靶向VEGF—hTERT基因siRNA表达载体抑骨肉瘤生长的实验研究

目的：观察靶向VEGF-hTERT基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞增殖的影响和对裸鼠骨肉瘤生长的影响。方法：构RNA干扰腺病毒载体rA-hTERT和rAd-VEGF,单独和联合转染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞后实时荧光定量PCR检测hTERT和VEGF基因表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;人骨肉瘤细胞系MG-63细胞于裸鼠成瘤后使用siRNA表达载体治疗,观察肿瘤的生长状况及组织病理学改变。结果：①转染后48h,rAd-hTERT对hTERT基因mRNA的抑制率约84%,对VEGF基因表达无明显抑制（P〉0.05）;rAd-VEGF对VEGF基因mRNA的抑制率约82%,对hTERT基因表达无明显抑制（P〉0.05）;rAd-hTERT-VEGF干扰组对hTERT基因表达抑制率约87%,VEGF基因表达抑制率约83%,联合干扰与单基因干扰相比,对hTERT-VEGF基因的表达抑制差异无显著性（P〉0.05）。②干扰组转染后l～6d均能促进细胞凋亡,联合干扰细胞凋亡率与单基因干扰细胞凋亡率相比,差异均有显著性（P〈0.05）。裸鼠实验中,基因组肿瘤的生长均受到明显抑制,且联合干扰组与单基因组比较有显著性差异（P〈0.05）。对骨肉瘤的肺转移联合干扰组有显著的抑制作用。结论：靶向VEGF-hTERT基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞系MG-63细胞和裸鼠骨肉瘤的生长及转移均有明显的抑制作用。     

番茄红素对体外人骨肉瘤细胞增殖及荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的影响

[目的]研究番茄红素(LP)对体外人骨肉瘤MG-63细胞增殖及荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的影响,并初探其机制。[方法]取对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞;设空白对照组,LP(5、10、20μg/mL)组和顺铂(40μg/mL)组;给药48 h后,观察细胞形态,检测细胞周期、细胞增值抑制率,观察细胞凋亡状况并测定细胞凋亡率。采用背部皮下注射接种人骨肉瘤细胞的方法建立荷骨肉瘤裸小鼠模型,设模型对照组,LP[5、10、20mg/(kg·d)]和顺铂[2 mg/(kg·d)],各20只;称量瘤体质量并计算抑瘤率,观察肿瘤组织形态结构变化和细胞凋亡状况,检测肿瘤组织凋亡相关蛋白(bcl-2、Bax、caspase-3)表达。[结果]体外实验:空白对照组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长、增殖迅速,LP干预组和顺铂组细胞呈现变圆、脱壁、细胞间接触松散状态;与空白对照组比较,LP组和顺铂组细胞周期G_0/G_1期显著延长,细胞增殖抑制率显著升高,凋亡细胞数量明显增多、凋亡率显著升高,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。体内实验:与模型组比较,LP 10、20 mg/(kg·d)组瘤质量显著减轻、抑瘤率显著升高;LP组肿瘤组织呈片状坏死、瘤细胞皱缩等病理性改变,细胞凋亡指数(AI)显著升高,肿瘤组织bcl-2表达下调、Bax上调而Bax/bcl-2比值显著升高,caspase-3表达显著上调,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。[结论]LP具有抑制体外人骨肉瘤MG-63细胞增殖和荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的药理学作用,其机制可能与LP阻滞细胞周期、调节凋亡相关调控蛋白表达有关。     

EGCG联合MicroRNA-34a抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]联合Micro RNA-34a对骨肉瘤MG63细胞的增殖抑制作用。方法将骨肉瘤MG63细胞分成EGCG组、Micro RNA-34a组、联合组和生理盐水组。MTT实验及细胞克隆形成实验研究EGCG联合Micro RNA-34a对MG63细胞的毒性。流式细胞技术研究EGCG联合Micro RNA-34a诱导MG63细胞凋亡作用。构建裸鼠骨肉瘤异位肿瘤模型,研究EGCG联合RNA干预对裸鼠肿瘤的生长抑制能力。结果与生理盐水组和单独给药组比较,EGCG联合Micro RNA-34a对MG63细胞的生长及克隆形成抑制作用显著强于其他组,差异有统计学意义(P0.01)。EGCG联合Micro RNA-34a能促进MG63细胞的凋亡(P0.01)。EGCG联合Micro RNA-34a能够显著延长荷瘤小鼠的中位生存期。结论 EGCG联合Micro RNA-34a能够有效抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖。     

