龙血通络胶囊对血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧损伤后细胞凋亡的改善作用

局灶性脑缺血及再灌注损伤是缺血性脑中风的重要发病过程,而缺血再灌注(I/R)损伤诱导的脑血管内皮细胞凋亡是局灶性脑缺血后脑组织损伤的重要诱因。龙血通络胶囊在临床上用于缺血性脑中风恢复期血瘀证的治疗,具有很好的治疗效果,然而其对大脑局灶性缺血后脑组织损伤的保护作用机制目前尚不清晰。该文采用体外氧糖剥夺/复氧(OGD/R)细胞模型模拟血管内皮细胞HUVEC缺血再灌注损伤,通过MTT实验、LDH实验、流式细胞术、AO/EB细胞染色以及Western blot等技术方法观察龙血通络胶囊对OGD/R诱导HUVEC细胞损伤的保护作用,并对其作用机制进行研究。MTT和LDH实验结果显示,龙血通络胶囊能剂量依赖性的提升HUVEC细胞OGD/R损伤后的细胞存活率并降低乳酸脱氢酶(LDH)的释放;流式细胞术与AO/EB细胞染色结果显示,龙血通络胶囊能浓度依赖性的抑制HUVEC细胞OGD/R损伤后的细胞凋亡;Western blot实验结果表明,龙血通络胶囊通过抑制HUVEC细胞caspase 3/9凋亡通路的激活进而抑制OGD/R损伤的细胞凋亡。总之,该研究表明龙血通络胶囊对OGD/R诱导的HUVEC细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制是通过抑制OGD/R诱导线粒体相关caspase 3/9通路的激活而实现的。     

丹酚酸B对骨髓间充质干细胞存活的影响及其作用机制研究

目的探讨丹酚酸B(SalB)对骨髓间充质干细胞(MSC)存活的影响及其作用机制。方法体外培养MSC,建立体外缺血缺氧(OGD)模型。实验分MSC组、MSC+OGD组和MSC+OGD+不同浓度丹酚酸B组,MSC+OGD+丹酚酸B组在进行OGD处理前30 min,加入相应浓度的SalB进行预处理。通过Hochest33342染色和Annexin-V/PI双重染色流式细胞仪检测细胞凋亡和存活,经Rhodamine 123染色观察细胞线粒体膜电位的变化,通过Western blot检测Bcl-2和Bax的表达。结果 Hochest33342染色和Annexin-V/PI流式细胞仪检测显示,MSC经OGD处理后,出现明显的凋亡现象(P0.01)。OGD处理前加入SalB与单纯OGD处理比较,MSC的凋亡明显减少,存活细胞数目显著增多(P0.05,P0.01)。OGD处理可以降低Rhodamine 123的表达,减少Bcl-2水平、增加Bax水平(P0.01);与OGD组比较,10μmol/L丹酚酸B预处理可增加Rhodamine 123的表达,并可增加Bcl-2水平、减少Bax水平(P0.05)。结论 SalB预处理可阻止线粒体凋亡途径,从而减少MSC凋亡,提高干细胞的存活率。     

骨髓间充质干细胞上清液治疗大鼠脑缺血的作用机制

目的观察骨髓间充质干细胞上清液经尾静脉注射治疗大鼠脑缺血的干预效果，探讨骨髓间充质干细胞移植体内作用机制。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。16只健康Wistar大鼠分为假手术组、缺血对照组、上清液低浓度组、上清液高浓度组。模型制作24h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷（bromodeoxyuridine，BrdU）标记处于增殖状态的神经前体细胞，应用免疫组织化学染色检测缺血后7d脑组织Brdu、Brdu＋NSE、BedU＋GFAP阳性细胞数。结果脑梗死后7d侧脑室室管膜下区、海马齿状回区BrdU、BrdU＋NSE、BrdU4-GFAP阳性细胞数开始增多，上清液高浓度组的上述阳性细瞧放明显多于对照组（P〈0．01）和低浓度组（P〈0．05）。结论骨髓间充质干细胞上清液可以促进脑梗死大鼠损伤原位内源性衬经前体细胞的增殖、分化。     

