脑心通对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制

目的:研究脑心通对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其机制。方法:将体外传代培养的人脐动脉VSMC随机分为5组:空白组、模型组和脑心通(1g/L,0.5g/L,0.1g/L)三个不同剂量组。采用MTT比色法检测各组VSMC的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期构成比。结果:脑心通有抑制ox-LDL诱导的VSMC的增殖的作用,MTT吸光度(OD值)由0.733±0.033减少到0.672±0.035(P<0.05);流式细胞分析示G0/G1期细胞比例由51.67%±9.64增加到64.70%±5.54(P<0.05)。结论:脑心通可抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,机制与其阻止细胞进入有丝分裂期有关。     

隔山香正丁醇部位对大鼠胸主动脉的舒张作用及机制的影响

目的:研究隔山香(Lemonfragrant Angelica Root,LAR)正丁醇部位对大鼠胸主动脉环的舒张作用,并探讨其可能的作用机制。方法:采用离体大鼠胸主动脉血管环灌流方法,考察0.34,0.65,1.22 g·L-1隔山香正丁醇部位对氯化钾(KCl)和去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)预收缩的血管环张力的影响。在无Ca2+Kreb’s液中,考察0.34,0.65,1.22 g·L-1隔山香正丁醇部位对氯化钙(Ca Cl2)量效曲线的影响和NE预收缩的血管环张力的影响。激光共聚焦扫描显微镜检测平滑肌细胞内[Ca2+]i的变化。结果:隔山香正丁醇部位对KCl和NE预收缩的内皮完整和去除内皮血管环均具有浓度依赖性的舒张作用(P0.01),并且去除内皮后的舒张作用未受影响;无Ca2+条件下,隔山香正丁醇部位能使Ca Cl2,NE预收缩强度显著性降低(P0.01)。激光共聚焦扫描显微镜下,隔山香正丁醇部位(1.22 g·L-1)能抑制KCl,NE和毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)引起的平滑肌细胞内[Ca2+]i升高。结论:隔山香正丁醇部位对大鼠胸主动脉血管有一定的舒张作用,可能通过抑制外钙内流和内钙释放发挥作用。本实验为隔山香水蒸气蒸馏后煎煮入药的成药制备工艺和水溶性药效指标成分的分离提供了依据。     

金鸡菊对大鼠主动脉的舒张作用及钾通道机制

目的:研究金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nuff.)乙醇提取物对离体血管平滑肌张力影响,同时探讨其作用机制。方法:采用大鼠离体胸主动脉灌流,应用金鸡菊提取物(0.25、0.50、0.75和1.00 mg/ml)记录张力变化,观测其对Sprague Dawley(SD)大鼠离体胸主动脉环的作用,L-NAME及不同钾通道阻滞剂的影响。结果:金鸡菊提取物0.50¹.00 mg/ml对氯化钾(60 mmol/L)和苯肾上腺素(0.3μmol/L)预收缩的血管环具有浓度依赖的舒张作用,对内皮完整和去内皮血管环舒张作用无差异,该舒张作用为非内皮依赖性。在KCl预收缩基础上,加入一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME,100μmol/L)和内向整流钾通道阻断剂钾通道阻断剂氯化钡(BaCl2,30μmol/L)均不能抑制金鸡菊提取物提取物的舒血管效应,非选择性钾通道阻断剂(TEA,10mmol/L)、电压依赖性钾通道阻断剂四氨基吡啶(4-AP,1 mmol/L)、ATP敏感钾通道阻断剂(Gli,10μmol/L)及大电导激活钾通道阻断剂(IbTX,100 nmol/L)能抑制金鸡菊提取物提取物对血管的舒张作用。结论:金鸡菊提取物提取物舒张血管的作用具有浓度依赖性,其作用机制可能与激活KATP、BKca和Kv有关。     

