黄芪、莪术配伍对人卵巢癌HO-8910原位移植瘤组织中MMP-2、FGF-2、BCL-2表达的影响

目的:观察黄芪、莪术配伍对人卵巢癌HO-8910原位移植瘤的抑瘤效果及瘤组织中MMP-2、FGF-2、BCL-2蛋白和基因表达的影响。方法:选取已建立荧光蛋白转染的HO-8910卵巢癌原位癌动物模型,分为模型组,阳性对照组(顺铂),黄芪组,莪术组,黄芪、莪术配伍(按照2∶1)高、中、低剂量组,监测抑瘤效果。用免疫组化和Real time-PCR检测移植瘤组织中MMP-2、FGF-2、BCL-2蛋白和基因的表达情况。结果:阳性对照组,黄芪组,黄芪、莪术配伍高剂量组,黄芪、莪术配伍低剂量组平均肿瘤质量明显小于模型组(P0.05);各组MMP-2、FGF-2、BCL-2蛋白表达与模型组相比无统计学差异(P0.05);黄芪组,莪术组,黄芪、莪术配伍组高、中、低剂量组肿瘤组织中的MMP-2、FGF-2、BCL-2 mRNA表达明显低于模型组(P0.05)。结论:黄芪、莪术配伍使用在实验周期内对人卵巢癌HO-8910具有抑制作用(P0.05),其作用机制可能与下调移植瘤中MMP-2、FGF-2、BCL-2基因表达相关。     

黄芪莪术配伍对人卵巢癌HO-8910原位移植瘤组织中FGF-2和BCL-2表达的影响

目的观察黄芪、莪术配伍对人卵巢癌HO-8910原位癌抑瘤效果。方法选取已建立荧光蛋白转染的HO-8910卵巢癌原位癌动物模型(7组),分为模型组,阳性对照组(顺铂),黄芪组,莪术组,黄芪、莪术配伍(按照2∶1)高、中、低剂量组。用免疫组织化学法及Real time-PCR检测移植瘤组织中FGF-2、BCL-2蛋白及基因的表达。结果阳性对照组,黄芪组,莪术组,黄芪、莪术低剂量组,黄芪、莪术高剂量组肿瘤平均肿瘤重量较对照组皆明显减少,且有统计学差异(P0.05),而黄芪、莪术高剂量组与阳性对照组比较,统计学分析有显著性差异(P0.05);各给药组肿瘤组织中的FGF-2、BCL-2 mRNA表达明显低于阴性对照组,且有统计学差异(P0.05);各给药组肿瘤组织中FGF-2蛋白表达明显低于阴性对照组(P0.05);而各给药组肿瘤组织中BCL-2蛋白表达与阴性对照组相比较无统计学差异(P0.05)。结论黄芪、莪术配伍使用在实验周期内对人卵巢癌HO-8910抑瘤效果明显(P0.05),其作用机制可能与下调FGF-2、BCL-2的表达有关。     

黄芩素通过激活Caspases和Bcl-2家族蛋白诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡

目的研究黄芩素对卵巢癌HO-8910细胞凋亡的调控作用及其可能的作用机制。方法选取人卵巢癌细胞系HO-8910细胞,经黄芩素不同浓度及不同时间处理后,分别采用噻唑蓝(MTT)法测定对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;采用Westernblotting法检测Bcl-2家族蛋白表达情况。结果黄芩素对HO-8910细胞有明显的增殖抑制作用,呈浓度-时间依赖性。与对照组比较,黄芩素组细胞凋亡率明显升高(P0.05、0.01)。黄芩素上调Bax/Bcl-2值,上调cleaved Caspase-3及cleaved Caspase-9的蛋白表达量,呈浓度依赖性。结论黄芩素通过激活Caspase和Bcl-2家族蛋白对卵巢癌HO-8910细胞发挥抗增殖及诱导凋亡活性。     

