1份生产用中药蛇粗毒的DNA分子鉴定

目的 利用PCR技术鉴定干燥蛇粗毒的来源物种,并对基因组DNA的提取效果及提取过程中需注意的若干问题进行分析和讨论,同时还对若干针对不同长度目的 基因扩增引物的使用效果进行验证.方法 从1份已保存了7年的生产用干燥蛇粗毒中提取总DNA,并以之为模板进行PCR扩增、测序和序列分析.结果 使用该方法可从蛇粗毒中提取得到微量的总DNA,并成功扩增得到0.45～1.18 kb不同长度范围的目的 片段;测序结果提交NCBI,并与CenBank中的同源序列进行BLAST比对.结论 该蛇粗毒样品来自眼镜蛇,且极可能由多个不同的亚种或单倍型所组成.该技术有可能推广用于对动物粗毒的来源进行准确和直接地鉴定.     

地龙及其混淆品原动物的形态及DNA双重条形码鉴定

目的基于线粒体cytochrome coxidase I(CO I)和16 S rRNA基因开发DNA双重条形码鉴定方法,由此验证并补充形态鉴定,以期建立一种准确、有效地鉴定地龙及混淆品原动物的方法。方法对收集到的66份样品依据形态特征进行初步鉴定,使用优化后的引物同时扩增CO I和16 S rRNA序列。优化一步法双重PCR实验条件。用MEGA 5.1计算地龙及其混淆品的种内、种间遗传距离,基于K2P模型构建NJ树。结果 CO I和16 S rRNA双重DNA条形码鉴定与形态鉴定结合,可准确鉴别地龙及混淆品原动物。结论形态鉴定是分子鉴定的基础,分子鉴定是形态鉴定的有力补充。二者结合可最大程度地实现地龙及其混淆品原动物的准确鉴定。DNA双重条形码鉴定方法也可为地龙药材鉴定以及其他动物药材的分子鉴定提供参考。     

DNA分子标记技术在中草药鉴定中的应用

传统中草药鉴定的主要方法有基源鉴定、显微鉴定、理化鉴定、生物鉴定，然而这些鉴定特征几乎均为生物体的遗传性表现型，不仅受到遗传因素的影响，而且与生物体的生长发育阶段、环境条件、人类活动如引种驯化、加工炮制等有着密切的关系，具有很大的变异性和随意性，难免存在主观性强、重复性和稳定性差等缺点，     

线粒体基因在药用植物DNA分子鉴定中的应用

线粒体是植物细胞中重要细胞器之一,蕴含丰富的DNA信息,与叶绿体基因组、核基因组相结合,能客观地反映物种、居群甚至个体间的遗传特性。针对植物线粒体基因组的基本特征及其在中药DNA分子鉴定中的应用价值、研究现状与进展进行综述。     

线粒体DNA标记在动物类药材分子鉴定中的应用进展

动物类中药材是中华医药宝库中重要的组成部分,药用历史悠久,功效显著。随着野生动物资源的破坏和日益增长的市场需求,动物类药物中混伪品掺杂现象时有发生,为其临床应用带来了安全隐患。线粒体DNA因其严格的母系遗传特征和丰富的遗传多样性,被广泛应用于动物群体遗传、谱系生物地理和系统发育等研究领域。近年来,线粒体DNA标记在动物类药材分子鉴定中的应用日益广泛,并取得了丰硕的成果,为动物类药物的质量控制提供了技术保障。对COI、Cyt b、12S rRNA等线粒体DNA标记在动物类药材分子鉴定中的应用现状进行总结,结合课题组前期的研究结果,对线粒体DNA分子标记技术在动物类药材鉴定中的后续应用开发进行了展望,以期为我国药用动物资源的合理利用提供参考和借鉴。     

rRNA基因间隔区碱基测序对当归进行鉴定的研究

目的 通过rRNA基因内转录间隔区的碱基序列测定。对当归进行分子水平鉴定。方法 常规提取当归种籽DNA，利用合成的特异性引物对其rRNA基因内转录间隔区进行套式PCR扩增，将扩增产物进行碱基序列测定。结果 琼脂糖凝胶电泳证实当归种籽中rRNA基因内转录间隔区PCR扩增产物存在；经测序后得到了当归种籽rRNA基因内转录间隔区的碱基序列。结论 rRNA基因内转录间隔区的碱基序列测定可做为分子水平鉴定植物性中药材的又一有效途径。     

