黄芪甲苷对大鼠肝缺血/再灌注损伤的保护作用

[目的]研究黄芪甲苷对肝缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制。[方法]将雄性SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组(Sham组)、肝缺血/再灌注组(I/R组)、黄芪甲苷预处理组(AsIV组)。分光光度法测定大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织形态学变化,蛋白印迹法(Western blot)检测心肌组织内Bax,Bcl-2蛋白表达。[结果]与假手术组比较,肝I/R组ALT、AST活性显著增高,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低,黄芪甲苷预处理可以降低肝缺血/再灌注损伤引起的ALT、AST活性增高,Bax蛋白表达增加,增加Bcl-2蛋白表达。[结论]黄芪甲苷预处理对肝缺血/再灌注损伤有一定的保护作用,其机制可能与黄芪甲苷抑制肝细胞凋亡有关。     

黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的影响

目的:观察黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞干预作用。方法:H9c2心肌细胞培养,传代后随机分为5组,对照组、缺氧/复氧组、黄芪甲苷药物预处理组:培养液中加入终浓度分别为25、50和100μmol/L的黄芪甲苷预处理,12h后进行缺氧/复氧处理。分别收取细胞培养上清液,用酶联免疫吸附技术(Elisa)测定上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;采用RT-PCR技术检测NF-κB的基因表达。结果:黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)预处理12h后可明显降低IL-6、TNF-α、MDA的含量,可明显提高SOD含量,并可以减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平,并且具有一定的量效关系。结论:黄芪甲苷保护缺氧/复氧对H9c2心肌细胞损伤,通过提高SOD含量,降低MDA含量,发挥抗氧化作用,并且抑制炎性因子IL-6、TNF-α分泌,其机制与减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平有关。     

黄芪总苷对大鼠神经元缺氧/复氧损伤的影响

目的 探讨黄芪总苷（astragalosides, AST）对大鼠神经元缺氧/复氧损伤的影响。 方法 建立原代培养的大鼠海马神经元的缺氧/复氧模型。采用四唑蓝（MTT）法和乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞活力;检测细胞上清液中丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性;Hoechst染色和AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;采用激光共聚焦显微镜和Ca2+荧光探针Fluo-3/AM观察细胞内游离钙[Ca2+]i。 结果 黄芪总苷可以提高缺氧/复氧后神经元的活力,降低细胞上清液中MDA和NO含量,提高SOD活性,降低细胞凋亡率,减轻神经元内的钙超载。 结论 黄芪总苷对缺氧/复氧损伤的神经元具有保护作用,其机制可能与抗氧化和减轻钙超载有关。     

黄芪甲苷和三七总皂苷配伍对脑缺血再灌注损伤大鼠海马NSCs的保护作用

目的探讨黄芪甲苷(AS)和三七总皂苷(PNS)配伍对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经干细胞(NSCs)的保护作用。方法无血清法培养新生大鼠海马NSCs,将NSCs分为对照组、缺糖缺氧-再灌注(OGD-R)组、AS和PNS配伍组。对照组常规培养,OGD-R组无糖缺氧处理后常规孵育,AS和PNS配伍组在OGD-R基础上用AS和PNS干预培养。比色法测定NSCs的乳酸脱氢酶(LDH),MTT法测定NSCs存活率,DAPI染色检测NSCs凋亡,Nestin/Brd U染色检测NSCs增殖。结果与对照组比较,OGD-R组NSCs的存活率及DAPI核染、Nestin/Brd U阳性反应显著降低,LDH漏出率显著升高(P0.01)。与OGD-R组比较,AS和PNS组NSCs的存活率、DAPI核染、Nestin/Brd U阳性光密度、面密度及细胞数显著增多,LDH漏出率显著降低(P0.01)。结论 AS和PNS可提高OGD-R新生大鼠海马NSCs的存活率,抑制NSCs凋亡,促进NSCs增殖。     