树舌多糖GF对人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响

目的:探讨树舌多糖GF对人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响及机制。方法:人肝癌细胞株MHCC97H接种4~5周鼠龄的雄性BALB/c-nu裸鼠背部2周,建立裸鼠皮下瘤模型。30只荷瘤裸鼠随机分为3组:对照组、生理盐水组及树舌多糖GF组,每组10只。对照组未做处理;生理盐水组腹腔注射生理盐水(0.15ml/只),连续14天;树舌多糖GF组按50mg/kg,0.15ml/只腹腔注射树舌多糖GF,连续14天。于末次给药24h,处死全部裸鼠,解剖瘤体,比较各组肿瘤体积及重量。Western blot检测各组瘤体Notch细胞信号的胞内段(Notch intracecellar domain,NICD)蛋白的表达情况。结果:给药14天后,树舌多糖GF组的瘤体及瘤重分别为(81.21±25.68)mm3和(1.39±0.41)g,与对照组(1022.14±164.71)mm3和(2.30±0.46)g,以及生理盐水组(983.19±114.27)mm3和(2.11±0.58)g相比较均有统计学差异(P0.05),树舌多糖GF可抑制肿瘤生长及减少瘤重;Western blot结果显示相比对照组及生理盐水组,树舌多糖GF组NICD表达降低。结论:树舌多糖GF抑制人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠肿瘤生长,其抗肿瘤的作用靶点之一可能为Notch细胞信号。     

蜂毒素对骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠移植瘤血管生成的影响

目的本研究拟探讨蜂毒素抗骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤的作用及其对肿瘤血管生成的影响.方法建立骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤模型,成瘤后随机分为两组生理盐水组、蜂毒素治疗组.瘤内注射给药治疗10天,计算治疗组肿瘤的体积抑制率和重量抑制率;采用免疫组化CD105观察移植瘤的微血管密度(MVD);免疫组化和Western blot检测瘤组织VEGF、HIF-1α蛋白表达.结果蜂毒素组对骨肉瘤的重量押制率为38.92%,体积抑制率为43.04%(P＜0.05).免疫组化及Western blot检测结果显示蜂毒素组CD105蛋白标记的MVD、VEGF、HIF-lα蛋白表达水平均明显低于生理盐水组(P＜0.01).结论蜂毒素能明显抑制骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤的血管生成,从而抑制肿瘤生长.与蜂毒素能够下调瘤组织VEGF、HIF-1α蛋白表达有关.     

自噬在骨肉瘤化疗中作用的体内研究

目的:探讨自噬的调节对骨肉瘤化疗的影响。方法:建立裸鼠骨肉瘤动物模型,自噬抑制剂3甲基腺嘌呤(3MA)和顺铂(DDP)干预肿瘤的生长,观察不同药物对骨肉瘤的生长情况的影响,检测肿瘤大小变化,HE染色观察病理表现。结果:对照组、DDP组、3MA+DDP组3组之间用药前后体积的比较差异具有统计学意义。DDP确实能较有效的抑制肿瘤的生长,加入3MA干预后能增强其敏感性,肿瘤的生长得到了进一步的抑制。HE染色见3MA+DDP组移植瘤组织中明显的坏死区。结论:3MA联合DDP化疗能提高对骨肉瘤细胞的杀伤率。     

蜂毒素对骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠移植瘤血管生成的影响

目的：本研究拟探讨蜂毒素抗骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤的作用及其对肿瘤血管生成的影响。方法：建立骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤模型，成瘤后随机分为两组：生理盐水组、蜂毒素治疗组。瘤内注射给药治疗10天，计算治疗组肿瘤的体积抑制率和重量抑制率；采用免疫组化CD105观察移植瘤的微血管密度（MVD）；免疫组化和Westernblot检测瘤组织VEGF、HIF—1α蛋白表达。结果：蜂毒素组对骨肉瘤的重量抑制率为38．92％，体积抑制率为43．04％（P〈0．05）。免疫组化及№ternblot检测结果显示蜂毒素纽CD105蛋白标记的MVD、VEGF、HIF—1α蛋白表达水平均明显低于生理盐水组（P〈0．01）。结论：蜂毒素能明显抑制骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤的血管生成，从而抑制肿瘤生长。与蜂毒素能够下调瘤组织VEGF、HIF—1α蛋白表达有关。     

