细辛改善哮喘豚鼠小气道重塑的实验研究

目的:探索细辛对哮喘豚鼠气道炎症的干预作用,及其对模型动物小气道的气道重塑的影响。方法:6周龄健康豚鼠共80只,随机分为空白对照组、细辛组、小青龙汤组和哮喘模型组,每组各20只。豚鼠用卵清蛋白(OVA)腹腔注射系统致敏,并用1%OVA雾化吸入激发的方式建立哮喘豚鼠模型,HE染色观察肺组织病理,酶联免疫法(ELISA)测定血清中MMP-9及TIMP-1含量,测量支气管内周长(Pbm)、气道总管壁面积(WAi)、平滑肌面积(WAm)、支气管总管壁面积(WAt),作为衡量气道重塑程度的指标。结果:细辛组、小青龙汤组和空白对照组组间血清MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比较,均无显著差异(P0.05);与模型组比较,差异显著(P0.05)。细辛组、小青龙汤组和空白对照组组间豚鼠气道总管壁厚度、内壁厚度和平滑肌厚度比较,无显著差异(P0.05);与模型组比较,差异显著(P0.05)。结论:在改善炎症因子MMP-9、TIMP-1失衡以及豚鼠小气道重塑指标方面,单味药细辛与小青龙汤效果相当。     

姜辛夏颗粒对哮喘大鼠气道重建TGF-β1表达的影响

目的 研究姜辛夏颗粒对卵蛋白致敏哮喘SD大鼠肺组织中TGF-β1水平变化的影响.方法 雄性SD大鼠52只随机分为4组.以卵蛋白(OVA)致敏激发制备大鼠哮喘模型,并用地塞米松、姜辛夏颗粒灌胃分别治疗,与哮喘模型组、地塞米松组比较.主要测定各组大鼠肺组织中TGF-β1表达及各组支气管管腔内周长、平滑肌面积以及厚度变化.结果 地塞米松组、姜辛夏颗粒治疗组与哮喘模型组比较,肺组织中TGF-β1水平表达明显降低(P＜0.01);姜辛夏颗粒治疗组能有效降低肺组织中TGF-β1水平表达,与地塞米松组相比无明显差异(P＞0.05);与哮喘模型组比较,地塞米松组、姜辛夏颗粒组的WAt/Pbm、WAi/Pbm与WAm/Pbm显著低于哮喘模型组(P＜0.01).结论 TGF-β1在调节哮喘气道重建中起重要作用;姜辛夏颗粒可以下调TGF-β1的表达,阻止哮喘气道重建的发生发展.     

五虎汤对哮喘幼年大鼠气道重塑及肺组织α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:探讨五虎汤对哮喘模型大鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及气道重塑的影响。方法:呼吸道合胞病毒(RSV)合卵清白蛋白(OVA)致敏激发建立SD大鼠慢性哮喘模型,将48只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、地塞米松组及五虎汤高、中、低剂量组,每组8只。肺组织病理标本行HE染色观察组织病理学改变,Masson染色检测上皮下胶原蛋白含量,免疫组织化学法检测α-SMA表达,并用计算机图像分析系统评价各组气道重塑,并分析胶原蛋白与α-SMA表达的相关性。结果:(1)模型组WAm/Pbm及WAi/Pbm显著高于正常对照组(P0.01),五虎汤中、高剂量组及地塞米松组WAm/Pbm、WAi/Pbm显著低于模型组(P0.01);模型组出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落、上皮下胶原蛋白沉积及平滑肌细胞层增厚等气道重塑的结构改变,五虎汤中、高剂量及地塞米松可有效减轻上述病理改变;(2)模型组上皮下胶原蛋白及肺组织α-SMA表达显著高于正常对照组(P0.01),五虎汤中、高剂量组及地塞米松组上皮下胶原蛋白显著表达显著低于模型组(P0.01),五虎汤各剂量组及地塞米松组肺组织α-SMA表达显著低于模型组(P0.05或P0.01);(3)各组大鼠气道上皮下胶原蛋白沉积、α-SMA的积分光密度(IOD值)呈显著正相关。结论:五虎汤中、高剂量能降低哮喘幼年SD大鼠上皮下胶原蛋白及肺组织α-SMA的表达,从而有效抑制哮喘气道重塑。     

