电针对脑缺血再灌注大鼠海马NGF表达的影响

目的 探讨针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠神经生长因子(NGF)表达的影响及针刺抗局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护机制.方法 将90只SD大鼠随机分为假手术组24h、假手术组48h、假手术组72h、模型组24h、模型组48h、模型组72h、电针组24h、电针组48h、电针组72h.采用改良线栓法制备局灶型脑缺血再灌注大鼠模型(MCAO),电针大椎、双侧内关穴,应用免疫组化(SABC)法观察各组大鼠海马NGF的表达.结果 模型各组大鼠缺血侧海马NGF的表达显著低于电针相应时段组,且于再灌注后48h达高峰,与假手术组相比较差异显著.结论 电针可能通过提高局灶性脑缺血冉灌注海马NGF的表达发挥神经保护作用.     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马Fas蛋白表达的影响

目的观察针刺对脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的抑制作用。方法采用改良线栓法制备局灶型脑缺血(MCAO)再灌注大鼠模型,电针大椎、双侧内关穴;用免疫组化学法观察假手术24h组、假手术48h组、假手术48h组、模型24h组、模型48h组、模型72h组、电针治疗24h组、电针治疗48h组、电针治疗72h组海马CA1区Fas蛋白的表达水平。结果模型各组大鼠缺血侧海马CA1区Fas蛋白表达显著高于针刺相应各组,且于再灌注后48h达高峰,与假手术组相比差异显著。结论电针可通过下调局灶性脑缺血再灌注海马CA1区促凋亡基因Fas水平,抑制细胞凋亡,减轻缺血半暗区神经元损害。     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马神经元BCL-2蛋白表达的影响

目的:探讨针刺对脑缺血再灌注损伤后抑制细胞凋亡作用。方法:采用改良线栓法建立大鼠局灶脑缺血再灌注模型(MCAO) ,用免疫组化方法观察凋亡相关蛋白BcL 2在各组MCAO大鼠海马区的表达水平,并用图像分析比较。结果:空白组海马区未见BcL 2蛋白表达;假手术组海马C1区BcL 2蛋白有少量表达;而缺血再灌注2 4小时后,BcL 2蛋白表达至高峰,在2 4小时～4 8小时呈下降趋势,到72小时时仅有少量表达;在相应时间点与缺血再灌注组相比较,电针组BcL 2蛋白阳性细胞数增加(P <0 0 1) ,其中以电针治疗A组最为明显。结论:电针“大椎”、“内关”两穴,对实验性局灶脑缺血再灌注损伤有明确的保护作用,通过上调海马区Bcl 2的蛋白表达,减轻缺血半暗区神经元损害     

电针对大鼠脑缺血-再灌注损伤的防护

目的　观察电针治疗缺血性脑病的可能机制。方法　采用结扎大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血 -再灌注损伤模型 ,测定不同时间电针前后海马内 MDA含量和 SOD、GSH -Px活性并计数断头后大鼠喘息次数和持续时间。每日电针“百会”、“风池”、“大钟”及“足三里”穴 30 min共 14 d,取疏 -密波 ,频率 :2 -2 0 H z,强度 :2 .0 A。结果　电针能显著延长大鼠脑缺血 -再灌注后的存活时间 ;降低缺血 -再灌注后大鼠海马的 MDA含量 (d7:2 .5 7± 0 .62 nmol/mg,d14 :1.18± 0 .47nm ol/m g)及提高SOD(d7:5 .18± 1.82 u/m g,d14 :6.91± 2 .47u/mg)及 GSH-Px(d7:9.5 0± 1.0 9u/mg,d14 :11.65± 1.72 u/m g)的活性。结论　电针能提高大鼠抵抗脑缺血 -再灌注的损伤能力 ,其作用机制可能与电针提高动物体内氧化酶活性、抑制自由基生成有关     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马GDNF表达的影响

目的 观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响,探讨针刺抗局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护机制.方法 按随机数字表将SD大鼠分为正常组,假手术24h组、假手术48h组、假手术72h组,模型24h组、模型48h组、模型72h组,电针24h组、电针48h组、电针72h组.采用改良线栓法制备局灶型脑缺血再灌注大鼠模型(MCAO),电针,选用2Hz,ImA,连续波,穴取大椎、内关穴,运用免疫组化(SABC)法观察各组大鼠海马GDNF的表达.结果 模型各组大鼠缺血侧海马GDNF的表达显著低于电针相应各组( P<0.05,P<0.01).结论 电针可能通过提高局灶性脑缺血再灌注海马GDNF的表达发挥神经保护作用.     

