肿节风总黄酮促进巨核细胞增殖的效应动力学研究

目的 探讨肿节风总黄酮对体外培养巨核细胞增殖的影响及其效应动力学。方法 肿节风总黄酮（0.39 g·kg-1）单次灌胃给予正常SD大鼠,给药后不同时间点采血制备含药血浆。采用兔抗大鼠血小板相关抗体建立大鼠骨髓巨核细胞增殖障碍模型,并将不同时间点的含药血浆作用于该模型,以巨核细胞数、细胞上清液中血小板生成素（TPO）、转化生长因子-β1（TGF-β1）含量为效应指标,绘制时间-效应动力学曲线,计算相关动力学参数。结果 肿节风总黄酮含药血浆可以显著提升巨核细胞数,肿节风总黄酮对巨核细胞数、上清液中TPO及TGF-β1的效应半衰期分别为：495.52,665.13和537.46 min,达峰时间分别为：60,90和40 min,平均驻留时间分别为：224.60,242.37和231.10 min,其中巨核细胞数与TPO含量的效应曲线之间有较好的相关性,时间上稍有滞后现象。结论 肿节风总黄酮含药血浆可显著促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖,可能与培养体系中TPO的浓度密切相关。     

肿节风总黄酮对体外骨髓基质细胞-巨核细胞共培养体系的影响

目的:探索肿节风总黄酮对骨髓基质细胞-巨核细胞共培养体系中巨核细胞分化成熟,以及基质细胞状态的影响。方法:模拟骨髓微环境,建立KM小鼠骨髓基质细胞和巨核细胞共培养体系,实验分为空白对照组、阿糖胞苷模型组、二甲基亚砜(DMSO)对照组、肿节风总黄酮组7.80、3.90、1.95μg/ml剂量组,每组3个复孔。各组培养4天后分离巨核细胞进行涂片、染色、统计多倍体数目,流式细胞术分析巨核细胞CD61表达量,消化培养体系中贴壁的基质细胞,流式细胞术检测其凋亡情况,ELISA检测培养体系中TPO和SDF-1的含量。结果:与阿糖胞苷模型组相比,肿节风总黄酮7.80μg/ml和3.90μg/ml剂量组中多倍体巨核细胞数目显著增加,肿节风总黄酮7.80μg/ml剂量组巨核细胞CD61表达水平明显提高。肿节风总黄酮7.80μg/ml和3.90μg/ml剂量组显著降低基质细胞的凋亡率。肿节风总黄酮7.80、3.90、1.95μg/ml剂量组显著提高培养体系中TPO和SDF-1的含量。结论:肿节风总黄酮可能是通过抑制共培养体系中基质细胞凋亡促进"量"的增加,增进其分泌细胞因子TPO、SDF-1影响"质"的变化,改善骨髓微环境,促进巨核细胞分化成熟和产生更多的血小板。     

肿节风总黄酮及迷迭香酸、落新妇苷对大鼠骨髓巨核细胞增殖的影响

目的:探讨肿节风总黄酮部位及其成分迷迭香酸、落新妇苷对大鼠骨髓巨核细胞增殖及血小板生成素(TPO)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法:采用兔抗大鼠血小板相关抗体(稀释倍数为128倍)建立大鼠骨髓巨核细胞增殖障碍模型,研究肿节风总黄酮部位500、250、125、62.5μg/ml,迷迭香酸500、250、125、62.5μg/ml及落新妇苷500、250、125、62.5μg/ml对大鼠骨髓巨核细胞增殖及培养上清液中TPO及TGF-β1含量的影响。结果:(1)肿节风总黄酮部位500、250、125μg/ml,迷迭香酸250、125μg/ml及落新妇苷500、250μg/ml均可显著促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖;(2)肿节风总黄酮部位500、250、125、62.5μg/ml,迷迭香酸500、250μg/ml及落新妇苷500、250、62.5μg/ml均可显著降低培养体系中TPO的含量;肿节风总黄酮部位250、125、62.5μg/ml及落新妇苷500、125μg/ml均可显著增加培养体系中TGF-β1的含量,迷迭香酸对培养体系中TGF-β1的含量无明显影响。结论:肿节风总黄酮部位、迷迭香酸及落新妇苷均可以促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖,迷迭香酸及落新妇苷是肿节风总黄酮部位促骨髓巨核细胞增殖的物质基础。     