基于ITS2序列的中药材藤梨根DNA分子鉴定

目的：通过DNA条形码鉴定技术区分中药材藤梨根及其常见混伪品。方法：对采集的中药材藤梨根样品及其常见混伪品进行DNA 提取,PCR扩增和测序,运用CodonCode Aligner 3.5.7对所获ITS2序列进行拼接。应用MEGA 5.0软件计算藤梨根及其常见混伪品的Kimura 2-parameter（K2P）遗传距离,并构建NJ（邻接）系统聚类树,最后分析种间ITS2序列的二级结构差异。结果：中药材藤梨根两种基原植物的平均种内K2P遗传距离分别为0.001和0.002,远小于藤梨根与其常见混伪品之间的平均K2P遗传距离0.120;藤梨根与其常见混伪品的ITS2二级结构也存在明显差异;NJ树显示藤梨根的基原植物聚在一起,与混伪品可明显区分,但无法区别所有猕猴桃属植物。结论：ITS2序列可高效区分藤梨根及其常见混伪品,弥补了传统鉴定方法的不足,提高了鉴定效率及准确性。     

基于4种序列的辽产苍术属植物DNA条形码鉴定

目的：采用4种序列对辽宁产苍术属植物进行鉴定,进而选择适合苍术属植物DNA条形码鉴定的序列。方法：使用试剂盒提取辽宁产4种苍术属植物关苍术Atractylodes japonica Koidz.ex Kitam、朝鲜苍术A.coreana （Nakai） Kitam、茅苍术A.lancea （Thunb.） DC.、北苍术A.chinensis （Bunge） Koidz.共43份样品的总DNA,进行聚合酶链式反应（PCR）扩增及产物测序;使用DNAMAN 8.0软件对测得的双向序列进行拼接;使用MEGA 6.0软件进行序列比对;使用邻接法构建系统聚类树。结果：仅内转录间隔区2（ITS2）序列将4种苍术属植物各分为一支,聚类效果较好,psbA-trnH、matK、rbcL聚类混乱,物种分离度低。结论：ITS2序列可作为苍术属植物DNA条形码鉴定的有效序列片段,苍术野生品和栽培品、叶裂与叶不裂均聚在一起,ITS2序列片段不能区分。     

基于DNA序列的石斛属药用植物鉴定研究进展

本文从核基因组、线粒体基因组和叶绿体基因组三方面,综述了目前常用DNA序列在石斛属药用植物的分子鉴定和物种分类研究中的进展。文献显示,目前用于石斛属物种分子鉴定研究的DNA序列主要有核ITS/ITS2、LEAFY,叶绿体rbcL、matK、trnH-psbA、rpoB、rpoC1、trnL-F、rbl16、trnl intron和线粒体基因组nad1 intron2,这些DNA序列均对石斛属药用植物鉴定具有借鉴意义。笔者对叶绿体全基因组序列作为“超级条形码”在石斛属植物中应用的可行性进行了展望,以期为石斛属药用植物的鉴定研究提供参考。     

黄精属药用植物DNA条形码鉴定研究

目的：评价DNA条形码候选序列对黄精属药用植物的鉴定能力。方法：对44份黄精属样品应用通用引物扩增其叶绿体rbcL、matK、psbA-trnH及核ITS2和ITS序列,分析其种内种间变异和barcoding gap,应用BLAST和Nearest Distance方法计算物种鉴定效率。结果：ITS2和ITS序列通用引物扩增效率低,叶绿体matK序列获得率最低,rbcL最高,三条序列种内与种间变异均较小,无明显的barcoding gap。基于BLAST和Nearest Distance方法计算,三条叶绿体序列对黄精属药用植物的鉴定效率均较低。结论：DNA条形码候选序列psbA-trnH、matK及rbcL不适用于黄精属药用植物的鉴定,叶绿体全序列或通过叶绿体全序列筛选合适的DNA片段可能是该属药用植物分子鉴定的方向。     

