基于BMP-2/Runx2信号通路探讨鹿茸多肽防治PMOP机制研究

目的:探索中药单体鹿茸多肽防治PMOP机制研究。方法:选取SD雌性大鼠,去卵巢方法建立绝经后骨质疏松症模型。给药6周,测定股骨骨密度;HE染色观察骨小梁微结构; ELISA法测定P1NP、β-CTX含量、Western Blotting法测定BMP-2、Runx2蛋白表达水平、micro-CT分析骨微结构。结果:与正常及假手术组相比,OVX组大鼠骨密度明显降低,说明PMOP模型建立成功。鹿茸多肽高、中剂量组能明显提高骨密度,P0.05。OVX组大鼠HE染色结果显示,骨小梁结构混乱,髓腔增大,骨小梁断裂,盲端增多。VAPs各组能明显改善骨小梁微结构,缩小髓腔,断裂盲端减少。对照组大鼠血清β-CTX、P1NP含量较假手术组相比显著升高,骨代谢表现为"高转换"型,VAPs中剂量组能显著降低β-CTX、P1NP含量水平,下调"高转换"型的骨代谢水平。western blotting法测定结果显示:VAPs各组能够显著提高BMP-2、Runx-2蛋白表达含量,模型组大鼠股骨大鼠矿化能力降低,骨小梁间隔增加,骨小梁Tb.Th及Tb.N.降低,Tb.Sp.升高,骨小梁结构杆状化。给药后,通过3D模式图可见,骨小梁走向一致,结构较为紧密,出现更为完整的网格状结构。结论:鹿茸多肽可能通过BMP-2/Runx2信号通路防治绝经后骨质疏松症。     

鹿茸不同组分对去卵巢骨质疏松症大鼠的影响

目的考察鹿茸不同组分对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响,明确鹿茸健骨作用的主要物质基础。方法雌性SD大鼠56只,随机分为7组,分别为正常组、模型组、仙灵骨葆组、补佳乐组、鹿茸多糖组、鹿茸多肽组、鹿茸多糖多肽组。采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,连续给药12周后,观察鹿茸不同组分对大鼠骨密度、血清生化指标的影响。结果连续给药12周后,鹿茸不同组分均能显著提高去卵巢大鼠血清中ALP、OT、BMP-2、E2活性,抑制TRACP、PPARγ2活性,提高去卵巢大鼠的骨密度,鹿茸多肽效果优于鹿茸多糖。结论鹿茸不同组分对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症均有拮抗作用。     

鹿茸多肽提取物抗去卵巢大鼠骨质疏松作用的研究

目的研究鹿茸多肽提取物对去卵巢大鼠所致骨质疏松症的影响。方法 Wistar雌性大鼠60只,适应性饲养1周,自由饮食饮水。按体重分为假手术组、模型组、阳性组、鹿茸多肽提取物高剂量组、鹿茸多肽提取物中剂量组、鹿茸多肽提取物低剂量组。采用摘除双侧卵巢法建立骨质疏松模型,造模2周后开始灌胃(Ig)给药,给药13周后观察鹿茸多肽提取物对大鼠骨密度(BMD)、血清中碱性磷酸酶(ALP)、雌二醇(E2)、磷(P)、钙(Ga)、肌酐(Gr)等指标,以及肾、子宫、阴道指标的影响。结果与模型组比较,鹿茸多肽提取物能够明显改善去卵巢大鼠骨密度、血清中E_2、P、Ga、Gr以及ALP指标的变化。结论鹿茸多肽提取物能有效的治疗去卵巢大鼠骨质疏松症状。     

骨疏宁颗粒治疗去卵巢后骨质疏松大鼠的实验研究

目的:观察骨疏宁颗粒对去卵巢所致大鼠骨质疏松的影响,为临床用于治疗骨质疏松症提供现代药理学依据。方法:建立去卵巢致大鼠骨质疏松模型,观察骨疏宁颗粒对大鼠体重、股骨重量、长度以及骨密度、骨硬度的影响,以及对大鼠血清钙、磷、碱性磷酸酶含量和股骨组织形态学的影响。并设抗骨质疏松药仙灵骨葆胶囊及尼尔雌醇片为对照。结果:与模型组比较,骨疏宁高、低剂量组均可明显增加去卵巢大鼠的体重和股骨干重(P<0.01);高剂量组还可明显提升去卵巢大鼠股骨的湿重、骨密度以及血清磷水平(P<0.01)。结论:骨疏宁颗粒具有一定的对抗去卵巢致大鼠骨质疏松症的作用,可用于临床治疗骨质疏松症。     