甲蓉片对子宫内膜腺癌裸鼠移植瘤CyclinD1和P16蛋白的影响

目的观察甲蓉片对子宫内膜腺癌裸鼠移植瘤CyciinD1和P16蛋白的影响,探讨甲蓉片是否会促进于宫内膜腺癌裸鼠移植瘤生长。方法将已制备成细胞悬液的HEC-1-B细胞,取0.3ml/只于裸鼠肩胛区下注射,建立子宫内膜腺癌裸小鼠动物模型。接种10天成瘤后,将36只子宫内膜腺癌移植瘤荷瘤裸鼠随机分为3组（甲蓉片组、雌激素组、空白对照组）。4周后处死裸鼠,取部分肿瘤组织检测CyclinD1和P16蛋白。结果CyclinD1蛋白在甲蓉片组、空白对照组之间无显著性差异（P〉0.05）,在雌激素组明显高于甲蓉片组、空白对照组（P〈0.05）;P16蛋白在甲蓉片组、空白对照组之间无显著性差异（P〉0.05）,在雌激素组明显低于甲蓉片组、空白对照组（P〈0.05）。结论甲蓉片对子寓内膜腺癌裸鼠移植瘤的生长无明显影响。     

甲蓉片对子宫内膜腺癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的观察甲蓉片对子宫内膜腺癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法将HEC-1-B细胞接种于裸鼠肩胛区，建立子宫内膜腺癌动物模型。将36只荷瘤裸鼠随机分为3组，即甲蓉片组（2．162g／kg）、雌激素组（倍美力0．045mg／kg）和空白对照组，每组12只，观察给药前后肉眼和光镜下移植瘤的形态，并根据肿瘤体积的变化情况绘制移植瘤生长曲线图。结果甲蓉片组、空白对照组与雌激素组生长曲线斜率依次增大，表明各组肿瘤的生长速度依次增快。肿瘤生长速度在甲蓉片组和空白对照组之间无显著性差异（P〉0．05），雌激素组明显快于甲蓉片组和空白对照组（P〈0．05）。各组荷瘤鼠出现不同程度的消瘦，其中以雌激素组尤为明显。用药后雌激素组肿瘤细胞排列密集，核异型性大，核分裂多，而甲蓉片组及空白对照组光镜下所见与用药前比较无明显变化。结论甲蓉片对裸鼠移植瘤生长无明显影响。     

白花蛇舌草对肝癌的作用机制研究

目的:探讨中药白花蛇舌草治疗肝癌的作用机制。方法:建立荷瘤小鼠肝癌模型,将造模成功的15只小鼠随机分为空白对照组、白花蛇舌草组和5-氟尿嘧啶溶液组,每组各5只。空白对照组给予清水灌胃,白花蛇舌草组给予白花蛇舌草注射液,每只50 mg·kg-1,肌肉注射,每周1次,共治疗5次,5-氟尿嘧啶溶液组腹腔注射5-氟尿嘧啶溶液。观察各组荷瘤小鼠肿瘤生长情况,采用ELISA法检测血清中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、免疫球蛋白G(Ig G)、免疫球蛋白M(Ig M)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的分泌水平,采用细胞毒实验MTT检测中药白花蛇舌草对肝癌细胞的抑瘤作用。结果:10%、15%、20%中药白花蛇舌草含药血清组抑制率分别为(14.2±1.42)%,(24.60±3.76)%,(35.35±4.81)%,其中以20%的浓度抑瘤率最高,与其他两组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。空白对照组、白花蛇舌草组、5-氟尿嘧啶溶液组小鼠肝癌的发生率分别为100%、60%、30%,三组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。空白对照组、白花蛇舌草组、5-氟尿嘧啶溶液组小鼠肿瘤的体积分别为(3 042±56)mm3、(1 873±47)mm3、(873±12)mm3,与空白对照组和白花蛇舌草组比较,5-氟尿嘧啶溶液组小鼠肿瘤的体积最小,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组,白花蛇舌草组相比,5-氟尿嘧啶溶液组荷瘤小鼠血清中Ig G,Ig M以及INF-γ、IL-12的含量明显升高,差异具有统计学意义(P0.05),而5-氟尿嘧啶溶液组荷瘤小鼠血清中AFP含量明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:中药白花蛇舌草通过提高荷瘤小鼠体内Ig G,Ig M以及INF-γ,IL-12的分泌水平,降低AFP含量,增强了机体细胞免疫及体液免疫能力,使机体可有效的识别并清除肿瘤细胞,抑制了肿瘤血管的生成。     