毛蕊异黄酮苷调控SIRT1 信号通路缓解海马神经元细胞损伤的研究

目的探讨毛蕊异黄酮苷（CG）通过调控沉默信息调节因子1（SIRT1）信号通路对氧糖剥夺再灌注（OGD/R） 海马神经元细胞损伤的保护作用。方法将海马神经元细胞在无糖培养基中缺氧8 h 后,在完全培养基中复氧 6 h 建立OGD/R 模型。将细胞分为4 组：正常对照组、氧糖剥夺再灌注组（OGD/R 组,模型组）、SIRT1 特异性 抑制剂组（EX527 组）、EX527+毛蕊异黄酮苷组（EX527+CG 组）。细胞处理结束后,采用CCK-8 法测定细胞存 活率;分光光度法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量;荧光 法检测细胞中活性氧（ROS）含量、细胞凋亡率;Western Blot 及ELISA 法检测SIRT1 信号通路中相关蛋白的表 达水平。结果与OGD/R 组比较,EX527 组的细胞活力、SOD 含量及SIRT1、叉头转录因子1（FOXO1）、B 淋 巴细胞瘤-2（Bcl-2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ 共激活因子-1α（PGC-1α）蛋白表达水平均明显降低（P＜ 0.05）,LDH 及MDA 含量、细胞凋亡率、Bax 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与EX527 组比较,EX527+CG 组的细胞活力及FOXO1、Bcl-2 和PGC-1α 蛋白表达水平均有升高,SOD 含量及SIRT1 蛋白表达水平明显升高 （P＜0.05）;MDA 含量有降低,LDH 含量、细胞凋亡率及Bax 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。结论毛蕊 异黄酮苷缓解海马神经元OGD/R 损伤的机制与调控SIRT1 信号通路有关。     

淫羊藿苷抑制内质网应激改善缺氧/缺糖诱导H9C2细胞损伤的研究

目的观察淫羊藿苷(icariin, ICA)对H9C2心肌细胞缺氧/缺糖(OGD)诱导细胞损伤的作用及其与内质网应激的关系。方法将培养的H9C2细胞随机分为6组:正常培养对照组、缺氧/缺糖模型组(OGD组)、ICA(10μmol/L)+OGD组、ICA(20μmol/L)+OGD组、ICA(40μmol/L)+OGD组、4-苯基丁酸(4-PBA 5mmol/L)+OGD组。正常培养对照组采用正常培养基培养至实验结束,OGD组采用缺糖培养基并在缺氧培养箱中培养6h, ICA(10,20,40μmol/L)+OGD组和4-PBA+OGD组分别按组于缺氧/缺糖前1h给予相应浓度的药物培养再行缺氧/缺糖过程。实验后MTT法检测细胞存活率;测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用DCFH-DA测定细胞中ROS产生量;Western blot测定GRP78和CHOP的表达。结果与正常培养组比较,OGD组细胞存活率显著下降(P0.01),LDH漏出量和ROS产生量增加,GRP78和CHOP表达上调(P0.01);给予不同浓度ICA和4-PBA干预后,ICA不同剂量组细胞存活率较OGD组明显升高,LDH和ROS产生明显降低,GRP78和CHOP蛋白表达较OGD组显著下降(P0.05),与4-PBA组结果相似。结论 OGD可诱导内质网应激,引起细胞存活率降低;而淫羊藿苷可通过减少ROS,抑制内质网应激发挥保护作用,减少缺氧/缺糖诱导的细胞损伤。     

