应用cDNA-AFLP研究甘草不同变异类型特异表达的基因

目的:探讨生态环境和遗传背景相同条件下8种不同变异类型甘草在基因表达水平上的差异,旨在揭示甘草种内变异的分子机制.方法:采用cDNA-AFLP、生物信息学等方法,对不同变异类型甘草在生长旺盛期根部组织特异表达的基因进行分析和功能预测;采用反相Northern杂交对特异表达的基因进行验证.结果:共获得14条差异表达基因片段,有6个基因序列编码的蛋白功能未知,其余的基因片段编码的蛋白参与了植物的抗菌,调节生物体内代谢,增加植物的抗热(高温)性,提高植物体固氮能力等生物过程.结论:首次克隆了不同变异类型甘草特异表达的基因,为筛选优良变异类型、品种选育、功能基因组的研究奠定基础.     

不同唐古特大黄变异类型功效组分含量的差异研究

根据植株形态,将同一栽培地的唐古特大黄划分为8种变异类型,研究其游离蒽醌类、结合蒽醌类、双蒽酮类等功效组分的含量差异。研究结果表明,不同变异类型功效组分存在显著差异,其中,从质量分数看,游离蒽醌平均为2.10~6.71mg·g~(-1),结合蒽醌平均为15.43~22.04 mg·g~(-1),番泻苷A+B的平均为32.88~42.36 mg·g~(-1);从单成分含量看,除番泻苷B和大黄素甲醚苷外的10种活性成分也均存在显著性差异。如根据功效组分含量和比例推断,该实验B型和E型样品可以作为潜在的泻下攻积专用药材的种质,G型和H型样品可以作为潜在的清热解毒专用药材的种质,C型和F型样品可以作为潜在的活血化瘀专用药材的种质,A型和D型可以作为潜在的收敛止血专用药材的种质,上述结论为特种用途的大黄优良品种定向培育奠定了基础。     

不同干燥工艺对药用大黄功效组分的影响

目的:确定不同功效型大黄的干燥工艺。方法:采用HPLC分别测定药用大黄中鞣质类、二蒽酮类、游离蒽醌类及结合蒽醌类成分的含量,并用双因素方差分析的方法对结果进行分析。结果:不同干燥工艺条件下,药用大黄中鞣质类、二蒽酮类、游离蒽醌类、结合蒽醌类成分含量差异有统计学意义。以鞣质类含量为指标,根茎最适宜干燥条件为切1 cm厚、60℃干燥,根为切1 cm厚、30℃干燥;以二蒽酮类含量为指标,根茎最适宜干燥条件为切1 cm厚、60℃干燥,根为切5 cm厚、40℃干燥;以游离蒽醌类含量为指标,根茎最适宜干燥条件为切3 cm厚、50℃干燥,根为切3 cm厚、30℃干燥;以结合蒽醌类含量为指标,根茎最适宜干燥条件为切5 cm厚、40℃干燥,根为切5 cm厚、70℃干燥。结论:不同功效组分型大黄的定向加工方式不同,可以通过降低干燥温度或增加切片厚度的干燥工艺,定向加工泻下攻积型大黄;通过提高干燥温度或减小切片厚度的干燥工艺,定向加工出清热泻火型大黄。     

不同采收期对唐古特大黄功效组分含量的影响

目的:对不同采收期唐古特大黄地下部分干质量及其含有的游离型蒽醌、结合型蒽醌、鞣质和二蒽酮4类功效组分的含量测定,分析采收时期对唐古特大黄药材产量及功效组分含量的影响,确定唐古特大黄药材的适宜采收期。方法:HPLC测定唐古特大黄中蒽醌、二蒽酮、鞣质等的14种化学成分的含量,样方法测定唐古特大黄的药材产量,SPSS、Sigma Plot等软件进行分析画图。结果:采收期对唐古特大黄中4类功效组分含量存在显著影响,5月采收的4年生唐古特大黄中游离型蒽醌含量较高;7月采收的6年生唐古特大黄中结合型蒽醌、二蒽酮含量较高;鞣质的含量则在9月采收的4～6年生唐古特大黄中含量较高;从产量看,考虑成本及经济效益,采收年限以11月采收的4～6年生的唐古特大黄较好。结论:本研究通过对不同生长年限和采收月份的唐古特大黄中主要功效组分含量及产量的分析,归纳采收期对唐古特大黄功效组分含量及产量的影响规律,为大黄定向培育技术的建立提供实验依据。     

