二仙汤对去卵巢大鼠认知障碍的影响

目的:观察二仙汤对去卵巢大鼠引起的认知障碍作用及初步机制探讨。方法:将雌性SD大鼠按体质量随机分成假手术组,模型组,阳性药戊酸雌二醇组(0.8 mg·kg~(-1)·d~(-1)),二仙汤高、中、低剂量组(相当生药量12,8,4 g·kg~(-1)·d~(-1))。除假手术组外,其他组动物均以去卵巢复制认知障碍模型,经阴道涂片筛选后,每日1次给药,连续90 d后,以Mirrors水迷宫实验检测大鼠认知能力,比色法检测大鼠大脑皮质乙酰胆碱酯酶(Ach E),乙酰胆碱转移酶(Ch AT),总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马和大脑皮质区域的雌激素α受体蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组逃避潜伏期随着试验次数显著增多(P0.01),在原平台象限停留时间减少(P0.05),Ch AT活性降低(P0.01)且Ach E活性升高(P0.05),大脑皮质区域的雌激素α受体表达显著减少(P0.01);与模型组比较,二仙汤能缩短模型大鼠逃避潜伏期,增加空间探索试验时穿过原目标平台的次数和原目标平台象限停留时间比例,以及增加Ch AT活性,降低Ach E活性,雌激素α受体表达显著增加(P0.01)。结论:二仙汤能改善去卵巢致大鼠认知障碍,其机制可能与中枢胆碱活性和雌激素等有关。     

二仙汤对去卵巢大鼠心功能和血压动态演变的干预作用

目的:探讨大鼠去卵巢后心功能、血压的演变规律及二仙汤对其的影响及机制。方法:选用健康10周龄雌性SPF级SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、雌激素组(戊酸雌二醇,0.18 mg·kg^-1)、二仙汤组(7.5 g·kg^-1)。大鼠去卵巢后2周开始灌胃给药,1次/d,连续12周。二仙汤组及雌激素组分别给予二仙汤或戊酸雌二醇灌胃,假手术组和模型组灌胃等体积纯净水。给药4,8,12周末以无创超声心动图(UCG)及尾动脉检测技术、放免法检测心功能、血压(BP),血清雌二醇(E2)含量;给药12周末采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清内皮素-1(ET-1),血管紧张素2(AngⅡ)含量,苏木素-伊红(HE)染色、电镜技术、原位末端标记法(TUNEL)检测心肌形态学和凋亡情况。结果:与假手术组比较,给药4周末模型组射血分数(EF)减小、左室收缩末期容积(LVVols)增大(P<0.05),8周末各组心功能无显著差异,12周末模型组左室收缩末期内径(LVIDs),LVVols,左室舒张末期内径(LVIDd),左室舒张末期容积(LVVold)均显著增大(P<0.01),4,8,12周末模型组收缩压(SBP)增高(P<0.05),并呈不断升高趋势,舒张压(DBP)变化不明显,12周末模型组血清E2水平降低(P<0.05),ET-1,AngⅡ升高(P<0.01),心肌肌原纤维不规则、部分肌丝断裂,线粒体嵴紊乱、断裂或消失,细胞凋亡增多(P<0.01);与模型组比较,二仙汤组心肌收缩、舒张功能明显改善,血压降低;血清E2含量明显升高(P<0.05),血清ET-1含量明显降低(P<0.05),血清AngⅡ含量显著降低(P<0.01);心肌、线粒体形态结构改善,心肌细胞凋亡指数显著降低(P<0.01)。结论:大鼠去卵巢后出现心功能降低、血压增高等一系列病理改变,与心功能下降比较血压升高的变化出现更早,二仙汤通过调节E2,血液活性物质及心肌凋亡等途径发挥对去卵巢大鼠心功能、血压的干预作用。     