肿节风总黄酮对阿糖胞苷所致血小板减少动物模型骨髓基质细胞和巨核细胞的影响

目的:利用阿糖胞苷建立化疗所致血小板减少症小鼠模型,研究肿节风总黄酮对模型小鼠血小板以及骨髓微环境中基质细胞和巨核细胞的影响。方法:将60只小鼠依据外周血小板数目随机均分为空白对照组、阿糖胞苷模型组、肿节风总黄酮31.50、63.00、94.50 mg/kg剂量组和阳性药物醋酸泼尼松龙组。除正常组外,每只小鼠腹腔注射阿糖胞苷建立化疗所致血小板减少小鼠模型,同时给予相应药物干预。动态检测外周血小板数目,实验结束时检测骨髓有核细胞活力,观察体外培养骨髓基质细胞生长状况,观察统计骨髓石蜡切片中巨核细胞数目及多倍体比例,免疫组化检测骨髓中基质细胞TPO以及巨核细胞相应受体C-mpl的表达量。结果:与模型组相比,肿节风总黄酮63.00 mg/kg和94.50 mg/kg剂量组显著提升模型动物外周血小板数目,显著提高骨髓有核细胞活力和骨髓基质细胞体外生长贴壁情况,显著提高骨髓中巨核细胞数目,肿节风总黄酮94.50 mg/kg剂量组显著提高多倍体巨核细胞比例;肿节风总黄酮63.00、94.50 mg/kg剂量组极显著促进骨髓内巨核细胞周围基质细胞TPO以及巨核细胞中相应受体C-mpl的表达。结论:肿节风总黄酮能显著提升阿糖胞苷诱导血小板减少症动物外周血小板数目,可能是影响了骨髓基质细胞生长状况,以及促进其产生有利于巨核细胞增殖分化的细胞因子,经过TPO-C-mpl通路促进巨核细胞增殖、分化和形成血小板。     

肿节风总黄酮调节MAPK/JNK 信号通路促进巨核细胞分化成熟

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/c-Jun N-末端激酶(JNK)信号通路探讨肿节风总黄酮对体外巨核细胞分化成熟障碍模型的影响及作用机制。方法 利用终浓度为5 ng·mL^-1的佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)和体积分数为1%的抗血小板血清(APS)联合作用于Dami细胞,构建体外巨核细胞分化成熟障碍模型。将细胞分为空白对照组、PMA诱导组(5 ng·mL^-1)、APS模型组(5 ng·mL^-1PMA+1%APS)以及肿节风总黄酮高、中、低剂量组(15.6、7.8、3.9μg·mL^-1肿节风总黄酮+5 ng·mL^-1PMA+1%APS)。分别于培养48、72、96 h后,采用化学发光法检测细胞增殖活力。培养96 h后,采用流式细胞术检测各组Dami细胞的巨核细胞表面标志物CD41a、CD42b和CD61表达情况;采用Western Blot法检测Dami细胞MAPK/JNK信号通路关键蛋白p-JNK、JNK、p-c-Jun、c-Jun的表达情况。结果 (...     