以鹿茸对去卵巢骨质疏松症模型大鼠的影响对不同规格鹿茸进行质量评价

目的： 考察8种不同规格鹿茸对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响,并对8种不同规格鹿茸进行等级划分。 方法： 雌性SD大鼠100只,随机分为10组,分别为正常组、模型组、8组不同规格鹿茸组。采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,同时给予8种不同规格鹿茸,给药12周后,观察不同规格鹿茸对大鼠骨密度、血清生化指标的影响,并以不同组大鼠的骨密度,血清中ALP,BMP-2,BGP含量为影响因素,对8种不同规格鹿茸进行聚类分析。 结果： 给药12周后,不同规格鹿茸均能显著提高去卵巢大鼠血清中ALP,BMP-2,BGP含量,提高去卵巢大鼠的骨密度,且聚类分析结果与传统商品鹿茸药材质量划分相似。 结论： 不同规格鹿茸对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症均有拮抗作用,且作用强弱与商品药材质量相关。     

骨松强骨方对去卵巢大鼠股骨骨密度、骨强度和骨结构的影响

目的:研究骨松强骨方对去卵巢大鼠股骨骨密度、骨强度和骨结构的影响。方法:采用去势雌性大鼠作为骨质疏松动物模型,将其分为假手术组,对照组,雌激素组,骨松强骨方低、中、高治疗组。治疗3个月后,检测大鼠骨密度、股骨松质骨显微结构以及股骨的生物力学性能。结果:对照组与假手术组相比骨密度、骨应力、结构强度、弹性模量、骨小梁数目显著降低,骨小梁间隙、骨小梁模型因子显著增高,表明摘去卵巢后成功建立骨质疏松症的病理模型。各治疗组与对照组进行比较,发现雌二醇和骨松强骨方的中剂量、高剂量组均能显著抑制大鼠骨密度降低;雌激素及骨松强骨方可不同程度地提高大鼠骨应力、弹性模量,改善大鼠股骨干骺端骨小梁的显微结构。结论:骨松强骨方对骨质疏松症的治疗具有较好的防治作用,且呈剂量依赖性。通过抑制骨量流失,改善骨小梁微结构,提高股骨强度,从而预防脆性骨折。     

中药强骨丹对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度和骨生物力学的影响

[目的]观察中药强骨丹对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度和骨生物力学的影响,探讨其治疗绝经后骨质疏松症的作用。[方法]运用切除大鼠卵巢方法建立去卵巢骨质疏松症模型,随机分为假手术组、模型组、强骨丹高、低剂量组和西药组5组,每组10只。摘除卵巢后第4天分别给予生理盐水、强骨丹高、低剂量和二膦酸盐,各组均在服药14周后处死动物,进行血清雌二醇、骨密度、骨矿含量和骨生物力学测定。[结果]强骨丹能够明显升高去卵巢骨质疏松大鼠血清雌二醇水平,使骨密度和骨矿含量增加,胫骨最大载荷显著提高。[结论]强骨丹可通过提高机体雌激素水平,降低骨的转换率,增加骨密度,有效维持骨生物力学性能,对绝经后骨质疏松症有防治作用。     

