中药对黑素生物合成影响研究I.82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

对中医治疗色素增加性皮肤病方剂69首进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药82味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.结果显示11味中药乙醇提取物在3个不同浓度对酪氨酸酶活性和黑素生成量呈剂量依赖性抑制,其中白术、白僵蚕、藁本、白芨、白附子、沙苑子、六月雪、柿叶对酪氨酸酶活性抑制率与单体化合物熊果苷无统计学差异(P＞0.05).进一步研究这些中药的皮肤脱色机制与评估其临床应用价值是必要的.     

中药对黑素生物合成影响研究Ⅰ.82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

对中医治疗色素增加性皮肤病方剂６９首进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药８２ 味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影 响。结果显示１１味中药乙醇提取物在３个不同浓度对酪氨酸酶活性和黑素生成量呈剂量依赖性 抑制,其中白术、白僵蚕、藁本、白芨、白附子、沙苑子、六月雪、柿叶对酪氨酸酶活性抑制率与单体 化合物熊果苷无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。进－步研究这些中药的皮肤脱色机制与评估其临床应用 价值是必要的。     

中药对酪氨酸酶活性的影响

酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的关键酶、限速酶，其活性与某些色素障碍性皮肤病有关。综述了中药对酪氨酸酶活性的影响研究现状。     

祛斑中药组方干预黑素合成的主效应中药剖析

目的解析祛斑中药组方干预黑素合成的主效应中药。方法采用3×2析因设计,以山楂、当归、山萸肉为考察因素,各设2水平,分别测定酪氨酸酶活性抑制率、多巴色素自动氧化生成黑素量、多巴自动氧化抑制率,并运用SPSS16.0软件辅助解析祛斑组方对干预黑素合成不同途径的主效应中药。结果组方中山萸肉对酪氨酸酶活性具有显著抑制作用(P0.05),山萸肉、当归对多巴色素自动氧化生成的黑素量具有极显著抑制作用(P0.01),山萸肉、当归对多巴自动氧化具有显著抑制作用(P0.05),山萸肉在组方中贡献最大。结论山萸肉为组方中抑制酪氨酸酶活性、多巴色素自动氧化生成黑素量、多巴自动氧化的主效应中药。     

20种中药对酪氨酸酶抑制作用的研究

 目的：评价某些中药对酪氨酸酶的抑制作用。方法：应用多巴色素法浏定对酪氨酸酶的抑制活性,底物为L-酪氨酸,在 490 nm处浏定吸光度。结果：检查了20种中药乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制活性,其中芦荟、熟地黄、当归等中药抑制作用 较强。结论：某些中药可用于药品或化妆品中治疗色素沉着过多症。     

中药对黑素细胞及酪氨酸酶调节作用的研究进展

黑素细胞的含量和酪氨酸酶的活性是引起色素性皮肤病的主要原因。近年国内观察中药对体外培养人正常黑素细胞或鼠黑素瘤细胞的影响，观察中药对蘑菇酪氨酸酶的影响，阐明菟丝子、白芷、蒺藜、六味地黄丸、桃红四物汤等一批单味或复方中药具有激活或抑制酪氨酸酶活性，调节黑素细胞的功能，增加或减少黑素生成的作用，为提高中医药治疗色素障碍性皮肤病疗效奠定基础。     

不同配比美白中药方剂乙醇提取物对酪氨酸酶抑制效果比较

目的:分析不同配比美白中药方剂乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用。方法:当归、白附子、玉竹、白芷、姜黄、甘草等药材按不同配比组方,采用85%乙醇提取,考察不同配比美白方剂的乙醇提取物对酪氨酸酶及B16黑色素瘤细胞增殖的抑制作用和对细胞内酪氨酸酶活性的影响。结果:处方1(质量比为1∶1∶1∶0.3∶1∶3)乙醇提取物对酪氨酸酶活性及对B16黑色素瘤细胞增殖及细胞内酪氨酸酶活性的抑制作用均最强,其IC50分别为0.77mg/m L、679μg/m L、409μg/m L。结论:处方1乙醇提取物具有较好的美白效果。     

21味中药对酪氨酸酶活性影响的研究

目的:研究21味中药对酪氨酸酶活性的影响。方法:用50％乙醇提取中药有效成分,利用可见分光光度法测定酶促反应的速度,以衡量其对酪氨酸酶的激活作用。结果:测得21条酶促反应时间曲线。结论:21味药中有13味中药对酪氨酸酶活性呈一定的激活作用(P<0.01),其中黄芩、毛慈菇激活作用较好。     

