舒肝凉血方对MCF-7和T47D细胞增殖及硫酸酯酶活性和表达的影响

目的:观察舒肝凉血方对雌激素受体阳性乳腺癌MCF-7和T47D细胞增殖的影响,并检测舒肝凉血方对两个细胞系中硫酸酯酶的活性及其mRNA表达的影响。方法:培养雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF-7和T47D,给予不同浓度的舒肝凉血方处理24 h后,MTT法检测复方对MCF-7和T47D细胞增殖的影响;RT-PCR检测舒肝凉血方对硫酸酯酶mRNA表达的影响。培养MCF-7和T47D细胞,转染萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶质粒,给予不同浓度的舒肝凉血方处理24 h后,双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测复方对两个细胞系中硫酸酯酶活性的影响。结果:舒肝凉血方显著抑制了MCF-7和T47D细胞的增殖,并呈现出剂量依赖关系,半数抑制浓度(IC50)分别是46.08 g.L-1和22.98 g.L-1;低浓度的舒肝凉血方对硫酸酯酶mRNA的表达无明显影响,高浓度时则显著下调了硫酸酯酶mRNA的表达;舒肝凉血方显著降低了MCF-7和T47D细胞中硫酸酯酶的活性,且呈现出剂量依赖性。结论:舒肝凉血方能显著抑制MCF-7和T47D细胞的增殖,此作用可能与该方降低硫酸酯酶活性以及下调硫酸酯酶mRNA的表达有关。     

续断“发汗”前后水煎液及含药血清对人成骨样MG-63细胞、幼鼠成骨细胞增殖的影响

目的探讨续断"发汗"前后水煎液及含药血清对人成骨样MG-63细胞、成骨细胞增殖的影响。方法将人成骨样MG-63细胞、幼鼠成骨细胞分别与续断"发汗"前后水煎液及大鼠含药血清共同培养。MTT法检测细胞增殖,硝基苯磷酸盐法检测成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。结果续断水煎液和含药血清均能显著促进MG-63细胞和成骨细胞增殖(P0.01),并能显著提高成骨细胞的ALP活性(P0.01),且相同剂量未"发汗"组作用普遍优于或非劣于"发汗"组。结论结合前期成分研究,推断续断"发汗"前后成分的改变影响了其促进细胞增殖和分化的作用,为其进一步研究奠定基础。     

葛根素促进人成骨样MG-63细胞分化的分子机制研究

目的 探讨植物雌激素葛根素促进人成骨样MG-63细胞分化的分子机制。方法 选择兼有2种雌激素受体（estrogen receptor,ER）亚型表达的人成骨样MG-63细胞为研究模型,采用磷酸苯二钠法、ELISA法及小RNA干扰等技术,探讨葛根素对人成骨细胞分化的作用及作用机制。结果 葛根素可通过提高MG-63细胞中碱性磷酸酶（ALP）活性和I型胶原蛋白分泌促进成骨细胞分化成熟,该作用可被纯ER阻断剂ICI 182, 780完全阻断,应用小RNA干扰技术进一步证实葛根素对成骨细胞ALP活性、I型胶原蛋白分泌的调节作用是由ERα和ERβ共同介导的。结论 葛根素对成骨细胞分化的调节是经ER途径,由ERα和ERβ共同介导。     

槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞体外增殖与凋亡的影响

目的:观察槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度的槲皮素作用于体外培养的MG-63细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测槲皮素对MG-63细胞增殖的抑制能力,流式细胞术(FCM)检测槲皮素对MG-63细胞凋亡的影响。结果:槲皮素可显著抑制MG-63细胞增殖,具有明显剂量和时间依赖性;槲皮素可明显诱导MG-63细胞凋亡。结论:槲皮素能够抑制MG-63细胞增殖,诱导MG-63细胞凋亡。     

戴村骨伤膏对人成骨样细胞(MG-63细胞)增殖及BMP-2表达的影响

目的:为了研究戴村骨伤膏对骨折愈合的影响,我们将其运用于人成骨样细胞(MG-63细胞)体外的细胞试验,观察其对细胞增殖及BMP-2表达的影响。方法:在体外培养的MG-63细胞中,加入不同浓度的戴村骨伤膏药物溶液作用后,使用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖以及RT-PCR反应法检测细胞中BMP-2表达情况。结果:戴村骨伤膏药在早期能较明显的促进成骨细胞MG-63的增殖分化及BMP-2的表达,并且效果随着药物浓度的升高而增强,但是随着时间延长药物对MG-63细胞增殖反而起抑制作用。结论:说明戴村骨伤膏对MG-63细胞增殖具有促进和抑制双重效应,其效应强度随作用时间不同而不同。     

