补肾活血方对Wnt/β-catenin信号通路介导的人滑膜细胞与正常软骨细胞共培养体系的调控作用

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制。方法:构建β-catenin过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,Transwell小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞模拟滑膜软骨关节体系内环境;各时间点不同浓度药物干预共培养体系,Western bolt方法检测补肾活血方对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;ELISA方法检测补肾活血方对共培养体系中滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7),人Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅱ),软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响。结果:Western blot检测发现β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞后滑膜细胞胞浆及胞核中β-catenin表达明显上调(P0.01),补肾活血方能够明显下调共培养滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达(P0.01);同时,ELISA法检测发现补肾活血方能够明显下调滑膜细胞与软骨细胞培养上清液中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达(P0.01)。结论:β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Wnt/β-catenin信号通路激活后共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的水平明显上升;补肾活血方可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达,减轻异常滑膜细胞对软骨细胞的损害,减缓软骨基质的降解,有利于骨关节炎的缓解和恢复。     

补肾活血“对药”对兔膝骨关节炎模型基质金属蛋白酶-3及其组织抑制剂-1的影响

目的通过观察补肾活血各＂对药＂组分对兔膝骨关节炎模型软骨、滑膜基质金属蛋白酶-3（MMP-3）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的影响,筛选出对骨关节炎作用靶点明确的治疗药物。方法将48只兔随机分为空白对照组、模型组、补肾对药组、活血对药组、补肾活血对药组和补肾活血药物组,每组8只。除正常组外,余均以1.6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液关节腔注射造成日本大耳白兔膝骨关节炎模型。各药物组经相应药物治疗6周后,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法观察各组兔膝关节软骨和滑膜MMP-3、TIMP-1的mRNA表达情况,并进行统计学分析。结果软骨MMP-3检测结果,模型组显著高于其他各组（P〈0.01）,仅活血对药组与正常组存在差异（P〈0.01）;TIMP-1检测结果,补肾活血对药组显著高于模型组（P〈0.05）,补肾对药组、补肾活血药物组显著高于模型组（P〈0.01）;滑膜MMP-3检测结果,模型组显著高于其他各组（P〈0.01）,与补肾对药和活血对药组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;滑膜TIMP-1检测结果,空白对照组显著低于模型组和各给药组（P〈0.01）,补肾活血对药组显著高于模型组（P〈0.05）,补肾活血药物组显著高于模型组（P〈0.01）。结论各药物组均能使得软骨和滑膜中的MMP-3含量下降,补肾活血对药组和补肾活血药物组能使软骨和滑膜中TIMP-1含量升高。表明药物治疗能够更好地从分子水平维持MMP-3和TIMP-1比例的相对稳定,而补肾活血药物组比补肾活血对药组的效果更显著。     

大鼠中药血清对骨关节炎患者膝关节软骨细胞胶原和金属蛋白酶mRNA表达的影响

目的:观察祛痰除湿剂对原代培养骨关节炎(OA)患者的膝关节软骨细胞中Ⅱ型胶原、X型胶原和相关代谢酶MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA表达的影响,探讨祛痰除湿剂治疗骨关节炎的作用及其机制.方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验.关节软骨细胞经含药血清作用72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)、Ⅹ型胶原(Col Ⅹ)、基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13的mRNA表达.结果:OA患者膝关节软骨细胞经祛痰除湿剂含药血清作用后Col Ⅱ mRNA表达明显高于仅使用胎牛血清培养的空白对照组,经10％祛痰除湿剂含药血清作用后Col Ⅹ及MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA表达均明显低于空白对照组.结论:祛痰除湿剂可调节OA患者关节软骨中胶原及相关金属蛋白酶(MMPs)的mRNA表达,从而对退变的软骨细胞有一定的修复作用并可延缓关节软骨细胞的进一步退变.     