黄芪甲苷对大鼠肺缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究黄芪甲苷(Astragalosides)对大鼠肺缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法:100只实验用大鼠随机分为假手术组、模型组和黄芪甲苷低、中、高剂量(20、40、80mg/kg)组,每组20只。各组大鼠分别于术前30min腹腔注射给药或生理盐水,除假手术组以外,其余各组大鼠采用夹闭左肺门45min后松夹的方法制备肺缺血再灌注损伤模型,假手术组行手术通路,不夹闭。再灌注2h后,测定各组大鼠肺组织湿/干重比(W/D),HE染色法观察肺组织病理学改变,末端标记法(TUNEL)观察肺细胞凋亡状况并计算凋亡指数(Apoptosis Index,AI),逆转录-PCR(RT-PCR)法检测肺组织中Bcl-2 m RNA、Bax m RNA表达并计算Bcl-2/Bax比值,测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,采用Western blotting法测定肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达并进行半定量分析。结果:与模型组比较,黄芪甲苷中、高剂量组大鼠肺组织W/D、肺细胞凋亡指数显著降低,肺组织形态结构变化和肺细胞病变显著减轻,肺组织中Bcl-2 m RNA表达显著升高,Bax m RNA表达显著降低,Bcl-2/Bax比值显著升高,肺组织中SOD、CAT活性显著升高,MDA含量显著降低,NF-k B蛋白表达量显著降低,上述差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01),其中以黄芪甲苷高剂量效果最为显著。结论 :黄芪甲苷对大鼠肺缺血再灌注损伤后肺细胞凋亡有一定的抑制作用,其作用机制可能与黄芪甲苷能够上调抑凋亡基因Bcl-2表达,下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达比值以及提高抗氧化酶活性,降低氧化应激反应,上调NF-k B蛋白表达有关。     

HO-1介导黄芪甲苷抗原代心肌细胞缺氧/复氧损伤作用研究

[目的]研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及机制。[方法]培养乳鼠原代心肌细胞,以缺氧4 h,复氧4 h建立心肌H/R损伤模型。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力。检测细胞培养液中心肌肌钙蛋白(cTnT)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,炎症细胞因子超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。分别以聚合酶链式反应逆转录(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测心肌细胞血红素氧化酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达水平。[结果]与H/R组比较,AS-Ⅳ、HO-1激动剂原卟啉氯化钴(CoPP)均可显著降低细胞上清中cTnT、LDH含量(P0.01),降低炎症因子hs-CRP、TNF-α水平(P0.01),而HO-1拮抗剂原卟啉Ⅸ锌(Ⅱ)络合物(ZnPP)作用趋势则相反。与H/R组比较,CoPP组及AS-Ⅳ组HO-1 m RNA、蛋白表达水平显著升高(P0.01),ZnPP组则显著下降(P0.01)。[结论]AS-Ⅳ对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有显著的保护作用,其机制与诱导具有保护作用的HO-1表达有关。     

黄芪甲苷及人参皂苷Rg1对高脂大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨黄芪甲苷(ASIV)及人参皂苷Rg1(Gin Rg1)对高脂大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)后心肌细胞凋亡的影响.方法 选取40只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、高脂模型组(M组)、黄芪甲苷治疗组(A组)、人参皂苷Rg1治疗组(G组)、黄芪甲苷+人参皂苷Rg1合用治疗组(C组)5组,每组8只....     

固相萃取HPLC法研究黄芪总苷、黄芪甲苷在大鼠体内的黄芪甲苷血药浓度

目的 建立了固相萃取HPLC测定大鼠血清中黄芪甲苷含量的方法,比较黄芪总苷(AST)、黄芪甲苷(AST-Ⅳ)在大鼠腹腔注射给药后相同时间大鼠血清中AST-Ⅳ的含量.方法 分别以AST、AST-Ⅳ(按AST-Ⅳ计20 mg/kg相等剂量)二种药物大鼠腹腔注射,给药后30,60,75,90,105,120 min测定大鼠血清中AST-Ⅳ的含量,并对两种药物结果 进行分析、比较.结果 在大鼠腹腔注射等量AST-Ⅳ,测得AST、AST-Ⅳ两种药物各时点血清中AST-Ⅳ浓度前者均是后者3倍以上,且最高浓度前者是后者的3.5倍.结论 以AST-Ⅳ血药浓度为指标,AST较AST-Ⅳ更易于吸收.     

