松果菊苷含药血清诱导骨髓间充质干细胞成骨分化及BMP2表达的研究

目的:探讨松果菊苷含药血清促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用及可能的机制。方法:大鼠用松果菊苷(16mg/kg)灌胃4天后,取血清备用。采用全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分为8组:空白对照组、松果菊苷含药血清组(2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%)、经典成骨诱导组(10%FBS+10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠+10-8mol/L地塞米松+50μmol/L维生素C)。ELISA测定碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)的表达;免疫荧光细胞化学染色和Western blot检测BMP2蛋白的表达,RT-PCR检测BMP2mRNA的表达。结果:与经典成骨组相比,10%松果菊苷含药血清使BMSCs表达ALP(80.16U/L)和BGP(150.79 U/L)增强,BMP2免疫荧光、BMP2蛋白表达及BMP2mRNA的表达也明显增强。结论:松果菊苷含药血清可以诱导体外培养的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,10%松果菊苷含药血清组的效果最佳,其作用机制与BMP2表达增加有关。     

松果菊苷诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究

目的:探讨松果菊苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用及可能的机制。方法:MTT实验观察不同浓度(7.867×10~3mg/L,78.67mg/L,0.7867mg/L,7.867×10~(-3)mg/L)松果菊苷对细胞增殖的影响,采用ELISA测定不同浓度松果菊苷组的碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)的表达,评价成骨分化的能力。免疫荧光和Western blot检测BMP2、Smad1、Runx2蛋白的表达,RT-PCR检测BMP2、Smad1、Runx2 m RNA的表达,分析成骨分化的可能作用机制。结果:MTT实验结果显示78.67mg/L和0.7867mg/L的松果菊苷促进细胞增殖的能力较好。经典成骨诱导组(10%FBS+3.061×103mg/Lβ-甘油磷酸钠+3.925×10-3mg/L地塞米松+8.806mg/L维生素C)和78.67mg/L的松果菊苷组的ALP(48.07)和BGP(141.67)表达均明显增强。经典成骨诱导组和松果菊苷组的BMP2、Smad1、Runx2蛋白表达及BMP2、Smad1、Runx2 m RNA表达明显增强。结论:松果菊苷可以促进体外培养的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,其作用机制与BMP2、Smad1、Runx2表达增加有关。     

补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

【目的】探讨补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外成骨细胞分化的能力。【方法】用不同浓度的补肾活血汤含药血清干预BMSCs,7d后应用4-硝基苯基磷酸二钠盐（PNPP）偶氮法测定碱性磷酸酶（ALP）活性,21d后行茜素红染色（ARS）观察钙盐沉积情况判定成骨能力,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测Runx相关转录因子2（Runx2）、骨钙素（OCN）、骨桥蛋白（OPN）的基因表达以评估成骨能力。【结果】与空白血清组比较,补肾活血汤低、中、高剂量血清组BMSCs的ALP活性、茜素红染色面积及Runx2、OCN、OPN基因表达水平均升高（P<0.05或P<0.01）。【结论】补肾活血汤可促进BMSCs向成骨细胞分化,其机制可能与上调Runx-2、OCN、OPN表达有关。     

骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展

骨髓间充质干细胞的成骨分化是近10年来骨组织工程种子细胞的研究热点,本文查阅相关文献,对近年骨髓间充质干细胞成骨分化进行综述.     

中药促骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展

骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有多向分化潜能以及自我复制的能力,可借助一定诱导条件分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等成熟细胞,是目前骨组织工程中较为理想的种子细胞.选用中药作为诱导剂,较之以往应用的化学物质和细胞因子,能选择的作用靶点更广泛,且更加廉价实用.研究表明中药及其有效成分能够显著促进BMSCs向成...     

中药诱导骨髓间充质干细胞成软骨及成骨分化的研究进展

骨髓间充质干细胞(BMSCs)不仅具有强大的自我更新能力、多向分化潜能,还兼具低免疫原性及归巢能力,是骨及软骨组织工程中理想的种子细胞。目前,诱导BMSCs分化的细胞因子由于价格昂贵和安全性问题而无法广泛应用于临床实践中。研究表明中药及其有效成分可诱导BMSCs分化,具有与细胞因子类似的生理活性。文章旨在对中药诱导BMSCs成软骨及成骨分化的研究进展进行综述,以期为骨科疾病的防治研究提供参考。     