不同产地肿节风的薄层鉴别及总黄酮含量测定

目的探讨肿节风药材所含内酯类及黄酮类成分的整体质量控制方法。方法采用薄层色谱对乙酸乙酯提取部位进行鉴别,并结合测定总黄酮含量对药材质量进行考查。结果不同产地肿节风药材所含成分及总黄酮含量差异较大。结论薄层鉴别结合总黄酮含量测定为肿节风药材质量控制提供了依据。     

肿节风总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺

目的:优化HPD-600型大孔吸附树脂分离纯化肿节风总黄酮的工艺条件和参数.方法:以肿节风总黄酮含量及回收率等为指标,考察肿节风总黄酮的大孔吸附树脂分离纯化工艺效果及影响因素.结果:最佳纯化工艺为上样液pH 5.0,总黄酮质量浓度15 ～20 g·L-1,上样液和树脂比10∶1,3 BV水洗,3 BV70％乙醇洗脱,得总黄酮纯度大于80％的提取物,总黄酮转移率大于85％.结论:HPD-600型大孔吸附树脂对肿节风总黄酮分离纯化效果较好,适合工业化大生产.     

大孔吸附树脂分离肿节风中总黄酮的研究

目的考察11种大孔吸附树脂对肿节风总黄酮的吸附分离性能。方法采用静态吸附分离法确定适合的大孔吸附树脂;采用动态吸附分离法确定分离条件。以总黄酮吸附量、总黄酮质量分数和回收率为考察指标,采用紫外分光光度法测定总黄酮。结果HPD 400大孔吸附树脂对肿节风总黄酮有良好的吸附分离性能,其分离肿节风总黄酮的工艺条件为:肿节风总黄酮上样质量浓度为10 m g/mL,肿节风总黄酮最大吸附量为9.5 m g/mL,吸附体积流量为2.5 mL/m in,洗脱剂为70%乙醇,洗脱剂用量为3倍柱体积,树脂可重复使用3次。结论采用HPD 400大孔吸附树脂吸附分离肿节风总黄酮简便有效,总黄酮回收率为85%左右。     

肿节风总黄酮对阿糖胞苷诱发小鼠血小板减少症模型的影响

目的：利用阿糖胞苷建立化疗后血小板减少小鼠模型,研究肿节风总黄酮对化疗后血小板减少小鼠模型的治疗效果及机制。方法小鼠注射阿糖胞苷造成血小板减少模型,并通过对肿节风及其各分离部位进行灌胃用药,就肿节风总黄酮对小鼠外周血象变化进行观察。结果小鼠经注射阿糖胞苷造模后,模型组血小板数显著低于正常对照组,数据差异具有统计学意义（P〈0.05）;肿节风总黄酮中剂量组、阳性药强的松龙组PLT显著高于模型组,数据差异具有统计学意义（P〈0.05）;阳性药强的松龙组WBC显著低于正常对照组,数据差异具有统计学意义（P〈0.05）;而MPV、 RBC、 HGB与正常对照组相比,数据差异无显著性（P〉0.05）,阿糖胞苷对其无影响。结论阿糖胞苷能够有效造成小鼠血小板减少模型,肿节风总黄酮能够明显对血小板起到提升作用。     

肿节风总黄酮对免疫性血小板减少大鼠骨髓细胞微环境的影响

目的:通过建立免疫性血小板减少症(ITP)大鼠模型,研究肿节风总黄酮对模型大鼠血小板以及骨髓细胞微环境的影响。方法:将54只SD大鼠依据外周血小板数目随机均分为空白对照组、ITP模型组、肿节风总黄酮0.0945、0.0630、0.0315g/kg剂量组和阳性药物醋酸泼尼松龙组。除正常组外,每只大鼠于第1、3、4、6、7、8天腹腔注射兔抗大鼠血小板血清(APS)建立ITP大鼠模型,同时给予相应药物干预。第10天检测各组动物血小板数目,台酚蓝染色计算骨髓有核细胞活力,体外培养并观察骨髓基质细胞生长状况及形成集落数目。结果:与模型对照组比较,肿节风总黄酮0.0945、0.0630、0.0315g/kg剂量组和醋酸泼尼松龙组大鼠血小板数量均显著增加,肿节风总黄酮0.0945、0.0630、0.0315g/kg剂量组骨髓单核细胞活力、相同时间内基质细胞贴壁率均显著提高,肿节风总黄酮0.0945和0.0630剂量组成纤维细胞集落数目明显增多。结论:肿节风总黄酮可以提升ITP模型大鼠血小板数量,可能是通过影响骨髓基质细胞改善了骨髓细胞微环境,进而促进巨核细胞分化生成血小板。     