乌腺金丝桃提取物对小鼠心肌缺血的保护作用

目的观察乌腺金丝桃提取物对小鼠缺血心肌的保护作用。方法采用异丙肾上腺素制备小鼠心肌缺血模型，检测乌腺金丝桃提取物对小鼠缺血损伤后耐缺氧存活时间、血清乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）水平及心肌组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影响。结果与模型组相比，乌腺金丝桃提取物能够延长小鼠缺血损伤后耐缺氧存活时间，降低血清中LDH、CK水平，增加心肌组织SOD活性，减少MDA含量。结论乌腺金丝桃提取物对异丙肾上腺素所致小鼠心肌缺血具有抵抗作用。     

丹参酮ⅡA 促进氧糖剥夺再灌注神经干细胞的增殖作用

目的观察丹参酮ⅡA 对原代培养的小鼠神经干细胞（NSCs）在氧糖剥夺再灌注（OGD/R）损伤条件下增殖 作用的影响。方法对原代小鼠NSCs 进行培养、鉴定;采用CCK-8 法测定细胞活力;通过检测神经球细胞 直径来观察NSCs 的增殖情况;对OGD/R 损伤条件进行筛选,建立OGD/R NSCs 模型。结果与溶剂对照组相 比,0.03、0.1、0.3、1、3、10、30 μmol·L-1 丹参酮ⅡA 干预48 h后,NSCs 的细胞活力显著提高（P＜0.01）; 0.3、1、3 μmol·L-1 丹参酮ⅡA 干预48 h 后,NSCs 神经球细胞透光性良好,神经球细胞直径明显增大（P＜ 0.05,P＜0.01）。NSCs 糖氧剥夺4 h 再灌注后的细胞活力介于40%~60%之间,故选择OGD/R（4 h/20 h）作为 NSCs 的OGD/R 损伤条件。与溶剂对照组比较,模型组NSCs 神经球细胞直径明显缩小、细胞活力明显下降 （P＜0.01）;与模型组比较,3 μmol·L-1 丹参酮ⅡA 干预48 h后,NSCs 神经球细胞直径明显增大、细胞活力明 显升高（P＜0.01）。结论丹参酮ⅡA 可促进正常条件及OGD/R 损伤条件下NSCs 的增殖及其细胞活力,丹参 酮ⅡA 对脑缺血损伤的保护作用机制值得进一步探讨。     

促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织HIF-1α及存活素表达的影响

目的研究促红细胞生成素（EPO）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及凋亡相关蛋白存活素（Survivin）表达的影响,探讨其抗凋亡的可能机制。方法将120只7dWistar大鼠随机分为3组：假手术组（n=8）、HIBD组（n=56）、rhEPO治疗组（n=56）。后两者根据处死时间分为：3h组,6h组,12h组,24h组,48h组,3d组,7d组,每组8只。采用免疫组化法测定HIF-1α、Survivin的表达,用TUNEL法对细胞凋亡指数（AI）进行检测。结果 HIF-1α的表达在缺氧缺血后3h即增强,12h达高峰,后逐渐降低（P〈0.01）;Survivin在缺氧缺血后12h开始增高,7d明显升高,与假手术组相比,除3h、6h组,其余差异有统计学意义（P〈0.01）,细胞AI值在缺氧缺血后6h增加,7d明显增高,除3h组,其余差异有统计学意义（P〈0.01）;与HIBD组相比,rhEPO治疗组12h、24h、48h、3d的HIF-1α表达明显减少（P〈0.05）,12h、24h、48h、3d的Survivin表达明显增高（P〈0.05）,细胞AI值24h、48h、3d、7d明显降低（P〈0.05）。结论 EPO可通过降低HIF-1α的表达和提高Sur-vivin的表达,从而减少HIBD后的细胞凋亡,发挥其神经保护作用.     

