南方红豆杉愈伤组织生长动力学及紫杉醇代谢动力学研究

目的通过愈伤组织细胞生长及其紫杉醇代谢动力学的研究,筛选确定南方红豆杉愈伤组织培养生产紫杉醇的最佳培养基配方与最佳收获期。方法以改良MS为基本培养基添加不同质量浓度的IBA、6-BA、GA3组合诱导培养南方红豆杉愈伤组织,通过测定愈伤组织鲜质量进行生长动力学研究,采用HPLC法检测不同生长阶段愈伤组织中紫杉醇的积累量,进行紫杉醇代谢动力学研究。结果改良MS+0.2 mg/L IBA+0.05 mg/L 6-BA+0.3 mg/L GA3、MS+0.2 mg/L IBA+0.01mg/L 6-BA+0.7 mg/L GA3及MS+0.2 mg/L IBA+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3培养条件均较有利于南方红豆杉愈伤组织的诱导培养,且紫杉醇的积累量也较高,最高可达0.037 76%。结论在添加IBA及6-BA的基础上适当增补GA3可使南方红豆杉愈伤组织诱导提前启动,缩短出愈时间,促进生长,降低褐变程度,增加愈伤组织中紫杉醇的积累量。愈伤组织的生长曲线呈S型,紫杉醇的积累呈线型增加,是一个逐渐积累的过程,但积累到一定程度就不再增加,且伴随着愈伤组织不断褐变。     

南方红豆杉愈伤组织培养及其紫杉烷二萜类成分的分析

目的研究南方红豆杉愈伤组织的出愈时间、诱导率、生长率、生长状态、褐变程度,比较愈伤组织中紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的量。方法采用单因素比较、正交试验设计,研究影响南方红豆杉愈伤组织诱导和生长的各种因素;采用HPLC法测定不同来源愈伤组织中10-脱乙酰基巴卡丁Ⅲ(10-DAB)、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱、紫杉醇和东北红豆杉素5种紫杉烷二萜类成分的量;采用加权评分综合考虑以上各因素优选组织培养条件。结果外植体脱分化形成愈伤组织的能力,以完整叶片及茎段最好;暗培养有利于紫杉醇等5种萜类成分的富集;愈伤组织诱导的最适培养基为B5+2,4-D 3.0mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L。结论南方红豆杉愈伤组织诱导、培养与外植体种类、培养基种类、光照有较大关联,紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的富集受植物生长调节剂种类及浓度影响显著。     

土贝母组织培养及植株再生

用土贝母茎段和叶片作外植体培养,可获得大量的试管苗。茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS 2,4-D 2.0 mg/L NAA 0.5 mg/L BA 1.0 mg/L(单位下同);叶片愈伤组织诱导的最佳培养基配方为MS 2,4-D0.5 NAA 2.0。叶片接入MS BA 3.0 NAA 1.0培养基可直接产生不定芽;愈伤组织用MS BA 2.0 IAA 1.0培养基也可产生不定芽。MS BA 2.0 IAA 0.1适于腋芽发育、增殖。壮苗生根培养基为1/2 MS IBA 1.0。诱导愈伤组织和不定芽,选用pH 6.0,琼脂0.8%~1.0%;诱导生根选用pH 5.8,琼脂0.6%~0.7%。经炼苗后,组培苗移栽成活率达90%。     

防风愈伤组织诱导及植株再生体系的建立

目的建立防风Saposhnikovia divaricate再生体系。方法研究不同外植体、温度、培养基、光照条件对诱导防风愈伤组织的影响,采用响应面试验设计,优化愈伤组织诱导及增殖的激素配比。结果以防风的叶片为外植体,诱导愈伤组织最适培养基为MS+6-BA 0.90 mg/L+2,4-D 1.05 mg/L+KT 0.96 mg/L,25℃恒温12 h/d光照培养;最适增殖培养基为MS+6-BA 0.56 mg/L+2,4-D 0.48 mg/L+KT 0.40 mg/L,继代周期为35 d;诱导丛生芽最适培养基为MS+NAA 0.6 mg/L+6-BA 1.0 mg/L;最适生根培养基为MS+NAA 0.4 mg/L+6-BA 0.1 mg/L。结论成功诱导防风愈伤组织并建立稳定高效的植株再生体系。     