Measurements of human bioluminescence

In measuring the output of light from the human skin, we estimated the total photon rates to be of the order of 170-600 photons/s/cm2, depending on anatomical location. The light was strongest at the red end of the spectrum, but fell below detectable levels in the ultraviolet. Significant variations were observed between individuals in both photon rate and spectral profile. The photon rate also varied significantly with time for a single individual. The possible source of this light and its significance are discussed.     

大蒜新素对人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞凋亡的影响

目的 研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)诱导感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)凋亡的动态变化及凋亡调控基因bcl-2和fas mRNA表达的影响。方法 用流式细胞术测定HELF在高、低感染复数(MOI分别为2．5、0．25)HCMV感染后1、12、24、36、48、72、96h凋亡细胞比率；大、中、小剂量大蒜新素(9、6和3μg／mL)处理正常的和感染的HELF细胞(MOI为2．5)后上述各时间点凋亡细胞比率。用原位杂交法检测大剂量大蒜新素处理感染细胞(MIO为0．25)72h后bcl-2和fas mRNA表达强度变化，并与正常细胞和感染细胞对比分析。结果 正常细胞凋亡比率保持恒定低水平(凋亡率平均2．68％)；低、高感染复数感染细胞随时间延长凋亡细胞逐渐增多，凋亡率峰值分别达8．85％(96h)和25．63％(72h)；各剂量大蒜新素处理的正常细胞凋亡率增加，呈剂量依赖性，峰值分别为4．88％、6．47％和8．35％；但各剂量药物处理感染细胞后却使细胞凋亡比率下降，大剂量药物处理72h时效应最为明显，凋亡细胞比率由25．63％降至16．24％。正常细胞高表达bcl-2，低表达fas基因；感染HCMV后，bcl-2表达显著下调，fas表达明显增强；大蒜新素处理感染细胞后使bcl-2表达强度明显高于感染细胞，fas表达水平明显低于感染细胞，但仍未恢复到正常细胞水平。结论HCMV是HELF凋亡的强诱导剂；病毒可通过下调凋亡抑制基因bcl-2和上调凋亡促进基因fas而发挥致凋亡作用。大蒜新素本身可诱导HELF凋亡，但却能明显抑制HCMV诱导的细胞凋亡，其抑制作用可能与药物干扰HCMV影响凋亡调控基因bcl-2和fas表达有关。     

Ge-Gen-Tang has anti-viral activity against human respiratory syncytial virus in human respiratory tract cell lines

Ethnopharmacological relevance

Ge-Gen-Tang (GGT) has been used against adult respiratory tract infection for thousand years in ancient China. However, GGT is unable to inhibit influenza virus. The effect of GGT to manage respiratory tract viral infection has been questioned. Several ingredients of GGT and their constituents are able to inhibit various viruses. Therefore, GGT might have antiviral activity against other viruses causing respiratory tract illness. Human respiratory syncytial virus (HRSV) is one of the most important airway viruses. However, it is unknown whether GGT is effective against HRSV.

Aim of the study

HRSV contributes considerably to respiratory tract illness of the elderly and immunocompromised adults. There is no effective therapeutic modality for HRSV infection. In order to find a readily available agent to manage HRSV infection, the authors tested the hypothesis that GGT can effectively minimize airway pathology by preventing HRSV-induced plaque formation in respiratory mucosal cell lines.

Materials and methods

Effect of the hot water extract of GGT on HRSV was tested by plaque reduction assay in both human upper (HEp-2) and low (A549) respiratory tract cell lines. Ability of GGT to stimulate anti-viral cytokines was evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

Results

GGT dose-dependently inhibited HRSV-induced plaque formation in both cell lines (p < 0.0001), especially in A549 cells. GGT was more effective when given before viral infection (p < 0.0001). GGT could dose-dependently inhibit viral attachment (p < 0.0001) with or without heparin. GGT could further inhibit HRSV internalization time-dependently and dose-dependently (p < 0.0001). GGT could stimulate mucosal cells to secrete IFN-β to counteract viral infection before and after viral inoculation.