杜仲提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢、骨密度及骨微结构的影响

目的:研究杜仲提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢、骨密度以及骨微结构的影响。方法:通过双侧卵巢切除术建立大鼠绝经后骨质疏松症模型,术后4 w将精神状态良好的成模大鼠随机分为模型组、戊酸雌二醇片(0.8 mg/kg)阳性对照组及杜仲提取物高(6 g/kg)、中(3 g/kg)、低(1.5 g/kg)剂量组,并设假手术组。连续给药16w,每周记录各组大鼠体质量。16 w后ELISA法检测血清中雌二醇(E2)、骨钙素(OC)含量及尿中脱氧吡啶啉(DPD)含量;全自动生化仪检测血清中钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)含量及尿中钙(Ca)、磷(P)、肌酐(Cre)含量;骨密度仪检测左侧股骨骨密度(BMD);取第五节腰椎骨(L5)行u CT检测骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨体积分数(BV/TV)、骨密度(BMD)、连接密度(Conn.D)。结果:给药16 w后,与模型组比较,杜仲提取物组大鼠体质量显著降低;血清E2显著升高,OC、ALP显著降低,尿中DPD/Cre、Ca/Cre、P/Cre显著降低;腰椎骨、股骨BMD均显著升高;大鼠第五节腰椎骨骨小梁Tb.N、BV/TV、Conn.D显著升高,Tb.Sp显著降低。结论:杜仲提取物对去卵巢大鼠骨质疏松症具有明显的防治作用,可升高血清雌二醇水平,降低雌二醇缺乏引起的体质量增加,调节骨代谢平衡,显著提高去卵巢骨质疏松大鼠股骨及腰椎骨骨密度,改善骨小梁微结构。     

补肾固本方对去卵巢大鼠骨质疏松症骨密度、骨矿盐含量及CT含量的影响

目的:采用切除双侧卵巢复制骨质疏松症大鼠模型,观察补肾固本方对去势大鼠骨质疏松症骨密度(BMD)、骨矿盐含量及血清降钙素(CT)水平的影响。方法:将105只6月龄雌性Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、仙灵骨葆组(500mg·kg-1)、戊酸雌二醇组(90μg·kg-1)、补肾固本方高、中、低剂量组(16,8,4 g·kg-1)。切除双侧卵巢复制骨质疏松症大鼠模型,造模成功后,给药组ig给予相应药物,给药3个月后取材。双能X射线BMD测量仪及X射线分别测量股骨和腰椎BMD及骨矿盐含量,补肾固本方对股骨及腰椎骨生物力学性能的作用,ELISA法检测CT。结果:与正常组比较,模型组股骨BMD值及骨矿物含量有明显下降(P<0.05),模型组大鼠股骨及腰椎的弹性模量、最大载荷、屈服强度下降(P<0.05),去卵巢组大鼠的血清CT水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组BMD及骨矿物有所提高(P<0.05,P<0.01),补肾固本方高、中、低剂量组及仙灵骨葆组BMD显著提高(P<0.01),补肾固本方高、中剂量对大鼠腰椎生物力学有一定改善(P<0.05),高剂量组对腰椎弹性模量有明显改善(P<0.01),补肾固本方高、中、低剂量组CT水平较模型组明显改善(P<0.05),其中补肾固本方高剂量组大鼠血清CT水平均明显高于其余各组,中剂量组对CT水平有明显改善(P<0.01),高、中剂量组间比较无差别。结论:补肾固本方能明显改善去卵巢大鼠BMD、骨矿物含量、改善去卵巢大鼠血CT水平,BMD及骨矿物含量明显降低;骨的力学性能得到改善或恢复。     

健骨片对去卵巢大鼠促骨形成作用机理初探

目的：研究健骨片对去卵巢大鼠促进骨形成作用的机理。方法：将SD雌性大鼠摘除双侧卵巢制成骨质疏松症模型，随机分为模型对照组、苯甲酸雌二醇组和健骨片高、中、低剂量组，并设伪手术组作空白对照．连续给药3个月后．测定大鼠的骨密度（BMD）和血清中雌二醇（E2）、碱性磷酸酶（AKP）、骨钙素（BGP）、Ca^2＋的含量并作骨组织痛理形态学检查。结果：与模型对照纽比较，健骨片各剂量能增加模型小鼠腰椎骨和股骨的骨密度，使其血清中E2水平明显增加．并能改善骨小梁形态，显著增加骨小梁平均宽度（MTT）与骨小梁面积百分比（TS％），中低剂量还可明显降低血清BGP、AKP和Ca^2＋水平。结论：健骨片对去卵巢所致大鼠过高的骨转换具有明显的抑制作用，并能提高骨再建能力．具有明显的促进骨形成作用。     