差异表达基因筛选技术及其在缺血性心脏病中的应用

在后基因组时代,人类基因组计划的工作重点转移到对功能基因的研究,疾病基因组的研究将成为现代医学研究的热点。随着差异基因筛选技术的不断完善,对疾病的发生机制的研究也不断深入。本文以缺血性心脏病为例,概述差异基因筛选技术的发展及其在该病病理机制研究中的应用状况。     

差异表达基因筛选技术及其在缺血性心脏病中的应用

在后基因组时代,人类基因组计划的工作重点转移到对功能基因的研究,疾病基因组的研究将成为现代医学研究的热点。随着差异基因筛选技术的不断完善,对疾病的发生机制的研究也不断深入。本文以缺血性心脏病为例,概述差异基因筛选技术的发展及其在该病病理机制研究中的应用状况。     

应用基因芯片技术研究冠心病秽浊痰阻证差异表达基因及其通路

目的?探索冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）秽浊痰阻证患者差异表达基因及相关信号通路，从分子水平阐明CHD秽浊痰阻证的生物学特点。方法?纳入2015年2月— 2016年3月就诊于新疆医科大学附属中医医院明确诊断为CHD的患者24例，其中秽浊痰阻证组12例、非秽浊痰阻证组12例，另纳入经冠脉造影术排除CHD的12例受试者为对照组。采集外周血并提取总的RNA，通过Human Genome U133 Plus2.0芯片检测获取基因，使用R语言limma软件包筛选差异表达基因，利用STRING构建差异基因编码蛋白互作网络（PPIs），应用Cytoscape插件识别差异表达基因的核心模块，应用Clusterprofiler软件包对差异表达基因进行GO和KEGG功能富集分析。结果?与对照组比较，CHD患者共筛选出184个差异表达基因，其中165个差异基因表达上调，19个差异基因表达下调。CHD秽浊痰阻证组与非秽浊痰阻证组差异表达基因42个，其中34个差异基因表达上调，8个差异基因表达显著下调，GO和KEGG富集分析中，7个模块显著富集了固有免疫调节、固有免疫正向调节、固有免疫的激活和Fc受体信号通路，模块基因参与了MAPK、NF-κB、PI3K/Akt等信号通路、Ⅰ型糖尿病相关通路、C-型凝集素受体信号通路、剪切应力与动脉粥样硬化相关通路等与CHD有密切关联的信号通路。结论?CHD秽浊痰阻证与冠心病非秽浊痰阻证患者存在显著的差异表达基因，这些差异表达基因显著富集在与冠心病相关的多条功能通路中。     

大黄不同功效的古今用药规律分析

基于文本数据挖掘研究,分析归纳大黄不同功效的古今用药规律。将中医方剂数据库中含有大黄的7 226首古方与《中国药典》2015年版和药智网中含有大黄的736条现代中成药处方信息分别进行筛选归纳,统计大黄在方剂中占比、制法、配伍药、功效及所治疾病科属,探究大黄制法用法与功效、疾病科属间的联系。通过数据挖掘发现,除生用内服、最常用于治疗内科疾病外,大黄发挥"泻下攻积、清热泻火"作用时古代常水煎液内服,现多酒炙内服,还用于儿科;"凉血解毒"时古代常贴膏外用或水煎液内服,现多醇提内服,还用于外科;"逐瘀通经"时古方中以酒煎液或酒送服为主,现今以水煎液内服为主,较多用于妇科;"利湿退黄"时古代常水煎液内服,而现代以酒煎液或水酒共煎液居多,还用于儿科。古方中大黄多与甘草配伍而现代与黄芩配伍较多,在"逐瘀通经"中配伍药古方以当归、肉桂、木香为主,现代以芍药和干漆为主。这些研究结果为大黄的临床精准使用与相关药物创制提供了参考。     