滋肾健骨方含药血清对人骨髓间充质干细胞成骨分化中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨滋肾健骨方含药血清对老年骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其作用机制。方法 取SD大鼠制备低、中、高剂量滋肾健骨方含药血清和空白血清。将培养第3代的老年骨质疏松症患者hBMSCs分为6组，空白组常规培养；模型组进行成骨诱导；空白血清组进行成骨诱导+空白血清培养；低剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+低剂量滋肾健骨方含药血清培养；中剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+中剂量滋肾健骨方含药血清培养；高剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+高剂量滋肾健骨方含药血清培养。CKK-8法检测细胞增殖情况，碱性磷酸酶(ALP)染色观察细胞分化情况，Western blot法检测细胞中转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达情况。结果 与模型组和空白血清组比较，各剂量滋肾健骨含药血清组细胞增殖活性和ALP活性均明显增强(P均<0.05),且中、高剂量滋肾健骨含药血清组均明显强于低剂量滋肾健骨含药血清组(P均<0.05);与模型组和空白血清组比较，各剂量滋肾健骨含药血清组细胞...     

健骨二仙丸对成骨细胞分化及IGF-ImRNA表达的影响

目的:在临床研究和动物实验的基础上,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响及其作用机制.方法:分离、培养人的原代成骨细胞,采用PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和I型前胶原mRNA的表达,从而了解健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响.定量RT-PCR和Northern印迹杂交等方法交观察成骨细胞胰岛素样生长因子(insulin-likegrowth factor-I)IGF-I mRNA的表达.结果:健骨二仙丸中、高剂量能显著增加碱性磷酸酶的活性,及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素的释放(P＜0.01,P＜0.05),与雌激素(倍美力)组比较差异无显著性.显著增加成骨细胞Ⅰ型前胶原mRNA和IGF-I mRNA的表达.结论:健骨二仙丸促进成骨细胞IGF-I mR-NA的表达,从而进一步促进成骨细胞的增殖、分化,改善成骨细胞功能,调节骨重建偶联.表明健骨二仙丸不仅能增加成骨细胞胶原蛋白地合成,而且能促进非胶原蛋白地表达.促进骨的形成是健骨二仙丸作用的主要机制.     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的机制研究

目的研究冬凌草甲素对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的分子机制。方法以流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测CyclinD1、P21以及凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2和Bax表达的变化;TRAP-PCR-ELISA方法检测MG-63细胞端粒酶活性的变化;Z-IETD-fmk阻断试验检测Caspase-8阻断前后,冬凌草甲素对MG-63细胞凋亡影响的变化。结果冬凌草甲素增加G0/G1期MG-63细胞百分率,降低S期MG-63细胞百分率;浓度依赖性抑制MG-63细胞的CyclinD1、Survivin和Bcl-2蛋白表达,上调P21和Bax蛋白表达;浓度依赖性抑制MG-63细胞端粒酶的活性;Z-IETD-fmk阻断Caspase-8活性后,能部分逆转和减弱冬凌草甲素对MG-63细胞的凋亡诱导作用。结论冬凌草甲素通过影响细胞周期调节蛋白、阻断细胞周期G1/S期"稽查点";抑制Survivin、Bcl-2,上调Bax;抑制端粒酶活性以及活化Caspase-8等途径抑制MG-63细胞增殖及诱导MG-63细胞凋亡。     

仙茅苷促MC3T3-E1成骨样细胞增殖、分化及钙化作用的研究

目的:考察仙茅苷对MC3T3-E1成骨样细胞的增殖、分化及钙化功能的影响。方法:用不同浓度仙茅苷加入MC3T3-E1细胞培养体系中,MTT法检测细胞增殖水平;用茜素红染色法考察骨小结形成能力;以对硝基苯二钠基质动力学法检测碱性磷酸酶的活性。结果:仙茅苷(10-4～10-8mol.L-1)对细胞增殖有促进作用,高浓度(10-4～10-6 mol.L-1时作用明显,其中48h为最佳作用时间;仙茅苷以10-7、10-9 mol.L-1浓度在96h时可促进MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性;仙茅苷浓度为10-9 mol.L-1时对于骨小结形成最为有效。结论:仙茅苷对MC3T3-E1成骨样细胞的增殖、分化及骨小结形成均有促进作用。     