黄芪甲苷对CCl_4所致小鼠肝损伤的影响

目的:研究黄芪甲苷的抗肝损伤作用机制。方法:雄性C57鼠采用腹腔注射CCl_4构建肝损伤模型,同时采用黄芪甲苷(20 mg/kg、40 mg/kg)和阳性药扶正化瘀胶囊(750 mg/kg)进行灌胃,HE染色检测肝损伤的变化;生化检测血清丙氨酸转移酶(ALT)和天冬氨酸转移酶(AST)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);采用ELISA检测血清中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α);Western blot法检测肝脏中TGF-β及Smad-3的蛋白表达。结果:黄芪甲苷(20 mg/kg、40 mg/kg)组和扶正化瘀胶囊(750mg/kg)组显著抑制CCl_4诱导的小鼠肝损伤程度,与纤维化模型组相比,黄芪甲苷(20 mg/kg、40 mg/kg)组和扶正化瘀胶囊(750 mg/kg)组血清ALT、AST水平及MDA水平明显降低及IL-6、TNF-α,SOD显著提高;黄芪甲苷(20 mg/kg、40 mg/kg)组和扶正化瘀胶囊(750 mg/kg)组显著抑制肝组织中TGF-β和smad-3的蛋白表达。结论:黄芪甲苷具有显著的改善肝损伤作用。     

黄芪甲苷对心肌缺血心律失常大鼠模型Ca~（2＋）浓度影响初步研究

目的：初步探讨黄芪甲苷对心肌缺血心律失常模型大鼠心肌细胞Ca2＋浓度的影响。方法：将心肌缺血再灌注模型大鼠随机分为模型组和假手术组,各组给药7d后开始造模。将Fura-2/AM荧光探针负载于大鼠心肌细胞,采用荧光分光光度计检测Ca2＋浓度。结果：模型组心肌细胞内游离Ca2＋浓度与假手术组比较,差异有显著性（P〈0.01）;与黄芪甲苷的低剂量组比较,无显著性差异（P〉0.05）;与黄芪甲苷的中、高剂量组比较,有显著性差异（P〈0.01）;黄芪甲苷的中、高剂量组与普罗帕酮组比较,无显著性差异（P〉0.05）。结论：黄芪甲苷可降低心肌细胞内游离Ca2＋浓度,从而减少心律失常的发生,起到抗心律失常的作用。     

活血康脑胶囊中黄芪甲苷的提取工艺研究

目的：优选活血康脑胶囊制备工艺中黄芪提取过程中的有关工艺参数。方法：以黄芪甲苷含量为指标,HPLC法为测定方法,提取率为评价标准,采用重复正交实验法优化提取工艺。结果：乙醇浓度、提取时间、提取次数均对提取率有显著的影响,溶剂倍量影响不大。结论：黄芪最佳提取工艺条件为加8倍量90%乙醇,回流提取3次,每次1h。     

蛇芪清毒颗粒稳定性研究

目的：建立蛇芪清毒颗粒中黄芪甲苷、大黄素含量测定的HPLC方法,以此方法为检测手段,考察在高温下上述2种成分含量变化。方法：将供试品置于密封洁净容器中,在60℃条件下放置10 d,分别在0、5、10 d取样,检测相关指标黄芪甲苷和大黄素的含量。与0 d比较,考察上述成分含量的变化。结果：通过10 d的考察,3批样品中黄芪甲苷和大黄素含量没有明显的变化。结论：蛇芪清毒颗粒在60℃下放置10 d,2种药材黄芪、何首乌中的的指标成分黄芪甲苷、大黄素含量没有明显变化,表明制剂质量较稳定     

正交试验法优选新风胶囊醇提取工艺

目的:优选新风胶囊的最佳醇提取工艺。方法:以新风胶囊中醇溶性浸出物和黄芪甲苷的含量为考察指标,通过正交试验考察不同因素和水平对提取工艺的影响。结果:最佳提取工艺为A1B2C2D3,即醇浓度为65%,加醇量8倍,提取时间1.5 h,提取次数为3次。结论:该提取工艺合理、可行,可为工业化生产提供依据。     

黄芪甲苷联合树突状细胞瘤苗抗胃癌免疫的体外实验研究

目的 通过体外实验观察中药单体黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AⅣ)联合树突状细胞(DC)瘤苗对机体免疫功能的调节作用.方法 外周血单个核细胞体外诱导、培养,负载胃痛SGC7901冻融抗原.制备DC瘤苗,分别观察AⅣ联合DC瘤苗、DC瘤苗、AⅣ淋巴细胞增殖情况及其激活的效应细胞在体外杀伤胃癌细胞的活性.结果 ...     