中药对血管平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)增殖是动脉粥样硬化(ＡＳ)斑块病变发生和发展的重要步骤[1],也是经皮腔内冠状动脉成形术(ＰＴＣＡ)后再狭窄的最主要形成因素之一[2]。抑制ＶＳＭＣ增殖是抗ＡＳ、防治ＰＴＣＡ术后再狭窄的重要途径之一。近几年来,中药对ＶＳＭＣ增殖影响的研究取得可喜的进展,现综述如下。1　单味中药及成分对ＶＳＭＣ增殖的影响1.1　丹参和丹参酮Ⅱａ磺酸钠(ＴＮⅡａ)　　张涛等[3]用实验性ＡＳ家兔,在髂动脉狭窄处行髂内血管成型术(ＴＡ),然后每日在普通饲料中掺入丹参粉2ｇ,饲喂30天的丹参组动物髂动脉ＶＳＭＣ增生较轻,内膜…     

川芎嗪抑制血管平滑肌细胞增殖及胶原合成的作用机制研究

目的 研究川芎嗪抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖的作用机制,为中药有效预防血管再狭窄提供实验依据。方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为：阴性对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组（AngⅡ10 －6 mol/L）、低剂量组（川芎嗪20 μmol/L加AngⅡ］、中剂量组（川芎嗪40 μmol/L加AngⅡ）及高剂量组（川芎嗪80 μmol/L加AngⅡ）。MTT法检测细胞增殖率;Western blot和实时荧光定量PCR法分别检测Wnt通路相关蛋白Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1及胶原Ⅰ（ColⅠ）、胶原Ⅲ（ColⅢ）蛋白、基因表达。结果 与阴性对照组比较,AngⅡ组细胞增殖率明显升高（P<0.05）。与AngⅡ组比较,中、高剂量组细胞增殖率明显降低（P<0.05）。与阴性对照组比较,AngⅡ组Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1、ColⅠ、ColⅢ蛋白和mRNA表达均明显上调（P<0.05）。与AngⅡ组比较,中、高剂量组Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1、ColⅠ、ColⅢ蛋白和mRNA表达均明显下调（P<0.05）。上述指标在低、中、高剂量组均具有浓度依赖性。结论 川芎嗪通过下调Wnt信号通路在一定程度上抑制了AngⅡ诱导的VSMCs的增殖及胶原分泌。     

槲皮素葡糖醛酸苷对大鼠主动脉平滑肌细胞迁移及增殖的影响

槲皮素为多种食物中含有的多酚，具有抗氧化和抑制血小板聚集的作用，摄取槲皮素可预防动脉硬化。但是，经口摄取的槲皮素在吸收过程中，会与葡糖醛酸结合，以槲皮素3-O-β-D-葡糖醛酸苷（Q3GA）的形式存在血中。本次探讨了血小板衍生生长因子（PDGF）刺激对血管平滑肌细胞迁移、增殖以及细胞内信号传递的作用，同时探讨了Q3GA对此的影响。     

连翘舒张大鼠离体胸主动脉环作用的研究

目的:观察连翘对大鼠离体胸主动脉环的作用,并探讨其作用机制.方法:取雄性Wistar大鼠,制备胸主动脉环置于浴槽内恒温灌流并记录收缩活动.结果:连翘浓度依赖性舒张去甲肾上腺素(NE)引起的血管收缩,IC50为8.60g/L,其作用是非.内皮依赖性的;连翘浓度依赖性舒张KCI引起的血管收缩,IC50为8.92g/L,其作用是内皮依赖性的.连翘的舒张大鼠离体胸主动脉环作用可被L-NAME部分阻断,但是不被心得安或格列苯脲阻断.连翘显著抑制NE诱发的细胞内钙收缩幅度和细胞外钙收缩幅度.结论:连翘显著舒张大鼠离体胸主动脉,作用机制可能是:阻断细胞膜上的受体调控性钙通道和电压门控钙通道或作用于其相关途径,增加NO浓度;抑制肌浆网释放Ca2+和抑制细胞外的Ca2+通过细胞膜进入细胞内.     