基于Nrf2/HO-1通路探讨黄芪甲苷对顺铂诱导的急性肾损伤的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对核转录因子NF-E2相关因子2 (Nrf2)/血红素氧合酶-1 (HO-1)通路的调控作用及对顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)的保护作用。方法:将大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组5组,每组10只。除对照组外,其余各组用顺铂按7 mg/kg的剂量单次腹腔注射建立AKI模型。黄芪甲苷低、中、高剂量组分别按5、10、20 mg/kg的剂量给予黄芪甲苷注射液,模型组和对照组给予生理盐水。用HE染色观察肾脏组织病理学改变;测定血清中肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量;测定肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量;分别用蛋白质印迹法(Western blot)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肾脏组织病理病变明显,可见肾小管坏死和退行性改变;与模型组比较,黄芪甲苷低、中、高组大鼠肾脏组织病理病变程度减轻,其中黄芪甲苷高剂量组最为明显。与对照组比较,模型组血清中SCr和BUN含量显著升高(P0.05),肾组织中GSH-Px、SOD活性显著降低(P0.05),MDA含量显著升高(P0.05),Nrf2和HO-1相对蛋白表达和mRNA水平显著降低(P0.05);与模型组比较,黄芪甲苷低、中、高剂量组血清中SCr和BUN含量显著降低(P0.05),肾组织中GSH-Px、SOD活性显著升高(P0.05),MDA含量显著降低(P0.05),Nrf2和HO-1相对蛋白表达和mRNA水平显著升高(P0.05);与黄芪甲苷低剂量组比较,黄芪甲苷高剂量组血清中SCr和BUN含量显著降低(P0.05),Nrf2和HO-1相对蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论:黄芪甲苷可通过调控Nrf2/HO-1通路对顺铂诱导的AKI大鼠肾脏组织起显著的保护作用。     

冬凌草甲素对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制研究

目的探讨冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制。方法通过大剂量冲击法,诱导制备耐紫杉醇的人卵巢癌HO-8910PM细胞株(HO-8910PM/PIX),用不同浓度冬凌草甲素处理HO-8910PM/PIX细胞;或在冬凌草甲素作用HO-8910PM/PIX细胞前以NF-κB激活剂TPA进行预处理。给药后,细胞经DAPI染色,荧光显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blotting检测卵巢癌细胞中NF-κB蛋白的表达。建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型。接种后8周,观察冬凌草甲素对裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中NF-κB的阳性表达。结果与对照组相比,冬凌草甲素呈浓度相关性抑制卵巢癌HO-8910PM/PIX细胞增殖,显著诱导细胞凋亡,而TPA可显著削弱冬凌草甲素诱导细胞凋亡的作用。与HO-8910PM细胞相比,NF-κB在HO-8910PM/PIX细胞中表达显著上调,冬凌草甲素可抑制HO-8910PM/PIX细胞中NF-κB的表达。冬凌草甲素可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,明显减弱移植瘤组织中NF-κB的阳性表达。结论冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性具有拮抗作用,该作用可能通过抑制NF-κB的表达而实现。     

益气化瘀解毒方及其单味药对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤血管拟态相关因子的影响

目的探讨益气化瘀解毒方及其单味药对人肝癌移植瘤血管拟态相关因子表达的影响。方法瘤细胞接种建立人肝癌移植瘤模型,随机分为益气化瘀解毒方组(全方组)、黄芪组、莪术组、重楼组、壁虎组、顺铂组及模型组,除模型组外,各给药组予相应药物干预。21d后,采用免疫组化法检测瘤组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、E-钙黏附蛋白(E-cad)表达,免疫荧光法观察血管生成拟态结构,实时荧光定量PCR检测瘤组织Twist1、Bcl-2表达。结果与模型组比较,给药后各给药组瘤体积减小(P0.05),全方组优于黄芪组、重楼组、壁虎组(P0.05);各组血管生成拟态结构荧光表达稀少,模型组、顺铂组最为明显;除黄芪组外,各给药组HIF-1α及MMP-9、MMP-2表达与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),全方组最为明显;全方组、黄芪组E-cad表达与模型组比较差异有统计学意义(P0.05);全方组、重楼组、壁虎组与模型组比较Bcl-2表达明显降低(P0.05),其中全方组Bcl-2表达明显优于其他给药组(P0.05);全方组、莪术组、重楼组、顺铂组Twist1表达与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论益气化瘀解毒方及其单味药通过下调HIF-1α、Twist1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9及上调E-cad表达,从而抑制血管生成拟态形成。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用