黄芪甲苷对哮喘模型小鼠呼吸道炎症及氧化应激反应的影响

目的 观察黄芪甲苷对哮喘模型小鼠呼吸道炎症及氧化应激反应的影响,探讨其作用机制.方法 按随机数字表法将50只小鼠随机分为正常对照组,模型组,黄芪甲苷低、中、高剂量组,每组10只.除正常对照组外,其余各组小鼠用卵蛋白致敏和雾化激发的方式建立哮喘模型.于造模第14天开始给药,于雾化吸入鸡卵白蛋白溶液之前1h,低、中、高剂量组分别灌胃黄芪甲苷溶液25、50、100mg/kg,正常对照组与模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续给药14d.造模第27天,进行气道高反应性激发试验.造模第28天取材,采用瑞氏染色检测小鼠支气管肺泡灌洗液中的细胞总数、嗜酸粒细胞计数及百分比,采用ELISA法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-13含量;检测肺组织MDA、GSH-Px、SOD活性.结果 与模型组比较,黄芪甲苷中、高剂量组支气管肺泡灌洗液中白细胞总数[(8.58±0.92)×105个/ml、(2.10±0.25)×105个/ml比(17.28±2.34)×105个/ml]、嗜酸粒细胞数[(3.17±0.37)×105个/ml、(0.36±0.03)×105个/ml比(10.35±1.06)×105个/ml]及百分比[(36.67±3.96)%、(14.71±2.04)%比(60.82±5.88)%]减少(P<0.01);IL-6[(80.81±13.42)pg/ml、(77.14±12.73)pg/ml比(118.08±20.41)pg/ml]、IL-13[(120.59±18.38)pg/ml、(65.12±13.81)pg/ml比(168.11±26.43)pg/ml]含量降低(P<0.01);肺组织MDA含量[(53.04±5.08)nmol/mg、(42.90±3.91)nmol/mg比(69.03±7.01)nmol/mg]降低,GSH-Px[(4.59±0.41)μmol/g、(6.24±0.58)μmol/g比(2.71±0.26)μmol/g]、SOD活性[(5.98±0.56)U/g、(8.29±0.81)U/g比(3.88±0.39)U/g]升高(P<0.01).结论 黄芪甲苷可有效改善小鼠的哮喘状态,其作用机制与抑制气道内炎症反应及氧化应激反应有关.     

黄芪中主要活性成分提取工艺的研究

目的：探讨从黄芪中同时获取黄芪甲苷和多糖的方法,为确立结肠靶向制剂的最佳提取工艺提供依据。方法：以黄芪甲苷为醇提部分含量测定指标,用超高效液相色谱-蒸发光散射检测器进行测定;以黄芪多糖为水提部分含量测定指标,经苯酚-硫酸法显色,用紫外可见分光光度法进行测定,通过综合评分优选最佳提取工艺。结果：黄芪以70%乙醇,8倍量,提取2次,每次1.5h,提取黄芪甲苷,药渣再用6倍水,提取3次,每次2h,提取黄芪多糖。结论：选出的提取工艺稳定、合理、可行。     

参芪心舒胶囊中黄芪甲苷、芍药苷和丹参酮ⅡA含量的测定

目的：建立参芪心舒胶囊中黄芪甲苷、芍药苷、丹参酮ⅡA的含量测定方法,并对其进行含量测定。方法：运用高效液相色谱法（HPLC）,黄芪甲苷采用ELSD法检测,芍药苷、丹参酮ⅡA采用二极管阵列检测器检测。结果：测得参芪心舒胶囊中黄芪甲苷的平均含量为0．0174％,芍药苷的平均含量为0．524％,丹参酮ⅡA的平均含量为0．103％,方法学考察结果满足含量分析要求。结论：建立了参芪心舒胶囊中以上3种成分含量测定方法,该方法精密度高,准确可靠,操作简便,可用于参芪心舒胶囊的含量分析方法,并可为类似制剂或成分的含量测定提供参考。     

SPE-HPLC-ELSD法测定补虚颗粒中黄芪甲苷的含量

目的:建立补虚颗粒中黄芪甲苷含量的测定方法。方法:采用固相萃取-高效液相色谱-蒸发光散射检测(SPE-HPLC-ELSD)法,以Kromasil C18为色谱柱分离,乙腈∶水(35∶65)为流动相;流速:0.8 mL.min-1;柱温:30℃。结果:黄芪甲苷进样量在1.03-20.6μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9995);平均回收率为98.74%,RSD%为0.89%(n=6)。结论:本方法简便、快速,分离度好,结果准确可靠,可作为补虚颗粒的质量控制方法。