二仙汤对去卵巢大鼠心脏电活动的影响

目的:探讨二仙汤对去卵巢大鼠心脏的电生理效应。方法:选用健康13周龄雌性SPF级SD大鼠32只,随机分为4组,分别为假手术组、模型组、雌激素组、二仙汤组,每组8只。大鼠分组后开始灌胃给药,1次/d,连续12周。二仙汤组ig7.5 g·kg~(-1)·d~(-1);雌激素(戊酸雌二醇)组ig 0.2 mg·kg~(-1)·d~(-1);假手术组和模型组灌服等体积纯净水。大鼠麻醉后,以针刺电极记录标准Ⅱ导联ECG,随后玻璃微电极细胞内电位记录技术记录离体心室流出道标本自发节律和心室肌动作电位,并分析各项参数的变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠P波,R波和T波振幅明显减小,P波时间,PR间期,QT间期,T波时间明显缩短(P0.05,P0.01),易出现T波低平或倒置,二仙汤组和雌激素组均可一定程度的逆转上述ECG改变。模型组大鼠离体心室流出道自发节律明显升高,更易触发心律失常,二仙汤组和雌激素组自发节律明显减慢,并可使去甲肾上腺素(NE)诱发的自发节律异常明显改善。模型组大鼠心室肌动作电位时程(APD)明显缩短,以APD50缩短更明显,二仙汤可使APD50的缩短明显改善,均具有统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:二仙汤可明显改善去卵巢大鼠心脏电活动的改变,对由于雌激素水平下降出现的心律失常有一定的治疗作用。     

二仙汤对去卵巢骨质疏松大鼠股骨蛋白质组的影响

该实验为探究二仙汤防治骨质疏松的作用及对去卵巢骨质疏松模型大鼠股骨蛋白质组的影响。将雌性SD大鼠按体重随机分为4组,即假手术组、模型组、阿仑膦酸钠组(阿仑膦酸钠,1 mg·kg~(-1))、二仙汤组(生药量8 g·kg~(-1)),其中假手术组和模型组灌服生理盐水,阿仑膦酸钠组按1 mg·kg~(-1)剂量灌服阿仑膦酸钠,二仙汤组按生药量8 g·kg~(-1)灌服二仙汤,每日1次,连续给药90 d后检测股骨骨密度,同时应用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测股骨骨蛋白,Protein Discovery软件进行蛋白质鉴定,SIEVE软件对蛋白进行相对定量分析。实验结果显示,二仙汤能显著提高去卵巢大鼠股骨骨密度。二仙汤组与模型组相比较共发现41个与假手术组趋势一致的差异蛋白,主要包括生物氧化相关蛋白、信号转导通路相关蛋白、脂肪酸代谢相关蛋白、细胞骨架相关蛋白、能量代谢相关蛋白、糖代谢相关蛋白等。二仙汤能防治骨质疏松症,碳酸酐酶2、整合素β1等相关差异蛋白质可能是其作用靶点。     

二仙汤对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的探讨二仙汤对去卵巢大鼠离体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及初步机制。方法36只雌性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、戊酸雌二醇组(戊酸雌二醇,8×10^-4g·kg^-1)、二仙汤低剂量组(4 g生药·kg^-1)、二仙汤中剂量组(8 g生药·kg^-1)、二仙汤高剂量组(12 g生药·kg^-1)。除假手术组外,各组动物均摘除卵巢复制更年期综合征大鼠模型,每日给药1次,连续90 d,通过Langdroff心脏灌流系统进行离体心脏灌注,生理信号采集系统记录心率,生化方法检测冠状动脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST),心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK-MB)、Ca^2+-ATP酶和Na^+-K^+-ATP酶活力。结果与模型组相比,二仙汤给药组能改善去卵巢大鼠MIRI的心率变化,减少冠状动脉流出液LDH、AST的含量,减少心肌组织MDA的含量,增加心肌组织SOD、Ca^2+-ATP酶和Na^+-K^+-ATP酶活力。结论二仙汤可防治去卵巢大鼠离体MIRI,其机制可能与抗氧化有关。     

二仙汤对肾阳虚大鼠促肾上腺皮质激素的影响

目的:探讨二仙汤不同时间对肾阳虚大鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)的影响。方法:SD大鼠以腺嘌呤灌胃30d,造成肾阳虚模型。造模大鼠随机分成模型组、二仙汤组,在喂药后不同时间(10、20、30d)观察对血浆ACTH含量的影响。结果:二仙汤组ACTH量随着时间的延长呈现递增的趋势,二仙汤具有改善肾阳虚大鼠低水平ACTH的作用(P<0.05)。结论:二仙汤提高肾阳虚大鼠ACTH含量是其治疗肾阳虚的机理之一。     