木犀草素-7-O-β—D-葡萄糖苷对缺血缺氧培养乳鼠心肌细胞的保护作用

目的观察木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对缺血缺氧培养乳鼠心肌细胞的保护作用及其可能机制。方法采用原代培养的乳鼠心肌细胞造成缺血缺氧损伤模型，观察木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对损伤后心肌细胞存活率、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影响，推断细胞内活性氧的生成量；观察培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性．以判断细胞损伤情况；并进行hochest33258染色，判断细胞凋亡程度。结果木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（100，50μg／mL）组可显著升高缺血缺氧损伤时细胞存活率、提高细胞SOD活性，降低MDA含量、降低LDH的漏出量，细胞凋亡率降低。结论木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对缺血缺氧培养的心肌细胞具有保护作用．其机制可能与清除氧自由基．稳定细胞膜．抑制细胞凋亡有关。     

任脉电针对脑缺血大鼠侧脑室下区神经干细胞增殖与分化的影响

目的：观察任脉电针对脑缺血大鼠侧脑室下区神经干细胞增殖与分化的影响.方法：制备大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,两小时后再灌注.实验大鼠随机分为手术对照组和任脉电针组,分别于造模成功7天、14天和28天后观察侧脑室下区神经干细胞增殖与分化的变化.结果：与手术对照7天组（C-7d）相比,任脉电针7天组（R-7d）的5-溴脱氧尿苷（Brdu）阳性细胞、5-溴脱氧尿苷/胶质纤维酸性蛋白双标细胞（Brdu/GFAP）、5-溴脱氧尿苷/巢蛋白双标细胞（Brdu/Nestin）、5-溴脱氧尿苷/神经元特异性烯醇化酶双标细胞（Brdu/Nse）数量差异无显著性（P＞0.05）;而在14天组及28天组中,任脉电针14天组（R-14d）、任脉电针28天组（R-28d）Brdu阳性细胞及Brdu/Nestin、Brdu/Nse双标细胞数量分别较手术对照14天组（C-14d）、手术对照28天组（C-28d）差异有显著性（P＜0.05）.在28天组,R-28d的Brdu/GFAP双标细胞明显多于C-28d（P＜0.01）.结论：任脉电针能促进脑缺血大鼠侧脑室下区神经干细胞的增殖与分化,适当促进增殖的神经干细胞向星形胶质细胞方向分化.     

银杏叶提取物对氧糖剥夺诱导的体外培养大鼠星形胶质细胞损伤的影响

目的应用体外培养的大鼠脑皮层星形胶质细胞,观察银杏叶提取物（EGb761）对氧糖剥夺再复氧导致细胞损伤的影响,并探讨其作用机制。方法以连二亚硫酸钠和无糖DMEM液造成化学性氧糖剥夺（OGD）模型模拟体内脑缺血再灌注损伤。利用WST-1法检测细胞活性、细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤程度、GFAP染色及Hoechst 33258染色观察细胞形态变化和凋亡,免疫蛋白印迹法测定bcl-2、bax、cas-pase-3蛋白的表达。结果 OGD处理90 min再复氧24 h能使细胞存活率明显下降,LDH漏出量增高,细胞形态损伤性改变、凋亡细胞增多,并能下调bcl-2/bax比值和上调caspase-3表达。而给予EGb761可逆转上述变化,减轻细胞损伤。结论 EGb761对OGD/R诱导的星形胶质细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与调整bcl-2/bax比值、抑制caspase-3激活对抗细胞凋亡有关。     

刺梨提取物联合5-氟尿嘧啶抗人子宫内膜腺癌作用

目的 探讨刺梨提取物（CL）联合5-氟尿嘧啶(5-florouracil,5-FU)的抗子宫内膜腺癌细胞株(JEC)作用。     

清开灵注射液对人食管癌 Ec-109细胞的体外抑制作用

目的：探讨中药制剂清开灵注射液对人食管癌Ec-109细胞的体外抑制作用。方法体外培养人食管癌细胞株Ec-109,分别给予不同剂量的清开灵注射液对体外培养的Ec-109细胞进行干预,然后用MTT法测定清开灵注射液对Ec-109细胞增殖抑制作用;用AO/EB染色检测细胞凋亡情况。结果 MTT和染色实验均显示清开灵注射液能明显抑制Ec-109细胞的生长。结论清开灵注射液对人食管癌Ec-109细胞具有明显的增殖抑制和促进凋亡作用。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞的作用及机理研究