马来酸依那普利叶酸片联合通心络对蛋氨酸诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的?探讨马来酸依那普利叶酸片联合通心络对蛋氨酸诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法?通过蛋氨酸诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖，采用马来酸依那普利叶酸片和通心络单独或者联合孵育细胞。实验随机分为对照组、蛋氨酸颗粒组、蛋氨酸颗粒加马来酸依那普利叶酸片组（简称EFA组）、蛋氨酸颗粒加通心络组（简称TXL组）及蛋氨酸颗粒加马来酸依那普利叶酸片加通心络组（简称EFA+TXL组）；通过MTT实验探索蛋氨酸颗粒、马来酸依那普利叶酸片和通心络的最佳浓度。采用Western Blot和RT-qPCR检测葡萄糖调节蛋白94（GRP94）、半胱氨酸门冬氨酸特异性蛋白激酶12（Caspase-12）和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）蛋白和mRNA表达，免疫荧光检测GRP94和Caspase-12表达。结果?MTT结果显示：蛋氨酸颗粒最佳浓度为3.2 mmol/L，马来酸依那普利叶酸片和通心络最佳浓度分别选择10 μg/mL和10 μg/mL。与对照组比较，蛋氨酸颗粒组GRP94、Caspase-12和GRP78蛋白和mRNA表达明显升高（P<0.05）；与蛋氨酸颗粒组比较，EFA组、TXL组、EFA+TXL组GRP94、Caspase-12和GRP78蛋白和mRNA表达明显下降（P<0.05）；与EFA组和TXL组比较，EFA+TXL组中GRP94、Caspase-12和GRP78蛋白表达明显下降（P<0.05），GRP78 mRNA水平明显下降（P<0.05）。结论?蛋氨酸可能通过内质网应激（ERS）途径参与并加重高血压引起的血管平滑肌重构的过程；马来酸依那普利叶酸片和通心络处理后能够通过抑制ERS保护血管平滑肌细胞，且联合作用效果更明显。     

染料木素对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及脂质过氧化的影响

目的:探讨染料木素对主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖及抗脂质过氧化作用.方法:培养大鼠主动脉平滑肌细胞,同时加入不同浓度染料木素,观察其对平滑肌细胞增殖和培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、3',5'-环磷酸腺苷(cAMP)、6-酮-前列环素(6-Keto-PGF1α)的影响,细胞增殖测定采用MTT法.结果:与对照组比较,染料木素在0.1～100 μmol/L范围内能明显抑制平滑肌细胞增殖(P＜0.05,P＜0.01),且呈计量依赖性;一定浓度染料木素能提高培养液SOD活性,降低MDA含量,升高cAMP和6-Keto-PGF1α水平.结论:染料木素可能通过提高SOD活性,降低MDA含量,升高cAMP和6-Keto-PGF1α水平抑制平滑肌细胞增殖.     

当归提取液对培养的兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

通过培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）氚胸腺嘧啶核苷掺入量和培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、前列环素（ＰＧＩ２）及环磷酸腺苷ｃＡＭＰ含量的测定，观察了当归提取液对ＳＭＣ增殖的影响。结果表明：当归提取液有抑制ＳＭＣ增殖的作用，其作用呈剂量依赖关系。当归提取液可能通过增加ＳＯＤ活性，降低ＬＰＯ水平，升高ＰＧＩ２、ｃＡＭＰ水平（Ｐ均＜０．０５），从而抑制ＳＭＣ增殖     

