血清药物化学和血清药理学相结合的方法探讨麻黄附子细辛汤抗炎和免疫抑制的物质基础

利用中药血清药物化学及血清药理学相结合的方法探讨麻黄附子细辛汤抗炎和免疫抑制的物质基础。通过比较麻黄附子细辛汤、给药后含药血清和空白血清的LC-MS/MS图谱,寻找麻黄附子细辛汤的入血成分; ELISA法测定各时间点含药血清对抗原刺激RBL-2H3细胞释放组胺、氨基己糖苷酶的影响;MTT法测定各时间点含药血清对脂多糖诱导小鼠脾细胞增殖的影响;采用逐步回归的方法对麻黄附子细辛汤的各成分与药理指标进行相关性分析。结果显示,灌胃给予麻黄附子细辛汤后,从大鼠血清中发现32个成分,其中27个原型成分(10个来自麻黄,13个来自附子,4个来自细辛),其他5个未知成分。与空白血清相比,麻黄附子细辛汤各时间点含药血清均能降低抗原诱导RBL-2H3细胞释放组胺(P<0.05);除麻黄附子细辛汤4 h含药血清外,其余各时间点含药血清均能抑制抗原诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒(P<0.05);麻黄附子细辛汤15,30 min含药血清能显著抑制脂多糖诱导的小鼠脾细胞增殖(P<0.05)。血中移行成分的化学数据和药理指标组胺释放量、β-氨基己糖苷酶释放率以及脾细胞增殖抑制率进行回归分析,推测甲基伪麻黄碱、伪麻黄碱与抗原诱导RBL-2H3肥大细胞释放组胺密切相关;伪麻黄碱、次乌头原碱、甲基伪麻黄碱与抗原诱导RBL-2H3细胞释放β-氨基己糖苷酶密切相关;苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、14-苯甲酰-10-羟基-中乌头原碱、新乌头原碱与脂多糖诱导小鼠脾细胞增殖抑制密切相关。由此可见,甲基伪麻黄碱、伪麻黄碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头原碱等成分可能为麻黄附子细辛汤抗炎和免疫抑制的部分物质基础。     

穿山龙总皂苷含药血清对小鼠脾淋巴细胞增殖及IL-6产生影响的实验研究

目的：用血清药理学方法研究穿山龙总皂苷对小鼠脾淋巴细胞增殖及其分泌IL-6的影响，探讨其可能的作用机制。方法：用MTT法测定不同浓度穿山龙舍药血清（分别在培养系中加入20％，10％，5％合药血清）时LPS诱导的脾淋巴细胞增殖的影响；用双抗体夹心ELISA法测定不同浓度穿山龙总皂苷含药血清对LPs诱导的脾淋巴细胞分泌IL-6的影响。结果：20％和10％穿山龙总皂苷含药血清可抑制LPS诱导的脾淋巴细胞增殖．20％穿山龙总皂苷含药血清可抑制LPS诱导的脾淋巴细胞分泌IL-6。结论：穿山龙总皂苷含药血清可抑制LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖及IL-6的产生．可能是其免疫抑制作用的机制之一．     

清开灵注射液对人血清补体和RBL-2 H3细胞影响的体外研究

目的 体外研究清开灵注射液对人血清补体和RBL-2 H3细胞的影响.方法 采用ELISA法检测清开灵注射液对人血清补体末端复合物SC5 b-9含量的影响.将不同批号、不同浓度的清开灵注射液与RBL-2 H3细胞共孵育,作用45min后,显微镜下观察细胞脱颗粒,显色法测定β-氨基己糖苷酶释放度和ELISA法测定组胺释放量.结果 清开灵注射液能使人血清中SC5 b-9含量降低,与PBS组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);能刺激RBL-2 H3细胞释放组胺和β-氨基己糖苷酶,与阴性组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 清开灵注射液不能引起补体系统激活,可以直接刺激肥大细胞脱颗粒释放组胺和β-氨基己糖苷酶.其在临床引起的不良反应可能为非补体激活相关的类过敏反应.     

灵芝酸G对FcεRIα~+肥大细胞的活性影响

目的研究灵芝酸G诱导小鼠肥大细胞活化及细胞因子分泌。方法流式细胞仪检测细胞表面CD117+FcεRIα+分子的表达;比色法测定小鼠肥大细胞β-氨基己糖苷酶释放,OPT法检测组胺释放。ELISA法检测IL-10和TNF-α的分泌。结果灵芝酸G能诱导小鼠肥大细胞97.18%的CD117+FcεRIα+分子表达;体外实验显示2μg/ml灵芝酸G可以诱导小鼠肥大细胞组胺释放率为72.0%,β-氨基己糖苷酶释放率为32.2%,并分泌IL-6和TNF-α。结论灵芝酸G能诱导小鼠肥大细胞脱颗粒并分泌细胞因子,同时抑制炎性反应。     

