地黄内生真菌促生作用的初步研究

目的:筛选出促进地黄生长的内生真菌,并初步研究其促生作用.方法:通过4株分离自地黄的内生真菌与地,黄无菌苗及地黄盆栽苗的共生实验,以苗重,叶绿素含量和根冠比为指标筛选出促进地黄生长的内生真菌,通过PC比色法测定真菌分泌IAA的能力并研究内生真菌的促生作用.结果:通过共生实验,发现4株真菌中,Ceratobasidium属内生真菌-菌Ⅳ显著促进盆栽地黄生长(P<0.05),与该菌共生的地黄无菌苗平均增长量是对照组正常生长地黄的1.25倍,并显著提高叶片中的叶绿素含量(P<0.01).通过salkowski比色法表明Ceratobasidium属内生真菌-菌Ⅳ分泌IAA,LAA浓度的峰值约可达到5.712 mg·L-1.结论:Ceratobasidium属内生真菌-菌Ⅳ促进地黄生长.     

南海红树林内生真菌ZZF42中生物碱类代谢产物的研究

从南海红树林内生真菌ZZF42的代谢产物中分离得到4种生物碱：Apicidin（1），N-methylharman（2），环苯丙-酪肽（3），吲哚-3-乙酸（4）。它们的结构通过波谱方法得到确定。化合物1为首次从该海洋真菌中分离发现，化合物2为首次从该海洋微生物中分离发现。药理实验结果表明，化合物1对人鼻咽癌细胞株KB和人鼻咽癌细胞耐药株KBv200的IC50均小于0．78μg/ml。     

南海红树林内生真菌5094代谢产物研究

目的 研究南海红树林内生真菌5094的代谢产物.方法 采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶色谱法等进行分离纯化,并通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构.结果 从南海红树林内生真菌5094的菌体中分离得到6个代谢产物.经波谱解析,分别为:1,4-二羟基-7-甲基-9,10-蒽醌(1),大黄素甲醚(2),大黄素-1,6-二甲醚(3),Chrysophanol (4),1,4,6-trihydroxy-2-methoxy-7-methylanthracene-9,10-dione(5),大黄素(6).初步药理活性显示化合物1对口腔癌细胞KB,KBv200的抗肿瘤活性值分别为5.5和10.2 μmol.结论 所有化合物均首次从南海红树林内生真菌5094中分离得到.     

格木内生真菌烟曲霉的代谢产物

采用GPY培养基对格木内生真菌烟曲霉Aspergillus fumigatus菌株进行培养发酵,发酵产物经冻融处理后分离得到菌液与菌丝体.菌丝体经乙醇提取后,分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,根据肿瘤细胞毒活性筛选结果,选择菌体的乙酸乙酯萃取物进行化学成分研究.运用硅胶色谱柱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱、反相柱色谱和制备HPLC等多种色谱技术,采用波谱学方法从中分离鉴定了5个二酮哌嗪化合物,其结构分别为cyclo-(R-Pro-R-Phe)(1),cyclo-( trans-4-OH-D-Pro-D-Phe)(2),cyclo-(R-Tyr-S-Ile)(3),cyclo- (R-Phe-S-Ile)(4),cyclo-(R-Val-S-Tyr) (5).     

真菌诱导子对怀地黄组培苗生长及次生代谢产物合成的影响

目的:研究分离自地黄不同部位的内生真菌诱导子对怀地黄组培苗生长及其次生代谢产物含量的影响,初步探究其促生作用。方法:以2株Alternaria属内生真菌A.alternata,Penicillium属内生真菌P.axalicum制备不同类型的诱导子,发酵液滤液和菌丝降解液,分别考察其对地黄组培苗株高、鲜重、叶绿素含量、梓醇及毛蕊花糖苷含量的影响,并用SPSS 17.0进行数据分析。高效液相色谱法测定梓醇及毛蕊花糖苷含量。结果:不同菌株制备的真菌诱导子促生作用差异明显,以Penicillium属内生真菌P.axalicum制备的真菌诱导子对怀地黄组培苗促生效果较佳,且以其发酵液滤液促生效果最好。在该培养条件下,怀地黄组培苗株高、鲜重、根长、总叶绿素、梓醇及毛蕊花糖苷含量增加率分别为27.80%,29.49%,22.08%,15.05%,35.98%和68.18%。结论:内生真菌诱导子可促进怀地黄组培苗生长,并提高其次生代谢产物含量,在今后地黄内生真菌应用中可做进一步探究。     