目的:研究黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的SD大鼠乳鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用,并探讨相关的作用机制。方法:利用酶解法和差速贴壁方法从出生1~3 d的正常SD大鼠的乳鼠心脏中分离得到原代心肌细胞,种于24孔板,体外培养48 h后,设置空白组、模型组、美托洛尔组及黄芪甲苷低、中、高剂量组。预先给予各组对心肌细胞有害的儿茶酚胺类物质异丙肾上腺素(ISO),造成体外原代心肌细胞损伤模型,空白组心肌细胞不加ISO;30 min后予各治疗组相应浓度的美托洛尔(2.336μg·L~(-1))及黄芪甲苷低、中、高剂量(3,10,30μmol·L~(-1))。BCA法检测总蛋白含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测原代心肌细胞的B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关蛋白X(Bax)及Bcl-2相关k蛋白(Bak)的表达,流式细胞学法检测各组细胞的凋亡率,Hochest/PI双染法镜下观察各组细胞细胞核的形态,从而检测细胞的凋亡情况。结果:与空白组比较,各给药组(10~40μmol·L~(-1))原代心肌细胞的活力上调(P0.05);HOCHEST/PI双染结果显示,与模型组比较,美托洛尔组及黄芪甲苷中、高剂量亮蓝色凋亡细胞明显减少;细胞流式结果显示,与模型组比较,美托洛尔组凋亡率下调(P0.01),黄芪甲苷中剂量组凋亡率下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组凋亡率下调(P0.01);Bcl-2灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bcl-2的表达上调(P0.01),黄芪甲苷低剂量组Bcl-2表达上调(P0.05),黄芪甲苷中、高剂量组Bcl-2表达上调(P0.01);Bak灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bak的表达下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组Bak表达下调(P0.05);Bax灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bax的表达下调(P0.01),黄芪甲苷高剂量组Bax表达下调(P0.05)。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤有抗凋亡作用。     

抑瘤一号方对HO-8910人卵巢癌细胞细胞活力及MMP-2、MMP-9mRNA表达的影响

目的:观察抑瘤一号方对HO-8910人卵巢癌细胞增殖及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9mRNA表达的影响,从而为其抑制卵巢癌进展提供依据。方法:在体外用不同浓度(0%、5%、15%、20%)抑瘤一号方含药血清处理HO-8910人卵巢癌细胞后,检测细胞活力及细胞内MMP-2、MMP-9m RNA表达。结果:空白组HO-8910人卵巢癌细胞胞体相对光滑,核膜尚完整,细胞器正常,染色质呈现均匀;抑瘤一号方含药血清处理后的HO-8910人卵巢癌细胞胞体发生皱缩,胞质可见多发空泡形成,核染色质出现固缩,形成多个团块状,或边界较分明的类似新月形小体,凋亡特征明显。作用12、24h后,5%、10%组细胞活力与同期空白组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组细胞活力依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05);作用48h后,5%组与空白组、5%组与10%组细胞活力比较,差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组细胞活力均低于同期空白组,且15%、20%组均低于10%组,差异均有统计学意义(P<0.05);作用72h后,5%组与空白组细胞活力比较,差异无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组细胞活力均低于同期空白组、5%组,且15%、20%组细胞活力均低于10%组,差异均有统计学意义(P<0.05)。5%组、空白组MMP-2mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组MMP-2mRNA表达水平均低于空白组,且15%、20%组均低于5%组,20%组低于10%组,差异均有统计学意义(P<0.05);空白组、5%组、10%组MMP-9mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);15%、20%组MMP-9mRNA表达水平均低于空白组和5%组,20%组低于10%、15%组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:抑瘤一号方在体外能明显降低HO-8910人卵巢癌细胞活力,抑制肿瘤细胞基质金属蛋白酶的表达。     

三根祛瘤方抗瘤作用研究

目的 :研究三根祛瘤方对人卵巢癌细胞株 HO-8910的体外生长影响。方法 :用三根祛瘤方不同浓度培养液 ,分别培养 HO-8910细胞 2 4小时、48小时、72小时 ,应用 MTT(四甲基偶氮唑蓝 )比色法观察 H O-8910细胞生长情况。结果 :三根祛瘤方对人卵巢癌细胞株 HO-8910的体外生长有抑制作用 ,并呈现出时间和剂量依赖关系 ,最佳抑制浓度为 6 2 .5 m g/m L ,最佳作用时间为 48小时。结论 :三根祛瘤方对人卵巢癌细胞株 HO-8910 [1 ] 的体外增殖有抑制作用     