葛根素对大鼠心肌细胞L型钙离子通道的影响

目的 :观察葛根素对大鼠L型钙离子通道的作用。方法 :恒流Langendorff灌流 ,I型胶原酶解分离 ,全细胞膜片钳技术记录离子电流。结果 :2.4 mmol·L^-1葛根素可以抑制单个大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流 ,且成时间依赖性 ;葛根素可以促进L型钙通道电流 电压 (I-V)曲线的上移。结论 :葛根素可以抑制大鼠心室肌细胞的L型钙离子通道电流 ,并提示葛根素的抗心肌缺血和抗心律失常作用可能与抑制L型钙离子通道电流有关。     

电针对脑缺血再灌注损伤小鼠海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的：观察电针对脑缺血再灌注损伤小鼠海马神经元凋亡及相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。方法：复制脑缺血再灌注小鼠模型,电针肾俞、膈俞和百会穴,对照组灌胃喜得镇,分别于治疗第1天和第7天后,以流式细胞术（FCM）法检测小鼠海马细胞凋亡率、Bcl-2、Bax表达。结果：术后第1天,模型小鼠海马细胞凋亡率明显增高,术后第7天较术后第1天增高（P〈0.01）。说明海马细胞由于反复脑缺血再灌注而出现凋亡。模型组术后第1天,海马Bcl-2表达明显下降;术后第7天,则明显增高,并高于术后第1天（P〈0.01）。模型组术后第1天和第7天海马Bax表达均增高（P〈0.01）。电针在两个时点均可上调海马Bcl-2表达,下调Bax表达,降低凋亡率（P〈0.01）。结论：电针具有抑制细胞凋亡、保护神经元的作用。     

大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡机制的研究

目的研究大鼠全脑短暂缺血再灌注后海马CA1区椎体神经元的死亡机制。方法采用经典的四血管夹闭法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,取缺血再灌注后不同时间（6 h、24 h、48 h）的海马CA1区脑组织,用ELISA检测Caspase-3的活性变化。同时运用免疫印记方法检测PKC、NMDA受体NR2A及NR2B亚基磷酸化水平的变化。结果与对照组相比,Caspase-3检测显示缺血再灌注6 h2、4 h、48 h海马CA1区椎体神经元呈现逐渐凋亡增多的迟发性死亡。磷酸化蛋白激酶C在缺血6 h即有明显增高,并且于24 h4、8 h达到表达高峰（P〈0.05）;NMDA受体亚基NR2A和R2B的磷酸化水平缺血再灌注后均呈现明显升高趋势。讨论PKC、NR2B、CaMⅡ级联反应的发生可能是大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区锥体神经元发生迟发性死亡的重要机制。     

电针对脑缺血再灌注模型大鼠海马IL-6表达影响的观察

背景:白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)在脑梗塞中的作用及与脑损伤的关系越来越多地受到关注。但多数为临床研究脑梗塞患者周围血清IL-6水平的观察,对中枢脑组织内IL-6的观察较少。目的:观察模型鼠海马组织IL-6表达的变化,观察电针对模型鼠海马组织IL-6表达变化的影响,探讨电针对脑神经元保护作用的可能途径。方法:将雄性SD大鼠15只随机分为假手术组、模型组、电针组,每组各5只。采用改良Longa线栓法复制大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型;电针组取百会(DU20)及大椎(DU14)两穴,采用疏密波刺激30 min,电流强度1～3 mA,频率3Hz。评价大鼠神经行为学变化。用免疫组织化学方法观察受损侧海马IL-6的表达情况。结果与结论:(1)神经行为学评分:与假手术组比较,模型组和电针组的神经行为学评分显著降低(P<0.01);与模型组比较,电针组的神经行为学评分显著升高(P<0.01)。(2)IL-6免疫阳性表达:与假手术组比较,模型组受损侧海马IL-6平均光密度有统计学意义的下降(P<0.01),电针组海马IL-6平均光密度有统计学意义的升高(P<0.05)。与模型组比较,电针组受损侧海马IL-6平均光密度有显著升高(P<0.01)。结论:神经行为学评分结果提示电针有明确的脑保护作用。脑梗塞后大鼠海马IL-6的表达下降,而电针治疗可以促进脑梗塞侧海马IL-6的表达,提示IL-6在脑缺血再灌注后的损伤中可能是发挥保护作用,这可能是电针治疗保护脑缺血再灌注受损神经细胞的途径之一。     