不同膨大状态地黄根部内生真菌的分离及鉴定

目的:以野生地黄为对象,分离和鉴定地黄内生真菌,并探讨其内生真菌与地黄连作状态之间的关系。方法:将野生地黄进行不同的移植处理,获得根部膨大状态不同的地黄根系,分离其内生真菌,分别通过棉兰染色法和18S rDNA及ITS序列分析对内生真菌进行形态学和分子鉴定,比较内生菌的差异;并建立地黄块根膨大的水培实验系统,将地黄无菌苗和内生真菌进行共培养,观察内生真菌对地黄生长的影响。结果与结论:共分离到4种内生真菌,从未膨大根系中分离出3种优势菌株Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,从膨大的地黄根中分离到Ⅲ和Ⅳ,经鉴定这4种真菌分别为I轮生菌Verticillium spp,Ⅱ尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum,Ⅲ芳香镰孢菌F.redolens,Ⅳ角担菌属真菌Ceratobasidiumspp.。共培养结果表明内生真菌Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ的过量生长不利于地黄根膨大,而Ⅳ则不影响地黄根部的膨大。     

广藿香内生真菌Diaporthe longicolla A616细胞毒活性次级代谢产物研究

为了研究广藿香内生真菌Diaporthe longicolla A616的活性次级代谢产物。采用正相硅胶、C18反相、Sephadex LH-20凝胶、HPLC等色谱技术从该菌株的发酵产物中分离得到了10个化合物,经波谱数据分析和文献比对,分别鉴定为1,3-diamino-1,3-dimethylurea(1),(7R,9R)-7-hydroxy-9-propyl-5-nonen-9-olide(2),ergosta-5,7,22-trien-3β-ol(3),(22E,24R)-ergosta-4,6,8(14)-22-tetraen-3-one(4),(22E,24R)-3β,5α-dihydroxy-6β-ergosta-7,22-diene(5),citreoisocoumarin(6),glycerol monolinoleate(7),1-(2-hydroxyethoxy)ethyl(E)-octadec-9-enoate(8),cyclo-(L-Pro-L-Ala)(9),cyclo(L)-Pro-(L)-Val(10),其中,化合物6~10为首次从Diaporthe属真菌中分离得到。体外细胞毒活性结果显示化合物4和5对肿瘤细胞株SF-268,MCF-7,NCIH460和Hep G-2具有显著的抑制活性,IC50分别为5.3,6.5,12.2,6.1μmol·L-1和8.2,5.2,6.1,9.4μmol·L-1。     

南海红树林内生真菌ZH-4d代谢产物研究

目的：研究南海红树林内生真菌ZH-4d的代谢产物。方法：采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶色谱法等进行分离纯化,并通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构。结果：从南海红树林内生真菌ZH-4d的培养液中分离得到6个代谢产物。经波谱解析,分别为citrinin（1）,tenellic acid C（2）,tenellic acid A（3）,terretonin（4）,echinulin（5）,（E）-4,6-dimethoxy-3-[4-oxo-5-(prop-1-enyl)-4H-pyran-2-yl]-isobenzofuran-1（3H）-one（6）。初步药理活性显示化合物1对口腔癌细胞KB,KBv200的抗肿瘤活性分别为0.08,0.09 mmol·L^-1。结论：所有化合物均首次从南海红树林内生真菌ZH-4d中分离得到。     

三种红树林内生真菌的环肽类次级代谢产物的研究

从三种红树林内生真菌Paecilomyces sp.(treel-7),4557,ZZF65中分到九个环肽类的次级代谢产物,分别是viscumamide(1),cyclo(Pro-Iso)(2),cyclo(Phe-Gly)(3),cyclo(Phe-Ana)(4),cyclo(Gly-Pro)(5),cyclo(Gly-Leu)(6),cyclo(Trp-Ana)(7),neoechinulin A(8),cyclo(Pro-Thr)(9)。其中化合物1,7,8,9是首次从海洋真菌中分离得到。     