中药调控酪氨酸酶活性的现状分析

酪氨酸酶是黑素生成途径中的主要限速酶[1],体现在酪氨酸生成多巴和多巴醌的过程均需酪氨酸酶的参与。近年来,色素性皮肤病防治的研究热点趋向于中药对酪氨酸酶的抑制或激活作用,并有望通过这一途径取得突破性的进展。现对目前国内外有关中药调控酪氨酸酶活性的实验报道分析如下。 1 酪氨酸酶与色素性皮肤病 色素性皮肤病可分为色素减退和色素增加两大类,分别表现为皮肤颜色变白和变黑。白癜风是最常见的色素减退性皮肤病[2],发病率为0.5%～2%[3],发病原因复杂。而其发病机制则是由于人体皮肤和毛囊的黑素细胞内酪氨酸酶的活性减低或消…     

驱白艾力勒思亚散对酪氨酸酶激活作用的实验研究

目的:观察驱白艾力勒思亚散提取物对酪氨酸酶活性的作用,并进行其动力学研究,探讨其治疗白癜风的作用机理。方法:分别测定驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶的激活率,Matsuda法测定多巴色素自动氧化生成的黑素量,计算黑素生成上调率,并对酪氨酸酶激活作用进行动力学观察。结果:驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶均有明显的激活作用,其激活作用随着药量的增加而增强,黑素生成的上调率也呈剂量依赖性;动力学研究证实此激活作用显著,且醇提液效果优于水提液。结论:驱白艾力勒思亚散是治疗白癜风的有效药物,激活酪氨酸酶是其作用机制之一。     

抗白汤对实验性白癜风豚鼠的治疗作用

目的： 研究抗白汤对实验性白癜风豚鼠的治疗作用。 方法： 采用5%氢醌制备实验性白癜风豚鼠模型,以白癜风胶囊（0.24 g·kg^-1）作对照,分别用低、中、高剂量（3.1,6.2,12.4 g·kg^-1）抗白汤灌胃,每天1次,连续50 d,相当于造模时间5倍治疗。肉眼观察各药物组治疗实验性白癜风豚鼠模型的疗效,并观察表皮基底细胞和棘细胞黑色素分布以及对豚鼠模型血液中胆碱酯酶（CHE）、单胺氧化酶（MAO）、丙二醛（MDA）含量的影响;各药物组对豚鼠模型黑色素吸光度及酪氨酸酶含量和血液流变学各项指标的影响。 结果： 造模后,模型组血浆黏度、全血黏度,CHE,MAO,MDA含量明显升高,毛囊中黑色素数量、吸光度以及酪氨酸酶含量明显减少,与正常组比较均有显著性差异（P<0.01）。抗白汤各剂量组与模型组比较,能显著增加皮肤表皮基底细胞和棘细胞黑色素分布和皮肤毛囊中黑色素（P<0.01）,能显著增强黑色素的吸光度以及增加酪氨酸酶的含量（P<0.01）,能显著降低血液中CHE,MAO,MDA含量（P<0.01）,能显著改善血浆黏度及全血黏度（P<0.01）,并呈现良好的量-效关系,与白癜风胶囊组比较也有显著性差异（P<0.05）。 结论： 抗白汤对实验性白癜风豚鼠模型具有良好的治疗作用,其主要机制可能与促进血液循环,降低血液中CHE,MAO,MDA含量和增加酪氨酸酶含量,增加毛囊中黑色素数量,增加其吸光度等有关。     

Inhibitory effects of Sargassum polycystum on tyrosinase activity and melanin formation in B16F10 murine melanoma cells

Ethnopharmacological relevance

Sargassum polycystum, a type of brown seaweed, has been used for the treatment of skin-related disorders in traditional medicine.

Aim of the study

The aim of the present study is to investigate the antimelanogenesis effect of Sargassum polycystum extracts by cell-free mushroom tyrosinase assay followed by cell viability assay, cellular tyrosinase assay and melanin content assay using B16F10 murine melanoma cells.

Materials and methods

Sargassum polycystum was extracted with 95% ethanol and further fractionated with hexane, ethyl acetate and water. The ethanolic crude extract and its fractionated extracts were tested for their potential to act as antimelanogenesis or skin-whitening agents by their abilities to inhibit tyrosinase activity in the cell-free mushroom tyrosinase assay and cellular tyrosinase derived from melanin-forming B16F10 murine melanoma cells. The tyrosinase inhibitory activity was correlated to the inhibition of melanin production in α-MSH-stimulated and unstimulated B16F10 cells.