南方红豆杉愈伤组织培养条件的优化及紫杉醇积累的基因表达效应分析

目的 优化南方红豆杉愈伤组织诱导与继代培养条件,获得含紫杉醇量高的红豆杉愈伤组织,明确紫杉醇合成相关基因的表达模式与紫杉醇量的关系.方法 探讨了适合南方红豆杉的愈伤组织诱导及继代培养的激索组成及浓度.比较了南方红豆杉(种胚、幼茎、幼芽)、曼地亚红豆杉(种胚)和太平洋红豆杉(种胚)不同外植体来源的愈伤组织的生长特点和紫杉醇的量,分析了不同愈伤组织紫杉醇合成相关基因的表达差异.结果 添加3.0 mg/L 2,4-D的Murashige & Skoog(MS)培养基有利于南方红豆杉的诱导,诱导率高于92%.添加2.0 mg/L 2,4-D与1.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)的继代培养基有利于南方红豆杉的紫杉醇积累.同一培养条件下,南方红豆杉种胚来源的愈伤组织紫杉醇量最高,达到干质量的0.027%.含紫杉醇量高的愈伤组织,其紫杉醇合成途径中的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(GGPPS)、紫杉二烯合成酶(TASY)、紫杉烷-10β-羟化酶(T10βH)、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-β-O-乙酰转移酶(DBAT)、苯丙氨酸氨基变位酶基因(PAM)、去苯甲酰紫杉-N-苯甲酰转移酶(DBTNBT)等酶基因的表达水平高.结论 从南方红豆杉的种胚为外植体源获得了含紫杉醇量高的愈伤组织,提高GGPPS、TASY、T10βH、DBAT、PAM、DBTNBT的表达水平将促进紫杉醇的合成.     

杂交景天组织培养和植株再生

以杂交景天子叶、胚轴为外植体,接种在附加不同激素组合的MS培养基形成的愈伤组织有红、绿两种类型。子叶在MS 6-BA1 mg/L 2,4-D 0.5 mg/L和MS 6-BA 1 mg/L NAA 0.5 mg/L培养基上的愈伤组织诱导率高达80%~82%。愈伤组织用MS 6-BA2 mg/L NAA 0.5 mg/L可诱导产生丛生不定芽,壮苗生根培养基为1/2 MS。组培苗移栽成活率达80%。     

箭根薯愈伤组织诱导及无性系的建立

目的 诱导箭根薯愈伤组织及建立无性系.方法 以箭根薯野生种为材料,采用不同激素组合对不同部位(根茎、叶片、叶柄)进行诱导,对比诱导效果,筛选出最佳部位及各个生长阶段的最佳激素组合.结果 外植体的消毒以0.1％ HgC12溶液处理8 min的效果最佳;诱导愈伤组织最佳外植体为叶柄;愈伤组织诱导的最佳培养基是MS +6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,在此培养基上使用叶柄诱导愈伤组织的诱导率达到100％;不定芽诱导分化的最适培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,分化率高达90％;生根诱导的最佳培养基为含1/2 MS+NAA 0.5 mg/L,生根率高达100％.结论 筛选出诱导箭根薯愈伤组织最佳诱导外植体及激素组合.     

北细辛叶柄愈伤组织的增殖培养及器官分化研究

目的研究北细辛Asarum heterotropoides叶柄愈伤组织增殖培养、再生芽分化及不定根诱导的最适条件,建立高效的愈伤组织培养和再生体系。方法以北细辛幼嫩叶柄诱导出愈伤组织,于含不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的增殖培养基中扩大培养,选取嫩绿致密的愈伤组织接种在不同激素浓度配比的分化培养基上诱导再生芽及不定根,经驯化后移栽。结果愈伤组织增殖较适培养基为1/2 MS+0.40 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA,在含0.40 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA的1/2 MS培养基中再生芽分化率最高,无激素添加的1/2 MS培养基适于壮苗培养,不定根诱导最适培养基为1/4 MS+0.25 mg/L IBA。结论确定北细辛愈伤组织增殖及分化的最适培养基及激素水平,建立了完善的北细辛再生体系,成功获得再生植株。     