穿山龙总皂苷对大鼠T淋巴细胞功能影响的血清药理学研究

目的用血清药理学方法研究穿山龙总皂苷对大鼠脾淋巴细胞增殖及其分泌IL-2的影响,探讨其可能的作用机理。方法用MTT法测定不同浓度穿山龙含药血清(分别在培养系中加入20%,10%,5%含药血清)对Con A诱导脾淋巴细胞增殖的影响;用双抗体夹心ELISA法测定不同浓度穿山龙总苷含药血清对Con A诱导脾淋巴细胞分泌IL-2影响。结果20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的脾淋巴细胞增殖(P<0.01,P<0.05),20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的脾淋巴细胞分泌IL-2(P<0.01,P<0.05)。结论穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖及IL-2的产生。     

清开灵注射液诱导嗜碱性粒细胞脱颗粒致类过敏反应作用研究

目的:观察清开灵注射液诱导大鼠嗜碱性粒细胞白血病细胞株RBL-2H3细胞脱颗粒,释放组胺,探讨其诱发类过敏反应的可能机制。方法:清开灵注射液孵育RBL-2H3细胞30 min后,透射电镜观察细胞发生脱颗粒反应形态学变化,阿利新蓝染色试验、Annexin V结合试验、β-氨基己糖苷酶测定试验检测细胞脱颗粒率,ELISA检测细胞组胺释放率。结果:不同浓度清开灵注射液可诱导细胞发生典型的脱颗粒反应形态学变化,与对照组相比脱颗粒率及组胺释放率显著升高,且具有浓度依赖性。结论:清开灵注射液单次给药即可诱导RBL-2H3细胞脱颗粒,释放组胺,诱发类过敏反应,这可能是其临床首次用药即引起严重不良反应的机制之一。     

绿原酸对RBL-2H3细胞脱颗粒作用的研究

目的:通过比较绿原酸和绿原酸完全抗原对未致敏和致敏RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,探讨绿原酸的致敏性及其作用机制,为进一步正确评价绿原酸在中药注射剂不良反应中地位和临床合理用药提供一定的参考.方法:采用未致敏RBL-2H3细胞和致敏RBL-2H3细胞模型,观察绿原酸和绿原酸完全抗原对肥大细胞脱颗粒的影响.比色法检测过敏介质组胺和β-氨基己糖苷酶的释放,中性红染色法进行形态学观察,流式细胞法检测 Annexin V阳性细胞率.结果:绿原酸和绿原酸完全抗原直接刺激RBL-2H3细胞并未引起肥大细胞发生脱颗粒反应;将RBL-2H3细胞与绿原酸或双黄连致敏血清共孵育致敏后,绿原酸完全抗原再次作用于细胞,可引起细胞组胺释放率、β-氨基己糖苷酶释放率、Annexin V阳性细胞率和中性红染色脱颗粒细胞率均明显增加.结论:绿原酸作为小分子物质,以半抗原形式存在,本身不具有致敏性,但它能与血清蛋白结合形成复合物而产生免疫原性,从而引起过敏反应.绿原酸作为双黄连注射剂的一种有效成分,同时也是双黄连注射剂引起变态反应的一种致敏原.     

川椒方含药血清对大鼠嗜碱性白血病细胞脱颗粒的影响

目的探讨川椒方治疗变态反应性结膜炎的可能作用机制。方法 SD大鼠20只,随机分为川椒方低、中、高剂量含药血清组和空白血清组,每组5只。川椒方低、中、高含药血清组分别以含川椒方生药0.334、0.668、1.336 g/ml的水煎剂20 ml/kg灌胃,空白血清组给予相同剂量的生理盐水灌胃,每日2次,连续给药3日,制备SD大鼠含药血清。筛选不同浓度含药血清对大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3)的最佳作用浓度,并筛选含药血清最佳作用时间。实验再分为模型组、川椒方治疗高、中、低剂量组、酪氨酸激酶抑制剂(PP2)治疗组、对照组。川椒方高、中、低剂量含药血清组按筛选所得浓度和作用时间每孔分别给予含药血清40μl;PP2治疗组于加抗原前30 min给予终浓度为1μM的PP2 40μl;对照组于加抗原前2 h给予10%空白血清40μl,酶联免疫吸附(ELISA)法检测β-氨基己糖苷酶释放率。结果川椒方浓度为10%时细胞活力较好,故本实验选择了10%浓度血清作为实验浓度。川椒方高、中剂量组含药血清作用120 min时,释放量最少(P0.01),故选用120 min作为作用时间。与正常组比较,模型组和对照组β-氨基己糖苷酶释放率升高明显(P0.01);川椒方各剂量组及PP2治疗组β-氨基己糖苷酶释放率下降(P0.01)。结论川椒方治疗变态反应性结膜炎的作用机制可能与抑制肥大细胞脱颗粒有关。     