柴朴汤对支气管哮喘大鼠气道重塑及肺组织中α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:观察支气管哮喘大鼠气道重塑和α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)在哮喘大鼠模型中的动态表达及柴朴汤的干预作用.方法:将70只SD大鼠随机分为对照组、哮喘模型组、柴朴汤干预组,用卵蛋白(OVA)致敏激发建立大鼠哮喘模型,采用HE染色的方法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学方法研究肺组织气道形态学参数的改变及α-SMA的表达.结果:①哮喘2,4,8周组总管壁面积( WAt/Pbm)、内壁面积(WAi/Pbm)及平滑肌面积(Wam/Pbm)均高于对照组(P＜0.05),且随着激发天数的增加,上述指标有增加的趋势,哮喘4周组高于2周组,哮喘8周组高于4周组(均P ＜0.05);柴朴汤2,4,8周组,哮喘2,4周组WAt/Pbm,WAi/Pbm,Wam/Pbm均低于哮喘8周组(均P＜0.05),但柴朴汤组高于对照组.②哮喘2,4,8周组的α-SMA的mRNA和蛋白水平明显高于柴朴汤2,4,8周组及对照组(均P＜0.05);α-SMA的mRNA和蛋白水平随激发天数的增加而明显增加(均P ＜0.05);柴朴汤2周组的α-SMA的mRNA和蛋白水平与对照组相比,差异没有显著性;柴朴汤各周组与哮喘各相应周组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论:哮喘大鼠肺组织α-SMA呈动态过量表达.柴朴汤可通过下调α-SMA表达,抑制气道平滑肌收缩及增生抑制气道重构.     

加减射干麻黄汤对哮喘大鼠气道重塑及肺组织PCNA和ERK的影响

目的观察加减射干麻黄汤对哮喘大鼠气道重塑及肺组织增殖细胞核抗原(PCNA)与细胞外调节蛋白激酶(ERK)的影响并探讨其机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为模型对照组、空白对照组、中药治疗组、地塞米松组。使用卵蛋白致敏建立哮喘大鼠模型,中药治疗组予加减射干麻黄汤0.5 m L灌胃,地塞米松组用地塞米松(0.65 mg/kg)0.26 m L腹腔注射。利用图像分析软件测量大鼠支气管内管壁面积、平滑肌面积、基底膜周长,通过免疫组化法检测大鼠肺组织PCNA和ERK的表达,原位杂交法检测大鼠肺组织PCNA和ERK的m RNA的表达,免疫印迹法检测大鼠肺组织PCNA和ERK的表达。结果 1)中药治疗组哮喘大鼠的症状明显减轻。2)中药治疗组大鼠肺组织支气管上皮细胞的炎症反应减轻,支气管壁及管腔内的炎症细胞也明显减少(P0.05)。3)中药治疗组WAm/Pbm及WAi/Pbm明显降低(P0.05),与地塞米松组比较无显著差异(P0.05)。4)中药治疗组与地塞米松组PCNA m RNA和ERK m RNA表达较模型对照组明显减少(P0.05)。5)中药治疗组PCNA m RNA和ERK m RNA表达较模型对照组明显减少,且与地塞米松组相当(P0.05)。6)中药治疗组PCNA、p-ERK、ERK蛋白表达较哮喘模型组明显降低(P0.05);与地塞米松组比较明显降低(P0.05)。结论加减射干麻黄汤能改善哮喘大鼠气道重塑,其机制可能是通过降低PCNA的水平,抑制气道平滑肌增殖及ERK、p-ERK、PCNA蛋白表达水平,从而达到改善哮喘气道重塑的目的。     