当归补血汤有效组分配伍对肝星状细胞氧化应激和Ⅱ相酶的影响

目的:研究当归的有效成分阿魏酸、黄芪有效成分黄芪甲苷及其配伍对大鼠肝星状细胞HSC-T6脂质过氧化物(LPO)含量、抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的影响。方法:阿魏酸、黄芪甲苷单独及联合处理HSC-T6细胞24 h,分光光度法检测HSC-T6细胞LPO含量和超氧化物歧化酶((SOD)活性,Western Blot检测HSC-T6细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLc)、谷氨酰半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLm)、血红素加氧酶1(HO-1)、SOD和磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)蛋白表达,实时定量PCR检测HSC-T6细胞GCLc、GCLm、HO-1和SOD1 mRNA表达。结果:黄芪甲苷显著抑制了HSC-T6细胞中LPO含量,增加了SOD活性,上调了GCLc和SOD的mRNA和蛋白表达,增加了GSK-3β的磷酸化水平(均P0.05),而对GCLm表达无显著性影响(P0.05)。阿魏酸对这些指标均无显著性影响(均P0.05)。与黄芪甲苷处理组比较,联合配伍的作用效果无显著性提高(均P0.05)。结论:当归补血汤的有效组分黄芪甲苷通过上调Ⅱ相酶的表达抑制了肝星状细胞氧化应激。     

染料木黄酮对人卵巢癌裸鼠移植瘤影响的实验研究

目的:探讨植物雌激素染料木黄酮对人卵巢癌HO-8910PM细胞裸鼠移植瘤的影响。方法:体外培养人卵巢癌HO-8910PM细胞,裸鼠皮下接种HO-8910PM细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,随机分为对照组和3个染料木黄酮治疗组,治疗组分别给予5,25,50 mg.kg^-1染料木黄酮。治疗4周后,应用流式细胞术(FCM)检测各组裸鼠移植瘤细胞周期时相和凋亡率,免疫组化技术检测凋亡基因bcl-2,Fas,FasL蛋白的表达情况,并通过电镜进行形态学观察。结果:50 mg.kg^-1染料木黄酮治疗组裸鼠移植瘤明显小于对照组,肿瘤细胞G₀-G_l期比例升高明显,S期细胞比例显著降低(P<0.01),移植瘤细胞凋亡率为(15.14±2.27)%,明显高于对照组(3.12±1.12)%(P<0.01);移植瘤细胞bc1-2蛋白表达水平明显下降,而Fas蛋白表达水平升高,与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05)。电镜观察50 mg.kg^-1染料木黄酮治疗组可见凋亡细胞明显增多。结论:染料木黄酮通过调节移植瘤细胞周期分布和凋亡基因,抑制卵巢癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢Bcl-2/Bax表达的影响

目的:观察补肾调冲方对雷公藤多苷片所致卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)雌性大鼠卵巢性激素水平和卵巢中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2),促进凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)蛋白及mRNA表达的影响,探讨补肾调冲方的预防作用。方法:SD雌性大鼠42只,随机分为正常组,模型组,结合雌激素组,补肾调冲方预防高、中、低剂量组。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中雌二醇(estradiol,E_2),卵泡刺激素(follicule-stimulating hormone,FSH),黄体生成素(luteinizing hormone,LH),孕酮(progesterone,P)水平。蛋白质免疫印迹(Western blot)法和逆转录-聚合酶链式方应(RT-PCR)法检测卵巢组织中Bcl-2,Bax蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH,LH含量明显升高,E_2的含量明显降低,卵巢组织中Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显降低,Bax蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.01);补肾调冲方各给药组和结合雌激素组E_2的含量均高于模型组(P0.01),其中补肾调冲方低、中、高剂量和结合雌激素组E_2含量与正常组比较,差异无统计学意义。补肾调冲方各给药组和结合雌激素组FSH,LH的含量均低于模型组(P0.01);低、中、高剂量组和结合雌激素组FSH,LH含量与正常组比较,差异无统计学意义。各组与正常组P含量比较差异无统计学意义。补肾调冲方预防低、中、高剂量组和结合雌激素组Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显高于模型组(P0.01);Bax蛋白及mRNA的表达明显低于模型组(P0.01)。结论:补肾调冲方对卵巢具有一定的保护作用,可以预防卵巢早衰的发生。其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,维持Bcl-2,Bax的平衡,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡的过度凋亡,改善卵巢的功能。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷抑制体内外卵巢癌生长的作用