冠心病心阳虚证相关差异表达基因分析

目的　通过基因表达谱分析冠心病心阳虚证的差异表达基因 ,探寻心阳虚证的特征性基因表达谱。方法　筛选出符合西医冠心病和中医心阳虚证诊断标准的患者 5例 ,选择同年龄段正常人 5例 ,分别取外周血 ,提取总RNA ,作基因芯片。 5例患者中经温阳通痹法治疗显效的典型病例 1例 ,治疗前后分别取外周血 ,提取总RNA ,作基因芯片。结果　患者与正常人的基因芯片差异表达谱与典型病例患者治疗前后的基因芯片差异表达谱中有 39条基因差异表达一致。结论　此 39条基因的差异表达可能是冠心病心阳虚证发生的分子生物学基础 ,对基因功能的分析 ,部分阐释了冠心病心阳虚证的病理机制。     

中药大黄在临床应用中的新功效

目的探讨中药大黄在临床应用中的新功效。方法对大黄的功效进行分析,并从中分析大黄的新功效。结果大黄在临床上的新功效表现为治疗蛔虫性肠梗阻、肠胀气、清洁肠道、急性胆囊炎、胆道出血等。结论大黄在临床应用中的新功效对于患者的疾病治疗具有重要意义,值得在临床推广应用。     

双龙方有效成分诱导干细胞分化过程中差异表达基因的筛选和聚类分析

目的:利用基因芯片筛选双龙方主要成分（人参皂苷Rb1,丹参酚酸B）诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化过程中的差异表达基因,并对差异表达基因进行聚类分析,研究双龙方主要有效成分对大鼠MSCs增殖及分化的影响。方法:用含5705条大鼠基因的博奥大鼠全基因组Oligo芯片,以不同给药情况、不同时间点的细胞总RNA制备的探针杂交芯片,用 LuxScan10KA双通道激光扫描仪（CapitalBio公司）进行扫描,筛选MSCs变化过程中的差异表达基因并进行生物信息分析,hierarchical聚类提取差异表达的特征基因。结果:在MSCs的分化过程中,筛选出128条（2.24%）差异表达基因,经分析发现它们与能量代谢,信号传导等多类基因密切相关,对样本进行聚类发现MSCs在20-30天之间发生了显著的改变。结论:基因芯片是研究中药作用机理的有效平台, 双龙方主要成分可诱导MSCs向心肌样细胞分化。     

双龙方有效成分诱导干细胞分化过程中差异表达基因的筛选和聚类分析

目的：利用基因芯片筛选双龙方主要成分（人参皂苷Rbl，丹参酚酸B）诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化过程中的差异表达基因，并对差异表达基因进行聚类分析，研究双龙方主要有效成分对大鼠MSCs增殖及分化的影响。方法：用含5705条大鼠基因的博奥大鼠全基因组Oligo芯片，以不同给药情况、不同时间点的细胞总RNA制备的探针杂交芯片，用LuxScan10KA双通道激光扫描仪（CapitalBio公司）进行扫描，筛选MSCs变化过程中的差异表达基因并进行生物信息分析，hierarchical聚类提取差异表达的特征基因。结果：在MSCs的分化过程中，筛选出128条（2．24％）差异表达基因，经分析发现它们与能量代谢，信号传导等多类基因密切相关，对样本进行聚类发现MSCs在20-30天之间发生了显著的改变。结论：基因芯片是研究中药作用机理的有效平台，双龙方主要成分可诱导MSCs向心肌样细胞分化。     

老龄冠心病心肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的:采用双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证基因表达水平的异常。方法:采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者6名和同龄健康对照者6名,采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果:经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证与健康对照者比较,获得44条差异表达基因,主要涉及脂代谢、免疫、心血管病变的基因。结论:老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和脂代谢紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