海南苍耳子挥发油对支气管哮喘大鼠气道重塑及肺组织Ⅲ型前胶原含量的影响

目的探讨海南苍耳子挥发油对支气管哮喘模型大鼠气道重塑及肺组织Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)含量的影响。方法采摘海南当地苍耳子炒制干燥,去刺,采用回流法提取苍耳子挥发油,SD大鼠雌雄各半,共48只,分为正常组,模型组,苍耳子挥发油低、中、高剂量组,地塞米松组,每组8只。除正常组外其余用卵蛋白致敏并雾化吸入法诱发大鼠支气管哮喘模型。苍耳子挥发油给药组从第一次哮喘激发开始(造模后第4周)至处死前每天通过喷雾给予苍耳子挥发油干预,共干预4周。取肺组织4%多聚甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色观察支气管肺组织形态学改变。采用ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中PC-Ⅲ含量变化。结果模型组总管壁厚度(WAt/Pbm)、内壁厚度(WAi/Pbm)和平滑肌厚度(WAm/Pbm)均高于正常组(P 0.05)。苍耳子挥发油中、高剂量组总管壁厚度、内壁厚度和平滑肌厚度显著降低,与模型组相比差异具有统计学意义(P 0.05)。与正常组相比,模型组支气管肺泡灌洗液中PC-Ⅲ含量显著升高(P 0.05)。与模型组相比,苍耳子挥发油低、中、高剂量组支气管肺泡灌洗液中PC-Ⅲ含量显著降低(P 0.05)。结论海南苍耳子挥发油可通过降低肺组织总管壁厚度、内壁厚度和平滑肌厚度,降低支气管肺泡灌洗液中PC-Ⅲ含量,从而抑制支气管哮喘大鼠气道重塑。     

补肺益肾方对幼龄哮喘豚鼠模型气道重塑中嗜酸粒细胞凋亡的影响

目的:探讨补肺益肾方对幼龄哮喘豚鼠气道重塑和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-5(IL-5)水平和嗜酸粒细胞(EOS)凋亡的影响。方法:24只健康幼龄豚鼠随机分为正常组、模型组、中药组。以卵蛋白致敏激发制备豚鼠哮喘模型,分离豚鼠BALF中的EOS,肺组织切片HE染色,利用计算机图像分析仪测定支气管管壁厚度(WAt/Pi)、支气管平滑肌厚度(WAm/Pi)、支气管平滑肌细胞计数(N/Pi),酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中IL-5的含量,Td T介导的d UTP缺口末端标记法(TUNEL)检测EOS凋亡。结果:模型组WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi均较高于正常组(P<0.01),中药组WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi均低于模型组(P<0.05)。模型组IL-5水平高于正常组(P<0.01),中药组IL-5水平低于模型组(P<0.05)。模型组豚鼠EOS凋亡明显减少,中药组EOS凋亡明显高于模型组(P<0.01)。结论:中药补肺益肾方可通过降低气道IL-5水平,促进EOS凋亡,抑制气道重塑,减轻气道炎症,达到防治哮喘的目的。     

加味茵陈蒿汤对湿热哮喘大鼠气道重塑的作用及机制研究

目的:探讨加味茵陈蒿汤对湿热哮喘大鼠气道重塑的影响及其可能的机制。方法:50只健康雄性SD大鼠随机均分为正常组、湿热哮喘模型组、加味茵陈蒿汤中、高剂量组、地塞米松组(n=10)。采用多因素干预建立湿热哮喘大鼠模型。HE染色观察大鼠肺组织形态,ELISA法测定各组大鼠血清白介素-6(IL-6)水平,免疫组织化学染色观察大鼠气道信号转导因子-3(STAT3)和胸腺活化调节趋化因子(TARC)表达水平。采用Image-Pro Plus 6.0测定支气管总管壁厚度(Wat/Pbm)及气道平滑肌厚度(Wam/Pbm)。结果:模型组大鼠湿热哮喘表现明显,HE染色出现典型气道重塑改变。气道TARC表达和Wat/Pbm、Wam/Pbm与血清IL-6和气道STAT3表达呈正相关(P0.05)。与模型组比较,中药中剂量组大鼠气道IL-6/STAT3表达、气道TARC表达(P0.05)和气道Wat/Pbm(P0.05)、Wam/Pbm(P0.05)值明显降低。结论:加味茵陈蒿汤中剂量早期干预能显著减轻湿热哮喘大鼠气道重塑,机制可能与抑制大鼠肺组织IL-6/STAT3通路的表达有关。     