灯盏花素对大鼠全脑缺血再灌注后海马神经元L型钙通道的影响

目的观察灯盏花素对大鼠全脑缺血再灌注后海马神经元L型钙通道平均开放概率和开放时间的影响。方法制作全脑缺血大鼠模型,再灌注1．5 h、3．0 h、4．5 h和6．0 h,急性分离海马CA1区神经元,采用膜片钳技术细胞贴附式方法记录神经细胞膜上单通道Ca~(2 )电流,分析L型钙通道平均开放概率和开放时间,在此基础上观察灯盏花素对其影响。结果不同浓度的灯盏花素能降低海马神经元L型钙通道的平均开放概率和开放时间,且在缺血再灌注3．0 h内作用明显。结论灯盏花素对脑缺血再灌注脑损伤有一定的保护作用。     

Effect of electroacupuncture on gene expression in calcium signaling pathway in hippocampal cells in mice with cerebral ischemia reperfusion

OBJECTIVE:To observe the regulation of electroacupuncture on gene expression at calcium signaling pathways in mice with cerebral ischemia reperfusion.METHODS:Sixty male, inbred Kunming mice were randomly assigned to three groups:repeated cerebral ischemia reperfusion group(RG, n = 24),sham-operated group(SG, n = 12), and electroacupuncture group(EG, n = 24).Mice in RG and EGgroups were modeled by repeated cerebral ischemia reperfusion surgery, and EG mice were treated with electroacupuncture for 30 min after recovery from anesthesia.Changes in gene expression profile of mice hippocampi were analyzed by global expression profile microarray.Genes that were up-regulated or down-regulated greater than 1.5folds were considered to be biologically meaningful.Real-time quantitative polymerase chain reaction(q-PCR) method was used to verify the expression of selected genes based on the algorithm [2^(ΔΔCt)].RESULTS:Compared with SG mice, 242 genes showed different in expressions in RG mice:107down-regulated and 135 up-regulated.Compared with RG mice, 609 genes showed a difference of expression in EG mice:315 down-regulated and 375up-regulated.Gene ontology and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes analyses indicated two pathways:calcium signaling and long-term potentiation in which 11 differentially expressed genes selected.Six of the 11 genes in the calcium signaling pathway were verified after real-time q-PCR testing.CONCLUSION:Electroacupuncture treatment of cerebral ischemia reperfusion appears to regulate Atp2a2, Cacna1 e, Camk2 a, Gnas, Grm1, Rapgef3 genes in the calcium signaling pathway.     

Cytoprotective effect of Scutellaria baicalensis in CA1 hippocampal neurons of rats after global cerebral ischemia

Based on the use of Scutellaria baicalensis for the treatment of stroke in traditional Oriental medicine, the current study was carried out to evaluate neuroprotective effects of S. baicalensis after transient global ischemia using rat 4-vessel occlusion model. Methanol extracts from the dried roots of S. baicalensis (0.1-10 mg/kg) administered intra-peritoneally significantly protected CA1 neurons against 10 min transient forebrain ischemia as demonstrated by measuring the density of neuronal cells stained with Cresyl violet. Methanol extract of S. baicalensis inhibited microglial tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and nitric oxide production, and protected PC12 cells from hydrogen peroxide-induced toxicity in vitro.     

Quercetin improves cognitive deficits in rats with chronic cerebral ischemia and inhibits voltage‐dependent sodium channels in hippocampal CA1 pyramidal neurons

Quercetin is a flavonoid compound found in a number of medicinal plants that are often prescribed in Chinese clinics for the treatment of cardiovascular diseases. The present study investigated the effects of quercetin on chronic cerebral ischemia in rats produced through bilateral occlusion of the carotid arteries. Treatment of quercetin (5 mg/kg i.p. for 14 days) was found to improve the performance of learning and memory of ischemic rats in the Morris water maze. Additionally, in electrophysiological experiments, quercetin attenuated the inhibition of long‐term potentiation (LTP) in ischemic rats. Also, in acutely isolated rat hippocampal CA1 pyramidal neurons, quercetin (0.3, 3 and 30 µm ) decreased the amplitude of voltage‐dependent sodium currents in a dose‐ and voltage‐dependent manner. Taken together, these data lend further support for the neuroprotective effects of quercetin and suggest that a therapeutic effect on cerebral ischemia and vascular dementia of quercetin could be due to its inhibition of sodium channels. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