鹿角与鹿角脱盘显微鉴定研究

目的:利用显微特征参数,分析比较鹿角与鹿角脱盘显微结构差异,为鹿角粉与鹿角脱盘粉鉴别,以及两者质地差异性提供显微结构基础。方法:采用光学显微镜观察鹿角脱盘、鹿角及鹿骨粉末显微特征,并测定和比较三者的骨陷窝长/短径比值和骨陷窝面积占比显微特征数。结果:鹿角脱盘骨陷窝长/短径比值为2.04~2.38、骨陷窝面积比为35.04%~45.82%;鹿角的骨陷窝长/短径比值为1.69~2、骨陷窝面积比为40.60%~61.77%;鹿骨骨陷窝长/短径比值为1.54、骨陷窝面积比为71.8%。结论:鹿角、鹿角脱盘及鹿骨中三者显微鉴定参数均具有明显的差异性;表明骨陷窝长/短径比与骨陷窝面积比,不仅可作为鹿角与鹿角脱盘显微鉴定参数;也阐释了鹿角脱盘角质地比鹿角更为坚硬的组织结构基础,即随着骨陷窝形态由圆变长、骨陷窝面积比降低,其骨化程度增加、质地更加坚硬。     

马鹿茸多肽提取工艺研究

目的:优选马鹿茸多肽水提取乙醇沉淀的最佳工艺。方法:采用L9(34)正交设计法,以马鹿茸多肽含量为评价指标优选提取工艺,考察药材粒度、料液比、提取次数、提取时间等因素对水提取工艺的影响;考察乙醇醇沉前药液相对浓度、乙醇浓度、醇沉时间三因素对醇沉工艺的影响。结果:水提取的最佳工艺为鹿茸粒度80~100目,料液比1∶12,提取次数3次,每次20 min;乙醇沉淀工艺为药液相对浓度0.5 g·m L-1(生药)、乙醇浓度65%、醇沉时间4 h。结论:经过验证实试验该马鹿茸多肽的提取工艺稳定、简便、合理、可行。     

微粉化对鹿茸粉体的影响

对梅花鹿茸进行超微粉碎,并对鹿茸细粉和微粉的粉体学特征进行了系统的比较研究。在扫描电子显微镜下观察了粉体的显微结构,通过激光粒度分析仪测定微粉粒径、粒径分布宽度和比表面积,检测粉体的休止角、堆密度、水溶性蛋白含量和水溶性浸出物的累计溶出度。结果表明微粉化使鹿茸粉体粒径明显变小,比表面积增大,能增加鹿茸水溶性蛋白质和水溶性浸出物的溶出度,可充分有效的利用鹿茸,增强药效,为开发新剂型奠定了基础。     

应用PCR-RFLP方法鉴定梅花鹿茸与马鹿茸

目的 建立一种应用限制性片段长度多态性技术鉴别梅花鹿茸与马鹿茸的方法。方法 提取各种鹿茸样品的基因组DNA,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对正品鹿茸的特异性片段进行扩增,鉴别鹿茸的真伪,然后对正品鹿茸利用动物通用引物进行PCR扩增,并通过限制性片段长度多态性分析进一步对正品鹿茸的种属来源进行确证。结果 通过对特异性片段的PCR扩增,可将梅花鹿茸及马鹿茸与驯鹿、麋鹿、新西兰鹿等伪品鹿茸加以区分,通过对限制性内切酶Msp I 进行酶切后的片段长度进行分析,可进一步区分梅花鹿茸与马鹿茸。结论 本实验建立了一种基于限制性片段长度多态性技术快速、准确的鉴别鹿茸真伪及种属鉴定的方法,为解决中药易混品种难以鉴定的问题提供了又一个新方法。     

复方茸血胶囊鹿茸多肽的含量测定及提取工艺研究

目的:制定复方茸血胶囊中鹿茸多肽含量测定方法及制备工艺的研究。方法:采用正交实验设计,以出膏率为指标,优选杜仲、枸杞、当归、熟地黄提取最佳工艺中的溶媒用量、提取时间及提取次数。采用福林酚法测定复方茸血胶囊中鹿茸多肽含量。结果:最佳提取工艺第一次加水十倍量,煎煮2.0 h,第二次煎煮时间1.5 h,加水8倍量。鹿茸多肽线性范围:0.214 2~0.499 8μg。样品含量测定数据:不得少于36.8 mg。结论:本法简便、准确,可用于复方茸血胶囊的含量测定。经过优化后制备的复方茸血胶囊各项指标符合规定,工艺重复性好,适于规模化生产。     