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞（Human Umbilical Vascular Endothelial Cell，HUVEC）增殖的抑制作用。方法体外培养HUVEC，采用二氯化钴（Cocl2）建立细胞化学缺氧模型，采用WST-8法观察密蒙花方对缺氧状态下HUVEC的作用。并进一步采用流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）蛋白表达的影响。结果①在Cocl2所诱导的化学缺氧下，HUVEC增殖明显。密蒙花方可抑制缺氧状态下HUVEC的增殖，并呈剂量一效应关系；②密蒙花方对HUVEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用，低、中、高不同浓度的密蒙花方作用24h后，其PCNA蛋白表达率分别为（62．377±3．200）％，（43．707±3．195）％、（27．621±3．622）％与缺氧组（90．600±3．694）％比较差异有统计学意义（P〈0．01）；随着密蒙花方浓度升高，PCNA蛋白表达率下降，呈剂量-效应关系（P〈0．01）。结论上述结果提示，密蒙花方有抑制新生血管发生的作用，有望成为防治增殖性糖尿病视网膜病变的有效药物。     

通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用

目的探讨通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用。方法以肾上腺嗜铬瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料，制备缺氧、缺糖损伤模型：MTT法测定PC12细胞存活数及乳酸脱清酶法测定细胞损伤程度。结果形态学检查发现，通塞脉微丸和丁基苯酞对两种损伤模型中的PC12细胞具有明显保护作用，MTT染色和乳酸脱氢酶活性测定显示，通塞脉微丸和丁基苯酞可显著提高损伤模型中PC12细胞的存活数，降低细胞损伤程度，其中以对缺氧损伤保护作用尤为显著。结论通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧和缺糖损伤模型均有显著保护作用。     

rt—PA在血脑屏障氧糖剥夺体外模型中对神经细胞保护的研究

目的观察重组组织型纤溶酶原激活剂（rt—PA）在体外血脑屏障氧糖剥夺模型中对神经细胞的影响,探讨rt—PA对脑缺血神经元的保护作用。方法利用Transwell培养小室为支架,构成以人血管上皮细胞为基础的体外血脑屏障模型;利用厌氧培养箱及无糖培养液,建立体外缺血缺氧模型;在体外缺血缺氧模型基础上,采用组织培养技术,培养神经细胞,并在缺血缺氧条件下,使用MTT法进行检测不同剂量rt—PA对神经细胞活性的影响。结果分别在氧糖剥夺实验（OGD）及非0GD条件下,在不同rt—PA药物的浓度作用下,低浓度（0．3125ug／mL）对非0GD条件下神经细胞的生长有促进作用,在OGD条件下,低浓度（0．625ug／mL,0．3125gg／mL）对神经细胞同样具有保护作用。结论rt—PA可能对脑缺血后神经细胞存在保护作用,并与rt—PA的剂量相关,在0GD条件下,低剂量rt—PA对神经细胞的保护作用更为显著。     