槲皮苷对大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSCs）成骨分化和成脂分化的分子调控机制研究

Objective:The study was designed to investigate the molecular mechanism of quercitrin on osteogenic differentiation and adipogenic differentiation of r BMSCs.Methods:r BMSCs were harvested from SD rats,and determination of alkaline phosphatase(ALP)activity,quantification of mineralization by Alizarin Red S staining,and the m RNA expression of osteogenic differentiation markers(Runx2,BMP-2,and OSX)by RT-PCR after r BMSCs stimulated by osteogenic induction with(0.1–10)μg/m L of quercitrin,quantification of Lipid droplet by Oil Red O staining and the m RNA expression of adipogenic differentiation marker(,and a P2)by RT-PCR after r BMSCs stimulated by adipogenic induction with(0.1-10)μg/m L of quercitrin.Results:Quercitrin can up-regulate the m RNA expression of osteogenic differentiation markers(Runx2,BMP-2,and OSX)and increase ALP activity and mineralization after osteogenic induction,on the other hand quercitrin can suppress the m RNA expression of adipogenic differentiation markers(,and a P2)and decrease lipid droplet after adipogenic induction.Conclusion:This study suggested that quercitrin not only stimulated osteogenic differentiation but also inhibited adipogenic differentiation of r BMSCs,which was associated with the up-regulation of Runx2,BMP-2,and OSX m RNA expression and the down-regulation of,and a P2 m RNA expression.     

淫羊藿苷促进体外培养大鼠骨髓间 充质干细胞的成骨性分化

目的:研究淫羊藿苷对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响.方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5mol·L-1的淫羊藿苷进行药物干预,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)及钙化结节数量,提取总RNA,RT Real-time PCR检测bFGF,IGF-1,Osterix(OSX),Runx-2 mRNA的表达情况.结果:1×10-5mol·L-1淫羊藿苷可提高碱性磷酸酶(ALP)活性,增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨性分化相关因子bFGF,IGF-1,OSX,Runx-2 mRNA的表达.结论:淫羊藿苷可显著促进rBMSCs的成骨性分化,提示淫羊藿苷具有开发为抗骨质疏松或促进骨折愈合新药的潜力.     

左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化中碱性磷酸酶含量的影响

目的:研究左归丸含药血清对间充质干细胞骨向分化过程中碱性磷酸酶含量变化的影响。方法:采用全骨髓贴壁法培养间充质干细胞,连续进行3次差速贴壁法纯化间充质干细胞。常规诱导组以β-甘油磷酸钠、地塞米松、维生素C诱导间充质干细胞骨向分化,实验组在常规诱导组基础上加以左归丸含药血清。使用茜素红染色钙结节、碱性磷酸酶染色鉴定诱导成功。分别在0,7,14,21 d用比色法检测细胞中碱性磷酸酶含量。结果:全骨髓贴壁法和差速贴壁法联合使用可得到较为均一间充质干细胞。用比色法测得碱性磷酸酶含量随着诱导时间延长而增加。结论:大鼠间充质干细胞经药物诱导后可以分化为成骨细胞。左归丸含药血清能够促使诱导过程中碱性磷酸酶含量表达增加。     

淫羊藿苷含药血清对体外培养骨髓间充质干细胞增殖及成骨性分化的影响

目的:研究淫羊藿苷含药血清(SI)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法:以每0.25g/kg质量淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠,制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清。分别以2.5%,5%和10%3种血清浓度干预rBMSCs,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养9d后的碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出最佳血清浓度。以最佳血清浓度干预rBMSCs的成骨性分化,比较SI组和对照组之间的钙盐沉积量、骨钙素分泌量;提取Total RNA,RT-PCR检测IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达情况。结果:所有浓度的含药血清均能抑制rBMSCs的增殖,但可提高ALP活性。5%的SI浓度为最佳干预浓度,该浓度的含药血清可显著促进骨钙素的分泌和钙盐沉积,提高ALP活性,增强IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达。结论:淫羊藿苷经口服后的代谢产物抑制rBMSCs增殖,但可促进成骨性分化,提示淫羊藿苷可以通过口服途径给药,其代谢物是发挥抗骨质疏松活性的主要成分。     