注射用鹿茸多肽生物活性测定方法研究

目的:建立注射用鹿茸多肽生物活性测定方法。方法:采用Wistar乳鼠颅盖骨成骨细胞原代培养和成骨样细胞株MG-63(人骨肉瘤细胞)培养的方法,通过MTT比色法检测。结果:成功地分离、纯化并培养了Wistar乳鼠颅骨成骨细胞,采用稳定的人成骨样细胞株MG-63(人骨肉瘤细胞)进行生物活性检测,确定5×104的细胞密度,0.1mg/ml的给药剂量,培养72h为最佳培养时间。结论:MTT比色法准确、可靠,可用于注射用鹿茸多肽的质量控制。     

小承气汤、厚朴大黄汤及厚朴三物汤药理作用

目的:研究组成药物相同、但配比不同的三方:小承气汤、厚朴大黄汤及厚朴三物汤的药理作用差异,为其临床不同应用提供依据.方法:采用炭末推进、黑便排出、氨水引咳、酚红分泌等理气、泻下及止咳化痰等有关实验.结果:三方大剂量均显著增加炭末在小肠推进距离,小剂量时仅厚朴三物汤有效且与小承气汤差异显著;三方大剂量均显著缩短小鼠出现黑便时间,增加6h内黑便排出总量,小剂量时小承气汤、厚朴大黄汤即呈现明显泻下作用,厚朴三物汤无效;厚朴大黄汤明显延长小鼠咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数,并显著促进小鼠气管酚红排泌,而其它两方作用不明显.结论:小承气汤泻下作用较强,厚朴三物汤理气效果较好,厚朴大黄汤止咳化痰作用明显.     

黄连解毒汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂药效学对比研究

目的对黄连解毒汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂进行药效学比较,为黄连解毒汤配方颗粒汤剂的临床应用提供理论依据。方法从对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、新鲜鸡蛋清致大鼠足跖肿胀和2,4-二硝基苯酚致大鼠发热三个方面的影响,考察黄连解毒汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂药效的差异。结果传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂均能减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀和新鲜蛋清致大鼠足跖肿胀,且两种汤剂等剂量间的抗炎作用无显著性差异(P0.05)。而不同剂量组的传统饮片汤剂和配方颗粒汤剂对2,4-二硝基苯酚致大鼠发热均有不同程度的解热作用,其中,两者的中、高剂量组优于低剂量组(P0.05),且等剂量的配方颗粒组优于传统饮片组(P0.05)。结论黄连解毒汤配方颗粒汤剂药效相似或优于传统饮片汤剂。     

龙胆泻肝汤合桃红四物汤加减治疗艾滋病带状疱疹33例

目的:观察龙胆泻肝汤合桃红四物汤加减治疗艾滋病带状疱疹的临床疗效.方法:33例艾滋病带状疱疹患者采用龙胆泻肝汤合桃红四物汤加减治疗,10 d为1疗程.结果:治疗1疗程后,33例患者中治愈26例,好转7例,未愈0例,治愈率为78.8%.结论:龙胆泻肝汤合桃红四物汤加减治疗艾滋病带状疱疹效果显著.     

地格达-4味汤煎煮工艺考察

目的:优化地格达-4味汤(DGD-4D)的煎煮工艺,为蒙药汤剂煎煮规范化研究提供参考。方法:以DGD-4D为模型药,比较了不同蒙药煎煮方法;采用HPLC测定汤剂中指标成分秦皮乙素、栀子苷、胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ的含量,以指标成分转移率和浸膏得率为指标,在单因素试验基础上,采用星点设计-效应面法优选DGD-4D的煎煮工艺,使用Design-Expert8. 0. 6软件进行回归模型拟合,建立工艺参数预测模型,并对最优工艺进行验证。结果:确定DGD-4D最佳煎煮条件为加40倍量水,煎煮17 min,煎煮1次;秦皮乙素、栀子苷、胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ转移率以及浸膏得率分别为70. 01%,94. 11%,61. 23%,92. 32%,32. 89%。结论:建立了DGD-4D的最佳煎煮方法,对于提高蒙药制剂水平以及保证其临床疗效的一致性具有重要参考意义。     

