于多烯磷脂酰胆碱组(P<0.05),中和高剂量组IL-1β、IL-18、Caspase-1和NLRP3蛋白及mRNA明显低于多烯磷脂酰胆碱组(P<0.05)。结论:金钗石斛多糖可明显改善高脂高糖饮食诱导的NAFLD大鼠肝功能和血脂,这与其可调节炎性小体NLRP3,进而降低炎症反应有关。     

特异性荧光偏振免疫法监测肾移植后环孢素A全血浓度2013例次

 目的：通过监测肾移植后患者环孢素A(CsA)全血浓度，提出CsA在三联免疫抑制用药方案中的理想治疗窗。方法：用特异性荧光偏振免疫法测定CsA全血浓度，对406例患者监测2013例次。按术后时间及临床表现分组比较。结果：CsA在肾移植后＜1月、1月～＜3月、3月～＜6月、6月～＜12月、1年～＜2年和2年以上的理想治疗窗应分别为，250 μg·L^{-1～450 μg·L-1，200 μg·L-1～350 μg·L-1，180 μg·L-1～300 μg·L-1，100 μg·L-1～200 μg·L-1，100 μg·L-1～160 μg·L-1和90 μg·L-1～150 μg·L-1。结论：将CsA全血浓度调整到推荐治疗窗内，毒性反应和排异反应明显减少。}     

麻花秦艽组织培养及植株再生的研究

目的：研究药用植物麻花秦艽组织培养技术,为工厂化育苗提供科学依据。方法：以麻花秦艽根、茎育出的无菌苗为外植体,采用MS培养基,附加不同的植物激素进行实验。结果：以MS培养基为基本培养基,附加BA 0.5～1.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1,适于丛生芽的诱导与增殖；附加IAA 1.0 mg·L^-1+BA 3 mg·L^-1,适于愈伤组织的诱导；附加IAA 1.0 mg·L^-1+BA 2.0～3.0 mg·L^-1适于愈伤组织继代培养,附加BA 2.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1适于愈伤组织的分化。结论：通过诱导愈伤组织途径可以达到快速繁殖的目的。     

金钗石斛的位点特异性PCR鉴别研究

目的建立一种简便、实用的金钗石斛的DNA分子鉴别方法。方法根据金钗石斛及其他黄草类、枫斗类石斛的rDNA ITS序列数据库,寻找金钗石斛特异性的序列位点,设计专用于金钗石斛鉴别的PCR引物,用该引物在不同条件下扩增石斛属植物的模板DNA,建立只有金钗石斛具有阳性扩增的PCR鉴别条件。结果在66℃、40 s的复性条件下进行鉴别PCR,金钗石斛的模板DNA扩增出约300 bp的阳性扩增带,而其他39种石斛的模板DNA在同样条件下无扩增产物。结论运用位点特异性PCR能有效地从其他石斛属植物中鉴别出金钗石斛,该方法具有高效、准确、简便、省时的特点,应用前景广泛。     

长柄链格孢菌对熊果酸的生物转化工艺优化

目的:以熊果酸为底物,用长柄链格孢菌AS3.2875对熊果酸进行生物转化,并对培养基和转化条件进行优化。方法:以熊果酸的消耗率和28-O-β-D-吡喃葡萄糖熊果酸酯苷的生成率为指标,考察不同起始pH,磷酸盐,不同种类金属离子,孢子浓度,底物加入量,温度,转速,培养时间对熊果酸在长柄链格孢菌培养液中转化的影响,得到长柄链格孢菌对熊果酸的最佳转化条件。结果:优化后的培养条件为初始pH 5.0,0.25 g.L-1MgSO4,1.0 g.L-1K2HPO4,0.083 g.L-1FeSO4,孢子浓度为4%,底物加入量0.3 g.L-1,转速140 r.min-1,28℃,培养3 d。结论:长柄链格孢菌转化熊果酸生成28-O-β-D-吡喃葡萄糖熊果酸酯苷的生成率稳定在5%左右。