戴村骨伤膏提取液对胎盘源性间充质干细胞成骨诱导分化的影响

目的:为了研究戴村骨伤膏对骨折愈合的影响,我们通过人胎盘源性间充质干细胞(hPMSC)的体外细胞试验,观察药物对干细胞成骨诱导分化的影响。方法:在体外培养的hPMSC中,加入不同药物剂量浓度的实验药液和成骨诱导液混合液,诱导2~4周后进行检测。采用偶氮偶联法进行碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞形成。Von Kossa染色法鉴定钙结节形成。以鼠抗人I型胶原单克隆抗体为一抗,羊抗鼠SABC为二抗,进行免疫组织化学染色。用流式细胞仪检测细胞表面标志。结果:hPMSC在诱导培养基培养条件下3 d出现细胞变粗,1周后细胞变为多角形或者是圆锥形,周边出现丝状突出,2周可见细胞基质矿化物逐渐出现,形成多层小结结构。实验2周后细胞基质内出现钙化,4周Von Kossa染色钙结节阳性,程度随药物剂量递增,药物诱导组(50mg.L-1)可见大量的黑色钙结节,单纯诱导组可见少量黑色钙结节形成,而对照组在任何时间都没有阳性反应。药物诱导2周后细胞碱性磷酸酶染色阳性,并且程度与药物剂量成正比,而单纯诱导液组的染色为弱阳性,未经诱导的显示阴性。经流式细胞术检测细胞表型发现经诱导而成的成骨细胞细胞表型无改变,表明其来源来自间充质干细胞。结论:戴村骨伤膏提取液能促进胎盘源性间充质干细胞成骨诱导分化,并且随药物剂量增加而效果提高。     

墨旱莲提取物促进小鼠骨髓来源的间充质干细胞迁移和成骨方向分化作用研究

[目的]探究墨旱莲提取物(EHE)对小鼠骨髓来源的间充质干细胞(BMMSCs)迁移和向成骨分化作用的影响.[方法]提取6周C57BL/6J雌性小鼠后肢股骨和胫骨中的BMMSCs,使用流式细胞术检测细胞表面分子表达.采用血清碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色、甲苯胺蓝染色和油红O染色观察BMMSCs向成骨、成脂、软骨细...     

Alpinetin alleviates osteoporosis by promoting osteogenic differentiation in BMSCs by triggering autophagy via PKA/mTOR/ULK1 signaling

Osteoporosis, a systemic bone disease that is characterized by a reduction in bone mass and destruction of bone microstructure, is becoming a serious problem worldwide. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) can differentiate into bone-forming osteoblasts, and play an important role in maintaining homeostasis of bone metabolism, thus being a potential therapeutic target for osteoporosis. Although the phytochemical alpinetin (APT) has been reported to possess a variety of pharmacological activities, it is still unclear whether APT can influence the osteogenic differentiation of on BMSCs and if it can improve osteoporosis. In this study, we found that APT treatment was able to enhance osteogenic differentiation levels of human BMSCs in vitro and mouse ones in vivo as revealed by multiple osteogenic markers including increased alkaline phosphatase activity and osteocalcin expression. Mechanistically, the protein kinase A (PKA)/mTOR/ULK1 signaling was involved in the action of APT to enhance the osteogenic differentiation of BMSCs. In addition, oral administration of APT significantly mitigated the bone loss in a dexamethasone-induced mouse model of osteoporosis through strengthening PKA signaling and autophagy. Altogether, these data demonstrate that APT promotes osteogenic differentiation in BMSCs by augmenting the PKA/mTOR/ULK1 autophagy signaling, highlighting its potential therapeutic application for treating osteoporotic diseases.     

丹酚酸B对大鼠骨髓间充质干细胞分化过程中Desmin、α-actinmRNA表达的影响

[目的]探讨丹参单体丹酚酸B(SalB)在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的情况及Desmin和α-actin mRNA的表达,确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点.[方法]选用成年近交系Wistar大鼠,利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增.免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定.分别应用10μmol/L5-氮胞苷(5-azaeytidine,5-aza)及250μg/L SalB联合5-aza(5-aza+SalB)对第9代的MSCs进行联合诱导24 h,于诱导后第4周,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PcR)法检测Desmin、α-actin mRNA的表达.[结果] 1)第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达.2)诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构.5-aza组、5-aza+SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比,5-aza+SalB组的Desmin和α-actin mRNA表达明显增强.[结论] SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用.     