目的:探讨矢车菊素-3-葡萄糖苷对体内外卵巢癌生长的影响及其机制。方法:矢车菊素-3-葡萄糖苷作用人卵巢癌细胞株HO-8910PM后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测卵巢癌细胞中Mucin-4蛋白表达;建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察矢车菊素-3-葡萄糖苷对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4的阳性表达。结果:与对照组相比较,矢车菊素-3-葡萄糖苷可显著抑制体外卵巢癌HO-8910PM细胞生长,并明显诱导细胞凋亡;可显著下调卵巢癌细胞中Mucin-4的表达。矢车菊素-3-葡萄糖苷可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长;可明显降低卵巢癌肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4的阳性表达。结论:矢车菊素-3-葡萄糖苷可显著抑制体内外卵巢癌生长,该作用可能通过抑制Mucin-4蛋白表达而实现。     

养阴舒肝颗粒对VCD诱导卵巢功能下降大鼠Bcl-2,Bax及Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨养阴舒肝颗粒对卵巢功能下降模型大鼠卵巢功能及;B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的影响。方法:选取动情周期规则的雌性SD大鼠,取10只作为正常组,其余大鼠均采用160 mg·kg~(-1)去氧乙烯基环己烯(VCD)腹腔注射诱导卵巢功能下降模型,取造模成功的56只大鼠按体质量随机分为模型组,养阴舒肝颗粒低(2.1 g·kg~(-1)),中(4.2 g·kg~(-1)),高剂量组(8.4 g·kg~(-1))和坤泰胶囊组,每组11只(模型组12只)。采用养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊进行灌胃给药,干预治疗4周后进行卵巢称质量,计算各级卵泡的数目,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清性激素水平卵泡刺激素(FSH),雌二醇(E_2),抗缪勒氏管激素(AMH),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠的卵巢质量和卵巢指数下降(P0.01),闭锁卵泡数目增多(P0.01),FSH水平升高(P0.01),E_2和AMH水平下降(P0.05),卵巢组织Bcl-2蛋白的表达减少(P0.01),Bax,Caspase-3蛋白的表达(P0.01);与模型组比较,养阴舒肝颗粒可以增加模型大鼠的双侧卵巢质量(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊可以增加卵巢指数(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒可以减少闭锁卵泡的数目(P0.05);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊均可以降低FSH水平(P0.05),升高E_2和AMH水平(P0.05),增加卵巢组织Bcl-2的表达(P0.01),同时抑制Bax,Caspase-3的表达(P0.01)。结论:养阴舒肝颗粒可以提高卵巢功能下降模型大鼠的卵巢功能,其机制可能与抗细胞凋亡有关。     

陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖影响的研究

目的体外培养法研究陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的影响。方法将体外培养的HO-8910PM细胞分为挥发油组、阳性对照组、阴性对照组及Control组,分别以挥发油、环磷酰胺、DMSO及完全培养基处理后,以MTT法评价不同浓度及不同作用时间下陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对HO-8910PM细胞的生长抑制作用;以Hoechst33258荧光染色法染色细胞核,倒置显微镜观察细胞核形态变化;测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)、Caspase-3酶活性,评价4种挥发油对细胞膜结构及细胞凋亡的影响。结果陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对HO-8910PM细胞增殖具有抑制作用,并且呈时间剂量依赖性。Hoechst33258荧光染色法观察细胞核有明显的凋亡形态变化。各实验浓度挥发油处理后,细胞培养液中LDH活性、细胞中Caspase-3酶活性均明显增加,较Control组及阳性药环磷酰胺组差异有统计学意义(P0.01)。结论陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对HO-8910PM细胞具有增殖抑制及促凋亡作用,其机制可能为破坏肿瘤细胞的细胞膜,激活细胞凋亡途径中的关键酶Caspase-3。     