Conclusions

GGT is effective against HRSV-induced plaque formation in airway epithelium.     

Intracellular uptake of (-)epicatechin by human erythrocytes as a function of human age

The present studies were carried out to determine the intracellular uptake of (-)epicatechin by erythrocytes during aging in humans. (-)Epicatechin uptake was estimated by performing ethyl acetate extraction while the total antioxidant potential of the (-)epicatechin was estimated in terms of FRAP (ferric reducing ability of plasma) values. A significant (p < 0.001) decrease in (-)epicatechin uptake by human erythrocytes was observed as a function of age. It is hypothesized that the uptake of (-)epicatechin in human erythrocytes has an important role in the regulation of PMRS (plasma membrane redox system) activity during normal human aging.     

和谐共处 人瘤共存

中医治疗以人为本,扶助正气,调理脏腑,达到人“瘤”平衡,带“瘤”生存的状态,提高患者的生活质量和延长生存时间。     

氯唑沙宗片的人体药物动力学研究

 采用反相ＨＰＬＣ法测定人血清中氯唑沙宗浓度。线性范围０．２６±６２．５２μｇ，ｍｌ￣（－１），高、中、低３种浓度回收率分别为９７．０％±２．３％，９７．１％±３．５％，９３．８％±３．０％（ｎ＝５），日内、日间ＲＳＤ均＜４．８％。以本法测定８例．怒愿受试者氯唑沙宗血药浓度，并计算分析药代动力学参数，结果单剂量口服８００ｍｇ氯唑沙宗后，药时曲线呈一室模型。Ｔ＿（ｍａｘ）＝１．６３±０．４３ｈ，Ｃ＿（ｍａｘ）＝１９．７１±３．９０μｇ·ｍｌ￣（－１），ＡＵＣ＿（０～∞）＝８２．２０±１１．３１ｍｇ·ｈ·Ｌ￣（－１），Ｋａ＝０．９２±０．３８ｈ￣（－１），Ｋｅ＝０．５４±０．１１ｈ￣（－１），Ｔ＿（１／２）＝１．３１±０．２４ｈ，Ｖｄ＝１８．６３±３．１５Ｌ，Ｃｌ＝９．９２±１．５５Ｌ·ｈ￣（－１）。     

茶多酚对人癌细胞和人体细胞增殖及凋亡的实验研究

目的 选用4种人癌细胞和3种人体正常细胞进行试验，比较茶多酚(TP)对人肝癌细胞Bel—7402等和人体肝细胞CLC增殖周期的影响和诱导凋亡的作用。方法 用MTT法测定TP对人癌细胞和人体正常细胞的细胞毒作用，用流式细胞仪(FCM)观察TP对细胞的周期改变和诱导凋亡作用。结果 TP对人癌细胞Bel—7402，CNEl，KB和H—29的IC50依次为68．2，104．63，119．83和148．61μg／mL；对人体正常细胞CLC，HEK—293和HD—MEC的IC50均＞400μg／mL。150和300μg／mL TP处理Bel-7402细胞12，24和36h，细胞凋亡率分别为13．2％，37．6％，40．7％和17．1％，39．9％，57．7％。表明TP可诱导Bel—7402细胞凋亡，使细胞周期停滞于S—G2／M期，而对CLC细胞无此作用。结论 TP对人癌细胞的细胞毒作用显著高于对人体正常细胞的作用，提示TP对人癌细胞有一定的选择杀伤作用。     

人之三本与丹田

本文论述了人之三本心、肺、脾与膻中丹田和神阙丹田的关系，作者认为，先天之本心和后天之本肺结合为膻中丹田，而后天之本肺脾则结合为神阙丹田。     

联苯苄唑的正常人体药物动力学研究

 目的研究联苯苄唑的正常人体药物动力学,以对联苯苄唑的安全性作一评价。方法采用GC-MS单离子检测的方法测定联苯苄唑溶液剂和霜剂在8名正常人体的血药浓度,并用3P87软件估算了药物动力学参数。结果溶液剂和霜剂的体内过程均符合二室开放模型,t^max分别为2.91和5.61h,C^max分别为713.46和410.70ng·mL-1。霜剂吸收、分布和清除较溶液剂慢,但曲线峰下面积没有显著性差别。结论联苯苄唑是一个较安全的外用药物,建议临床上交替使用,以提高疗效。