从欧洲红豆杉茎皮中分离出2种新的类紫杉醇化合物

欧洲红豆杉 Taxus baccata 因含紫杉碱成为一种毒性很强的植物。1968年,Lythgoe曾报道分离了此类生物碱中的紫杉碱 A 、B和 C,10年后 Graf 等鉴定了紫杉碱 A、B 的结构。作者也曾报道从欧洲红豆杉茎皮中分离出新的类紫杉醇化合物,即与紫杉醇、三尖杉宁碱、巴可亭-Ⅲ共存的13-去乙酰-10-去苯甲酰 taxchinin C。随后,又进一步分离出另外5种类紫杉醇化合物,其中2个为新化     

东北紫杉茎皮化学成分的研究

从东北紫杉（TaxuscuspidataSieb．etZucc．）的干燥茎皮中分得6个紫杉烷二萜类化合物。经理化性质及波谱分析，分别鉴定为，2-desacetoxyaustrospicatine（Ⅰ），紫杉醇（Ⅱ）．cephalomannine（Ⅲ），2-去乙酰氧基红豆杉素丁（Ⅳ），紫杉宁B（Ⅴ），10-去乙酰-7-O-β-D-木糖基紫杉醇（Ⅵ），其中Ⅰ为首次从该属植物中分得。     

红豆杉种子中的新紫杉烷类化合物

自从紫杉醇在临床上用于治疗乳腺癌和卵巢癌后,人们一直在寻找这种药物的新来源,并对其进行结构修饰,研究其构效关系。研究发现,许多紫杉烷类化合物可作为半合成紫杉醇或其同系物的原料。作者对红豆杉Taxuschinensis(Pilg)Rehd.的种子进行了研究,从中分离得到2种新紫杉烷类物和11种已知的紫杉烷类物。红豆杉种子的乙醇提取物分别用正己烷和25%水-甲醇萃取。萃取物经SephadexLH-20柱层析、硅胶柱层析及反相柱层析分离得到13个化合物,其中2个新紫杉烷为::2α-乙酰氧基-2′,7-双去乙酰氧基austrospicatine,白色粉末,[α]D 33.7°,其1HNMR…     

东北红豆杉内生真菌的分离及产紫杉醇菌的鉴定

东北红豆杉Taxus cuspidata Sieb.et Zucc.又名紫杉、赤皮松、紫柏松,《本草推陈》记载有利尿、通经作用,现代研究表明含有二萜类化合物,如紫杉宁(taxinine)、紫杉宁A、紫杉宁H、紫杉宁K、紫杉宁L等[1],另外还含有包括紫杉醇在内的紫杉烷类化合物。紫杉醇(paclitaxel,商品名Tax     

朝鲜产东北红豆杉树皮中紫杉烷类成分的研究

目的研究朝鲜产东北红豆杉树皮中紫杉烷类的化学成分。方法采用乙醇提取、液-固萃取以及硅胶柱色谱分离,通过理化常数和光谱分析鉴定化合物的结构。结果从朝鲜产东北红豆杉的干燥树皮中分得8个化合物。经理化性质及波谱分析,鉴定了其中的7个化合物的结构,分别为紫杉醇(taxol,Ⅰ)、三尖杉宁碱(cephaolman-nine,Ⅱ)、7-表-紫杉醇(7-epi-taxol,Ⅲ)、10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ,Ⅳ)、7-木糖基-紫杉醇(7-xylose-taxol,Ⅴ)、2-deacetoxydecinnamoyl taxinine J(Ⅵ)、β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅶ)。结论化合物Ⅰ~Ⅶ为首次从朝鲜产东北红豆杉树皮中分得,化合物Ⅵ为首次从该种植物中分得。     

紫杉醇和紫杉烷的生物合成途径研究进展

 目的 介绍紫杉醇及紫杉烷生物合成途径的最新研究进展。 方法 以近年来该领域的国内外文献为基础，对紫杉醇及紫杉烷碳环骨架和侧链的生物合成过程、生物合成过程中关键酶及生物合成调控方面的进展情况进行综述。结果 紫杉醇是用于临床癌症治疗的植物天然药物，紫杉烷是紫杉醇合成的前体或代谢支路的产物。应用红豆杉细胞培养及无细胞体系，使用同位素掺入、微粒体催化反应等手段确定了紫杉醇及紫杉烷生物合成过程的部分步骤，已克隆紫杉烷环化酶1个，羟基化酶6个，酰基转移酶5个。为提高紫杉醇及紫杉烷的产量，已开发了多种调控其生物合成的技术。结论 紫杉醇及紫杉烷生物合成途径的阐明对调控其生产具有重要意义。今后的调控生产应综合考虑生物合成和后生物合成的关系，目标代谢途径和竞争代谢途径的关系。     