桂竹糖芥苷对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:考察桂竹糖芥苷对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:应用80%乙醇回流提取,正己烷萃取,MCI柱层析甲醇洗脱获得桂竹糖芥苷。采用体外培养的血管平滑肌细胞,检测细胞增殖、细胞内钙和c-myc基因的mRNA表达,并与哇巴因、地高辛进行比较。结果:(1)桂竹糖芥苷浓度在10-5mg·mL-1时具有促血管平滑肌细胞增殖作用;哇巴因和地高辛浓度分别在10-14和10-9mg·mL-1时具有促血管平滑肌细胞增殖作用,最大增殖率分别为49.08%和51.05%。(2)桂竹糖芥苷浓度在10-3mg·mL-1时可暂短升高细胞内钙;哇巴因浓度在10-4mg·mL-1时可持久升高细胞内钙。(3)桂竹糖芥苷浓度在10-8mg·mL-1时对c-myc mRNA表达没有影响;哇巴因和地高辛浓度在10-12mg.mL-1时可增加c-myc mRNA表达。结论:与哇巴因和地高辛相比,桂竹糖芥苷对血管平滑肌细胞增殖的影响较小。     

昆明山海棠提取物对血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨昆明山海棠提取物(THW-4)对离体血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响。方法培养家兔主动脉平滑肌细胞,加入不同浓度的THW-4进行处理,用MTT法测定细胞生长曲线,以Annexin V-FITC／PI双标记、透射电镜、原位末端标记法检测细胞凋亡。结果THW-4可以明显抑制VSMC增殖,呈剂量和时间依赖性,作用48h的半有效抑制浓度(IC50)为15．6μg／L;VSMC在含10～100μg／L THW-4的培养液中孵育56h,可检测到细胞早期凋亡,且凋亡率随THW-4浓度增加而升高;延长孵育时间至72h,透射电镜下可观察到典型的凋亡细胞形态学改变,原位末端标记法显示DNA片段化增多,有核碎裂、固缩等改变;细胞周期时相分布显示THW-4主要阻滞VSMC于G2/M期。结论THW-4能有效抑制体外培养的VSMC增殖及诱导其凋亡,提示THW-4可能会作为防治血管成形术后再狭窄的候选药物。     

补脾益气中药对脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、Caspase-3表达的影响

目的:探究脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、Caspase-3表达的变化及补脾益气方药对这种变化的调节作用。方法:将实验动物分成空白组、模型组、四君子汤组、六君子汤组、归脾汤组,用免疫组化法检测血管平滑肌细胞内PDGF、Caspase-3的表达。结果:与空白组比较,其他各组PDGF、Caspase-3的灰度值低,表达增强(P<0.05),与模型组比较,其他各组的PDGF、Caspase-3灰度值高,表达减弱(P<0.05)。结论:脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、Caspase-3表达增强,而补脾益气中药能改善这种情况,从而为补脾益气中药防治心血管系统疾病提供实验室依据。     

芎芍胶囊对动脉粥样硬化兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究芎芍胶囊对实验性兔动脉粥样硬化（AS）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响,并探讨其可能的机制。     

淫羊藿甙对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞内质网应激的影响

目的：观察淫羊藿甙对动脉粥样硬化（AS）家兔血管平滑肌细胞（VSMC）中葡萄糖调节蛋白78基因表达的影响,探讨淫羊藿甙防治AS的可能机制。方法：复制家兔AS模型,给予淫羊藿甙治疗,组织原位杂交观察该基因在兔斑块组织中的表达水平。结果：组织原位杂交显示该基因片段在AS斑块组织中表达水平增高。结论：葡萄糖调节蛋白78基因在AS细胞质中表达增高,可能是淫羊藿甙作用靶点之一,如上调该基因则可促进平滑肌细胞凋亡,将对AS治疗产生一定作用。     

川芎嗪抗血管紧张素Ⅱ诱导的离体培养血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(angiotensinII,AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)中钙调神经磷酸酶(Calc ineunrin,CaN)活性及原癌基因c-fos表达水平的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型,应用免疫细胞化学法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对血管平滑肌细胞表达c-fos的影晌;并用酶促反应定磷法测定CaN活性变化。结果与正常对照组比较,AngⅡ组能够明显刺激VSMCs增殖,细胞增殖活度明显升高(P<0.01):AngⅡ作用后VSMCs中CaN活性和c-fos表达量(A值)较正常对照组均显著增高(P<0.01)。同时加川芎嗪作用后,各组CaN活性和c fos表达水平均显著下降(P<0.01)。结论AngⅡ能显著刺激血管平滑肌细胞增殖,川芎嗪能使血管平滑肌细胞中原癌基因c-fos的表达减弱及增殖受抑。     