调肝汤对肝郁模型大鼠血液流变学的影响

目的：探讨调肝汤对肝郁模型鼠血液流变学的影响。方法：采用血液粘度计检测70例大鼠的高切，低切，红细胞压积，红细胞聚集指数及血浆粘度。结果：造模组与生理盐水组比较，全血粘度与血浆粘度及细胞聚集指数均明显增高（P＜0．001）而治疗组与模型相比，以上指标均有显著差异（P＜0．05）。结论：经过动物血液流变学测定，调肝汤能够改善造模型引起的血液流变学改变，具有降低全血粘度，抑制红细胞聚集，降低血浆粘度，改善瘀血状态的作用。     

去卵巢大鼠肠道菌群结构和功能的变化及二仙汤的干预作用

目的 采用16S rRNA基因测序探讨二仙汤对大鼠去卵巢后肠道菌群变化的干预作用。方法 将32只雌性健康SD大鼠随机分为4组,每组8只,分别为假手术（Sham）组、模型（OVX）组、雌激素（E）组及二仙汤（EXD）组。E组、EXD组分别以1.8×10^-4 g·kg^-1剂量戊酸雌二醇药液、9 g·kg^-1剂量二仙汤进行灌胃,余下两组给予等体积蒸馏水,1次/d,持续16周。16周后,检测大鼠血清雌激素及血脂四项水平,提取大鼠粪便DNA,给予16S rRNA基因测序并分析结果。结果 与Sham组比较,OVX组血清雌激素水平显著降低（P<0.01）,血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平明显升高（P<0.05）,与OVX组比较,E组与EXD组血清雌激素水平显著升高（P<0.01）,TC、LDL-C水平明显降低（P<0.05）。Alpha多样性显示,去卵巢后肠道菌群多样性无显著性变化。Beta多样性显示,4组菌群结构具有显著性差异,二仙汤干预可以改善去卵巢后肠道菌群变化。利用LEfSe分析4组差异菌群,Sham组与OVX组有3个差异菌门、18个差异菌属,OVX组与E组有1个差异菌门、12个差异菌属,OVX组与EXD组有3个差异菌门、5个差异菌属。雌激素干预可以使OVX组瘤胃球菌1（Ruminococcus 1）、厌氧弧菌（Anaerovibrio）、苏黎世杆菌（Turicibacter）3种菌属变化趋势逆转恢复;二仙汤干预可以使OVX组拟杆菌门和厚壁菌门2种菌门变化趋势逆转恢复,普雷沃氏菌9（Prevotella 9）、瘤胃球菌科UCG-014属（Ruminococcaceae UCG-014）、瘤胃球菌1（Ruminococcus 1）、纺锤链杆属（Fusicatenibacter）4种菌属变化趋势逆转恢复。结论 去卵巢大鼠肠道菌群结构和功能发生明显改变,二仙汤可以改善这种变化。     

二仙汤及其组方中药对幼年大鼠卵巢形态学影响

目的:通过二仙汤及其组方中药对幼年大鼠卵巢的形态学观察,探讨其对卵巢功能的影响机制。方法:幼年SD大鼠54只,分为正常对照组、阳性对照组、二仙汤组、淫羊藿组、仙茅组、巴戟天组、当归组、黄柏组和知母组9组。各组给药6d后麻醉大鼠,取血清测量卵泡刺激素(FSH)和雌二醇(E2)的含量,分离摘取双侧卵巢,称重后常规石蜡包埋切片,行HE染色和免疫组织化学染色。结果:阳性对照组、仙茅组和黄柏组卵巢系数与正常组对比增加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。仅阳性对照组E2含量升高。HE染色发现阳性对照组、二仙汤组、淫羊藿组、仙茅组、当归组和黄柏组卵泡数量明显增多,其中阳性对照组、仙茅组和黄柏组可见黄体形成。免疫组织化学染色发现雌激素受体α(ERα)在各组大鼠的卵巢颗粒细胞中未见表达,雌激素受体β(ERβ)主要表达于各组大鼠的卵巢颗粒细胞的细胞核中;二仙汤组、淫羊藿组、仙茅组、当归组和黄柏组ERβ表达显著增强(P<0.05)。结论:二仙汤及其方中温肾药(淫羊藿、仙茅),滋阴药(黄柏)和调理冲任药(当归)通过上调卵泡颗粒细胞ERβ表达,促进卵泡发育成熟和排卵。     