矮紫杉中紫杉烷类成分及其抗肿瘤活性研究

目的研究矮紫杉Taxus cuspidata cv. Nana中紫杉烷类化合物成分及其抗肿瘤活性,以期发现红豆杉资源的替代品种。方法采用高通量测序技术进行转录组测序,并采用分子对接的方式初步预测矮紫杉具有产生紫杉烷类化合物的能力。采用硅胶、SephadexLH-20和HPLC等色谱方法进行分离纯化,并根据理化性质及波谱学数据鉴定结构。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Westernblotting等方式,以肺癌NCI-H1299细胞、乳腺癌耐药株MCF-7/ADR、胃癌AGS细胞以及肝癌HepG2细胞为模型,对所分离鉴定的部分化合物进行体外抗肿瘤活性评价。结果从分子层面上验证矮紫杉具有代谢产生紫杉烷类化合物的能力,在此基础上从矮紫杉中分离得到6个紫杉烷类化合物,分别鉴定为紫杉醇(taxol,1)、三尖杉宁碱(cephalomannine,2)、巴卡亭Ⅲ(baccatin Ⅲ,3)、2-去乙酰氧基紫杉宁J(2-deacetoxytaxinine J,4)、2-去乙酰氧基-13-去乙酰去桂皮酰-紫杉宁J(2-deacetyloxy-13-deacetyldecinnamyltaxinine J,5)、2-去乙酰氧-5α-羟基紫杉宁J(2-deacetoxy-5α-hydroxytaxinine J,6)。化合物1～3对目标细胞株均具有良好的抗肿瘤活性。结论栽培品种矮紫杉具有代谢产生紫杉烷类化合物的能力,可以在一定程度上作为红豆杉替代资源使用。     

温度对南方红豆杉紫杉烷类化合物含量的影响

目的:研究不同贮藏温度对南方红豆杉4种紫杉烷类化合物含量变化的影响。方法:设置0℃、20℃和40℃3个考察组,HPLC法定期测定南方红豆杉中10-DAB Ⅲ、三尖杉宁碱、紫杉醇、7-表-10-脱乙酰基紫杉醇的含量。结果:贮藏3个月后,10-DAB Ⅲ含量:0℃组﹥20℃组﹥40℃组;三尖杉宁碱含量:20℃组﹥40℃组﹥0℃组;紫杉醇含量:0℃组﹥40℃组﹥20℃组;7-表-10-去乙酰基紫杉醇含量:20℃组﹥0℃组﹥40℃组,总紫杉烷类化合物含量:0℃组﹥20℃组﹥40℃组。结论:低温更有利于总紫杉烷类化合物、10-DABⅢ及紫杉醇含量的保存,常温更有利于三尖杉宁碱和7-表-10-去乙酰基紫杉醇含量的保存;4个组分均应避免高温贮藏。     

加速溶剂提取法在红豆杉中的应用

研究了不同条件下加速溶剂提取法(ASE)应用于东北红豆杉(Taxus cuspidata)中紫杉醇(Paclitaxel)及相关化合物的提取。此方法采取加压的方式以保持热溶剂在提取过程中处于液态,还能缩短提取时间,提高靶化合物的得率。试验中,紫杉醇、浆果赤霉素Ⅲ和10-去乙酰基浆果赤霉素Ⅲ采用ASE法的提取率明显高于室温下普通溶剂的提取率。采用ASE提取紫杉     

南方红豆杉不同部位紫杉烷类含量累积规律分析

目的:测定南方红豆杉不同组织器官紫杉烷类物质的含量,优选出最佳采收部位,为其开发利用提供依据。方法:分别采集南方红豆杉植株主干树皮、侧皮、根皮、须根、茎、叶六个组织器官材料,运用HPLC法检测紫杉烷类物质含量,确定其最佳利用组织器官。结果:南方红豆杉四种紫杉烷类在组织中的分布明显地受组织分化的影响,其中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ在叶中最多,7-表-10-去乙酰基紫杉醇在侧皮中最多,紫杉醇、三尖杉宁碱则在根中最多。结论:叶是合成紫杉醇前体物质的主要器官,而皮与根则是合成及积累紫杉醇的主要组织器官。     