番红花组织培养及快速繁殖研究

目的 为番红花的快速繁殖提供依据.方法 添加不同种类及不同浓度的激素,对番红花进行愈伤组织诱导、丛生芽诱导及球茎培养.结果 愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+2.0 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA;丛生芽诱导的适宜培养基为MS+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA;在光照条件下,丛生芽可分化出小球茎.结论 利用组织培养技术能够实现番红花快速繁殖.     

栀子叶片愈伤组织诱导优化研究

目的:对栀子(Gardenia jasminoides Ellis)叶片愈伤组织诱导进行优化研究。方法:通过以叶片为外植体,MS和WPM为基本培养基,添加不同激素组合(6-BA、NAA和IBA)进行愈伤组织诱导研究。结果:栀子叶片在WPM+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L以及6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1(或0.5)mg/L中均有100%的诱导率;在MS培养基上,MS+6-BA 1.0(或1.5)mg/L+NAA 0.5 mg/L的诱导率最好,分别为70%和74%。栀子叶片愈伤组织在再分化培养基上均未诱导出丛生芽。结论:WPM培养基比MS培养基更易诱导栀子叶片愈伤组织,且栀子愈伤组织的再分化较困难。     

华重楼植株的快速繁殖研究

目的以华重楼Paris polyphylla var.chinensis根茎为外植体,建立华重楼植物的快速繁殖技术。方法以MS为基本培养基,通过研究激素6-BA、2,4-D、NAA、IBA、KT、IAA和头孢曲松钠、活性炭等对愈伤组织诱导、不定芽分化和不定根产生的影响,找出组培苗诱导培养的最佳培养基配方。结果华重楼最佳愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.5mg/L+2,4-D 3.0 mg/L;最佳不定芽分化培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L+KT 1.0 mg/L+头孢曲松钠300 mg/L;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+活性炭0.5%。当组培苗长出第1片叶且不定根长出4条以上时将组培苗取出,先放在无菌水中栽培5 d,再移栽至松软土壤中,组培苗生长健壮,成活率为100%。结论在获得愈伤组织的基础上,进一步完成对不定芽的诱导与无根苗生根培养,筛选出了培育华重楼组培苗的最佳条件。     

白芨愈伤组织诱导、增殖与分化研究

目的 建立白芨愈伤组织诱导、增殖和分化再生体系.方法 以MS为基本培养基,应用正交试验方法设计植物生长调节剂组合和质量浓度配比,研究不同外植体及植物生长调节剂对白芨愈伤组织形成、增殖和分化的影响.结果 白芨假鳞茎为诱导愈伤组织形成的最佳外植体;1.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)与2.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)组合不仅可诱导白芨愈伤组织形成,还有利于愈伤组织分化成芽.1.0 mg/L 6-BA与3.0 mg/L 2,4-D的组合促进愈伤组织增殖,增殖系数为7.8;在分化培养基中附加0.5 mg/L噻二唑苯基脲(TDZ),可提高愈伤组织分化率.结论 白芨愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L;最佳增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 3.0 mg/L;分化最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L.     

老鸦瓣芽茎组织培养初步研究

目的 建立老鸦瓣芽茎愈伤组织诱导及丛生芽增殖体系。方法 以老鸦瓣冷藏芯芽产生的芽茎为外植体,MS为基本培养基,考察不同质量浓度6-BA、NAA对愈伤诱导、分化及丛生芽增殖的影响。结果 芽茎诱导愈伤的最佳培养基为MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 2.0 mg/L,愈伤诱导率78.54%,诱导出的愈伤组织在原培养基上继代培养增殖后即可进行芽分化;愈伤分化不定芽最佳培养基为MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L,芽诱导率为66.21%;丛生芽增殖培养基为MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0.2 mg/L,增殖系数2.48。结论 筛选出芽茎诱导愈伤、分化不定芽及丛生芽增殖的培养基,初步建立了老鸦瓣芽茎组织培养体系。     