补阳还五汤延缓血管平滑肌细胞衰老的机制研究＊

目的 探讨补阳还五汤抑制血管平滑肌细胞衰老的作用及机制。方法 SD大鼠通过灌胃补阳还五汤汤剂和蒸馏水制备补阳还五汤含药血清和对照血清。用血管紧张素II （AngⅡ）诱导人主动脉血管平滑肌细胞（HA-VSMCs）衰老为模型，分别予金属基质蛋白酶-2（MMP-2）抑制剂ARP101、补阳还五汤含药血清和对照血清干预，并设立年轻对照组。衰老相关β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色测定SA-β-gal的活性；免疫印迹法和明胶酶谱法测定金属基质蛋白酶-2（MMP-2）表达及分泌水平。结果 与对照组相比，Ang II诱导的衰老组HA-VSMC中SA-β-gal阳性细胞百分率显著升高[（74.10 ± 4.64）% vs.（10.30 ± 1.92）%， p < 0.001]；同时MMP-2蛋白表达及分泌水平均显著增加。补阳还五汤含药血清干预的衰老HA-VSMC中SA-β-gal阳性细胞百分率较未干预的衰老细胞显著降低[（14.08 ± 5.15） vs. （74.10 ± 4.64）%， p < 0.001]，同时MMP-2蛋白表达及分泌水平均显著减少[（0.39 ± 0.16） vs. （0.93 ± 0.20）和（0.67 ± 0.13） vs. （1.81 ± 0.26），均p < 0.05]；而类似的结果未在对照血清干预的衰老HA-VSMC中观察到。ARP101干预也可降低衰老HA-VSMC中SA-β-gal阳性细胞百分率，而补阳还五汤含药血清对衰老细胞SA-β-gal阳性细胞百分率的抑制作用可被ARP101干预减弱。结论 补阳还五汤治疗可能通过抑制VSMCs中的MMP-2来延缓血管衰老。     

栉孔扇贝糖胺聚糖对bFGF诱导的血管平滑肌细胞增殖及原癌基因<>ic-myc mRNA表达的影响

 目的观察栉孔扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用及原癌基因(c-myc) mRNA表达的影响,并探讨SS-GAG抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的VSMC增殖模型,用MTT法观察bFGF、SS-GAG对VSMC增殖活性的影响;用原位杂交方法观察SS-GAG对bFGF诱导增殖的VSMC内c-myc mRNA表达的影响。结果bFGF模型组细胞活性最高,与正常对照组比较,差异有统计学意义,不同浓度的SS-GAG组细胞增殖活性均低于模型组细胞,差别有统计学意义;bFGF诱导增殖的VSMC内c-myc mRNA基因表达强度明显高于对照组;与模型组比较,SS-GAG作用后,增殖的VSMC内c-myc mRNA表达强度和阳性细胞数量均减少,差别有统计学意义。结论bFGF对VSMC有明显的促增殖作用,SS-GAG能显著抑制VSMC增殖,且对bFGF诱导增殖的VSMC的c-myc mRNA的阳性表达有抑制作用。     

小白菊内酯对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨小白菊内酯对血管平滑肌细胞增殖的影响及作用机制。方法:培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),Western印迹杂交法检测c-fos,c-myc,p15,p16,p18,p19蛋白表达,流式细胞仪检测VSMC周期情况,[³H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果:小白菊内酯以时间依赖关系抑制c-fos,c-myc蛋白表达,但不影响p15,p16,p18,p19蛋白表达,以剂量依赖关系使VSMC周期中的G₀/G₁期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[³H]TdR参入。结论:小白菊内酯可能通过抑制c-fos,c-myc蛋白表达,而不是影响p15,p16,p18,p19蛋白表达来抑制VSMC增殖。