二至丸有效部位群促进T淋巴细胞免疫活性的实验研究

目的考察二至丸有效部位群(女贞子总皂苷、女贞子多糖、墨旱莲总黄酮)促进小鼠T淋巴细胞免疫活性作用的机制。方法环磷酰胺致小鼠免疫力低下,灌胃给药,制备含药血清、细胞悬液和脾总RNA,中性红法测定腹腔巨噬细胞的吞噬能力,MTT法测定脾淋巴细胞的增殖能力,胸腺细胞增殖法和ELISA法测定腹腔巨噬细胞分泌IL-1的水平、脾淋巴细胞分泌IL-2、IL-12的水平,RT-PCR法检测IL-1、IL-2和IL-12 mRNA的表达。结果免疫力低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力、脾淋巴细胞的增殖能力,以及IL-1、IL-2和IL-12的水平,均较正常小鼠明显下降,三种细胞因子的表达也受到抑制,经该方治疗后,上述检测指标均有不同程度的提高。结论该方对免疫失衡机体的保护作用与其改善T淋巴细胞因子的活性水平及其mRNA的表达水平有关。     

蝉翼藤对小鼠脾细胞体外增殖和淋巴因子分泌水平的影响

目的探讨蝉翼藤醇提取物对小鼠淋巴细胞体外增殖和分泌白细胞介素-2(IL-2)与肿瘤坏死因子β(TNF-β)的影响。方法向小鼠脾细胞加入刀豆蛋白(ConA)和蝉翼藤醇提取物进行培养,以MTT法检测淋巴细胞增殖反应,用ELISA法测定IL-2和TNF-β分泌水平。结果蝉翼藤醇提取物能增强ConA诱导的小鼠脾细胞的体外增殖和分泌IL-2和TNF-β的水平。结论蝉翼藤醇提取物对小鼠淋巴细胞活性有增强作用。     

草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响

目的：研究草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响。方法：以凝血酶时间(TT)为指标，用添加法比较不同浓度草酸铵对僵蚕提取液和凝胶分离液抗凝作用的影响。结果：添加草酸铵浓度在1．8～21．3mg／ml范围内，对固形物含量15．8～31．6mg／ml的提取液和14．6～29．1mg／ml的凝胶分离液的TT值增加成正相关。结论：草酸铵对僵蚕提取液、凝胶分离样品的抗凝作用均有增强作用，随提取液浓度降低影响增大，而随凝胶分离液浓度增大影响增大。     

蛇床子素抗凝血作用

目的：研究蛇床子素的抗凝血作用。方法：通过测定小鼠凝血时间（CT）、大鼠的凝血酶原时间（PT）和优球蛋白溶解时间（ELT），观测蛇床子素的抗凝作用。结果：蛇床子素能显著处长CT、PT，缩短ELT。结论：蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

苯唑青霉素对丁胺卡那毒素药动学的影响

 采用微量微生物法对丁胺卡那霉素（AMK）单用及AMK与苯唑青霉素（OXA）合用后，兔体内AMK血药浓度进行测定；药时数据用MCPKP软件经IBM计算机处理，并对两组药动学参数进行了统计学处理，结果表明OXA对AMK的药动学有显著的影响。     

蛇床子素抗凝血作用

目的:研究蛇床子素的抗凝血作用。方法:通过测定小鼠凝血时间(CT)、大鼠的凝血酶原时间(PT)和优球蛋白溶解时间(ELT),观测蛇床子素的抗凝作用。结果:蛇床子素能显著处长CT、PT,缩短ELT。结论:蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