经不对称双羟化反应合成紫杉醇的新途径

 目的寻求一种高效、低廉的半合成紫杉醇的途径。方法在可回收非支载型手性配体的催化作用下,通过不对称双羟化反应合成紫杉醇C₁₃侧链,对侧链的羟基和氨基进行保护后生成(4S,5R)-N-苯甲酰基-2-(4′-甲氧基)苯基-4-苯基-1,3-氧氮杂戊环-5-甲酸,进而和7-三乙基硅烷巴卡亭-Ⅲ缩合、去保护获得紫杉醇。结果获得了高光学纯度的紫杉醇C₁₃侧链(化学产率52%,光学纯度99%),紫杉醇的总产率为30%,光学纯度为99%。结论此方法反应步骤少、操作简单、成本低廉,为紫杉醇的半合成开辟了一条新路线。     

组培条件对云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇的影响

目的 :寻找适合于云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇的培养条件。方法 :对在不同光照条件下和不同培养基上的愈伤组织进行生长分析和紫杉醇含量测定。结果与结论 :黑暗、0.1mg·L^-1BAP和 1.0mg·L^-1 2,4 D的激素组合 ,B5,DCR或 6,7V基本培养基有利于云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇 ;培养基中NO₃ -浓度高有利于愈伤组织的生长 ,NH4⁺ 浓度高抑制愈伤组织的生长 ,但显著提高紫杉醇含量。     

对数期继代对南方红豆杉细胞培养动力学的影响

目的 解决南方红豆杉细胞生长缓慢及代谢水平低下的问题。方法 对对数期(20d)和静止期(30d)的红豆杉细胞分别进行继代，在整个生长周期中测定了培养基中的碳源、氮源、磷酸盐的变化并分析了红豆杉细胞生长及紫杉醇的合成情况。结果 对数期继代细胞吸收碳源和硝态氮早于静止期继代的细胞，且前者的比生长速度是后者的1．5倍，紫杉醇含量提高了近4倍。结论 对数期继代有利于生物量的积累及紫杉醇的合成。     

线粒体靶向的载紫杉醇TPP-PEG-PE纳米胶束的体外评价及促肿瘤细胞凋亡研究

目的制备载紫杉醇TPP-PEG-PE纳米胶束,研究其体外释放行为,考察其线粒体靶向性及促A549肺癌细胞凋亡效果。方法采用薄膜水化法制备载紫杉醇TPP-PEG-PE纳米胶束,以载药量、包封率、粒径为考察因素,优选载紫杉醇TPP-PEG-PE纳米胶束的制备工艺参数,再对优选工艺的纳米载药系统进行表征,采用体外释药、线粒体靶向、肺癌细胞毒性和细胞凋亡实验对该载药系统进行评价。结果载紫杉醇TPP-PEG-PE纳米胶束粒径为(18.7±0.8)nm,Zeta电位为(13.4±0.5)m V,透射电子显微镜结果表明,载紫杉醇TPP-PEG-PE纳米胶束为大小较为均一的规则圆球型。线粒体靶向实验表明TPP-PEG-PE纳米胶束可以促进药物聚集在线粒体部位,肺癌细胞毒性实验显示载紫杉醇TPP-PEG-PE纳米胶束抗细胞凋亡效果良好,Hoechst染色提示凋亡肺癌细胞出现了大量形态学改变,载紫杉醇TPP-PEG-PE纳米胶束可以明显提高促凋亡Caspase-3活性以及减少抗凋亡蛋白Bcl-2和c-IAP1表达量,均显著优于载紫杉醇PEG-PE纳米胶束和紫杉醇组的实验结果(P0.01)。结论载紫杉醇TPP-PEG-PE纳米胶束具有良好的肺癌细胞线粒体靶向性和促肺癌细胞凋亡作用,是一种潜在高效的肺癌细胞线粒体靶向给药系统。     