基因测序技术在中药质量研究中的应用(Ⅱ)——山药基原的DNA测序鉴别

目的 :分析正品山药DioscoreapolystachyaTurcz .与地方习用品广山药D .persimilisPrainetBurkill、土山药D .japaonicaThunb .和方山药D .alataL .的核基因组 18SrRNA基因序列 ,为山药基原鉴别及品质评价提供分子依据。方法 :采用PCR直接测序技术测定山药及其地方习用品的 18SrRNA基因核苷酸序列并作序列同源性分析。结果 :山药、广山药和土山药的 18SrRNA序列长度均为 1810bp ,而方山药为 180 7bp。根据排序比较 ,广山药和正品山药的 18SrRNA序列完全相同 ,而与土山药和方山药的序列同源性分别为 99 89%和 97 5 1%。结论 :DNA测序技术可成为山药基原鉴定准确而有效的分子方法     

基因测序技术在中药质量研究中的应用(Ⅱ)——山药基原的DNA测序鉴别

目的 分析正品山药Dioscorea polystachya Turcz.与地方习用品广山药D.persimilis Prain et Burkill、土山药D.japaonica Thunb.和方山药D.alataL.的核基因组18SrRNA基因序列,为山药基原鉴别及品质评价提供分子依据。方法 采用PCR直接测序技术测定山药及其地方习用品的18SrRNA基因序列。为山药基原鉴别及品质评价提供分子依据。方法 采用PCR直接测序技术测定山药及其地方习用品的18SrRNA基因序列,为山药基原鉴别及品质评价提供分子依据。方法 采用PCR直接测序技术测定山药及其地方习用品的18SrRNA基因核苷酸序列产荼序列同源性分析。结果 山药、广山药和土山药的18SrRNA序列长度均为1810bp,而方山药为1807bp。根据排序比较,广山药与正品山药的18SrRNA序列完全相同,而与土山药和方山药的序列同源性分别为99.89%和97.51%。结论 DNA测序技术可成为山药基原鉴定准确而有效的分子方法。     

活血止痛胶囊中土鳖虫的分子鉴定研究

 目的 建立活血止痛胶囊中土鳖虫的一种分子鉴定方法。方法 采用蛋白酶K法结合吸附柱法提取活血止痛胶囊中土鳖虫基因组DNA,使用蜚蠊目昆虫通用引物扩增其线粒体16S rRNA 片段并测序。结果 土鳖虫能扩增出475 bp左右的片段,本实验成功从自制活血止痛胶囊中扩增出该片段。结论 该方法灵敏度高,可靠性强,可以做为活血止痛胶囊中土鳖虫的一种鉴定方法。     

橐吾属药用植物5S rRNA基因间隔区序列与含HPAs植物的鉴别

目的：对橐吾属Ligularia药用植物的5S rRNA基因间隔区序列进行测定，为含肝毒吡咯里西啶生物碱(HPAs)植物的鉴别提供分子依据。方法：对12种橐吾属植物的5Sr RNA区序列进行PCR扩增、测序，并运用CLUSTAL、MEGA等软件对所测序列进行了排序、对比和分析。结果：建立了12种橐吾属药用植物的5S rRNA区序列数据库，橐吾属植物在该区间具有显著的种间差异，替代数为3～53，变异位点数128个，信息位点数58个。结论：含HPAs的橐吾属植物的5S rRNA区序列具有明显而稳定的特异性鉴别位点，可用作该类型植物鉴别的分子标记。     