Results

Sargassum polycystum ethanolic extract and its fractions had little or no inhibitory effect on mushroom tyrosinase activity. However, when tested on cellular tyrosinase, the ethanolic extract and its non-polar fraction, hexane fraction (SPHF), showed significant inhibition of cellular tyrosinase activity. In parallel to its cellular tyrosinase inhibitory activity, SPHF was also able to inhibit basal and α-MSH-stimulated melanin production in B16F10 cells.

Conclusions

Our findings showed that (i) cellular tyrosinase assay is more reliable than mushroom tyrosinase assay in the initial testing of potential antimelanogenesis agents and, (ii) SPHF inhibited melanogenesis by inhibiting cellular tyrosinase activity. SPHF may be useful for treating hyperpigmentation and as a skin-whitening agent in cosmetics industry.     

山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响。方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g.L-15个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P<0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P<0.05或P<0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P<0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异。结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据。     

基于中药血清药物化学方法的逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础研究

目的：利用中药血清药物化学的方法，初步确定逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础及其作用机理。方法：通过建立逍遥散经口给药后大鼠血清色谱指纹图，确定大鼠血中移行成分的生药来源，并以血清色谱指纹图为指导，以血中移行成分来源生药为原料，定向富集制备逍遥散提取物；采用体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞株，以熊果苷为阳性对照药，用MTT法、多巴氧化法、NaOH裂解法评价逍遥散提取物对细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响，探讨逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础及作用机理。结果：逍遥散经口给药后大鼠血中发现了14个入血成分，其中4个为血中原型成分，10个为原型入血或代谢产物，分别来自于柴胡、当归、白芍、甘草、茯苓。定向制备的逍遥散提取物对B16细胞酪氨酸酶活性和黑素合成有明显的抑制作用，作用强度呈浓度依赖性。结论：逍遥散的血中移行成分具有抑制B16细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的作用，是逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础。     

七种增白中药在体外对酪氨酸酶的影响

 酪氨酸酶为黑色素生成过程的关键酶，控制其活力即可控制黑色素生成量。用酪氨酸酶对常用增白中药进行筛选，有７种中药有不同程度的抑制作用，其中白茯苓、白鲜皮、白蒺藜有显著抑制作用（Ｋｉ分别为２．１３×１０￣（－２），２．２６×１０￣（－２），１．８６×１０￣（－２）ｇ／ｍｌ）。白茯苓、白鲜皮为竞争型抑制，白蒺藜为混合型抑制。通过抑制酪氨酸酶活性来减少黑色素生成量，可能是增白中药的作用机制之一。     

阿育魏实提取物对酪氨酸酶的激活作用

目的： 研究阿育魏实不同提取物对酪氨酸酶活性和黑色素生成的影响。 方法： 以阿育魏实为材料,通过乙醇提取得到总提取物即醇提物,然后依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到相应的提取物。采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法和NaOH裂解法研究了该提取物对酪氨酸酶的效应和黑色素上调率。 结果： 所得阿育魏实乙醇和乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶激活作用较明显,对黑色素生成具有直接刺激作用,与对照品补骨脂和驱虫斑鸠菊相比,阿育魏实乙酸乙酯提取物IC₅₀为（13.64±7.78） g·L^-1,对酪氨酸酶激活作用优于临床治疗白癜风药物补骨脂[IC₅₀ （21.18±2.88） g·L^-1]。 结论： 阿育魏实乙酸乙酯提取物具有较好的体外酪氨酸酶激活及促进黑色素生成作用,可为临床治疗白癜风药物提供依据。     

白茶、玫瑰花及玳玳花提取物对体外培养黑素细胞功能的影响

[目的]观察白茶、玫瑰花及玳玳花提取物(祛斑因子A、B)对体外培养的正常人表皮黑素细胞功能及角质形成细胞和黑素细胞共培养体系中黑素小体转运的影响。[方法]制备含药血清,建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定黑素细胞增殖,酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达,Pull-down法检测黑素细胞GTP-RhoA和GTP-Rac1蛋白的表达;建立正常人角质形成细胞和黑素细胞的体外共培养体系,流式细胞术检测共培养细胞体系中黑素转运的情况。[结果]与空白血清对照组相比,祛斑因子A、B可显著抑制酪氨酸酶活性;祛斑因子A可显著降低酪氨酸酶mRNA的表达。祛斑因子A中、低剂量可抑制树突结构蛋白的表达。祛斑因子A高、中、低剂量及祛斑因子B均可抑制黑素小体的转运。[结论]为祛斑因子用于色素性疾病的保健防治提供一定的实验依据。