升陷乌梅汤对激素干预哮喘大鼠TGF-β1/Smad信号通路及气道重塑的影响

目的观察升陷乌梅汤对激素干预哮喘大鼠TGF-β1/Smad信号通路和气道重塑的影响。方法将50只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、哮喘组、激素组、布地奈德组、升陷乌梅汤组。除正常组外,其余各组采用卵蛋白致敏、雾化激发建立哮喘大鼠模型,并予各给药组大鼠腹腔注射糖皮质激素干预,在此基础上予升陷乌梅汤组大鼠灌胃、布地奈德组大鼠雾化吸入。观察各组大鼠肺功能及支气管病理改变,并采用Western blot及RT-qPCR法检测TGF-β1/Smad信号通路相关因子蛋白及mRNA表达的变化。结果①与正常组比较,哮喘组大鼠肺组织中胶原蛋白表达、WAi/Pbm、WAm/Pbm及WAe/Pbm升高(P0.05),信号通路因子TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白和mRNA表达及p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达均升高(P0.05),而肺功能中FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF50%及FEF75%均降低(P0.05),肺组织中Ai/Pbm以及通路因子Smad6、Smad7的蛋白和mRNA表达均降低(P0.05)。②与哮喘组比较,各给药组均可减少肺组织中WAi/Pbm、WAm/Pbm和WAe/Pbm(P0.05),降低TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达及TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P0.05),并升高FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF50%和FEF75%(P0.05),增加Smad6、Smad7的mRNA表达(P0.05);且升陷乌梅汤组较激素组可进一步减少WAi/Pbm、WAm/Pbm、WAe/Pbm,降低TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白和mRNA表达及p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P0.05),并升高FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF75%,增加Smad6的蛋白和mRNA表达以及Smad7的mRNA表达(P0.05)。结论升陷乌梅汤可在激素干预基础上进一步阻止TGF-β1/Smad信号通路的异常激活,抑制气道重塑发展,延缓肺功能下降。     

穴位贴敷对慢性哮喘小鼠气道重塑及转化生长因子β1/Smad 3表达的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad 3信号通路在穴位贴敷改善慢性哮喘小鼠气道重塑中的作用机制。方法:BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、假穴位贴敷组、穴位贴敷组、地塞米松组,每组8只,采用卵白蛋白致敏的方法制备慢性哮喘模型。穴位贴敷组运用白芥子、延胡索、生甘遂、细辛组方药贴贴敷双侧"肺俞""心俞""膈俞",假穴位贴敷组运用凡士林药贴贴敷双侧"肺俞""心俞""膈俞",两组均每次贴敷6h,每日1次,共治疗14d;地塞米松组腹腔注射地塞米松1mg/kg,每日1次,共治疗14d。应用小鼠肺功能仪检测气道阻力,应用苏木精-伊红染色在光镜下观察各组小鼠气道病理学改变,应用图像分析软件测定肺内支气管管壁面积(WAt)/管腔内周长(Pi)、管壁平滑肌面积(WAm)/Pi,应用免疫组化法检测小鼠肺组织中TGF-β1及Smad 3蛋白表达。结果:与正常组相比,模型组和假穴位贴敷组小鼠气道阻力、WAt/Pi、WAm/Pi、肺组织TGF-β1和Smad 3蛋白表达均显著增高(P0.01);穴位贴敷组、地塞米松组与模型组、假穴位贴敷组比较,小鼠气道阻力、WAt/Pi、WAm/Pi、肺组织中TGF-β1及Smad 3蛋白表达均下降(P0.05);穴位贴敷组和地塞米松组之间比较,各指标差异均无统计学意义(P0.05)。模型组支气管管壁大量炎性细胞浸润,管腔狭窄,气道上皮增生,支气管黏膜水肿增厚;穴位贴敷组肺泡内少量炎性细胞浸润,肺间隔未见明显增厚;地塞米松组小气道黏膜上皮较完整,肺间隔未见明显增厚。结论:穴位贴敷可通过下调慢性哮喘小鼠气道TGF-β1/Smad 3通路以改善气道重塑,从而治疗慢性哮喘。