复元活血汤对骨折大鼠血液流变学的影响

观察复元活血汤对大鼠骨折后的血液流变学的影响。方法:采用大鼠闭合性骨折造模,结果表明复元活血汤对闭合性骨折大鼠骨痂生长有促进作用,可明显提高骨钙含量,并降低血液粘度,改善血液循环。     

二仙汤对围绝经期大鼠心脏电生理的影响

目的:探讨二仙汤对围绝经期大鼠心脏电生理的作用及机制。方法:雌性SD大鼠,根据体质量随机分组,分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组(8×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1)),二仙汤低、中、高剂量组(4,8,12 g·kg·~(-1)d~(-1))。除假手术组外,其余各组大鼠均彻底摘除卵巢复制围绝经期大鼠模型。同时分别灌胃给药,假手术组和模型组则灌胃等量生理盐水,每天1次,连续80 d。以生物信号采集仪连接Ⅱ导联电极记录大鼠心电图,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中雌二醇(E2)的含量,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠子宫病理形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western bot)检测大鼠心肌组织中雌激素α受体(ERα)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心电图P波,R波,T波幅度显著减小(P 0. 01),PR间期,QRS时程,QT间期不同程度的缩短,大鼠血清中E2水平显著降低(P 0. 01);大鼠子宫明显干瘪,皱缩,子宫内膜层变薄,腺体数量明显减少;心肌组织ERα受体蛋白表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,二仙汤各剂量组均能改善上述大鼠子宫的病理变化,中、高剂量二仙汤能显著升高E2水平(P 0. 01),显著逆转上述子宫的病理变化,上调ERα受体蛋白的表达(P 0. 01)。结论:二仙汤能改善围绝经期大鼠的心脏电生理变化,其机制可能与提高大鼠体内雌激素活性和雌激素受体表达有关。     

二仙除痹汤对大鼠胶原诱导型关节炎的影响

目的探讨二仙除痹汤对大鼠胶原诱导型关节炎（CIA）的作用及机制。方法取健康Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组及二仙除痹汤低、高剂量组,除正常组外其余各组建立大鼠CIA模型。二仙除痹汤低、高剂量组于造模后第7日起分别给予二仙除痹汤8、16 g/kg灌胃,每日1次,连续4周。评估发病率及临床积分,观察关节组织病理形态和放射学改变,检测关节组织匀浆上清和血清中促炎细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α以及血清炎症介质前列腺素（PG）E2的含量变化。结果模型组大鼠CIA发病率100%,关节炎最高临床积分8.2,踝关节出现明显的炎症细胞浸润、血管翳形成、软骨和骨破坏等组织病理学变化以及关节间隙狭窄或增宽、关节面虫蚀样破坏等影像学改变,关节和血清中IL-1β、TNF-α、IL-6以及血清PGE2含量明显升高。与模型组相比,二仙除痹汤低、高剂量组可显著降低关节炎的发病率（分别为60%、40%）、临床积分（分别为5.7、3.8）和改善关节组织病理学改变,二仙除痹汤高剂量组还能明显抑制骨破坏程度,降低关节和血清中IL-1β、TNF-α、IL-6及PGE2的含量,二仙除痹汤低剂量组的亦显著抑制血清中IL-1β、IL-6以及关节中IL-6的含量。结论二仙除痹汤能控制大鼠CIA病情的发生发展,其机制可能与对系统和关节局部促炎细胞因子和炎症介质的有效抑制有关。     

二仙汤联合优甲乐对甲状腺功能减退患者血清炎性因子和免疫功能的影响

目的:探讨二仙汤联合优甲乐对甲状腺功能减退患者血清炎性因子和免疫功能的影响,分析联合治疗可能作用机制。方法:选取2013年6月至2015年6月海淀区中医院收治的甲状腺功能减退症患者148例,据随机数字表法分为对照组与观察组,每组74例,对照组给予优甲乐治疗,观察组联合应用二仙汤治疗,治疗4周后,比较2组患者血清炎性因子、免疫功能、临床疗效等指标。结果:观察组治疗有效率97.30%明显高于对照组的87.84%(χ~2=4.812,P0.05);血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平均明显低于对照组(t=3.946~4.839,P0.05);治疗4周后观察组CD3~+、CD4~+T细胞比例及CD4/CD8~+比值较对照组升高,而CD8~+、CD16~+T细胞比例较对照组降低(P0.05)。结论:二仙汤联合优甲乐有助于提高甲状腺激素减退患者临床疗效,可能与降低血清炎性因子水平、改善免疫功能等因素有关。     