复方扶芳藤合剂口服结合BMSCs复合FG移植对兔膝关节软骨组织形态学的影响

目的:通过检测模型兔膝骨性关节炎的软骨组织的病理改变,观察复方扶芳藤合剂口服结合骨髓基质干细胞复合纤维蛋白凝胶(fibrin glue,FG)移植治疗骨性关节炎的疗效,并探讨其作用机理。方法:本实验将80只新西兰大白兔随机分为生理盐水灌胃组(A组),百年乐灌胃组(B组),注射BMSCs+FG复合物组(C组),百年乐灌胃+注射BMSCs+FG复合物组(D组),每组20膝。采用管型石膏固定膝关节的方式造模,造模6周后采用各组对应的方法处理或治疗,治疗结束1周后,空气栓塞处死试验兔,解剖膝关节,肉眼观察兔关节软骨表面情况;切取部分内侧胫骨平台软骨按照标本制备方法制定后,进行光镜观察。结果:A组关节软骨层变薄、粗糙,部分区域软骨细胞核固缩、坏死。浅表层软骨细胞消失,过渡层细胞外露,辐射层细胞增生呈簇状、染色质粗、不均匀,甚至软骨下骨囊性变。D组软骨表面基本完整,软骨细胞数量增多,4层结构基本清晰,潮线结构基本完整。关节软骨Mankin评分为A组7.50±0.64,B组5.33±0.46,C组5.64±0.58,D组5.00±0.47,B、C、D组与A组比较差异有统计学意义(P0.05),D组与B、C组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:利用复方扶芳藤合剂口服,配合可注射支架(FG)复合BMSCs局部治疗KOA,对KOA关节软骨剥脱有一定的修复作用,从而延缓KOA的病变发展。     

锯叶棕提取物与AG490合并应用对MM细胞增殖作用的影响

目的：探讨锯叶棕提取物与AG490合并应用后对MM细胞增殖的影响。方法：将体外培养的U266和PRM182：26细胞与0—2uL／mL的不同浓度锯叶棕提取物共孵育，应用MTT比色法测定细胞增殖活性；同时应用台盼蓝不相容实验检测锯叶棕提取物与AG490单独使用或合并使用时的细胞成活率。结果：锯叶棕提取物抑制U266与RPM18226细胞的增殖，其抑制生长50％（ED50S）的有效剂量分别为1．2和0．7灿L／mL；U266细胞用锯叶棕提取物（0．5uL／mL）或AG490（20nM）预处理，其细胞成活率分别为（79．7±1．1）％和（67．2±6．1）％，两者联合应用细胞成活率为（42．9±12.0）％（P〈0．001）；RP—M18226细胞用锯叶棕提取物（0．5ul／mL）或AG490（20nM）预处理，其细胞成活率分别为（74．7±2．1）％和（37．2±5．1）％，两者联合应用细胞成活率为（42．9±4．1）％（P〈0．001）。结论：锯叶棕提取物与AG490合并应用抑制MM细胞的增殖作用较单独使用效果好。     

通窍活血汤含药血清对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用

目的:从细胞水平研究通窍活血汤含药血清(TQHXD)对谷氨酸(Glu)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据。方法:SD大鼠灌胃给予通窍活血汤提取液,每日2次,每次4 g.kg-1,连续5 d,制备通窍活血汤含药血清。采用PC12细胞和终浓度为12.5 mmol.L-1的谷氨酸共培养,造成神经细胞损伤模型。光镜观察5%,10%,20%的TQHXD对损伤PC12细胞形态改变的影响;台盼兰染色法、AO/EB染色法及LDH法观察TQHXD对损伤的细胞膜通透性的变化影响;MTT法检测TQHXD对PC12细胞增殖及活性的影响及对培养上清液中NO浓度的影响。结果:倒置显微镜下可见,正常组细胞胞体较损伤组略大,呈强折光性,细胞数量多,突起长。模型组细胞数量显著减少,折光性明显减弱,细胞突起减少、缩短。TQHXD和PC12细胞共培养24 h后,活细胞数明显增加,细胞折光性增加,损伤细胞形态接近于正常细胞;台盼兰染色后,TQHXD组活细胞比率明显上升,AO/EB染色后被EB染色的数量较少。MTT法检测结果显示,与模型组比较,各浓度TQHXD组的吸光度A均升高且有显著性差异。各浓度的TQHXD组细胞培养上清中LDH,NO含量相对模型组明显减少,两者有显著性差异。结论:TQHXD对Glu损伤的PC12细胞有明显的保护作用。