《中国药典》中蕲蛇饮片分子鉴定方法的研究和探讨

目的：运用多种分子鉴定方法,从技术要求和标准编写方面对蕲蛇饮片现行质量标准提出建议。方法：本研究选取蕲蛇所在蝰科Viperidae蝮亚科Crotalinae的7个近缘物种和9种常见的蕲蛇伪品物种作为研究对象,采用DNA 条形码技术扩增16S rRNA序列,运用电泳检视法,根据扩增条带的有无评价模板DNA的质量;16S rRNA序列扩增产物通过双向测序,运用BioEdit软件拼接,双端对齐后剪切比对,利用MEGA 5.1软件构建邻接（NJ）系统发育树;采用蕲蛇饮片现行标准方法进行同步鉴别。结果：16S rRNA序列的电泳检视结果可有效评价蕲蛇样品的模板DNA质量,避免由于模板DNA质量不佳导致的假阴性结果的可能性;基于16S rRNA条形码序列建立的NJ树可以鉴别蕲蛇饮片及其混淆品;蕲蛇饮片现行标准方法专属性良好。结论：DNA条形码方法、现行标准方法以及NJ树三者相互结合,从不同角度对蕲蛇饮片进行真伪鉴别,有效弥补蕲蛇饮片现行标准方法的不足,为其他中药品种的分子鉴定技术的质量标准制定提供了参考。     

维药阿里红药材的生药鉴定研究

目的：探讨维药阿里红的生药鉴定特征。方法：运用性状鉴别、显微鉴别对阿里红药材进行生药鉴定,尤其对其显微特征做深层次鉴别。结果：阿里红生药的显微有三大特征：无分支菌丝、孢子、棕色块。结论：该方法简便易行,可为阿里红生药鉴定及质量标准的制定提供依据。     

花类生药的数码显微鉴别

目的:对部分花类生药进行粉末显微鉴别,并拍摄其显微特征的数码照片,以期为生药的鉴别提供科学的参考依据。方法:采用水合氯醛法(粉末透化法)应用Motic数码显微镜观察花类生药的粉末显微特征。结果:金银花的主要显微鉴别特征是花粉粒、腺毛和非腺毛;红花镜下可看分泌细胞、花粉粒、柱头碎片和花冠裂片;丁香具有花粉粒、油室、纤维和草酸钙簇晶。并以彩色数码图片来真实、直观的反映花类生药的显微鉴别特征。结论:以上显微鉴别特征及数码图片可作为金银花、红花和丁香粉末显微鉴别及药材评价的科学参考依据。     

益母草属植物药材的鉴别 Ⅱ 叶、花的表面特征

目的：用叶、花表面特征鉴别益母草属９种１变种植物药材。方法：常规表面制片,显微镜下观察比较。结果：发现了比较明显的鉴别特征,并用图表示出。结论：各种非腺毛的特征,如形状、长度、分枝状况等,对益母草类药材有鉴别意义;叶常数、簇晶也有参考价值;而光镜下花粉粒、分泌组织等不宜作为鉴别特征。     

塞隆骨原动物高原鼢鼠核基因18S rRNA序列测定与分析

目的 :测定仓鼠科动物高原鼢鼠Myospalaxbaileyi的核rDNA基因序列 ,为塞隆骨正品基原检定提供分子依据。方法 :采用PCR直接测序技术测定高原鼢鼠 18SrRNA基因核苷酸序列并作序列特征分析。结果 :高原鼢鼠的 18SrRNA序列长度为 185 1bp。根据排序比较 ,高原鼢鼠与 2种鼠科动物间的DNA序列同源性为 72 .0 4 %～ 72 .18%。结论 :通过基因序列分析 ,DNA测序技术可成为塞隆骨正品基原检定的准确有效手段     

塞隆骨原动物高原鼢鼠核基因18SrRNA序列测定与分析

目的 :测定仓鼠科动物高原鼢鼠Myospalax baileyi的核rDNA基因序列 ,为塞隆骨正品基原检定提供分子依据。方法 :采用PCR直接测序技术测定高原鼢鼠 18S rRNA基因核苷酸序列并作序列特征分析。结果 :高原鼢鼠的 18Sr RNA序列长度为 1851bp。根据排序比较 ,高原鼢鼠与 2种鼠科动物间的DNA序列同源性为 72.04%～72.18%。结论 :通过基因序列分析 ,DNA测序技术可成为塞隆骨正品基原检定的准确有效手段。