5种中药醇提物体外抑制2种革兰阳性菌的活性

目的:研究丹参、丁香、厚朴、金银花、大黄这5种中药醇提物对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活力,进而通过正交试验考察不同配比对这2种革兰阳性菌的抑菌作用.方法:丹参、丁香、厚朴、金银花、大黄醇提物浓缩至0.2g·mL-1,通过测量抑菌圈直径考察不同中药醇提物与醇提物配伍后对这2种细菌的抑菌效果.结果:痤疮丙酸杆菌对丹参醇提物为高度敏感,抑菌圈直径为(23.27±3.68) mm,对丁香、厚朴醇提物为中度敏感,为(18.82±2.27),(17.78±1.88) mm;金黄色葡萄球菌对丁香和厚朴醇提物为高度敏感,抑菌圈直径分别为(21.94±0.74),(19.52士1.09)mm,对大黄和丹参为中度敏感,抑菌圈直径为(14.43±2.24),(16.01±0.88) mm.丹参、厚朴、丁香醇提物最佳复配比例为1∶1∶1,其对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为(20.07±1.26),(20.57±0.38) mm.结论:丹参、厚朴、丁香的醇提物对这2种菌的抑菌活力均为高度敏感,抑菌作用最佳.丹参、厚朴、丁香的醇提物对2种菌抑菌活性的最佳配比为1∶1∶1.     

夏枯草花粉离体萌发观察

选用唇形科植物夏枯草花粉为材料,通过在离体条件下花粉的萌发来探讨夏枯草花粉萌发的最适条件.以10％ H3BO4,30％ Ca(NO3)2,20％ MgSO4,10％ KNO3配制成无机盐溶液为基本培养基,统计不同相对分子质量的PEG,不同浓度的蔗糖,不同pH和不同温度条件以及不同采集时间下花粉萌发率的情况.夏枯草花粉萌发的最适液体培养条件是:10％ H3BO4 +30％ Ca(NO3)2 +20％ MgSO4+10％ KNO3+25％ PEG-4000,pH在6.5左右,刚刚开花时采集的花粉在此条件下花粉萌发率最高.     

赶黄草总黄酮超声提取工艺的响应面法优化及其体外抗氧化活性分析

目的:优化赶黄草总黄酮的超声提取工艺并分析其体外抗氧化活性.方法:以总黄酮得率为指标,在单因素试验基础上,采用响应面设计法对影响总黄酮得率的乙醇体积分数、超声时间及料液比进行优化,同时考察其体外抗氧化活性.结果:赶黄草总黄酮超声提取的最佳工艺条件为26倍量60％乙醇于50℃下超声提取20 min.在此条件下,总黄酮得率4.14％,试验结果与模型预测值相符.体外抗氧化活性研究表明,赶黄草总黄酮具有较强的还原力和总抗氧化能力,同时具有较强的清除羟基自由基和DPPH自由基能力.结论:该优选工艺方便、快捷、高效;赶黄草总黄酮具有较强的抗氧化活性,值得深入研究.     

Identification of Escherichia coli enterotoxin inhibitors from traditional medicinal herbs by in silico, in vitro, and in vivo analyses

Ethnopharmacological relevance

Glycyrrhiza uralensis has been used for the treatment of gastrointestinal disorders, such as diarrhea, in several ancient cultures. Glycyrrhizin is the principal component of liquorice and lots of pharmacological effects have been demonstrated.