补肾养血方对卵巢早衰小鼠凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的：探讨补肾养血方对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠卵巢凋亡调节基因B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。方法：以小鼠透明带3（Zp3）为抗原,皮下多点注射免疫 BALB/c雌性小鼠,14 d后强化免疫,建立免疫性卵巢早衰模型。设补肾养血方低、中、高剂量（5.1,10.2,20.4 g·kg^-1）进行治疗,以补佳乐（戊酸雌二醇0.6 mg·kg^-1）为阳性对照,于造模后15 d开始灌胃给药1次/d,连续6周（每1周休息1 d）。放射免疫法检测小鼠血清激素水平,Western法检测卵巢组织 Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果：与空白对照组相比,模型组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达减少,Bax蛋白表达增加,（P<0.05）,模型组小鼠卵巢Bcl-2/Bax下降（P<0.01）,提示模型组卵泡Bcl-2蛋白的低表达、Bax蛋白的高表达可能加速了卵泡的凋亡,导致卵巢早衰;与模型组相比,补肾养血方高、中、低剂量组及西药组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达明显增加（P<0.01,P<0.05）,卵巢Bax蛋白的表达均减少（P<0.05）,Bcl-2/Bax明显降低（P<0.05）。结论：卵泡凋亡过快可能导致卵巢早衰,补肾养血方可能通过上调卵泡及卵巢间质Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制卵泡的过快凋亡,从而改善卵巢功能。     

黄芪甲苷逆转人乳腺癌细胞MDA-MB-231对阿霉素多药耐药的体外研究

目的探讨黄芪甲苷对耐药人乳腺癌细胞MDA-MB-231/DOX多药耐药的逆转作用。方法以噻唑蓝(MTT)法测定黄芪甲苷的细胞毒性及其处理前后乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性或耐药性变化。采用乙醇注入法-硫酸铵梯度法构建共载阿霉素-黄芪甲苷的脂质体(LPs-DOX/AS),并评价其对乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用,采用流式细胞术测定LPs-DOX/AS对细胞凋亡的影响。结果黄芪甲苷在实验浓度范围内对乳腺癌细胞无明显细胞毒性;与黄芪甲苷联用后,阿霉素对MDA-MB-231、MDA-MB-231/DOX细胞的半数抑制浓度(IC_(50))值均下降(P0.05),并且对耐药细胞的干预效果更明显(P0.01)。脂质体包载后的LPs-DOX/AS-IV比游离DOX/AS-IV对2种乳腺癌细胞的IC_(50)值均下降(P0.05),同样对耐药株的效果更明显(P0.01)。经LPs-DOX/AS-IV处理的耐药株细胞凋亡率也显著高于游离药物组(P0.05)。结论黄芪甲苷对人乳腺癌细胞MDA-MB-231对阿霉素多药耐药具有很好的逆转作用,黄芪甲苷与阿霉素联用及其脂质体共递送体系的开发可以有效逆转或增敏乳腺癌的多药耐药。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠氧化应激反应的影响

目的:以氧化应激损伤为切入点探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为模型组,假手术组,尼莫地平组(20 mg·kg~(-1)),益气活血方高、中、低剂量组(2. 916,1. 458,0. 729 g·kg~(-1)),连续灌胃14 d后,采用结扎双侧颈总动脉法建立急性脑缺血损伤模型,透射电镜观察突触超微结构,生化法检测脑匀浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)酶的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠缺血区脑皮层血红素氧化酶-1(HO-1),核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白和m RNA表达。结果:透射电镜观察结果显示益气活血方对脑缺血损伤程度有明显改善作用。与假手术组比较,模型组大鼠脑匀浆MDA水平显著上升,T-SOD,GSH-Px水平显著降低(P 0. 01),LDH,Na+-K~+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶及ATP酶的活性均明显降低(P 0. 05,P 0. 01),脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量以及HO-1,Nrf2 m RNA表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,益气活血方中、高剂量组可明显降低脑组织中MDA含量,升高T-SOD,GSH-Px的水平(P 0. 05,P 0. 01);益气活血方高剂量组可显著增加LDH,Na+-K+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和总ATP酶活性(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方中、高剂量组大鼠脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量明显升高(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方高剂量组HO-1,Nrf2 m RNA表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:益气活血方可能通过Nrf2/HO-1信号通路抑制氧化应激水平实现对脑缺血损伤的保护作用。