Ethanol extract of Fructus Ligustri Lucidi promotes osteogenesis of mesenchymal stem cells

Fructus Ligustri Lucidi (FLL) has been used in traditional Chinese medicine for over 1000 years. The ethanol extract of FLL (EFLL) has been shown to be a potential candidate in the prevention and treatment of osteoporosis. The present study aimed to determine whether EFLL carries out the effect by promoting osteogenesis in mesenchymal stem cells (MSCs). The osteogenic differentiation of MSCs was evaluated by their alkaline phosphatase (ALP) activities and mineralization. Expression of genes was detected by RT‐PCR. We found that EFLL significantly stimulated the ALP activities and shortened the time needed for the mineralization of MSCs during osteogenic differentiation. The expression of several osteoblast differentiation regulators was also upregulated by EFLL during this process. Our study demonstrated that the EFLL is capable of enhancing osteogenic differentiation of MSCs. It might be useful for treating diseases with inadequate bone formation, including osteoporosis. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

天然小分子化合物诱导间充质干细胞向成骨分化的研究进展

骨缺损的修复一直是骨科领域的难点,以干细胞移植为核心的再生医学的发展为攻克这一顽疾带来了希望。间充质干细胞具有很强的成骨分化潜能,是骨组织工程优良的种子细胞。天然小分子化合物具有来源丰富、结构复杂多样及广泛而独特生物活性等特点。近年来,发现天然小分子化合物是高效、定向诱导间充质干细胞向成骨细胞分化的天然诱导剂,在干细胞治疗骨缺损中有重要应用前景。综述了近几年有关天然小分子诱导间充质干细胞成骨分化的研究进展,可望加快间充质干细胞在骨缺损、骨组织工程中的临床应用提供新思路。     

双龙方干预骨髓间充质干细胞分化过程的蛋白表达

目的:研究中药复方双龙方(人参,丹参)干预骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化过程的蛋白表达;方法:采用双龙方含药血清对中国小型猪MSCs定向诱导分化为心肌样细胞的过程进行人工干预。对分化前后细胞蛋白进行二维电泳分离,PDQuest软件分析蛋白点的表达情况;对差异蛋白进行质谱分析并加以鉴定。结果:成功鉴定16个蛋白,通过对成功鉴定的蛋白功能进行数据库检索,表明这些蛋白的差异表达可能与中药干预过程有关;结论:双龙方含药血清对MSCs体外定向分化过程有一定的辅助作用;同时表明蛋白质组学技术可以应用于细胞增殖、分化和凋亡等过程的机理分析。     

麦门冬汤对大鼠骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的影响

[目的]观察麦门冬汤含药血清对促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向肺泡上皮细胞分化的影响。[方法]分别予麦门冬汤大鼠血清、肺纤维化模型大鼠血清、肺纤维化模型大鼠+麦门冬汤血清对绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞(GFP-BMSC)进行干预14 d,通过免疫组化、实时荧光定量聚核酶链反应(qPCR)方法,检测各组GFPBMSC细胞肺表面活性蛋白(SP-C)、水通道蛋白-5(AQP-5)蛋白及mRNA的表达。[结果]模型组、模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5蛋白表达明显高于DMEM对照组、麦门冬汤组(P0.01),其中模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5表达明显高于模型组(P0.01)。[结论]麦门冬汤在肺纤维化环境中可促进GFP-BMSC向肺泡上皮细胞分化,该作用可能是其改善肺纤维化的重要机制。     

微应变环境下柚皮苷对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 探讨在微应变环境下,柚皮苷体外对培养的骨髓间充质干细胞（MSCs）向成骨细胞分化的影响及其机制。方法 将体外培养的兔MSCs接种于硅橡胶膜上,利用EF3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应舱系统,对细胞进行周期性循环牵张微应变（微应变）加载。实验分成8组：对照组（常规培养）,微应变组,柚皮苷不同质量浓度（2、20、200 ng/mL）组,微应变＋柚皮苷（2、20、200 ng/mL）组。流式细胞仪检测各组MSCs的增殖指数;RT-PCR检测各组MSCs骨钙蛋白（OCN）、成骨特异性转录因子（Runx 2）与I型胶原（Col I）基因的表达。结果 在微应变环境下,柚皮苷使MSCs呈现明显的极性排列趋向,且细胞长轴平行力学刺激方向;显著提高MSCs的增殖活性;柚皮苷200 ng/mL显著上调OCN基因表达;不同质量浓度的柚皮苷均显著上调Runx 2基因表达,且与质量浓度呈正相关;低质量浓度柚皮苷促进Col I基因表达,而高质量浓度柚皮苷抑制了Col I基因的表达。结论 柚皮苷可增强在微应变环境下MSCs的增殖并能够促进其向成骨分化。