五指毛桃组织培养获得再生植株的研究

目的采用组织培养快繁技术培养五指毛桃种苗,为人工种植提供种源。方法采用五指毛桃叶片作外植体,以MS和1/2 MS为基本培养基,采用正交设计研究植物生长调节剂多因素组合(6-BA、NAA、2,4-D、IAA、KT和IBA)对五指毛桃初代诱导、不定芽分化和诱导生根的影响。结果不定芽最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,外植体经20 d诱导培养,可分化形成不定芽72个;MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA+0.3 mg/L KT最利于不定芽继代增殖,增殖倍数6.67;1/2 MS+1.0 mg/L IBA+0.3 mg/L NAA最适于诱导生根获得再生植株,生根率100%;宜移栽于泥炭-珍珠岩(1︰1)的基质上,成活率为93%。结论此途径繁殖速度快、再生率高,能为栽培五指毛桃提供大量种苗。     

南方红豆杉愈伤组织培养的研究

对南方红豆杉叶愈伤组织诱导条件及最适培养基级成成分进行了探讨。结果表明,２,４－Ｄ比ＮＡＡ更有利于愈伤组织的形成。培养基中添加适度浓度的ＣＡ、Ｐｈｅ和乙酸钠能促进南方红用愈伤组织的生长和紫杉醇的积累。     

藏药马尿泡离体快繁技术研究

目的 通过对马尿泡组织培养技术的研究,为马尿泡的快速繁殖提供技术支撑.方法 以马尿泡野生植株上的休眠芽为外植体,将它们接种到一系列含有不同激素的培养基中.结果 外植体野生芽不易进入正常萌发生长阶段,一旦进入正常阶段,能迅速进入生长状态,诱导野生芽分化的最适培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L,且侧芽要比主芽分化得快,增殖率明显高于主芽的增殖率.25 d转接1次,增殖倍数在5倍以上.最适生根培养基是1/2 MS+IBA 0.5 mg/L,诱导生根率达96%.无菌苗幼叶诱导愈伤组织最适培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D1.0 mg/L,诱导率达100%.结论 一方面建立了稳定高效的马尿泡再生体系,另一方面通过组织培养达到了其种质资源的保存.     

滇杠柳茎段和顶芽组织培养及植株再生研究

目的:建立滇杠柳(Periploca forrestii Schlt)茎段和顶芽快速繁殖体系,为其推广种植提供可行性。方法:利用植物组织培养技术,将滇杠柳茎段和顶芽插入含有不同浓度6-BA(6-苄基腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)和2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的MS培养基中培养,诱导其成为完整植株。结果与结论:顶芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,其中芽的诱导率可达到86.29%;茎段诱导的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L,芽的诱导率可达到56.67%;增殖的最佳培养基配方都为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,增殖系数达到2.10;生根培养基最好为1/2 MS+IBA(吲哚丁酸)0.5 mg/L,生根率达到53.33%。     

知母组织培养的初步研究

目的以知母种子为试验材料,对知母的组织培养进行了初步研究,以期建立知母的再生体系。方法采用植物组织培养和单因子试验的方法对知母无菌体系的建立、分蘖芽的增殖、分蘖愈伤组织的诱导和再分化以及再生苗的移栽进行研究。结果 知母种子最佳的消毒方式是75%酒精处理30 s后用0.1%HgCl2处理15 min;知母分蘖芽增殖的最佳培养基是MS+KT 1 mg/L+NAA 0.5 mg/L;知母分蘖愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L;知母愈伤组织再分化的最佳培养基是MS+KT 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L;知母愈伤组织再生芽最佳的生根培养基是1/2MS+NAA 0.5 mg/L;知母试管苗最佳的移栽基质是腐殖土。结论本实验建立了知母的再生体系,为知母试管苗的工厂化生产奠定了技术基础。