老龄肾阳虚证差异表达基因的筛选与鉴定

目的:筛选并鉴定与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。方法:从前期基因表达谱芯片初步获得的差异表达基因中筛选出25个基因,选取18例肾阳虚证患者和6例正常对照者,采用半定量RT-PCR检测其血液中这25个基因的表达情况,从中鉴定出与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。结果:有8个基因在18例老龄肾阳虚证患者和6例正常人间的表达水平存在明显差异,这8个基因主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫。结论:老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂过程,推测肾阳虚可能与肿瘤的发生存在某种程度的关联。     

用基因芯片筛选针刺衰老大鼠涌泉穴的318个差异基因初报

目的：应用基因芯片研究针刺涌泉穴对D－半乳糖所致衰老大鼠基因表达的影响。方法：将成年健康大鼠机分为模型组与针刺组，两组每日皮下注射10％D－半乳糖0.5ml造模，造模的同时针刺组予以针刺涌泉穴，7周后处死，并摘取肝脏提取mRNA，作逆转录为cDNA以备检测，随机选用2305条大鼠cDNA制备成表达谱芯片，用Cy3和Cy5两种荧光物质分别标记两组大鼠肝组织的cDNA，制备成探针与表达谱芯片进行杂交，通过计算机扫描后进行数据分析，初步筛选出了差异表达基因318条，其中表达上调的有137条，表达下调的有181条，并对其中差异最为显著的55条作了初步分析。结果：针刺涌泉穴对衰老大的基因表达的影响涉及免疫、生长发育，基础代谢和细胞骨架运动等多个方面，这从基因水平明显了针刺治疗是一整体调节作用。结论：应用基因芯片技术能够同时半定量的研究数千条基因的表达状态，可以从微观基因水平研究针刺的整体机理，并判定其分子疗效，进而提高中医的科研水平。     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

骨关节炎肾阳虚证信号转导差异表达基因分析

目的:以基因芯片技术从差异基因表达角度分析骨关节炎肾阳虚证与信号转导相关差异表达基因。方法:先后筛选出符合西医膝骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者两组,每组8例,与8例正常对照组比较。两组病人均取血、提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,分别混合与对照组杂交作两张基因芯片,最后对数据进行信息挖掘。结果:两张芯片各获得162和75条差异表达基因,其中与信号转导相关的分别为26条和11条;两张芯片共同差异表达基因6条,与信号相关的有3条,占总数的1/2。提示:信号转导是生命活动的一种最基本和最重要的方式。细胞间信号转导异常可能在肾阳虚证骨关节炎的发生、发展过程中起着重要作用。     

冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化状态的初步研究

目的 探讨冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化的情况.方法 以家系冠心病血瘀证患者14例为观察对象,家系健康人7例为对照,采用表达谱芯片检测冠心病血瘀证差异表达基因.再收集冠心病血瘀证患者16例和健康人7例,选择其中2个差异基因进行启动子区甲基化特异性PCR(MS-PCR)研究,初步分析冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化状态.结果 表达谱芯片结果通过倍数变化值(FC)＞3或FC＜1/3、Call=P筛选,共获取差异表达基因26个,选择KLF5和LRP12基因进行MS-PCR,冠心病血瘀证与健康人各启动子甲基化率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 冠心病血瘀证差异基因KLF5和LRP12的启动子甲基化状态和健康人比较无明显区别.     

心经经脉与心脏相关的差异表达基因的研究

目的:从基因差异表达方面探讨心经与心脏相关的特异性基础。方法:复制大鼠急性心肌缺血模型,分别电针心经“神门”至“通里”段、小肠经“养老”至“支正”段、肺经“太渊”至“列缺”段。刺激电压5V,频率2Hz,波宽300μs,正负向交替方波,每次电刺激20min,1次/d,共3次。取缺血心肌组织,采用大鼠全基因U230序列芯片进行芯片检测,大规模筛选差异表达基因。结果:与模型组比较,差异表达2倍以上的基因,电针心经组有20个上调70个下调;电针小肠经组有18个上调26个下调;电针肺经组有14个上调20个下调,且3组之间鲜有相同的基因表达。结论:经脉脏腑相关具有确实的分子基础,电针心经、小肠经、肺经具有相对特异性作用途径。