基于细胞自噬探讨左归丸对肾虚仔鼠皮肤发育的影响

目的:研究左归丸对先天肾虚仔鼠发育过程中皮肤内细胞自噬的影响及其机制,探索补肾填精法在生长发育异常中的应用价值。方法:36只雌雄比例为2∶1的大鼠进行配对,复合应激法刺激孕鼠构建先天肾虚仔鼠模型,根据将孕鼠处理方式不同,分为正常组,肾虚组,左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg^-1)。正常组不造模给予生理盐水灌胃,肾虚组造模给予生理盐水灌胃,左归丸低、高剂量组造模给予左归丸悬浊液灌胃。切取出生后21 d仔鼠的背部皮肤,苏木素-伊红(HE)染色观察仔鼠皮肤显微结构形态,测量真皮层和表皮层厚度,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测仔鼠皮肤分泌型糖蛋白3a(Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)mRNA和蛋白表达量,免疫双荧光检测皮肤内自噬指标微管相关蛋白轻链3(LC3)和人死骨片1-泛素结合蛋白p62(SQSTM1-p62)的表达。结果:正常组仔鼠皮肤层次清楚,结构正常,肾虚组真皮层胶原排列疏松,左归丸低、高剂量组皮肤组成基本正常;与正常组比较,肾虚组仔鼠在皮肤的表皮层增厚,真皮层变薄(P<0.05);与肾虚组比较,左归丸低、高剂量组皮肤的表皮层和真皮层厚度的改变明显恢复(P<0.05)。与正常组比较,肾虚组仔鼠Wnt3a和β-catenin蛋白和mRNA表达明显下降(P<0.05);与肾虚组比较,左归丸低、高剂量组Wnt3a和β-catenin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05)。同时免疫荧光法检测发现与正常组比较,肾虚组的LC3的表达上调,SQSTM1-p62表达下调;与肾虚组比较,左归丸可以逆转SQSTM1-p62和LC3的异常表达(P<0.05)。结论:左归丸可以通过增加仔鼠皮肤内Wnt3a和β-catenin蛋白和mRNA的表达,下调皮肤细胞自噬水平,改善先天肾虚仔鼠皮肤异常发育。     

中医药治疗黄褐斑现状

综述了1995－2001年中药内治、外治疗法及针灸治疗黄褐斑的特色和优势。     

"软系"疗法的中医探讨

从中医角度探讨“软系”疗法的科学性,探求“软系”疗法疗效显著的原因。     

辨证施护对精神病患者服药依从性的影响研究

目的:探究并分析辨证施护对精神病患者服药依从性的影响。方法:选取自2008年3月—2012年3月收治的精神病患者160例,将其作为临床研究对象,随机分为观察组和对照组,每组80例。两组患者均继续接受抗精神病药物治疗,对照组患者同时采取一般健康教育及心理护理,观察组根据不同证候进行辨证施护。观察两组患者治疗后的服药依从性及病情评价情况。结果:观察组患者治疗后6个月、12个月服药完全依从率分别为72.50%、68.75%,均明显高于治疗前的完全依从率26.25%,且较对照组治疗后的完全依从率高;治疗后6个月、12个月,两组患者的BPRS及PANSS评分均较治疗前明显改善,且观察组患者病情改善情况优于对照组,评分均明显低于较对照组,具有统计学意义(P<0.05)。结论:辨证施护对精神病患者服药依从性具有很好的提高疗效,明显提高患者的生活质量及不良行为的发生,值得在临床上广泛应用。     

腧穴热敏化艾灸疗法治疗压疮的疗效观察

目的:观察腧穴热敏化艾灸对压疮患者的治疗护理效果。方法:对Ⅰ、Ⅱ期压疮患者治疗组采用腧穴热敏化艾灸治疗,每次灸至感传现象消失,每日1次。对照组不避热敏化穴,在患者压疮部位附近穴区采用红外线照射40min后,将百多邦软膏敷于压疮疮面,以无菌纱布覆盖,每日1次。两组同时加强专科护理措施,并在疗程(包括不足7d痊愈者)结束后统计疗效。结果:治疗组和对照组有效率分别为100%、72.4%。二者有显著差异(P<0.05)。结论:腧穴热敏化艾灸疗法对压疮患者疗效明显,值得推广应用。     

大黄素对急性胰腺炎胰腺组织TGFβ1表达的影响

目的通过分析中药大黄素对大鼠急性胰腺炎治疗前后胰腺组织细胞转化因子β1(TGFβ1)的表达、DNA合成及总蛋白含量的影响，从胰腺再生角度探讨大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制。方法以雨蛙肽(caerulein)腹腔注射诱导大鼠急性胰腺炎模型，并于大黄素治疗前后6、24、48、72及96h处死大鼠。同时应用RT-PCR技术检测治疗前后胰腺组织TGFβ1mRNA表达，同位素体外掺入法测定胰腺组织DNA合成以及Lowry′s法测定胰腺组织总蛋白含量。结果大黄素治疗后血清淀粉酶显著下降。正常胰腺组织、胰腺炎诱导后6h未见TGFβ1mRNA表达。TGFβ124h后出现表达，72h时达高峰。大黄素治疗后6h即可检测到TGFβ1mRNA表达，且24、48h时表达均较非治疗组显著增强，并于48h时达最大值。同时胰腺炎诱导后72h，胰腺组织DNA合成显著下降，大黄素治疗后96hDNA合成明显增加，胰腺炎诱导后48h胰腺组织总蛋白含量下降，大黄素治疗后96h显著增加。结论大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制可能是通过诱导细胞因子TGFβ1基因表达增强，调控细胞增殖和分化，刺激多种细胞外基质成分合成，增加胰组织DNA合成和蛋白含量，参与胰腺细胞修复、再塑过程。