川芎内生真菌次级代谢产物中1个新的内酯化合物

目的研究川芎内生真菌Alternaria sp. IS275代谢产物的化学成分。方法采用硅胶和葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱、反相中压液相色谱、制备薄层色谱以及半制备高效液相色谱等分离技术,对川芎内生真菌发酵液的醋酸乙酯提取部位进行分离纯化,利用现代波谱学手段对分离的化学成分进行结构鉴定。结果从川芎内生真菌Alternaria sp. IS275代谢产物的醋酸乙酯提取部位分离得到1个新的内酯类化合物,鉴定为(+)-4,11-二羟基-2-十二烯-5-内酯。结论化合物1为首次从川芎内真菌中分离得到的新内酯化合物,命名为芎孢内酯A。     

不同产地地黄中地黄苷A的含量比较

目的测定不同产地地黄中地黄苷A的含量。方法薄层扫描法,展开剂为氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5),显色剂为10%硫酸-乙醇,扫描波长为407。结果Y=176.42X 52.8,r=0.996,线性范围:0.5~2.5μg。平均回收率为99.33%,RSD=2.62%。结论河南温县、博爱、武陟产地黄中黄苷A的含量较高,与梓醇含量正相关。     

地黄中梓醇变化条件的探讨

地黄干燥、炮制后,经HPLC测定梓醇的含量明显降低。梓醇含量的变化与酸、碱性条件有关,而在水溶液中加热时间对其含量无明显改变。与单糖、低聚糖混合并长时间加热梓醇的含量也未见显著变化。     

拟茎点霉属真菌福士拟茎点霉发酵产物中的1个具有抗菌活性的新二苯醚类化合物

目的对拟茎点霉属真菌福士拟茎点霉Phomopsis fukushii发酵产物的化学成分进行研究。方法运用硅胶、凝胶及RP-HPLC等多种色谱技术进行分离纯化得到化合物,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从福士拟茎点霉发酵产物中分离到4个异戊基二苯醚类化合物,分别鉴定为1-[4-(3-羟基-5-甲基苯氧基)-2-甲氧基-6-甲基苯]-3-甲基丁基-3-烯-2-酮(1)、diorcinol C(2)、diorcinol D(3)和diorcinol E(4)。对化合物1进行抗菌活性筛选,发现其对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株的MIC_(90)值为(54±4)μg/mL。结论化合物1为新化合物,命名为拟茎点二苯醚A;化合物2~4为拟茎点属真菌中首次发现的异戊基二苯醚类化合物,化合物1具有突出的抗菌活性,接近阳性对照左氧氟沙星的MIC_(90)值。     

正交实验优选地黄叶中梓醇的提取工艺

目的对干地黄叶中梓醇的提取方法进行优选，确定最佳提取工艺。方法采用正交实验表L8（2）^7安排实验。结果提取方法对梓醇提取率影响最大。结论确定地黄叶中梓醇的最佳提取工艺，即加水煎煮提取，提取次数为2次，1h／次。     

蛇足石杉内生真菌Penicillium chrysogenum MT-12中2个新二苯醚类成分

目的研究蛇足石杉内生真菌Penicillium chrysogenum MT-12经固体发酵培养后的代谢产物。方法利用硅胶、Sephadex LH-20及半制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质及IR、MS、NMR等光谱数据鉴定化合物的结构;利用体外模型进行抗炎、乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选。结果从P.chrysogenum MT-12固体发酵培养后的代谢产物中共分离鉴定8个二苯醚类化合物,分别为黄青霉内酯A(1)、黄青霉内酯B(2)、talaromyone A(3)、isopenicillide(4)、penicillide(5)、hydroxypenicillide(6)、purpactin A(7)、黄青霉内酯C(8)。结论化合物1、2为新化合物,化合物3为首次从青霉属中分离得到,化合物4~8为首次从产黄青霉菌中分离得到;化合物1、2对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的NO产生有一定抑制活性,半数抑制浓度(IC50)值分别为(72.6±2.3)、(41.2±1.4)μmol/L,而所有化合物在100μmol/L时对乙酰胆碱酯酶不显示抑制活性。     

湖北地黄多糖超声波提取工艺条件及含量测定研究

目的建立超声波提取湖北地黄多糖的最佳工艺和测定湖北地黄各部分中多糖的含量。方法对超声波提取湖北地黄多糖的条件进行了研究并用蒽酮-硫酸法测定了湖北地黄各部分的多糖含量。结果由正交实验得出超声波提取的最佳条件为:湖北地黄与水的质量比为1∶40,提取温度为40℃,提取时间为30 m in。采用蒽酮-硫酸法于624 nm比色,得湖北地黄中各部分多糖含量为:根、茎、叶分别为15.74%,8.36%,4.21%。结论湖北地黄的多糖依据不同提取方法、不同部位含量有较大差异。     