大承气汤传统煎煮工艺优选

目的:优选大承气汤传统煎煮工艺。方法:采用传统煎药器具砂锅煎煮,以出膏率、结合型蒽醌、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、厚朴酚及和厚朴酚含量为指标进行综合评分,考察加水量、浸泡时间、煎煮时间及大黄后下时间等4个因素,采用L9(34)正交试验对大承气汤传统煎煮工艺进行优选。结果:最佳煎煮工艺为加入8倍量水浸泡时间30 min,沸腾后煎煮25min,大黄后下10 min。结论:采用传统煎煮方法建立大承气汤煎煮工艺标准,为提高大承气汤汤剂质量提供参考。     

四物汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂有效成分比较

目的比较四物汤传统饮片汤剂与其配方颗粒汤剂有效成分的含有量差异。方法四物汤传统饮片汤剂与其配方颗粒汤剂溶液的分析采用依利特SinoChrom ODB⁃BP柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相乙腈⁃0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;检测波长215 nm(没食子酸),230 nm(芍药苷),330 nm(绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷);柱温30℃。结果6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9996),平均加样回收率96.81%~99.01%,RSD 0.81%~1.58%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于四物汤的质量控制。     

温经汤不同煎煮方法比较研究

目的:比较温经汤传统煎煮方法和现代医疗机构煎煮方法所得汤剂的质量差异,为温经汤的临床应用提供科学依据。方法:采用高效液相色谱法测定两种方法所得汤剂中芍药内酯苷、芍药苷、β-蜕皮甾酮、甘草苷、阿魏酸、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵的含量,并对两种方法所得汤剂的总皂苷和浸膏率进行比较。结果:两种方法所得的汤剂中,芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、甘草素、肉桂酸、甘草酸铵含量差异具有统计学意义(P<0.05),β-蜕皮甾酮、阿魏酸、桂皮醛、丹皮酚、总皂苷、浸膏率差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论:两种煎煮方法所得的温经汤质量存在差异,医疗机构煎煮法更具科学性。     

三黄泻心汤合煎与分煎样品中盐酸小檗碱含量比较研究

目的对三黄泻心汤合煎与分煎样品中盐酸小檗碱含量进行比较,为临床应用提供依据。方法采用高效毛细管电泳仪测定盐酸小檗碱的含量。结果合煎样品中盐酸小檗碱含量明显低于分煎样品中的含量。结论三黄泻心汤分煎样品的药效是否比合煎样品的好,还应该通过临床实验才能作出结论。     

厚朴三物汤饮片汤剂与其配方颗粒汤剂厚朴酚含量比较

目的比较厚朴三物汤饮片汤剂与其配方颗粒汤剂中厚朴酚含量.方法采用 Shim-pack VP-ODS(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱;流动相为甲醇-1%醋酸溶液(80∶ 20);检测波长为294nm;流速为1.0mL/min;柱温为40℃;峰面积外标法定量.结果配方颗粒汤剂中厚朴酚平均含量为0.1191mg·mL-1,RSD为19.58%(n=3);饮片汤剂中厚朴酚平均含量为0.0753mg·mL-1,RSD为100.1%(n=3).结论厚朴三物汤配方颗粒汤剂与饮片汤剂的色谱图基本一致,配方颗粒汤剂中厚朴酚含量比饮片汤剂高,而且配方颗粒汤剂较饮片汤剂稳定,相对容易控制质量,更有优越性.     

桂枝附子汤与白术附子汤方证辨析

《伤寒杂病论》对风湿三附子汤的论述详见于《金匮要略·痉湿喝病篇》.历代医家对于桂枝附子汤与白术附子汤的病证解读仁智互见,尤以白术附子汤为著.通过对其方证进行探讨,试析桂枝附子汤与白术附子汤的发病机制与治法,以便对临床诊治提供新思路.认为桂枝附子汤与白术附子汤乃内外合邪致病,治疗均旨在取微汗之义,注重顾护里气.然发汗太过,风邪虽去,病必不除,湿邪辗转,流滞皮下而现白术附子汤证.两方虽然症状相同,但是证候不同,病理反映亦不同.然药随方变,而方随证转,故制方加减用药应当以证为着眼点.