Aim of the study

Heat-labile enterotoxin (LT), the virulence factor of enterotoxigenic Escherichia coli, induces diarrhea by initially binding to the G_M1 on the surfaces of intestinal epithelial cells and consequently leading to the massive loss of fluid and ions from cells. Therefore, we evaluated the inhibitory effects of traditional medicinal herbs (TMH) on the B subunit of LT (LTB) and G_M1 interaction.

Materials and methods

The inhibitory effects of TMH on LTB-G_M1 interaction were evaluated by G_M1-enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The likely active phytochemicals of these TMH were then predicted by in silico model (docking) and analyzed by in vitro (G_M1-ELISA) and in vivo (patent mouse gut assay) models.

Results

We found that various TMH, which have been ethnomedically used for the treatment of diarrhea, inhibited the LTB-G_M1 interaction. Docking data showed that triterpenoids were the most active phytochemicals and the oleanane-type triterpenoids presented better LTB-binding abilities than other types of triterpenoids. Moreover, by in vitro and in vivo models, we demonstrated that glycyrrhizin was the most effective oleanane-type triterpenoid that significantly suppressed both the LTB-binding ability (IC₅₀ = 3.26 ± 0.17 mM) and the LT-induced fluid accumulation in mice.

Conclusions

We found an LT inhibitor, glycyrrhizin, from TMH by in silico, in vitro, and in vivo analyses.     

北柴胡糖基转移酶基因BcUGT3,BcUGT6的表达分析及其原核表达

该研究测定了北柴胡中2个糖基转移酶基因BcUGT3和BcUGT6在不同组织中的转录水平及MeJA处理后不定根中的转录水平。BcUGT3在根、叶、花和果中的转录水平无明显差异,但均高于茎中的转录水平。BcUGT6在叶中转录水平最高,在花中最低。以未处理的为对照,BcUGT6在MeJA处理后2 h,8 h,24 h,2 d,4 d的北柴胡不定根中,转录水平均提高近2倍,表明BcUGT6的转录受MeJA影响较小。BcUGT3转录水平随处理时间的延长不断增加,4 d时,达7倍左右。利用载体pET-28a（+）,进行了2个基因的原核表达。IPTG诱导后,宿主菌表达出了目的蛋白,并获得了纯化蛋白。为后续开展这2个基因的功能研究奠定了基础。     

罗布麻定时脉冲片的制备及体外释药特性研究

目的:以罗布麻为模型药物,研制基于扩散、溶胀、渗透压机制的定时脉冲片,并考察其体外释药特性.方法:通过体外释放度试验,考察片芯崩解剂种类与用量、渗透压活性物质种类与用量、包衣液的组成与厚度等处方因素对脉冲片体外释放的影响.结果:脉冲片由含有罗布麻干浸膏的片芯及外包2层衣膜构成,内层为溶胀层,由HPMC E5构成;外层为控释层,由Eudragit RS100,RL100的混合物构成.该制剂在体外释放时滞为(5±0.5)h.结论:罗布麻脉冲片在体外具有脉冲释放特性.     

金莲花提取物粉雾剂的制备与体外评价

该研究以金莲花提取物为模型药物,将其制备成粉雾剂,并进行制剂学评价。采用喷雾干燥法制备金莲花提取物微粉;将微粉与乳糖载体混合制备粉雾剂,考察并优化处方与制备工艺。结果表明,金莲花微粉的体外有效部位沉积率为(21.07±1.74)%,排空率为(75.31±21.05)%;与适当的乳糖载体混合后,有效部位沉积率为(56.4±2.2)%,排空率为(95.9±3.0)%。由此可见,所制备的粉雾剂各项指标符合药典相关规定,具有较好的应用前景。     

An ethnopharmacological survey and in vitro confirmation of ethnopharmacological use of medicinal plants used for wound healing in Bosomtwi-Atwima-Kwanwoma area,Ghana

Aims of the study

Wounds represent a major health burden and drain on healthcare resources in the world including Ghana and Africa. The majority of the people of Ghana and Africa still patronize traditional medicine for their health needs including various forms of wounds. The aim of this study is the identification of medicinal plants, type of wounds, dosage forms and collection methods used traditionally in treating wounds in the Bosomtwi-Atwima-Kwanwoma district, Ghana. In vitro screening of selected extracts from these plants on cell physiology of human dermal fibroblasts and keratinocytes was to be performed.