紫玉盘内生真菌节菱孢中1个新的异香豆素类化合物

目的研究紫玉盘内生真菌节菱孢Arthrinium sp.A092发酵菌丝体的化学成分。方法采用硅胶柱、凝胶柱、HPLC等色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据进行化合物结构鉴定;以肝癌细胞Hep G-2、乳腺癌细胞MCF-7、大细胞肺癌细胞NCI-H460和神经胶质瘤细胞SF-268为供试细胞株,采用SRB法对化合物进行细胞毒活性测试。结果从节菱孢菌丝体中分离得到10个化合物,分别鉴定为3,4,5-trimethyl-6-methoxy-8-hydroxyisocoumarin(1)、decarboxycitrinone(2)、4-hydroxy-17R-methylincisterol(3)、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸(4)、邻苯二甲酸二丁酯(5)、flemingipanic acid(6)、吲哚-3-羧酸(7)、过氧化麦角甾醇(8)、对羟基苯甲酸(9)、4-羟基苯甲醛(10);化合物3对SF-268和MCF-7的IC50值分别为63.8和57.2?mol/L,化合物8对SF-268、MCF-7和NCI-H460的IC50值分别为50.6、32.3、39.0?mol/L。结论化合物1为新化合物,命名为节菱孢异香豆素A,化合物3~5、7~10均为首次从该属真菌中分离得到;化合物3和8具有一定的细胞毒活性。     

裙带菜内生真菌Guignardia sp．的活性次生代谢产物

目的：对裙带菜内生真菌Guignardia sp．发酵液的乙酸乙酯萃取物进行分离纯化,寻找具有新和,或强生物活性的化合物。方法：采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和ODS反相柱层析等色谱方法进行成份的分离纯化,并利用波谱学技术对化合物进行结构鉴定。采用纸片法和MTT法分别评价化合物的抑菌活性和细胞毒活性。结果：从发酵液中分离获得7个化合物,分别鉴定为过氧麦角甾醇（1）、麦角甾醇（2）、环-（酪氨酸-亮氨酸）（3）、环-（苯丙氨酸一苯丙氨酸）（4）、环-（缬氨酸-亮氨酸）（5）、环-（苯丙氨酸-脯氨酸）（6）、环-（亮氨酸-异亮氨酸）（7）。其中化合物1,2,3和6能抑制犬小孢子生长,其MIC分别为10．0,20．0,50．0和5．0μg·mL-1;化合物1,2和6对红发毛癣菌有抑制活性,其MIC分别为15．0,20．0和10．0μg·mL-1并且1和6有抑制絮状表皮癣菌的活性,其MIC分别为20．0和50．0μg·mL-1。另外,化合物1,3和6对人鼻咽癌KB细胞有抑制活性,其Ic50分别为20．0,10．0和10．0μg·mL-1。结论：化合物1—7均首次从裙带内生菌Guignardia sp．中分离得到,并且化合物1和6显示出较好的细胞毒和抗菌活性。     

白木香内生真菌Fimetariella rabenhorstii化学成分研究

目的:研究白木香内生真菌Fimetariella rabenhorstii的化学成分。方法:采用各种色谱技术进行分离纯化,通过波谱方法鉴定化合物的结构。结果:从Fimetariella rabenhorsti中分离得到5个化合物,其结构鉴定为:对羟基苯乙醇(1)、烟酸(2)、D-半乳糖醇(3)、2-苯胺基-1,4-萘醌(4)、乙酰苯胺(5)。结论:以上化合物均为首次从Fimetariella属中分离获得,化合物5在天然产物中非常少见。     

植物内生真菌Periconia sp. F-31中的一个新内酯类化合物

对一株番荔枝内生真菌Periconia sp. F-31中的次生代谢产物进行研究。通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备HPLC等方法分离纯化得到了2个化合物,根据波谱学方法分别鉴定为5-(1-羟己基)-6-甲基-2H-吡喃-2-酮(1)、2-(3-羟基-4-甲基苯)-丙酸(2)。化合物 1 为新化合物,化合物 2 为新的天然产物,首次对化合物 2 的NMR数据进行了报道。