中药还精方对人类精子顶体反应的影响

目的:观察中药还精方对人类精子顶体反应(AR)的影响。方法:通过人精子与含药血清共同培养,采用双重染色法(double-staining)检测精子的AR发生率。结果:含药血清组中人类精子顶体反应发生率有明显增加,且随剂量的增加而逐渐增加,高剂量组最为明显(P<0.05),呈现出一定的量效关系。与空白组、不含药血清组相比较P<0.001,有非常显著性差异。结论:在人类精子获能条件下,适当浓度的中药还精方可较大幅度提高顶体反应发生率,具有提高人类精子受精能力的作用。     

生精方对人精子运动能力影响的研究

目的研究生精方含药血清体对人精子运动能力和受精能力的影响。方法通过人精子与生精方含药血清共培养,观察生精方对人精子运动能力(精子运动CASA分析)、精子爬高试验的影响。结果含药血清加入共培养可显著提高人精子运动速度(精子运动路径速度(VAP)、精子轨迹速度(VCL)、精子前向运动速度(VSL,P均<0.01)、精子头部侧置振幅(ALH)和鞭毛摆动频率(BCF)及前向运动精子密度(P均<0.05)),提高精子爬高试验(P<0.01)。结论生精方具有提高人精子离体质量的作用。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨固本解毒方含药血清对肺癌A549细胞EMT的影响

目的 观察固本解毒方对肺癌A549细胞上皮间质转化（EMT）的影响,从磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路探讨其作用机制。方法 制备固本解毒方含药血清,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率并筛选固本解毒方浓度用于后续实验。分为空白组、固本解毒方组（2.5%、5%、10%含药血清）、PI3K/Akt通路激活剂（SC79）组、固本解毒方+SC79组。划痕实验检测细胞迁移力,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化（p）-Akt、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、p-GSK-3β蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测N-cadherin、Vimentin mRNA表达。结果 与空白组比较,固本解毒方组含药血清（2.5%、5%、10%、20%、40%）A549细胞活力降低（P<0.05）,选择固本解毒方含药血清10%、5%、2.5%作为高、中、低浓度进行后续实验。与空白组比较,固本解毒方组A549细胞迁移力降低。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,固本解毒方组A549细胞N-cadherin、Vimentin mRNA表达显著降低（P<0.01）。Western blot结果显示,与空白组比较,固本解毒方组（含药血清5%、10%）A549细胞E-cadherin蛋白表达显著升高（P<0.01）,固本解毒方组N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达显著降低（P<0.01）,p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。与SC79组比较,固本解毒方组（含药血清10%）E-cadherin蛋白表达显著升高（P<0.01）,N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3β、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β表达显著降低（P<0.01）。与固本解毒方组（含药血清10%）比较,固本解毒方+SC79组（含药血清10%）E-cadherin蛋白表达显著降低（P<0.01）,N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3β、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达显著升高（P<0.01）。结论 固本解毒方可抑制肺癌A549细胞迁移和EMT,其机制与调控PI3K/Akt信号通路有关。     

补肾通络方对衰老大鼠血清T水平及Leydig细胞数目的影响

目的:观察补肾通络方对雄激素部分缺乏大鼠血清睾酮(T)水平及睾丸问质(Leydig)细胞数目的影响.方法:采用自然衰老大鼠模型,补肾通络方低、中、高剂量组干预模型大鼠,放免法检测各组大鼠T、黄体生成素(LH)的变化;HE染色观察Leydig数目变化;免疫组化法观察Leydig细胞StAR阳性表达.结果:补肾通络方干预后能提高自然衰模型大鼠T水平(P＜0.05),对LH影响不明显(P＞0.05).补肾通络方高、中剂量组能增加雄激素部分缺乏大鼠Leydig细胞数目(P＜0.05).结论:补肾通络方能提高模型大鼠血清T水平,增加Leydig细胞数目是其作用机制之一.     

柔肝方含药血清对TGF-β1 诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白的影响及其机制

目的:研究柔肝方含药血清对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的影响及其作用机制。方法:30只SD大鼠,随机分成正常组、柔肝方低剂量(9 g·kg-1)给药3 d及5 d组、柔肝方高剂量(18 g·kg-1)给药3 d及5 d组,每组6只,按10 m L·kg-1·d-1灌服饮用水或柔肝方药液,制备含药血清。用含10%正常血清或含药血清的DMEM培养基体外培养LX-2人肝星状细胞株,MTT法检测细胞增殖;LX-2细胞经含10%正常血清或含药血清的培养基预处理24 h,再予TGF-β1(终质量浓度10μg·L-1)刺激24 h,收集细胞,RT-PCR法检测OPN mRNA表达,Western blot法检测OPN及磷酸化蛋白激酶B(p-protein kinase B,p-PKB)蛋白表达。结果:与正常组比较,各含药血清组均能抑制LX-2细胞增殖(P0.05,P0.01);予含药血清预处理再经TGF-β1刺激的细胞,与正常组细胞比较,OPN mRNA,OPN和p-PKB蛋白表达明显下调(P0.05,P0.01)。结论:柔肝方含药血清对TGF-β1诱导的人肝星状细胞表达OPN具有抑制作用,其机制可能与抑制PI3K/PKB信号通路活化有关。     