Materials and methods

Validated questionnaires were administered to 78 traditional healers in 54 communities of the district. Interviews and structured conversations were used to administer the questionnaires. Selected herbal material dominantly used by the healers was collected, identified and aqueous and ethanolic extracts were investigated in vitro on influence on cell physiology of keratinocytes and dermal fibroblasts (MTT-, BrdU-, LDH-assay). Antioxidant activities of ethanolic extracts were determined by free radical scavenging activity. Antiadhesive activity against Helicobacter pylori on human stomach cells was investigated for extracts reported to be used for stomach ulcer treatment.

Results

The ethnopharmacological survey revealed 104 plants species belonging to 47 families. The detailed use of these plants is documented. Aqueous extracts of Phyllanthus muellerianus, Pycnanthus angolensis and Combretum smeathmanni influenced the mitochondrial activity and proliferation of dermal fibroblasts and keratinocytes significantly. Ethanolic extracts of selected plants exhibited strong antioxidant activities comparable to α-tocopherol. For Spathodea campanulata, Hoslundia opposita and Pycnanthus angolensis, which were reported by the healers to be used also for wound healing in case of stomach ulcers, strong antiadhesive activity against Helicobacter pylori was demonstrated, while the extracts did not exhibit any direct cytotoxicity against the bacterium.

Conclusions

Traditional use of many wound-healing plants from Ghana can be well rationalized by the in vitro investigation of aqueous extracts. E.g. extracts of Phyllanthus muellerianus, Pycnanthus angolensis and Combretum smeathmanni exhibited significant influence on the cell viability and proliferation of keratinocytes and dermal fibroblasts.     

灵芝体外抑制猴免疫缺陷病毒作用的研究

目的:对灵芝孢子水提物(AEGLS)进行体外抗猴免疫缺陷病毒(SIV)活性分析并对其作用机制进行初步研究.方法:300 TCID50的SIV病毒稀释液和AEGLS稀释液同时加入到CEM × 174细胞(CEM T淋巴细胞和174 B淋巴细胞杂交细胞)中培养4d后计数合胞体数量并进行统计,研究AEGLS抗SIV活性.利用不同加药时间点实验、作用阶段分析实验、Western blot对其作用机制进行初步分析.结果:AEGLS具有良好的抗SIV活性,其半数抑制浓度IC50为(466.62 ±20.21) mg·L-1,并且其细胞毒性较低,半数细胞毒性浓度CC50为(3.13±0.11) g·L-1,选择指数为6.71.抗SIV机制研究显示AEGLS主要作用在SIV病毒感染的早期阶段,与抑制SIV病毒的吸附或者穿透细胞有关,Western blot实验显示AEGLS能降低SIV衣壳蛋白P27( SIV P27)的表达水平.结论:AEGLS具有良好的抗SIV作用,其主要作用在SIV病毒感染的早期阶段,与抑制SIV病毒的吸附或者穿透细胞有关,并且能降低SlY P27农壳蛋白的表达水平.     

地龙体外抗凝血部位的制备工艺研究

目的:采用体外活性评价法,研究地龙基于膜分离技术抗凝血部位的制备工艺.方法:以蛋白质含量和酶活性为指标,采用单因素考察和正交试验优选地龙的提取、精制、浓缩工艺.结果:地龙体外抗凝血部位的制备工艺为地龙粗粉加入15倍量0.9%NaCl溶液,37℃超声提取3次,每次40 min;将上述提取液经30×103超滤膜进行精制,超滤液经10×103超滤膜进行浓缩.结论:超声提取技术与膜分离技术相结合,能够提高地龙抗凝血部位的分离纯化效果,有利于活性部位的进一步研究.