经筋理论指导下的针刀松解术联合热敏灸治疗早中期膝骨关节炎临床研究

目的：观察经筋理论指导下的针刀松解术联合热敏灸治疗阳虚寒凝型早中期膝骨关节炎的效果。 方法：选取78 例阳虚寒凝型膝骨关节炎患者,采用随机数字表法分为观察组和对照组各39 例。观察组采 用经筋理论指导下的针刀松解术联合热敏灸治疗,对照组采用常规定点针刀松解术联合热敏灸治疗,2 组 均治疗3 周。治疗前后评定症状评分、膝关节疼痛视觉模拟评分法（VAS） 评分、西安大略和麦克马斯特 大学骨关节炎指数（WOMAC） 评分,检测关节液中的炎症因子［白细胞介素（IL） -1β、IL-18、肿瘤坏死因 子-α（TNF-α）］、骨代谢因子［骨钙素（BGP）、抗酒石酸盐酸性磷酸酶异构体（TRACP-5b）、骨特异性碱性磷 酸酶（BALP）］ 及软骨细胞外基质代谢因子［基质金属蛋白酶-3 （MMP-3）、金属蛋白酶组织抑制因 子-1（TIMP-1）、软骨寡聚基质蛋白（COMP）］ 水平。比较2 组的临床疗效,并进行安全性评价与随访观察。 结果：治疗后,观察组临床疗效总有效率94.87%,高于对照组（79.49%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。 2 组症状积分、膝关节疼痛VAS 评分均治疗前降低（P＜0.05）,观察组症状积分、膝关节疼痛VAS 评分均低 于对照组（P＜0.05）。2 组WOMAC 疼痛、僵硬、关节功能评分均较治疗前降低（P＜0.05）,观察组3 项评 分均低于对照组（P＜0.05）。2 组关节液中的IL-1β、IL-18、TNF-α、TRACP-5b、MMP-3、COMP 水平均较 治疗前降低,BALP、BGP、TIMP-1 水平均较治疗前升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。观察组IL-1β、 IL-18、TNF-α、TRACP-5b、MMP-3、COMP 水平均低于对照组,BALP、BGP、TIMP-1 水平均高于对照组, 差异均有统计学意义（P＜0.05）。2 组患者在治疗期间均未出现晕针、断针、神经损伤、术口感染等不良反 应。随访6 个月,观察组复发率低于对照组（P＜0.05）。结论：使用经筋理论指导下的针刀松解术联合热敏灸 治疗阳虚寒凝型早中期膝骨关节炎效果显著,安全性高,可能与调节炎症因子、骨代谢因子及软骨细胞外基质 代谢因子有关。     

青藤碱关节腔注射对膝骨关节炎兔软骨和滑膜组织形态学及基质金属蛋白酶-13和软骨寡聚基质蛋白的影响

目的观察青藤碱关节腔注射对膝骨关节炎模型兔关节软骨和滑膜组织形态学及血清和关节液中基质金属蛋白酶(MMP)-13和软骨寡聚基质蛋白(COMP)含量的影响,探讨青藤碱治疗膝骨关节炎的部分作用机制。方法 38只新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、透明质酸钠组和青藤碱组。空白组不予任何处理,模型组、透明质酸钠组和青藤碱组通过木瓜蛋白酶关节腔注射法诱导膝骨关节炎模型后,分别用生理盐水、透明质酸钠和青藤碱干预。5周后取关节软骨及滑膜HE染色并进行组织学评分,ELISA检测血清及关节液中MMP-13和COMP的含量。结果模型组软骨Mankin's评分和滑膜组织病理学评分显著高于空白组,青藤碱组软骨Mankin's评分和滑膜组织病理学评分显著低于模型组(P0.01);模型组血清及关节液中MMP-13和COMP含量较空白组显著升高(P0.01);青藤碱组血清、关节液中MMP-13含量较模型组显著降低,关节液中COMP含量较模型组降低(P0.05,P0.01)。结论青藤碱具有改善滑膜炎症、延缓关节软骨退变进程的作用。     

关节镜结合补肾活血法治疗膝骨关节炎对细胞因子的影响

目的：通过观察关节镜清理术配合术后口服补肾活血中药治疗膝骨关节炎,评估其临床疗效及对血清CTX-Ⅱ、COMP的影响。方法：将符合诊断标准的患者随机分成治疗组和对照组,各30例。先行关节有限清理术,观察并记录关节内关节软骨退变程度、滑膜增生及炎性程度,术前采集静脉血,用ELISA法测定血清CTX-Ⅱ和COMP含量,术后治疗组行手术治疗+术后口服补肾活血中药,对照组行手术治疗+口服塞来昔布胶囊治疗。分别于治疗前及治疗后4周,采用WOMAC膝关节功能评分及临床疗效评定,并测定术后血清CTX-Ⅱ和COMP含量。结果：治疗组有效率高于对照组（P<0.05）;治疗组WOMAC评分在疼痛、僵直、活动难度评分及总评分与对照组比较有显著差别（P<0.05）;两组治疗前后,及治疗组与对照组治疗后血清CTX-Ⅱ、COMP差异均有统计学意义（P<0.05）;血清CTX-Ⅱ和COMP与软骨的退变及滑膜增生呈正相关,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：关节镜下有限清理配合补肾活血法治疗膝骨关节炎有协同治疗作用,可有效缓解临床症状,改善膝关节功能,血清CTX-Ⅱ、COMP含量较前降低明显;膝骨关节炎关节镜下软骨退变、滑膜增生与细胞因子CTX-Ⅱ和COMP有内在密切的联系;细胞因子CTX-Ⅱ和COMP水平对软骨退变、滑膜增生程度的估计及预后有重要参考价值。     