双参提取物对慢性脑低灌注大鼠海马神经元的影响及机制研究

目的 观察双参提取物对慢性脑低灌注大鼠海马神经元的保护作用,并从星形胶质细胞活化和DNA修复蛋白表达方面探讨其作用机制.方法 采用随机数字表法将50只SD雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,双参提取物小、大剂量组,金纳多组,每组10只.除假手术组外,其余各组大鼠制备双侧颈总动脉永久性结扎模型.造模后24 h开始给药,双参提取物小、大剂量组分别灌胃双参提取物溶液2.2、4.4 g/kg,金纳多组灌胃金纳多溶液60 mg/kg,假手术组及模型组灌胃等体积生理盐水.1次/d,连续给药30 d.末次给药后,采用免疫荧光染色结合图像分析技术检测各组大鼠海马区神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly adenosinediphosphate-ribose polymerase,PARP)的表达.结果 与模型组比较,双参提取物小、大剂量组大鼠海马NeuN表达[(206.39±11.91)、(222.89±12.27)比(129.87±21.62)]、GFAP表达[(263.48±32.70)、(293.27±20.25)比(187.52±19.20)]升高(P<0.05),PARP表达[(771.44±55.03)、(718.61±58.43)比(1056.56±45.56)]降低(P<0.05).结论 双参提取物可减轻慢性脑低灌注致海马神经元损伤,其作用可能与促进星形胶质细胞适度活化、降低PARP过度表达有关.     

异丙酚与依托咪酯预处理对鼠脑缺血损伤海马区钙离子的影响

目的观察异丙酚与依托咪酯脂肪乳剂预处理在大鼠短暂性脑缺血损伤时对海马神经细胞静息态钙离子(Ca2+)的影响,以进一步阐明它们的脑保护作用及其机制。方法健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为假手术组(SH组)、缺血模型组(ISC组)、依托咪酯预处理组(EPC组)和异丙酚预处理组(PPC组),每组8只。应用激光共聚焦显微镜(LSCM)技术观察各组海马神经细胞内Ca2+荧光像素值的变化。结果大鼠脑缺血30 min后ISC组Ca2+荧光像素值较SH组显著增加(P<0.01),PPC组与EPC组较ISC组明显降低(P均<0.01),但两用药组间比较无显著性差异。结论异丙酚和依托咪酯预处理对大鼠短暂性脑缺血损伤的保护作用与抑制海马神经细胞Ca2+浓度的增加有关。     

双苯氟嗪抗大鼠全脑缺血再灌注所致海马CA1区神经元凋亡

 目的 研究L-型钙通道拮抗剂双苯氟嗪在大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元中的抗凋亡作用及与CD95(Fas)分子启动的死亡信号转导通路之间的关系。方法 四血管阻断法制备全脑缺血再灌注损伤模型(缺血15 min，再灌注3 d)，双苯氟嗪（20，40和80 mg·kg^-1）每日灌胃给药1次。激光扫描共聚焦显微镜(Confocal)和HE染色观察海马CA1区神经元细胞形态学改变，流式细胞仪(FCM)分析海马DNA含量变化；Western-blotting和RT-PCR方法检测CD95(Fas)分子启动的死亡信号转导通路相关蛋白Fas,FasL和Caspase3蛋白及mRNA表达变化。结果 全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元呈现典型凋亡细胞形态学改变，凋亡细胞百分率明显上升（P<0.01）。双苯氟嗪明显改善海马CA1区神经元形态，显著降低凋亡细胞百分率（P<0.01）。Western blotting及RT-PCR结果显示，双苯氟嗪显著降低CD95(Fas)分子相关蛋白Fas、FasL和Caspase3在蛋白及核酸水平的表达。结论 双苯氟嗪对缺血性脑损伤的保护作用可能通过抑制CD95(Fas)分子启动的死亡信号转导通路，从而发挥其抗脑缺血再灌注损伤作用。     

参芎化瘀胶囊预处理对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区细胞凋亡及原癌基因c-fos、c-jun表达的影响