红豆杉属植物中紫杉烷化合物含量比较与分析

目的分析和比较5种红豆杉中6种紫杉烷类化合物含量的差异。方法利用乙醇超声浸提后得到样品溶液;通过高效液相色谱法测定和相关性分析、回归分析和聚类分析比较紫杉醇、巴卡亭Ⅲ、10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-deacetylbaccatin Ⅲ,10-DAB)、10-去乙酰基紫杉醇(10-deacetyltaxol,10-DAT)、三尖杉宁碱和10-去乙酰基-7-木糖基紫杉醇(10-deacetyl-7-xylosetaxol,DXT)含量。结果不同种红豆杉紫杉烷含量存在显著性差异,陇南地区中国红豆杉中10-DAB、紫杉醇、10-DAT和三尖杉宁碱含量显著高于其他种红豆杉,曼地亚红豆杉和湖南省南方红豆杉中10-DAB含量也相对较高;相关性分析、回归分析及聚类分析均表明,10-DAT和三尖杉宁碱与紫杉醇含量显著相关,且前者比后者对紫杉醇含量的影响作用更大;聚类分析还表明温室内栽植的南方红豆杉聚为一类,大田种植的中国红豆杉、东北红豆杉、太行山地区南方红豆杉和曼地亚红豆杉聚为一类,表明环境因子对紫杉烷积累具有明显影响。结论不同种红豆杉中紫杉烷含量具有显著差异,种类是影响红豆杉紫杉醇等紫杉烷含量的重要因素,紫杉醇含量随着10-DAT和三尖杉宁碱含量增加而增加。     

云南红豆杉高紫杉醇含量细胞系的选择

目的 :选择云南红豆杉高紫杉醇含量细胞系。方法 :根据色泽、质地、生长速率和分泌有色物质等性状 ,将不同的小细胞团挑出、单独培养 ,并对其进行生长分析和紫杉醇含量测定。结果与结论 :通过仔细选择 ,可以得到紫杉醇含量高的细胞系 ;颜色深、生长慢、干重 /鲜重比值高的细胞系紫杉醇含量常常较高。     

紫杉醇在犬体内的药动学

 目的：测定犬iv紫杉醇后的药动学。方法：犬10条，随机分为两组，一组先后iv1．5和3．0mg·kg^－1两个剂量的紫杉醇，另一组则iv6．0mg·kg^－1的紫杉醇，用HPLC测定血药浓度。结果：犬iv1．5，3．0和6．0mg·kg^－13个剂量的紫杉醇后，血浆药 时曲线均符合二室模型，t_1／2β分别为2．20，2．01和2．24h，AUC分别为1．24，2．75和6．72μg·h·ml^－1。紫杉醇的主要药动学参数在3个剂量组之间无显著性差异。结论：紫杉醇在犬体内的处置无剂量依赖性。     

黄背栎中的黄酮类化学成分研究

 目的研究黄背栎(Quercus pannosa Hand.-Mazz.)中的黄酮类化学成分。方法利用Sephadex LH-20及硅胶等柱色谱技术进行化合物的分离和纯化,根据理化性质、光谱数据对其结构进行鉴定。结果得到5个黄酮类化合物,分别鉴定为(+)-catechin(1),(-)-epicatechin(2),(2R,3R)-(-)-二氢槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷(3),(2R,3R)-(-)-二氢槲皮素3-O-β-D-木糖苷(4),chamaechromone(5)。结论这5个化合物均为首次从黄背栎中分离得到。     

论红豆杉植物资源的保护和再生

红豆杉属植物所含成分紫杉醇具有明显的抗癌作用,而野生资源极为有限,成为紫杉醇开发的主要制约因素。本文着重阐述了红豆杉资源保护的内容和促进资源再生的途径。     

南方红豆杉DXS基因的克隆与功能分析

目的从南方红豆杉Taxus chinensis获得紫杉醇生物合成途径关键酶1-脱氧-D-木糖醇-5-磷酸合成酶(1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase,DXS)基因(TcDXS)并进行生物信息学和表达模式分析以及亚细胞定位和功能鉴定。方法采用RACE技术获得TcDXS全长;利用qRT-PCR分析TcDXS在南方红豆杉不同部位的表达情况;采用亚细胞定位分析TcDXS在细胞中的位置;用颜色功能互补实验检测TcDXS功能。结果获得的TcDXS由3 031个核苷酸组成,包含了2 229 bp编码区,编码742个氨基酸,其蛋白相对分子质量为79 400,等电点(p I)为7.99;qRT-PCR检测表明TcDXS在南方红豆杉的嫩叶柄中表达量最高,其次是叶和皮,根和茎中的表达量较低;亚细胞定位结果表明,TcDXS定位在叶绿体中;功能互补实验结果表明,在共同转化p AC-BETA和pTrc-TcDXS的大肠杆菌菌落呈现出橘黄色。结论 TcDXS的克隆和功能分析为深入研究紫杉醇生物合成途径和实现其代谢工程奠定了基础。