川芎嗪对骨关节炎模型大鼠软骨内MMP-13及TIMP-1的调节作用

目的：研究川芎嗪对膝骨关节炎模型大鼠关节软骨内MMP-13及TIMP-1的调节作用。方法：1月龄SD大鼠18只,随机分为正常对照组、模型组和川芎嗪组,每组6只。模型组、川芎嗪组大鼠通过直立位诱导法建立大鼠膝关节炎模型。川芎嗪组大鼠于9月龄时开始用药,连续用药1个月。10月龄时处死3组大鼠取膝关节,行实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组关节软骨内基质金属蛋白酶-13（MMP-13）以及金属蛋白酶类组织抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达的情况。结果：模型组TIMP-1 mRNA的表达量明显低于正常对照组,而川芎嗪组TIMP-1 mRNA的表达量明显高于模型组,差异有统计学意义;模型组MMP-13 mRNA表达量明显高于正常对照组,川芎嗪组MMP-13 mRNA的表达量低于模型组,差异有统计学意义。结论：川芎嗪可刺激TIMP-1的合成,抑制软骨基质中MMP-13作用,延缓软骨细胞退变和基质降解。     

补肾活血方对膝骨关节炎大鼠MMP-3、MMP-13及OPG/RANKL轴的影响

目的:检测不同质量分数的补肾活血方对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠模型膝关节软骨组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体活化受体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)轴相关因子mRNA表达的影响,探讨补肾活血方对KOA大鼠模型骨重建及治疗作用的机制。方法:采用随机数字表法将48只Wistar大鼠分为正常对照组,模型对照组,依托考昔片组,补肾活血方中药小、中、大剂量组6组,每组8只。采用木瓜蛋白酶膝关节腔内注射法制备KOA大鼠模型。确认造模成功后,依托考昔片组给予依托考昔3.125μg/g混悬液灌胃,补肾活血方小、中、大剂量组分别给予补肾活血方0.52,1.04,2.08 g/kg混悬液灌胃,正常对照组和模型对照组给予同体积蒸馏水灌胃,1d1次,连续4周。给药结束后,对KOA模型鼠进行关节软骨退行性改变组织学分级评分(Mankin′s评分),采用实时荧光定量核酸扩增检测系统检测关节软骨内MMP-3、MMP-13、OPG、RANKL的mRNA表达水平。结果:KOA造模后大鼠膝关节软骨Mankin′s评分较正常对照组升高,差异有统计学意义(P0.05);经各治疗组药物治疗后,评分有所下降(P0.05)。模型对照组大鼠MMP-3、MMP-13及RANKL的mRNA表达较正常对照组显著上调,而OPG mRNA有所下降(P0.05);经依托考昔及中药治疗后,MMP-3、MMP-13及RANKL的mRNA表达有不同程度下降,其中大剂量组与依托考昔片组相近;经依托考昔及中、大剂量补肾活血方治疗后,OPG mRNA表达有所上升(P0.05)。结论:补肾活血方能提高模型鼠膝关节软骨内OPG的mRNA表达,降低MMP-3、MMP-13和RANKL的mRNA表达水平,可能是通过调节关节腔内的骨代谢平衡来改善关节软骨损伤、延缓骨关节炎病情进展的。     

中药保护关节软骨的作用机制研究进展

通过文献整理,从组织形态学、细胞因子、软骨细胞凋亡等多方面概述了近些年来中药在保护关节软骨方面的作用机制及研究进展,中药治疗骨关节炎主要通过减轻损伤、延缓退变及促进软骨分化和修复起作用,其机制包括:1)抑制软骨细胞炎性因子的表达及产生;2)抑制关节软骨基质金属蛋白酶表达;3)促进生长因子表达;4)促进胶原蛋白形成;5)促进关节软骨细胞增殖;6)抑制关节软骨细胞凋亡等方面。     

风湿骨痹口服液治疗兔膝骨性关节炎实验研究

目的:观察风湿骨痹口服液对实验性家兔膝骨性关节炎的治疗作用及其作用机制。方法:将30只新西兰大耳兔随机分为正常组、模型对照组及药物组,每组各10只。采用Hulth法复制膝骨性关节炎模型,造模1周后,正常组和模型组用生理盐水,药物组用风湿骨痹口服液灌胃连续给药6周,经大体观察后,测定各组血清中的一氧化氮(nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)的含量;并测定关节液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-1(interleukin-1,IL-1)、基质金属蛋白酶-1(Matrix metalloproteinase,MMP-1)的含量。结果:与模型组比较,药物组能够降低血清中NO和MDA含量,并提高SOD活性;关节液中IL-1、TNF-α和MMP-1含量明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:风湿骨痹口服液对实验性家兔膝骨性关节炎具有治疗作用,其作用机制可能是通过有效抑制细胞因子、基质金属蛋白酶、氧自由基的生物效应来延缓软骨的退变。