二仙益坤汤对围绝经期模型小鼠学习记忆能力的影响

目的:观察二仙益坤汤对围绝经期模型小鼠学习记忆能力的影响并探讨其作用机制。方法:雌性小鼠摘除卵巢模拟围绝经期,随机分为模型组,乙烯雌酚组(DES,0.1 mg·kg-1),二仙益坤汤高、中、低剂量组(30,15,7.5 g·kg-1),另有假手术组作为对照,各组按相应剂量连续ig给药5周后,采用跳台法和Morris水迷宫实验观察其对围绝经期模型小鼠学习记忆能力的影响,并生化检测血清超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),脑组织一氧化氮(NO),乙酰胆碱(ACh),脑组织过氧化脂质(LPO),SOD活性和一氧化氮合酶(NOS),胆碱酯酶(AChE)活性,荧光定量PCR法检测海马中Bcl-2相关x蛋白(Bax)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA的表达。结果:与模型组相比较,给药各组能明显减少跳台实验训练错误次数及测试错误次数,延长潜伏期,Morris水迷宫实验中,二仙益坤汤高、中剂量组小鼠定向航行潜伏期缩短、空间搜索穿越站台次数增加;与模型组相比,给药各组均能提高小鼠血清SOD活性,降低MDA含量;提高脑组织SOD活性及Ach含量,降低LPO和NO水平,并降低AchE和NOS的活性;使模型大鼠海马Bcl-2表达上调,并降低Bax表达,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:二仙益坤汤对围绝经期模型小鼠具有改善学习记忆能力的作用,其作用机制可能与清除自由基、抗氧化和调节神经递质水平并影响凋亡因子Bax及Bcl-2 mRNA的表达等有关。     

淫羊藿黄酮对去势大鼠骨生物力学性能的影响

目的：探讨淫羊藿黄酮对去势大鼠骨生物力学性能的影响。方法：选用2月龄雌性SD大鼠60只,随机分为6组,每组10只。A组：空白对照组,常规方法饲养,进行假手术处理;B组：去势组,不给予淫羊藿黄酮干预;C组：去势垣钙剂,每日灌服高效钙（75 mg·kg-1）垣维生素D3 21 IU·kg-1;D组：去势垣低剂量,每日灌服淫羊藿黄酮（75 mg·kg-1）;E组：去势垣中剂量,每日灌服淫羊藿黄酮（150 mg·kg-1）;F组：去势垣高剂量,每日灌服淫羊藿黄酮（300 mg·kg-1）。实验第4月末处死大鼠,取出大鼠双侧胫骨、双侧股骨、双侧肱骨和全部腰椎。实验动物干预完毕后测定：淤第四腰椎体力学性能指标中弹性模量、最大载荷、最大应力、变形位能、结构刚度,于股骨结构力学性能指标中最大载荷、破坏载荷、变形位能、结构刚度,盂股骨材料力学性能指标中弹性模量、最大应力、最大应变、破坏应力、破坏应变。结果：与B组比较,A、D、E、F组第四腰椎体力学性能指标中弹性模量、最大载荷、最大应力、变形位能、结构刚度,股骨结构力学性能指标中最大载荷、破坏载荷、变形位能、结构刚度,股骨材料力学性能指标中弹性模量、最大应力、最大应变、破坏应力明显升高（P<0.05）;C组有升高趋势;A、C、D、E、F组之间比较差异没有统计学意义;D、E、F组随淫羊藿黄酮剂量的增加而增加,但其相互之间差异没有统计学意义;股骨材料力学性能指标中破坏应变A、C、D、E、F组之间相互比较差异没有统计学意义;表明去势造成了大鼠椎骨力学性能,股骨结构力学性能和股骨材料力学性能的降低,应用淫羊藿黄酮可改善第四腰椎体力学性能、股骨结构力学性能和股骨材料力学性能。结论：淫羊藿黄酮可有效防治去势大鼠骨生物力学性能的降低,使其维持在较高水平。