补肾益元方对运动性低血睾酮大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成酶的影响

目的探索补肾益元方对运动性低血睾酮大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成酶的影响。方法采用逐级递增负荷跑台方案建立运动性低血睾酮大鼠模型,40只大鼠随机分为空白组、模型组、淫羊藿提取物组(0.70 g/kg)及补肾益元方低、高剂量组(0.35、0.70 g/kg),每组8只。透射电镜观察大鼠睾丸超微结构,Western blot检测睾丸Leydig细胞中胆固醇合成限速酶(HMG-CoA还原酶、LDL-R、SR-BI)、睾酮合成限速酶(CYP11A1、StAR)蛋白表达。结果补肾益元方组大鼠在透镜下可见Leydig细胞个别线粒体轻度肿胀,内质网扩张不明显,血清睾酮值,睾丸Leydig细胞HMG-CoA还原酶及StAR、CYP11A1蛋白表达较模型组显著升高(P0.01),但LDL-R、SR-BI蛋白表达无显著变化(P0.05)。结论补肾益元方可能通过运动性低血睾酮大鼠睾丸Leydig细胞内胆固醇和睾酮、合成相关酶来影响其血睾酮浓度。     

狼疮方含药血清对人近端肾小管上皮细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达及CD40、RANTES的影响

目的观察狼疮方含药血清对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及干扰素(INFγ)和肿瘤坏死因子(TNFα)诱导的白细胞分化抗原40(CD40)、受激活调节的正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)表达的影响,探讨该复方体外抗炎效应及其可能机制.方法制备狼疮方含药大鼠血清;HK-2细胞株体外培养,分组如下(1)培养基对照组;(2)正常鼠血清对照组;(3)狼疮方含药血清组;(4)IFNγ TNFα刺激组;(3)刺激 10%狼疮方血清组;(4)刺激 10%正常鼠血清对照组.采用免疫印迹(Westem-blot)检测PPARγ蛋白表达,半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测CD40 mRNA、RANTES mRNA表达水平.结果(1)正常HK-2细胞基础量表达PPARγ;10%狼疮方含药血清作用下,PPARγ蛋白表达呈现时间依赖性先增高后降低的趋势.(2)正常HK-2细胞基础水平表达CD40、RANTES.IFNγ TNFα刺激后,CD40和RANTES表达显著升高;10%狼疮方含药血清可显著抑制IFNT TNFα诱导的CD40和RANTES表达;正常鼠对照血清对CD40和RANTES表达无明显影响.结论狼疮方含药血清可能通过激活PPARγ途径抑制人近端肾小管上皮细胞CD40和RANTES表达,从而发挥抗炎效应.     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA基因表达的影响

目的 探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法测定各组HELF TGF-β1表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组TGF-β1下降至1/3,清肺口服液含药血清组可显著升高TGF-β1水平至RSV感染细胞的2倍.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞TGF-β1 mRNA表达水平显著下降;清肺口服液可调节TGF-β1 mRNA表达,减缓RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

首乌还精胶囊含药血清对人类精子运动能力和受精能力的影响

目的　探讨首乌还精胶囊对人精子功能的影响 ,阐明其治疗男性不育症的作用机制。方法　通过人精子与首乌还精胶囊含药血清共培养 ,分析首乌还精胶囊对人精子运动速度、活力指数、毛细管穿透试验、精子低渗肿胀试验和穿透去透明带仓鼠卵能力的影响。结果　首乌还精胶囊含药血清对精子的运动能力和膜功能有促进作用。含药血清加入培养可显著提高卵子受精率、受精指数。结论　首乌还精胶囊具有提高人精子运动能力和受精能力的作用。     

精杞胶囊对大鼠生精功能损伤的保护作用

目的探讨精杞胶囊(蛹虫草、熟地、枸杞子,等)对环磷酰胺诱导大鼠生精功能损伤的保护作用。方法精杞组和丙酸睾酮组先期给药2周后,除正常组外,均腹腔注射环磷酰胺25 mg/(kg·d)连续造模5 d,与此同时精杞组和丙酸睾酮组延续给药,造模结束后次日处死全部动物。放射性免疫法检测血清睾酮含有量;称取大鼠体质量、睾丸、附睾、前列腺质量,计算脏器指数;HE染色观察大鼠睾丸组织形态;CASA仪检测精子密度与精子活率;TUNEL检测细胞凋亡。结果精杞组与模型组比较,血清睾酮含有量升高;睾丸、附睾、前列腺脏器指数增加;生精上皮损伤减轻,各级生精细胞数量增多;精子密度与精子活率增高;TUNEL显示细胞凋亡率降低。结论精杞胶囊对环磷酰胺所致大鼠生精功能损伤有保护作用。