目的 观察参芎化瘀胶囊预处理对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区细胞凋亡及c-fos、c-jun 表达的影响.方法 将SD大鼠采用完全随机的方法分为假手术组(24只)、脑缺血再灌注组(模型组24只)和参芎化瘀胶囊预处理组(预处理组24只).假手术组、模型组给予生理盐水1 ml灌胃,预处理组给予参芎化瘀胶囊生理盐水混悬液1 ml (480mg)灌胃.均给药7d,1次/d.第7天给药2h后,用线栓法制作大脑中动脉阻断再灌注模型(MCAO).采用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测c-fos、c-jun的表达.结果 ①模型组6、24、48、72 h海马CA1区细胞凋亡数分别为(11.17±3.71、39.83±5.67、48.33±5.32、22.17±3.71)个/高倍视野,预处理组分别为(7.83±2.04、15.00±3.58、29.50±6.89和10.17±2.32)个/高倍视野.与模型组比较,预处理组不同时间点凋亡细胞减少(P＜0.05或P＜0.01).②模型组6、24、48、72h海马CA1区c-fos表达分别为(14.50±3.45、33.67±1.63、42.33±3.32、32.00±2.90)个/高倍视野,预处理组分别为(10.17±2.93、21.50±2.43、30.83±3.76、25.17±5.27)个/高倍视野.模型组6、24、48、72 h海马CA1区c-jun表达结果分别为(15.50±4.19、22.83±5.64、33.10±4.19、14.67±3.08)个/高倍视野,预处理组分别为(9.67±3.63、15.67±2.73、21.26±3.63和9.33±3.61个/高倍视野.与模型组比较,预处理组不同时间点c-fos、c-jun表达减少(P＜0.05或P＜0.01).结论 预处理组可通过抑制c-fos、c-jun表达,减少细胞凋亡,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用.     

苦参素对慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡保护作用的研究

[目的]研究苦参素对大鼠慢性脑缺血后大脑海马CA1区神经元凋亡的保护作用并探讨其机制。[方法]将100只SD大鼠采用结扎双侧颈总动脉的方法复制慢性脑缺血大鼠模型,设假手术组、模型组和苦参素低[25 mg/(kg·d)]、中[50 mg/(kg·d)]、高[100 mg/(kg·d)]剂量组,各20只,术后第2天开始腹腔注射给药,疗程7 d。通过苏木精-伊红(HE)染色、末端标记(TUNEL)法分别观察海马CA1区神经元形态及凋亡状况;免疫组织化学(IHC)法检测海马B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达;生化分析海马区氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量;测定海马组织炎症细胞因子含量。[结果]与模型组比较,苦参素中、高剂量组慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元形态结构变化和凋亡状况均明显改善,凋亡指数(AI)显著降低(P0.01),海马区Bcl-2表达上调、Bax表达下调且Bcl-2/Bax比值显著提高(P0.05或P0.01),Caspase-3、NF-κB蛋白表达均显著下调(P0.05或P0.01),抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05或P0.01);炎症细胞因子[白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)]含量均显著降低(P0.05或P0.01)。[结论]苦参素具有抑制慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡的药理学作用,其机制可能与苦参素调节凋亡相关蛋白表达以及提高氧自由基清除能力、抑制炎症反应有关。     

石菖蒲对缺血再灌注脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的 :观察石菖蒲对缺血再灌注脑损伤大鼠神经细胞凋亡影响的有效部位。方法 :提取石菖蒲 (去油水提液、含油水提液、挥发油、β -细辛醚 ) ,灌胃给药 7d ,1次 /d ,观察大鼠脑皮质和海马神经细胞凋亡的情况。结果 :β -细辛醚有明显抑制大鼠脑皮质神经细胞凋亡的作用 ,石菖蒲组分 (含油水提液、挥发油、β -细辛醚 )也有减少大鼠海马神经细胞凋亡的作用。β -细辛醚能抑制大鼠脑皮质和海马神经细胞Bax基因表达。石菖蒲挥发油和 β -细辛醚能增强大鼠脑皮质神经细胞Bcl -X基因的表达。结论 :石菖蒲挥发油尤其是 β -细辛醚有抑制大鼠神经细胞凋亡的作用     

Effect of electroacupuncture on the expression of interlukin-1beta mRNA after transient focal cerebral ischemia

It has been reported that interleukin-1beta (IL-1beta ) play a key role in the pathogenesis of cerebral ischemia. Acupuncture is an effective traditional medical therapy in China. The aim of present study was to evaluate the effect of electroacupuncture (EA) on IL-1beta mRNA expression after middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats. Using in situ hybridization technique, it was found that in the MCAO group the expression of IL-1beta mRNA was significantly increased at 2h, 6h, 12h after reperfusion in cerebral ischemic cortex compared with normal group. In EA+ MCAO group the expression of IL-1beta mRNA was significantly decreased at 2h, 6h and 12h in ischemic cortex compared with MCAO group. The results indicated that EA might decrease the IL-1beta protein expression by reducing the IL-beta mRNA expression in ischemic cortex.