马鹿茸多肽A的表面结构分析

目的:对马鹿茸多肽A的表面结构进行分析,并探讨其结构对药效的作用。方法:采用原子力显微镜观察马鹿茸多肽A的表面结构。结果:马鹿茸多肽A表面呈三维的曲面、板状结构;其基部为不规则网格状结构,3D结构显示其网格边缘具有粗细不均、长短不等的支链形成椎体状突起,呈栅状或片状。质量浓度为0.50、0.25、0.10µg·mL^(–1)的马鹿茸多肽A的粗糙度分别为0.6672、0.7000和0.7900,表面高度分别为14.5105、39.4588、6.1397 nm。在相同波长下,一维各向同性功率谱密度越大,则二维各向同性功率谱密度越大,样品对于测定的响应越灵敏。结论:马鹿茸多肽A的曲面板状结构可增加与作用靶点的接触面积,其栅状或片状椎体支链结构则更有利于和作用靶点的相互接触或渗入而易发挥药效作用。随着质量浓度的增大,其粗糙度逐渐变小;而表面高度没有随质量浓度的变化呈现出规律性的变化。     

中药鹿茸性激素的含量测定

用放射免疫法测定了中药鹿茸雌二醇和睾酮的含量。结果显示澳鹿茸雌二醇含量（１５．３±１．８２）ｎｇ／ｍＬ,梅花鹿茸的含量为（１１．４±１．２６） ｎｇ／ｍＬ与鹿角镑（１．９６±０．２６） ｎｇ／ｍＬ相比有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）,鹿茸伪品和鹿角胶的雌二醇含量与鹿角镑相比没有显著性差异（Ｐ＞０．０５）,提示雌二醇是鹿茸治疗宫冷不孕的物质基础;测定鹿茸中雌二醇的含量可作为评价鹿茸品质的依据;鹿茸中睾酮的含量低,提示睾酮不是鹿茸壮阳的有效成分,进一步研究鹿茸中促雄激素样物质,必将为鹿茸的壮阳作用提供依据。     

鹿茸线粒体DNA的指纹鉴定研究

 目的 通过鹿茸特异性引物鉴别和随机扩增多态DNA(RAPD)鉴别的比较,选择一种更简便的方法用于鉴别鹿茸。 方法 采用盐析法从梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸、市售鹿茸等样品中抽提线粒体DNA,并应用试剂盒进行纯化。进行特异性引物扩增和序列测定,同时进行随机扩增多态DNA扩增。结果 梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸以及部分市售鹿茸经特异性引物扩增后均可在琼脂糖凝胶中显示313 bp片段,只是条带亮度不同。而其余市售鹿茸无扩增条带; 随机扩增多态DNA不仅有效显示阳性与阴性的DNA扩增结果,而且对梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸的聚合酶链反应产物的差异,以不同的条带数目和条带亮度得以验证。结论 随机扩增多态DNA鉴别鹿茸真伪的方法更准确快捷,通过随机扩增多态DNA扩增后主条带与梅花鹿茸或马鹿茸扩增的条带大小和亮度一致,则为正品;如不一致,则为《中国药典》规定外的鹿茸或其他混淆品。这种方法对于筛选、甄别市售动物中药材,特别是名贵中药具有广阔的应用前景。     

乳宁冲剂中鹿角粉的PAGE鉴别

目的：对鹿然粉、含鹿角粉的乳宁剂、乳宁冲剂阴笥样品进行检测方法：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法（Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,简称ＰＡＧＥ）,以ＰＨ８．３系统制备交及缓冲液,浓缩胶浓度２．５％,分离胶浓度１５％。结果：乳宁冲剂电泳图谱中有４个蛋白斑点。结论：实验取得了较满意的效果。为该样品的鉴别提供了较可靠的方法。     

鹿茸化学成分的研究进展

鹿茸为脊索动物门哺乳纲鹿科的动物梅花鹿Cervus Nippon Temminck或马鹿Cervuselaphus L．的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角。鹿茸始载于《神农本草经》，列为中品，是我国的传统名贵中药之一。历代本草对鹿茸的治疗作用均有记载。鹿茸具有壮肾阳，益精血，强筋骨，调冲任，托疮毒等作用。用于阳痿滑精，宫冷不孕，赢瘦，神疲，畏寒，眩晕耳鸣耳聋，腰脊冷痛，筋骨痿软，崩漏带下，阴疽不敛…。现将近年来公开发表的文献，主要从化学方面进行简单的综述如下：